蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。     

蛋白酶体抑制剂对白血病细胞系细胞周期的影响

近年来的研究显示蛋白酶体抑制剂可诱导多种人肿瘤细胞系的凋亡，机制之一是其对细胞周期的影响。本实验就蛋白酶体抑制剂Z－LLL－CHO对白血病细胞系M－07e、TF－1、HL－60细胞周期的影响进行了初步研究。应用MTT法显示Z－LLL－CHO对三株白血病细胞系M－07e、TH－1、HL－60细胞周期的影响进行了初步研究。应用MTT法显示Z－LLL－CHO对三株因病细胞系呈不同程度的细胞杀伤效应。流式细胞仪检测显示应用2.5μmol/L Z-LLL-CHO 8h后可使G2／M期细胞比便增加，此种效应在S＋G2／M期比例最高的HL－60中最为显著。对凋亡峰的考察发现，Z－LLL－CHO作用后可使细胞凋亡峰的比例增加，但与其对细胞周期的影响程度无明显相关性。上述结果提示蛋白酶体抑制剂作用后可使白血病细胞系G1／M2期细胞比例增加，细胞对其诱导凋亡的敏感性与细胞周期受影响的程度无明显相关性，提示其他的相关机制参与了蛋白酶体抑制剂诱导白血病细胞凋亡的调控。     

瘦素对人类外周血T淋巴细胞增殖作用的影响

目的：探讨瘦素（Leptin）对人外周血T淋巴细胞增殖作用的影响.方法：分离并培养人外周血T淋巴细胞,采用[^3H]TdR掺入试验方法,观察不同浓度Leptin的单独作用及其与PHA的协同作用对人外周血T淋巴细胞增殖作用的影响.结果：不同浓度Leptin的单独作用对人类外周血T淋巴细胞均无刺激增殖作用,但可协同PHA的刺激增殖作用,并在一定浓度范围内呈现剂量依赖性.结论：瘦素可协同PHA刺激人类外周血T淋巴细胞增殖.     

八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖及其活化影响

目的:研究八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞的增殖及活化的影响.方法:以正常人外周血来源的T淋巴细胞为研究对象, 设对照组、 PHA组、 PHA+八珍汤组、 PHA+TGF-β1组、 PHA+TGF-β1组+八珍汤组.以MTT法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞活化的影响及对CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的数量的影响;ELISA法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞分泌IFN-γ、 IL-2的影响.结果:八珍汤可以使TGF-β1抑制的T淋巴细胞的增殖率回升(P<0.01), 但仍低于对照组(P<0.01), 并随TGF-β1作用时间的延长, 恢复难度增加.八珍汤可以使T淋巴细胞活化率增加, TGF-β1+八珍汤组与TGF-β1组的活化标志CD69表达有统计学差异(P<0.01);八珍汤能使CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的比例降低(P<0.01);能使T淋巴细胞分泌IFN-γ、 IL-2的能力恢复(P<0.01), 但都未能恢复到TGF-β1抑制前的水平, 明显低于PHA组水平(P<0.01).结论:八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖率、 T淋巴细胞的活化、 CD4+CD25+调节性T细胞比例、 IFN-γ、 IL-2的分泌水平都有一定的恢复作用.     

枸杞对T,B淋巴细胞增殖和T细胞亚群变化的调节作用

本文报告了中药枸杞子（Ｌｙｃｉｕｍｂａｒｂａｒｕｍ，ＬＢ）对Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖和Ｔ细胞亚群的调节作用。实验结果指出，枸杞对未经活化的淋巴细胞没有诱导增殖作用，对于分别经ＰＨＡ和ＰＭＡ活化的淋巴细胞增殖有显著的促进作用（Ｐ〈０．０５），这表明枸杞对活化的Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖有促进作用。选择最大促进效应浓度的ＬＢ对ＰＨＡ活化的Ｔ淋巴细胞亚群的变化进行双标记检测。结果指出，和ＰＨＡ活化后的情况相比，ＬＢ的     

氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞（Tr）数量的影响

目的： 分析氧化苦参碱（OMT）对小鼠外周血调节性T细胞（Tr细胞）数量及其对刀豆蛋白A(Con A) 刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响, 探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法： 建立DNFB诱发的小鼠ACD模型，腹腔注射（ip）不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)，在实验的第1 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠尾静脉采血, 应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记, 流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色，流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果： 500、125和31 mg/L OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制，而16、8、4、2 mg/L OMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖，但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量, 与HCT组、PBS组比较（P<0.01）。结论: OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用；腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量；提示:OMT是一种双向免疫调节剂。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,能进入细胞中可逆性地抑制蛋白酶体的活性,从而抑制泛素—蛋白酶体通路所介导蛋白质的降解,进而影响细胞周期进程和诱导细胞凋亡。目前,许多文献报道MG132能够诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,是一种潜在的抗肿瘤药物。     

醛肽类蛋白酶体抑制剂对LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症介质表达的影响

目的： 探讨醛肽类蛋白酶体抑制剂MG132对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞Raw264.7 核转录因子-κB（NF-κB)活化、炎性因子一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法： 利用报告基因检测法分析转染细胞（pNiFty-SEAP/HEK293）中NF-κB的活性;采用DAF-2DA荧光探针法检测Raw264.7细胞内NO的产生;蛋白免疫印迹法探讨细胞中iNOS和IκB-α蛋白表达情况;酶联免疫吸附法测定Raw264.7细胞上清中TNF-α的含量。结果： 预先加入MG132能够显著抑制LPS诱导的TNF-α分泌,其抑制率由5 μmol/L时的36.7%升高到10 μmol/L时的60.4%。反映NO含量的荧光强度值随着MG132给药浓度的增加而降低,其抑制率从2 μmol/L时的29.5%达到10 μmol/L的55.9%。预刺激后MG132可使胞浆中iNOS蛋白表达减少,IκB-α蛋白却明显增加,NF-κB的活性随着给药浓度的升高而不断降低。结论: MG132能够抑制LPS诱导的TNF-α和NO的产生,减少iNOS表达,具有抗炎作用。其作用机制可能与IκB降解受阻,导致NF-κB活性降低有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区神经干细胞增殖潜能的影响

目的: 观察侧脑室注射蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖能力的影响,了解蛋白酶体对NSCs增殖潜能的调控作用,从而进一步探讨蛋白酶体在帕金森病(PD)等老年性疾病神经元损伤中的可能作用机制。方法: 选90日龄健康BALB/c小鼠,左侧侧脑室注射10 μg MG132,于注射后3 d、7 d、14 d提取SVZ总蛋白,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性。同时腹腔注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU免疫荧光染色标记NSCs,动态观察蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力的影响。另设溶剂对照组左侧侧脑室注射等剂量DMSO,进行上述实验。结果: 侧脑室注射MG132 3 d、7 d后,SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组显著降低(P<0.05),同时SVZ BrdU⁺ NSCs也显著减少至21±4和22±3,与DMSO对照组相比差异显著(P<0.05)。随着MG132注射时间延长,14 d后SVZ蛋白酶体活性恢复至正常水平(P＞0.05),BrdU⁺ NSCs数量MG132组(82±4)与DMSO组(67±6)相比无显著差别(P＞0.05)。结论: 应用蛋白酶体可逆性抑制剂MG132短时期内能显著抑制SVZ蛋白酶体活性,并且能够降低NSCs增殖能力,提示蛋白酶体活性与NSCs增殖潜能密切相关。     

可溶性DC-SIGN对T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的调节作用

目的:研究可溶性DC-SIGN(sDC-SIGN)对T细胞增殖及分泌细胞因子的影响.方法:无菌分离人外周血单个核细胞,免疫磁珠负选法分离纯化T细胞.以Con A、anti-CD3/anti-CD28单抗与sDC-SIGN共培养T细胞,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞的增殖,ELISA检测培养上清中细胞因子的含量.结果:培养72 h时,对于Con A诱导的T细胞增殖,sDC-SIGN使CD4+、CD8+T细胞的增殖率分别由(11.42±0.20)%和(12.15:±0.39)%下降到(2.61±0.05)%和(1.62±0.04)%(P＜0.05);sDC-SIGN使Con A诱导T细胞配体上清中IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-17A的含量(ng/L)分别由680.27±5.86、29.37±0.44、101.82±0.03、60.46±0.34下降到348.54±0.91、22.45±0.05、63.77±0.01、23.74±0.03(P＜0.05),却使IL-6的含量(ng/L)由85.17±0.62增高到460.57±12.67(P＜0.05).对于anti-CD3/anti-CD28单抗诱导的T细胞增殖和细胞因子产生,sDC-SIGN也具有类似效应.此外,sDC-SIGN还下调Con A所刺激T细胞表达早期活化标志CD69.结论:sDC-SIGN可抑制T细胞增殖和影响细胞因子分泌,提示sDC-SIGN可能在T细胞介导免疫的调节中具有重要意义.     

OX40信号上调Survivin表达对CD4+T淋巴细胞增殖存活的影响

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果　CD4 T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论　OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。     

不同波段的红外线对小鼠体内淋巴细胞增殖的影响

目的：为了探讨红外线照射对体内淋巴细胞增殖反应的影响。材料与方法：用不同波段地红外线照射环磷酰胺所致免疫抑制带小鼠，以体内ＰＨＡ刺激的Ｔ淋巴细胞转化率和脾指数做为检测指标。结果：红外线照射可显著提高小鼠体内Ｔ淋巴细胞吉普车反应，以中波红外线的作用效果最明显 。     

RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究

目的: 探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法: 采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果: 雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论: 在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。     

蛋白酶体抑制剂MG132 对大鼠胶原诱导性关节炎的干预机制

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠胶原诱导性关节炎（Collagen induced arthritis,CIA）的干预效果及作用机制。方法：48只雌性SD大鼠被随机分为空白对照组、CIA模型组、MG132干预模型组,每组16只CIA模型组和MG132干预模型组注射牛Ⅱ型胶原建立CIA模型大鼠,初次免疫后第21天,干预组大鼠以1 mg/kg的剂量每天1次,连续14天皮下注射MG132。建模起每周观察大鼠关节肿胀程度,计算关节炎指数（Arthritis index,AI）,第42天后称重并处死大鼠;HE染色观察关节滑膜组织的病理改变;荧光底物测定法检测滑膜组织20S蛋白酶体的活性;蛋白质印迹法（Western blot）检测大鼠关节滑膜组织NF-κB/p65、IκBα蛋白的表达情况。结果：与CIA模型组比较,MG132干预模型组大鼠关节炎指数在注射MG132后一周明显降低（P<0.05）,关节滑膜组织未见明显增生,只伴有少量炎性细胞浸润。与空白对照组大鼠比较,CIA模型组大鼠关节滑膜组织20S蛋白酶体活性增高;与CIA模型组大鼠比较,MG132皮下注射干预后关节滑膜组织20S蛋白酶体活性降低（P<0.05）。与空白对照组比较,CIA模型组大鼠关节滑膜组织高表达NF-κB/p65蛋白,其中胞核NF-κB/p65表达增高更为明显（P<0.01）,注射蛋白酶体抑制剂MG132干预后,其滑膜组织胞浆及胞核NF-κB/p65蛋白表达均显著减少（P<0.01）。与空白对照组比较,CIA模型组大鼠关节滑膜低表达IκBα蛋白（P<0.01）,注射MG132干预后关节滑膜IκBα蛋白表达显著增多（P<0.01）。结论：大鼠CIA体内实验显示,蛋白酶体抑制剂MG132经皮下注射可明显改善大鼠关节炎症状,其作用机制可能与MG132降低大鼠CIA关节滑膜组织20S蛋白酶体活性,减少其底物蛋白IκBα的表达,从而抑制NF-κB活性有关。     

蛋白酶体抑制剂PSI对大鼠早期糖尿病肾病发病的作用

目的研究泛素蛋白酶体途径(UPP)对大鼠早期糖尿病肾病(DN)发病的可能作用机制及蛋白酶体抑制剂(PSI)对DN的治疗作用。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型后随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)和PSI治疗组(DP组)。检查体质童、肾重、肾重指数、24 h尿微量白蛋白(24 h U-mAlb)、尿蛋白/尿肌酐比值(Up/Ucr)、肾纤维化情况、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达及NF-κB和IκBα蛋白表达。结果在6、8周时,与NC组比较,DC组的体质童明显降低(P<0.05),肾重、肾肥大指数(肾重/体质童)、24 h尿量、Up/Ucr、24 h U-mAlb、空腹血糖、FN mRNA均显著性增加(P<0.05,P<0.01)。与DC组相比,DP组体质童明显增加(P<0.05);肾重、Up/Ucr和24 h U-mAlb、FN mRNA均显著性降低(P<0.05);肾重/体质童、24 h尿量、空腹血糖均有所降低,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,DC组胞浆NF-κB P65蛋白表达显著降低(P<0.05),胞核NF-κB P65蛋白表达增高(P<0.05),而DP组经治疗后与DC组呈现相反改变;与NC组比较,DC组IκBα蛋白表达明显降低(P<0.05),而PSI干预的DP组表达明显高于DC组(P<0.05)。光镜下,6周时,各模型组肾小管轻度扩展,间质无明显增生;8周时,DC组肾小球增大,毛细血管充血,肾小管肿胀,未见明显纤维化改变,DP组以上改变较DC组轻。结论 UPP通过对NF-κB信号通路的泛素化调节从而参与早期DN发生;蛋白酶体抑制剂PSI能改善早期DN,理论上可部分治疗DN。     

p38 MAPK的活化促进小鼠T细胞增殖

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并测定其增殖的相关指数;采用碘化丙锭染色分析SB203580和茴香霉素对ConA或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的影响。结果显示:0.5μmol/L～15.0μmol/L SB203580对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);该浓度范围的SB203580能够呈明显剂量依赖性地阻止ConA或PDB加Ion诱导的T细胞进入S期或G2/M期(r_s=-0.98,P<0.01;r_(G2)/M=-0.97,P<0.01)。茴香霉素浓度在0.01～0.5ng/ml时能够增强ConA对T细胞的促增殖作用,并能够促进ConA诱导的T细胞进入G2/M期,促进PDB加Ion诱导的T细胞进入S期。以上提示p38信号通路的活化在促进小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132对NK/T淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的： 探讨蛋白酶体抑制剂MG132（Z-leu-leu-leu-CHO,三肽基乙醛）对NK/T淋巴瘤细胞的增殖和细胞周期分布的影响,研究蛋白酶体抑制剂MG132治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法: 用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,噻唑蓝［ 3（4,5二甲基噻唑2）2,5二苯基四氮唑溴盐,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide,MTT］法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果: 1 μmol/L MG132作用24 h,HANK1细胞增殖抑制率为（57.72±7.44）%,而0.1 μmol/L MG132作用24 h,增殖抑制率仅为（3.98±0.07）%;MG132剂量大,增殖抑制率高;1 μmol/L MG132作用24 h后,HANK1细胞G1和G2期细胞分别为（72.33±3.44）%和（12.86±1.29）%,对照组为（63.63±2.29）%和（7.94±1.91）%,用药组G1和G2期细胞明显高于对照组（P<0.01,P<0.05）; 早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞分别为（33.57±2.10）%和（16.66±0.47）%,而对照组仅为（7.18±0.82）%和（3.81±1.06）%,与对照组相比,凋亡率明显增高 (P<0.01,P<0.01)。结论: MG132抑制NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖,使细胞周期G1和G2期阻滞,促进细胞凋亡,并存在剂量和时间依赖关系,蛋白酶体抑制剂MG132很可能成为治疗进展期NK/T细胞淋巴瘤的药物。     

异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ,PHA或PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达百分率。结果 :培养 2h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用要强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ;培养 6h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用同样强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ,但较之 2h时间点均有所降低 ;无论PHA活化组或PDB活化组 ,Genistein对T细胞CD6 9表达率的抑制效应均随作用浓度的升高而增强。结论 :Genistein对PHA和PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达率均有明显的抑制作用 ,这种抑制作用存在浓度依赖关系。Genistein有潜力发展成一种免疫干预药物。     

蛋白酶体抑制剂MG132改善胶原诱导性关节炎模型大鼠炎症反应的研究

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠炎症相关因子的影响.方法:48只雌性SD大鼠随机分为对照组、关节炎模型组、MG132干预组.于大鼠左足趾部皮内注射牛Ⅱ型胶原构建关节炎模型,干预组在关节炎模型基础上于皮下注射MG132进行干预.建模后每周观察大鼠关节肿胀程度,并计算关节炎指数.第42天处死大...