半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响

目的 研究半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-MADM)对肝癌细胞株HepG2侵袭力的影响。方法应用Gal-MADM于HepG2细胞,并设A组:RPMI 1640对照组、B组:普通盐酸阿霉素(ADM)组、C组:磁性白蛋白阿霉素纳米粒联合磁场(MADM M)组、D组:半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM)组、E组:Gal-MADM联合磁场(Gal-MADM M)组。药物作用后以β-actin基因作为参照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织蛋白酶(C)B mRNA的表达差异,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化,并用裸鼠肝癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果Gal-MADM作用HepG2肝癌细胞后CB mRNA表达降低较其他各组更为明显且有显著性,侵过小室滤膜细胞数目减少于其他各组且差异有显著性(P<0.01),裸鼠肝癌生长明显受到抑制(P<0.01)。结论Gal-MADM抑制肝癌细胞株HepG2的侵袭力的作用较ADM、MADM和Gal-ADM为强。     

半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒与阿霉素对大鼠的毒性比较

目的　比较研究半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒 (AGMAN)和阿霉素 (ADM )对大鼠的毒性作用。方法　将AGMAN和ADM分为几个不同的剂量组 ,观察静脉给药后的两种药物的急性LD5 0 ,同时将未死亡的动物进行肝肾功能 ,心肌酶学的检查 ,观察其改变。结果　半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒比阿霉素的LD5 0显著的提高。动物的肝肾功能损害明显减轻。结论　AGMAN具有很安全的用药范围 ,对动物的主要器官及全身的毒副作用相对ADM也有明显的减轻     

交变磁场介导下半乳糖白蛋白磁性阿霉素对人肝癌细胞和肝细胞的影响

目的 观察半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合交变磁场对肝癌细胞和人肝细胞的影响.方法 将人肝癌细胞HepG2及人肝细胞L-02细胞,随机分成A1、A2组(即RPMI 1640对照组),B1、B2组(游离阿霉素),C1、C2组(半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒),D1、D2组(阿霉素纳米粒),E1、E2组(半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒),实验组每组含有0.5 mg/L或等量的阿霉素;除C1、C2组外,其他各组置交变磁场(频率为100 kHz、磁场强度为15 kA/m)中,作用30 min.通过细胞计数、Hoechst荧光染色、DNA蛋白电泳、流式细胞仪检测,观察细胞生长曲线、细胞形态、细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 (1)E1、E2组,HepG2和L-02细胞增殖抑制作用最强,DNA梯形带最明显,细胞凋亡率分别达40.12%、45.3%;S期细胞分别为39.53%、53.46%,明显高于其他组(P＜0.01);(2)L-02细胞的形态改变、细胞增殖抑制、细胞凋亡率明显强于HepG2细胞(P＜0.05).结论 半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒在交变磁场介导下,对HepG2和L-02细胞产生热化疗协同增效的作用.     

半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常大鼠体内的靶向性分布的研究

目的 观察半乳糖白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM)在正常肝脏中的靶向性,并观察Gal-MADM在全身各脏器的分布特征。方法 使用放射示踪技术,用125I标记纳米粒。肝动脉注射,分别于注药后5、15、30、60、120min处死,立即取肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血作γ计数。用同样的方法进行白蛋白磁性阿霉素纳米粒(MADM)在大鼠体内分布实验。结果 Gal-MADM和MADM肝摄取分别在注射后5 min后最高,分别为15 054.4 CPM／g和6 186.7 CPM／g,各时相前者的肝摄取率均为同时刻后者的2-3倍。在肝、肾、心、肺、小肠、脾、及周围血的分布两药差异有高度显著性(P<0.05)。结论Gal-MADM在正常肝组织中有明显的主动靶向性,Gal-MADM主要分布肝脏,其它的脏器含量少。     

表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒治疗移植性肝癌

目的 观察表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对移植性肝癌的治疗效果。方法 建立SD大鼠移植性肝癌动物模型，14d后，从中随机取12只，测定肿瘤的长短径，为治疗前的肿瘤体积。并将余下肿瘤模型大鼠随机分为4组，每组12只。除生理盐水组外，EPI组给表阿霉素每只1．67mg／kg体重，EPI—PACA—NP组给表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒每只相当于1．67mg／kg体重表阿霉素。PACA-NP组给空白纳米粒每只相当于EPI-PACA-NP组所给纳米粒不载药纳米粒的量。1周后记录肿瘤治疗后的生长率、肿瘤的坏死范围，存活天数，生命延长率。结果治疗后各组间肿瘤体积差异有统计学意义（P＜0．05），EPI—PACA—NP组的肿瘤体积和肿瘤生长率显著低于其他组（P＜0．01）。病理切片可见EPI—PACA—NP组可见肿块里有大面积无核结构，纤维组织替代，以重度坏死为主，无轻度坏死。与NS组和EPI组比较，EPI—PACA—NP组大鼠平均生存时间延长（P＜0．01）；且以EPI组作为对照组，则EPI—PACA—NP组大鼠的生命延长率增加80．95％。结论 尾静脉注射EPI—PACA—NP组肿瘤生长率明显降低、生命延长率显著提高（P＜0．01）。     

磁性阿霉素白蛋白纳米粒在移植性肝癌模型中的磁靶向性

目的：观察磁性阿霉素白蛋白纳米粒在移植性肝癌模型中的磁靶向性，并观察磁性白蛋白纳米粒在各脏器中的分布特征。方法：建立大鼠移植性肝癌模型。大鼠正中开腹，胃十二指肠动脉插管固定。实验组，肝肿瘤区外加磁场，肝动脉注射磁性阿霉素白蛋白纳米粒(相当于阿霉素0．5mg／kg)，磁场应用30min，移去磁场后，动物立即处死。对照组肝肿瘤区不加磁场，肝动脉注射同样剂量的纳米粒后30min处死。动物处死后，立即取肿瘤组织、非磁区正常肝组织、心、肾、脾、肺、小肠和胃作了计数，肿瘤组织、肝组织送病理切片检查。结果：肝肿瘤区应用磁场30min后，磁区肿瘤组织的放射活性较非磁区肝组织的放射活性明显增加，磁区肿瘤组织的放射活性为非磁区正常肝组织的放射活性的8．7倍。对照组在没有磁场存在的情况下，肿瘤组织的放射活性为正常肝脏的2．8倍。实验组肺的放射活性较对照组明显降低。肾、心、脾、小肠和胃两组之间无明显差异。另外，实验组脾、肺和胃与肿瘤组织的放射活性之比较对照组大为降低。注入纳米粒800%以上分布于肝脏。结论：在磁场的作用下，磁性阿霉素白蛋白纳米粒在大鼠移植性肝肿瘤中的聚集明显增加。即使肝肿瘤区没有外加磁场，由于肿瘤组织和正常肝组织血管密度的差异，磁性阿霉素白蛋白纳米粒在肿瘤组织中的分布明显高于正常肝组织。实验组脾、肺、胃与肿瘤组织的放射活性比值大大低于对照组，说明磁场的存在使这些脏器的相对药物暴露明显降低。     

硬脂酸聚乙二醇阿霉素纳米粒的制备及其对人肝癌细胞的杀伤作用

目的合成硬脂酸聚乙二醇阿霉素纳米微粒(DOX鄄SLNs鄄PEG)并检测其相关参数,观察其对人肝癌细胞杀伤作用。方法以“乳化蒸发鄄低温固化”法合成DOX鄄SLNs鄄PEG纳米粒。透射电镜计算粒径,分光光度法计算载药率,噻唑蓝法(MTT法)观察对肝癌细胞的体外杀伤效应及观察体内抑瘤效应。结果DOX鄄SLNs鄄PEG纳米粒平均粒径120±4.84mm,包封率68.6%,体外释放实验提示,7d可释放所载60%左右的药物。体内抑瘤实验表明:控释制剂间隔给药疗效已优于未包载药物每日给药的疗效,量效关系明显。结论DOX鄄SLNs鄄PEG纳米粒可有效抑制肝癌细胞的生长。     

表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒靶向治疗裸鼠移植性肝癌

目的 观察表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒(EPI-PBCA-MNPS)对裸鼠移植性肝癌的作用效果.方法 建立Bel-7402裸鼠人肝癌模型,当肿瘤体积长至20～30mm3时,将其随机分成5组:生理盐水组(NS组)、表阿霉素组(EPI组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒组(EPI-PBCA-NPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组(EPI-PBCA-MNPS组)、表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒组加磁场组(EPI-PBCA-MNPS+MF组),每组10只,除生理盐水组外,其余各组按照0.002mg/g体质量或相当于40 μg/只的表阿霉素静脉注射给药,治疗2周后处死裸鼠,准确测量肿瘤大小并称重,计算瘤体积抑制率及瘤重抑制率,所有肿瘤均编号病理切片,比较治疗前后各组肿瘤细胞坏死的程度.结果 治疗后肿瘤体积抑制率、瘤重抑制率除EPI-PBCA-NPS组与EPI-PBCA-MNPS组差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中EPI-PBCA-MNP+MF组(94.26%、80.82%)显著高于其余组,差异有统计学意义(P<0.01).病理切片显示,EPI-PBCA-MNP+MF组肿瘤细胞坏死程度最重.结论 EPI-PBCA-MNPS具有良好的靶向性,在外加磁场作用下对裸鼠人肝癌模型有显著抑瘤作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles (EPI-PBCA-MNPS) on the transplanted hepatoma in nude mice.Methods Human hepatoma cell line Bel-7402 nude mice models were established and divided into 5 groups with each of 10 once gross tumor volume was up to 20-30 mm3:normal saline group (NS),epirubicin group (EPI),epirubicin polybutylcyanoacrylate nanoparticles group (EPI-PBCA-NPS),epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles group (EPI-PBCA-MNPS) and epirubicin polybutylcyanoacrylate magnetic nanoparticles+magnetic field group(EPI-PBCA-MNPS+MF).Except for NS group, the dosage of epirubicin was 0.002 mg/g body weight or 40 μg for intravenous injection.After two-weeks therapy,all nude mice models were executed and the tumor volume and weight were measured so as to calculate the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio.Every tumor specimen was made into pathological section and labelled with serial number for comparing neorobiosis degree in different groups before and after therapy.Results There were statistically difference among the other groups (P<0.05) in the volume inhibition ratio and the weight inhibition ratio after therapy except for EPI-PBCA-NPS and EPI-PBCA-MNPS group (P>0.05).The two ratios in the EPI-PBCA-MNP+MF group (94.26%,80.82%) were significantly more than those in other groups (P<0.01).The pathological sections demonstrated the most severe tumour neorobiosis in the EPI-PBCA-MNP+MF group.Conclusion With the additional magnetic field,EPI-PBCA-MNPS has significant anticancer effect on human hepatoma nude mice models due to its favourable magnetic targeting.     

磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒的制备及性能检测

目的 制备磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒并检测其磁性、载药量、粒径大小等物理性能,为进一步进行动物实验和临床应用奠定基础.方法 先将市售棉籽油精制,再将盐酸阿霉素、盐酸维拉帕米、人血清蛋白及Fe3O4磁粉按一定比例混合,采用加热固化法制备磁性阿霉素维拉帕米清蛋白纳米粒.用透射电子显微镜检测颗粒形态和粒径大小.倒置显微镜下观察载药纳米粒的磁响应性和结构.绘制标准曲线,高效液相色谱仪检测纳米粒中维拉帕米的载药量,荧光分光光度仪检测阿霉素的载药量.结果 纳米粒大小均一,形态规则,呈圆球形,磁响应性好.平均粒径约0.5 μm,维拉帕米载药量为0.8%,阿霉素载药量为1.25%.结论 加热固化法可以制备出同时包载两种药物的纳米粒,物理性能良好,制备方法简便,实验条件容易控制.     

阿霉素纳米粒逆转P-gp介导的膀胱移行细胞癌多药耐药的实验研究

目的：观察阿霉素聚氰基丙烯酸异丁酯纳米粒（阿霉素纳米粒）对多药耐受糖蛋白（P－glycoprotein，P－gp）介导的膀胱移行细胞癌细胞多药耐药（MDR）的逆转。方法：MTT法观察MDR的逆转，流式细胞仪检测细胞内阿霉素（Dox）浓度。结果：阿霉素纳米对敏感株的细胞毒作用与阿霉素差异无显著性意义（P＞0.05)；耐药株对阿霉素纳米较对Dox敏感4.5倍（P＜0.05），细胞内阿霉素浓度显著增高为其机制。结论：阿霉素纳米可有效逆转P－gp介导的MDR。     

外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布的影响

目的　观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝脏中的靶向性 ,并观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响。方法　大鼠正中开腹 ,肝动脉插管并固定 ,肝动脉注射12 5I半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 (相当于阿霉素0 .5mg/kg) ,左外叶加磁场 ,磁场应用 3 0min ,移去磁场后 ,动物立即处死 ;对照组 :肝动脉注射半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 ,左外叶不加磁场 ,3 0min后 ,移去磁场后 ,动物立即处死 ,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数。肝组织作病理切片。结果　注入的纳米粒75 %～ 85 %分布于肝脏 ,其他脏器极少。病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在 ,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见。结论　半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的磁靶向性 ;在磁场作用下 ,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布于肝脏 ,其他脏器含量很少 ;实验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血与对照组的放射活性比较明显降低 ,表明磁性物质的存在使这些脏器的相对药物暴露明显减少     

纳米金增加阿霉素耐药肝癌细胞株敏感性的实验研究

目的：观察纳米金（GNP）人耐药肝癌细胞株耐药性的逆转作用。
　　方法：采用氯金酸柠檬酸三钠还原法制备并鉴定;分别用GNP与阿霉素（ADM）组单独或联合作用于ADM耐药的肝癌细胞株HepG2/ADM,以未处理的HepG2/ADM细胞为对照,用MTT法检、流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡情况;紫外分光光度计检测HepG2/ADM细胞经ADM单独作用以及GNP与ADM联合作用后细胞内ADM浓度。
　　结果：与对照细胞比较,ADM单独作用及GNP与ADM联合作用后,HepG2/ADM的增殖均明显抑制、凋亡率明显升高,但后者的作用明显强于前者（均P<0.05）,而GNP单独作用对细胞的增殖与凋亡无明显影响（均P>0.05）;GNP+ADM作用后,HepG2/ADM细胞内的ADM含量较ADM单独作用后的ADM含量明显增加[（2.92±0.13）μg/Lvs.（1.68±0.74）μg/L,P<0.05]。
　　结论：GNP可增加HepG2/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与其增加HepG2/ADM细胞内的ADM浓度有关。     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

荧光分光光度法检测纳米粒运载的阿霉素在大鼠体内的分布

目的　观察由半乳糖化磁性白蛋白纳米粒运载的阿霉素经舌静脉给药后在大鼠体内的的分布状况。方法　全部大鼠随机分为 4组 ,经舌静脉 ,按分组分别注射 :游离阿霉素组(FADM ) ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒 (MADM ) ;半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组 (Gal2 9 ADM ) ;半乳糖磁性阿霉素白蛋白纳米粒 外加磁场 (Gal2 9 ADM M ) ,剂量均为阿霉素 2 .5mg/kg体重。取全血、心、肺、肝、脾、肾。全血制成血浆 ,器官组织制成匀浆 ,盐酸乙醇法提取阿霉素 ,用荧光光度计测量。结果　静脉注射同等剂量、不同剂型的阿霉素药物后 ,阿霉素在器官中的蓄积程度从高到低 :肝 :D靶肝 >D非靶肝、C >B >A ;心脏、肾、血浆 :A >B >D、C ;脾 :B >A、C、D ;肺 :B>A >C、D。磁性阿霉素白蛋白纳米粒注入体内后 ,在心、肺、肝、脾、肾中的药物浓度在 15～ 3 0min达峰值 ,而半乳糖化后 ,阿霉素的药物峰值提前到 5min或之前。外加磁场和未加磁场的半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组的药物靶向指数和药物选择指数是均高于磁性白蛋白纳米粒。结论　磁性阿霉素白蛋白纳米粒经半乳糖化后 ,可显著增强阿霉素对肝脏的靶向性 ,并显著降低心、肺、脾、肾、血浆肝外器官的组织阿霉素浓度。利用外加磁场 ,可提高阿霉素在肝脏特定部位蓄积的能力。     

交变磁场下Fe3O4纳米磁流体对裸鼠移植性肝癌的杀伤作用

目的 研究交变磁场作用下Fe3O4纳米磁流体对HepG2裸鼠移植性肝癌细胞的杀伤作用.方法 建立HepG2裸鼠肝癌移植模型,将荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、磁场空白组、Fe3O4纳米磁流体组3组.其中空白对照组不做任何处理;磁场空白组仅接受磁场作用不做其他处理;Fe3O4纳米磁流体组于裸鼠肿瘤部位直接注射PEG(polyethylene glycol)-PEI(polyetherimide)/Fe3 O4纳米磁流体后接受磁场作用.实验中,交变磁场发生频率为40 kHz,磁场强度峰值为5 kA/m,作用时间为15 min/d,共15 d,观察并记录7、15 d两个时段皮下肿瘤体积、重量的变化情况,以及肿瘤的病理改变和肝癌细胞凋亡情况.结果 裸鼠移植性肝癌肿瘤的成瘤率为100%,7和15 d的记录显示Fe3O4纳米磁流体组裸鼠肿瘤体积和重量均小于其他两组,抑瘤率为54.20%(t=14.506,P＜0.01),明显高于磁场空白组的22.66%(t=7.497,P＜0.05).空白对照组的肿瘤细胞生长良好,细胞密度大,核大深染,形态不规则,核分裂象多见;磁场空白组肿瘤细胞较为稀疏,间质增多,有坏死区形成;纳米磁流体组有大量的肿瘤细胞呈凝固性坏死,细胞核分解、消失,血管明显减少,肿瘤细胞分布稀疏.结论 Fe3O4纳米磁流体在交变磁场的作用下,对HepG2裸鼠移植性肝癌细胞有显著的抑制作用.

Abstract：

Objective To study the therapeutic effect of Fe3O4 nanometer magnetic fluid-induced hyperthermia on implanted liver cancer in nude mice under alternating magnetic field. Methods Nude mice model bearing implanted HepG2 was established. Mice were then randomly divided into 3 groups: the blank control group; the magnetic field group; nanometer magnetic fluid group. The magnetic field group were just put under the magnetic field; Nanometer magnetic fluid group received injection of PEG-PEI/Fe3O4 nanometer magnetic fluid under the alternating magnetic field. At the frequency of 40 kHz, and magnetic field of 5 kA/m, 15 minutes one day in the next 14 days. On the 7th day and the 15th day, the changes of tumor volume and weight were recorded, cell apoptosis were observed and recorded and pathological examination was done. Results On the 7th and the 15th day, in the nanometer magnetic fluid group, tumors' volume was smaller and the weight was lighter than other groups, and the tumor inhibitory rate of 54. 20% (t = 14. 506,P ＜0. 01 ) was significantly higher than the control group and the magnetic field group 22. 66% ( t = 7.497, P ＜ 0. 05 ). In the control group, tumor cells grew well, high density, the nucleus engrained, the shape irregular, the nuclear fission clear; compared with the control group, in the magnetic field group, tumor cells scatter thinly, intercellular substance increases, and necrosis area formed;in the nanometer magnetic fluid group, many of tumor cells died, their cell nucleus broke up and vanished,the blood vessel reduced obviously, and the tumor cell spread thinly. Conclusions Under the alternating magnetic field, PEG-PEI/Fe3O4 nanometer magnetic fluid inhibits liver cancer growth in nude mice model of HepG2.     

磁性蛋白微球阿霉素的定性研究

目的　对采用改良方法自行制备抗肿瘤药物磁性白蛋白微球阿霉素进行定性研究和评价。方法　采用改良方法自行制备抗肿瘤药物磁性白蛋白微球阿霉素 ,并经细胞图像分析仪二值化处理 ,优选出符合静脉用药的最佳磁微球 (0 .91± 0 .3 3 ) μm ,并以小鼠和豚鼠为实验对象 ,对该复合物进行定性分析 ,观察 (长达 6周 )该复合药物的急性、亚急性等毒性实验 ,并作相应的病理学检查。同时 ,测定其LD50 值。结果　该复合药物对实验动物的组织细胞并没有毒性损伤 ,也没有在体内蓄积。其LD50 值为 2 3 .3mg/kg体重 ,高于单纯阿霉素静脉给药的LD50 值 (2 0 .0mg/kg体重 )。结论　该复合物毒性很小 ,具有可靠的安全性 ,并优于单纯阿霉素。