胃癌细胞环氧合酶-2的表达对内皮细胞生物学行为的影响

目的 以环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)高表达的胃癌细胞系SGC7901及其反义核酸转染细胞为模型,观察胃癌细胞COX-2的改变对体外培养的内皮细胞迁移及其管状形成能力的影响,初步探讨COX-2的表达在胃癌血管发生过程中的作用.方法 通过半定量RT-PCR和Western bloc检测SGC7901、7901-P(空栽体对照)、7901-AS(反义COX-2转染细胞)细胞中COX-2的蛋白及mRNA表达水平.采用半定量RT-PCR技术检测3组细胞中内皮细胞特异性血管发生因子的表达;然后收集其条件培养基刺激内皮细胞,观察不同条件下内皮细胞迁移的数目及其所形成管腔样结构的长度.结果 反义核酸转染后.COX-2 mRNA及蛋白表达水平均较亲本细胞及其空载体转染细胞降低;胃癌细胞VEGF、Ang-1的表达明显下调,其条件培养基刺激内皮细胞后,内皮细胞的迁移能力及管状形成能力均较亲本细胞和空载体转染细胞下降(P<0.01).结论 抑制COX-2表达可降低内皮细胞的血管生成能力.COX-2的过度表达可能通过提高血管发生因子的水平来影响内皮细胞的迁移和血管形成,从而促进肿瘤的发生、发展及其转移.     

利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。     

环氧合酶-2抑制剂联用姜黄素对肝星状细胞增殖抑制作用的观察

目的观察选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398与姜黄素联用对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）增殖的影响。方法体外培养肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分别加入终浓度为20μmol／L的NS-398和姜黄素，两药物单独或联合应用与HsC共同培养，以M＇IT法检测NS-398、姜黄素单用或联用24h（n=4）对HSC生长的抑制情况。LDH法检测NS-398、姜黄素对HSC的毒性作用。结果NS-398、姜黄素及联合应用两药对HSC的增殖的抑制率分别为6．0％，20．5％，44．0％，与细胞对照组比较差异有显著性（P〈0．01），联合用药组优于单用药组（P〈0．05）。与对照组比较，各浓度组培养上清液中LDH活力差异无显著性（P〉0．05）。结论NS-398与姜黄素均可以抑制HSC增殖，联合用药的效果明显优于任一药物单用。     

胃癌组织中环氧合酶-2表达与胃癌关系的研究进展

胃癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其预后较差,5年总生存率为30%~50%。影响胃癌预后的因素很多,而浸润和转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。尽管胃癌早期检测技术和手术治疗方式有很大的改进,     

环氧合酶-2蛋白在胃癌发生发展中的表达

目的研究环氧合酶-2（COX-2）蛋白在胃癌、癌前病变、淋巴结转移灶等组织中的表达。方法应用免疫组化SP法和RT—PCR法检测甘肃省河西地区90例胃癌,及其80例增生性病变,22例正常胃黏膜上皮和29例淋巴结转移灶中COX-2的表达。结果免疫组化结果提示正常胃黏膜上皮、增生病变及原位癌中均未发现有COX-2的表达;无淋巴结转移的胃癌原发灶中COX-2的阳性表达率是46％,有淋巴结转移的胃癌原发灶中阳性表达率是72％,淋巴结转移灶中阳性表达率是90％。在鳞状细胞浸润癌中COX-2呈低表达（14％）,在浸润性腺癌中高表达（78％）。RT-PCR结果与免疫组化结果相似。结论COX-2的表达与胃癌的浸润、淋巴结转移有关,其表达具有组织选择性。     

姜黄素和环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞时效的双向调节体外实验研究

【目的】观察抗氧化剂姜黄素（Cur）与选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398两种药物同时联用或分时联用对大鼠肝星状细胞（HSC）生长的影响。【方法】体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6，接种96孔板，分为5组。I：单独姜黄素系列浓度组（0、20、30、40μmol／L）；单独NS-398系列浓度组（0，20,40，80μmol／L）；Ⅱ：单独NS-398系列浓度组（ABS1）和NS-398系列浓度组＋姜黄素20μmol／L（,4BS2）对大鼠HSC增殖的影响。Ⅲ：两种药物同时加药组；Ⅳ：两种药物先后6h加药组：先加姜黄素20μmol／L作用HSC6h后加NS-398系列浓度组（0、20、40、80wmol／L）；先加NS-398系碉浓度（0、20、40、80Vunol／L）作用HSC6h后加姜黄素20μmol／L组，V：析因分析组。各组设不加药物的细胞对照组，与HSC共同培养，以MTT法检测姜黄素、NS-398单用或同时、分时联用对HSC生长的影响。LDH法检测各组对HSC的细胞毒性舴用。[结果]单独NS-398系列浓度组和单独姜黄素系列浓度组有抑制HSC的作用，但姜黄素的作用比NS-398强；同时加两药组比分时加药组有明显不同，先加NS-398作用HSC6h组比先加姜黄素作用HSC6h组的抑制率明显降低。【结论】时间因素导致两药联用是双向调节，同时加药或先加姜黄素作用HSC6h组后加NS一-98时呈正调节作用，抑制率升高，而先加黼98作用ItSC6h后加姜黄素呈负调节作用，抑制率降低。NS-398对HSC作用一定时间后有抑制姜黄素对HSC起生物效应的作用。     

P53、环氧合酶-2与胃癌关系的研究进展

目前对胃癌的病因尚未阐明 ,其发生是与环境因素和机体内在因素相互作用的结果。流行病学调查显示[1] ,幽门螺杆菌(Helicobacterpylor ,Hp)感染与胃癌的发生存在显著相关性 ,Hp感染后胃癌发生率增加 4～ 9倍 ,且 60 %的胃癌患者有Hp感染[1] ,故认为Hp感染是胃癌发生的重要环境因素之一。近年认为致癌过程是多阶段的 ,包括多个连续的“独立”事件 ,是多个遗传物质 ,即基因积累性改变的结果。与癌肿有关的基因有3种 :第 1种是抑癌基因 ,如P5 3、R6等 ;第 2种是癌基因 ,如myc、ras等 ;第 3种是程序死亡基因 ,如bcl-2等。第 1种基因的失活和…     

环氧合酶2与胃癌分化程度关系的研究

目的:观察环氧合酶2(COX-2)在胃癌组织中的表达与其临床病理特征的关系.方法:将82例胃癌组织切片分别进行HE和免疫组化染色,用X2检验方法分析.结果:COX-2主要存在于胃癌细胞的胞浆中,胃癌组织中表达率87.80%,过表达率65.28%.结论:胃癌组织中COX-2的过表达率与胃癌细胞的分化程度明显相关.     

胃癌组织中CagA+幽门螺杆菌感染和环氧合酶-2检测

目的探讨胃癌组织中CagA+Hpylori感染对环加氧酶2(cox2)mRNA表达的影响.方法采用原位杂交法检测40例慢性浅表性胃炎、31例慢性萎缩性胃炎伴肠化、34例不典型增生、55例胃癌组织中cox-2 mRNA的表达情况;快速尿素酶试验和warthin-starry银染色结合C14-呼气试验检测Hpylori感染情况;斑点金免疫渗滤法检测患者血清抗H pylori CagA IgG抗体.结果慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化、不典型增生和胃癌组织中cox-2 mRNA的表达率呈递增趋势,胃癌与慢性浅表性胃炎组织中的cox-2 mRNA表达率差异有统计学意义(P＜0.05);cox-2 mRNA表达与胃癌的分化程度及淋巴结转移情况有关(P＜0.05);Hpylori阳性慢性浅表性胃炎和慢性萎缩性胃炎伴肠化组织中cox-2 mRNA阳性表达率高于Hpylori阴性组,差异有统计学意义(P＜0.05);在不典型增生和胃癌组织中Hpylori阳性组与Hpylori阴性组cox-2 mRNA的阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05);Hpylori阳性慢性浅表性胃组织炎中抗Hpylori CagA IgG抗体阳性率低于Hpylori阳性胃癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05);cox-2 mRNA表达与H pylori CagA密切相关(P＜0.05).结论Cox-2参与胃癌的发生发展,同时也增加其转移的潜能;H pylori通过诱导cox-2表达上调参与胃癌病变;CagA是H pylori的重要致病因素,与cox-2 mRNA表达上调及胃癌的发生密切相关.     

胃癌中血小板衍生生长因子受体和环氧合酶-2的表达及其与生物学行为的关系

目的探讨血小板衍生生长因子受体(PDGFR)与环氧合酶-2(COX-2)在胃癌中的表达及其在胃癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组化法检测80例胃癌(胃癌组),40例慢性浅表性胃炎(对照组)PDG-FR、COX-2的表达情况,分析它们与胃癌临床病理指标的关系。结果胃癌组及对照组中PDGFR表达率分别为48.8%和2.5%,COX-2的表达率分别为53.8%、0%,差异有统计学意义(P0.01)。PDGFR、COX-2的表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度无关,两者与肿瘤的浸润、转移有关。PDGFR与COX-2的表达呈正相关(r=0.756,P=0.0000),两者阳性表达程度与淋巴结及远处转移呈正相关。结论PDGFR、COX-2在胃癌的发生发展中可能具有相互协同作用,促进胃癌的浸润及转移。     

细菌脂多糖诱导人胃上皮癌细胞株BGC-823环氧化酶-2的合成

目的 :研究细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)对人胃上皮细胞环氧化酶 1和环氧化酶 2合成的影响。方法 :实验选用LPS(E .Coli 0 111∶B4 )和人胃上皮癌细胞株BGC - 82 3。环氧化酶的合成用免疫蛋白印迹法(WesternBlotting)测定。 结果 :LPS对BGC 82 3细胞环氧化酶 2的合成有明显的诱导作用。BGC - 82 3细胞环氧化酶 - 2的含量在LPS作用 1h后明显增加 ,并持续至少 6h。结论 :E .Coli的LPS可诱导BGC - 82 3细胞COX- 2的合成。     

Dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞增殖凋亡的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以Dnmt1(DNA methyltransferase 1)为靶基因,设计构建重组体pshRNA-Dnmt1,研究其对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法:设计shRNA的寡核苷酸片断,再克隆至载体pTZU6 1中构建重组体pshRNA-Dnmt1,转染胃癌细胞株AGS,用Western Blot检测DNMT1蛋白水平变化,用RT-PCR法评估mRNA水平,MTT法动态监测活细胞数,AO/EB法、电镜和TUNEL观察其促凋亡作用.结果:成功构建重组质粒pshRNA-Dnmt1 后,进行序列分析得到确证. RT-PCR检测结果证实: 重组质粒pshRNA-Dnmt1 对胃癌AGS细胞中Dnmt1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24 h抑制率在21.63%左右;48 h为52.97%;72 h为72.06%. Western Blot检测结果表明:pshRNA-Dnmt1 转染AGS细胞后24 h出现DNMT1蛋白表达量减少,抑制率为28.24%;48 h为68.54%;72 h为81.47%. MTT结果提示: 转染后24, 48和72 h细胞数存活率为对照组的79.49%, 51.63%和39.16%. AO/EB法、电镜和TUNEL都看见大量典型的凋亡和坏死细胞,转染后48 h的细胞凋亡率由对照组的5%上升为35%左右.结论:重组质粒pshRNA-Dnmt1 能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内Dnmt1基因的表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,从而为肿瘤的基因治疗开辟了新途径.     

人SPOP真核表达质粒的构建及其在胃癌细胞中的表达

目的 构建人pUB6/V5-HisB-SPOP真核表达质粒及稳定表达外源性人SPOP基因的人胃癌AGS细胞系.方法 采用基因重组技术将人SPOP cDNA插入真核表达载体pUB6/V5-HisB,构建人pUB6/V5-HisB真核表达质粒.脂质体介导空载体pUB6/V5-HisB和表达质粒pUB6/V5-HisB-SPOP分别转染人胃癌AGS细胞株,杀稻瘟菌素筛选阳性克隆,扩大培养,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测SPOP mRNA和蛋白表达.结果 双酶切和基因测序结果均证实人pUB6/V5-HisB-SPOP真核表达质粒构建成功.SPOP转染组与空白对照组、空载体组比较,SPOP蛋白表达显著上调(P＜0.05).结论 成功构建人SPOP真核表达质粒并获得稳定表达SPOP基因的胃癌AGS细胞系,为进一步研究SPOP基因在胃癌发生发展中作用奠定实验基础.     

姜黄素对肠炎大鼠肠黏膜环氧合酶-2的调控

目的: 探索姜黄素对炎症性肠病(IBD)模型大鼠肠黏膜炎症靶点环氧合酶-2(COX-2)的影响.方法: 建立以三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠肠炎模型.模型大鼠给予含20 g/L的姜黄素饲料喂养,药物阳性对照组给予含5 g/L柳氮磺胺吡啶(SASP)和2 g/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)的饲料喂养,模型组及阴性对照组给予普通饲料喂养.评价大鼠肠黏膜病理组织学评分.应用电泳迁移率改变分析法检测肠黏膜胞核NF-κB活性的变化.应用Western印迹分析法检测肠黏膜细胞质IκB及COX-2的变化.应用半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达.结果: 姜黄素改善IBD模型大鼠病理组织学征象.姜黄素可抑制IBD模型大鼠肠黏膜胞质IκB的降解,并抑制胞核NF-κB的激活,同时降低了COX-2的活性.结论: 姜黄素可预防和改善IBD鼠科模型中的实验性肠炎,调控COX-2的活性;COX-2可作为治疗炎症性肠病的药物靶点.姜黄素对治疗IBD有应用前景.     

双氢青蒿素对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

研究双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对人胃癌细胞BGC-823细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）法检测DHA对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用;用流式细胞技术、荧光显微镜、透射电子显微镜检测经DHA处理后BGC-823细胞的凋亡率及形态特征的变化;Western印迹方法检测凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8表达的变化。 结果MTT分析表明,DHA作用可明显抑制BGC-823细胞的增殖,抑制率随药物浓度的增加而增大,且随着时间的延长而增大,具有显著的剂量和时间依赖性（P＜0.01）,半数抑制浓度(IC50值)为3.4 μmol/L。流式细胞术检测结果显示,随着DHA药物浓度的增加,凋亡峰愈加明显,并呈现出剂量依赖性（P＜0.01）。形态学的观察结果：BGC-823细胞在DHA作用下出现典型的凋亡形态。Western印迹显示：Bax、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达随着DHA给药浓度的增加而增高。 结论DHA对BGC-823细胞增殖有抑制作用;DHA通过上调Bax、Caspase-3、Caspase-8表达促进BGC-823细胞凋亡。     

二烯丙基二硫对CD44+人胃癌AGS细胞生长的影响

目的分析二烯丙基二硫(DADS)对CD44⁺胃癌AGS细胞增殖与周期分布的作用,为DADS抑制胃癌作用机制研究提供进一步实验依据。方法经免疫磁珠技术富集人胃癌细胞株AGS中的CD44⁺细胞,流式细胞术检测CD44⁺细胞比率。肿瘤球形成、Transwell迁移及侵袭实验验证CD44⁺细胞的干样特性。MTT、软琼脂集落形成及流式细胞术分析DADS对干样细胞的生长、细胞周期分布的作用。结果免疫磁珠术富集了99.9% CD44⁺细胞。相较于未分选的AGS组,CD44⁺AGS组细胞生长2周后成球状态良好,且表现出更强迁移、侵袭能力(P＜0.05)。不同质量浓度DADS处理可明显抑制CD44⁺细胞增殖,且其抑制作用呈质量浓度依赖性(P＜0.05);30 mg/L和60 mg/L DADS可抑制CD44⁺细胞集落形成能力(P＜0.05),且可导致细胞周期呈现G₂/M期阻滞(P＜0.05)。结论DADS可明显削弱CD44⁺细胞的生长能力,与阻断细胞周期于G₂/M期有关。     

环氧化酶-2与胃癌的相关性研究进展

近年的研究表明，环氧化酶-2（COX-2）在胃癌中的表达增强，且可能在胃癌的发生发展过程中起了较为重要的作用。COX-2的表达与胃癌的组织来源有关。COX-2表达于肿瘤细胞的胞浆中，且其表达受启动子CPG鸟甲基化，NF-kappaB及p53突变等因素调节，幽门螺杆菌感染可以使COX-2表达增强，使用COX-2特异性抑制剂可以干预COX-2的表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

四碘甲腺乙酸对耐药性人胃癌细胞系体内和体外增殖的抑制作用

目的：研究四碘甲腺乙酸(Tetrac)对阿霉素(Dox)抵抗性人胃癌细胞系SGC-7901/R体内及体外扩增的抑制作用及作用机制。方法：体外实验分为SGC-7901与SGC-7901/R两组,分别与不同浓度的Tetrac和Dox共同培养4 d。MTT法检测其细胞活性,以不同药物浓度下的肿瘤细胞存活率来表示;Western blotting检测2组中相关耐药基因P-gp、SOD和GST的表达。分别将Dox、依拉泊苷(Etop)、顺铂(Cisp)3种药物单独或联合Tetrac作用于SGC-7901/R细胞系,用MTT法、衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-b-Gal）染色法与凋亡相关的烟酸已可碱（Hoechst）染色法检测肿瘤细胞活性、衰老及凋亡情况,检测结果以染色阳性细胞比例表示。体内实验中,腋部皮下注射SGC-7901/R细胞（10⁶ /100 μL）的裸鼠被分成4组（每组7只）：生理盐水对照组、Tetrac治疗组（30 mg/kg）、Dox治疗组（2 mg/kg）和Tetrac（30 mg/kg）+Dox（2 mg/kg）联合药物治疗组,检测各组小鼠肿瘤生长情况。结果：体外实验中,2组肿瘤细胞均随Tetrac浓度的升高而坏死明显加快,在100 mg/L时全部死亡;P-gp转运子仅在SGC-7901/R细胞中过表达;Dox、Etop、Cisp与 Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞存活率较单独用药明显降低(P<0.001);Dox与Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞衰老、死亡较单独用药明显增加(P<0.05)。体内实验中,Dox与Tetrac联合用药可以明显抑制肿瘤生长。结论：Tetrac可能通过降低药物转运子P-gp表达来促进SGC-7901/R细胞的衰老和凋亡,对于治疗Dox抵抗性肿瘤是一种有效的化疗药物。     

环氧化酶2在肾癌组织中表达及与血管生成的关系

目的：探讨环氧化酶2（COX-2）在肾癌组织中表达的意义及其与血管生成的关系.方法：采用免疫组化法检测34例肾癌组织和癌周正常肾组织中COX-2的表达及微血管密度（MVD）.结果：COX-2在肾癌组织中表达的阳性率为76.47%,癌周正常肾组织中表达的阳性率为13.33%,两者比较有统计学意义（P＜0.01）.COX-2的异常表达与肾癌的病理分级及临床分期之间的差异无统计学意义.COX-2表达阳性组的MVD高于COX-2表达阴性组,两者之间有显著相关性（r=0.75,P＜0.01）.结论：COX-2的异常表达可能与肾肿瘤的发生有关,可为肾肿瘤的治疗和预防开辟新的途径.     

Wnt-1诱导分泌蛋白2对胃癌细胞上皮间质转化的影响*

的 探讨Wnt-1诱导分泌蛋白2（WISP2）在胃癌组织中的表达及其对胃癌患者癌细胞上皮间质转化的影响。方法 选取2016年3月—2018年5月四川绵阳四〇四医院收治的胃癌患者癌组织和癌旁组织标本,每组85例。采用免疫组织化学法检测WISP2在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况;构建WISP2-shRNA和NC-shRNA稳定细胞系,采用细胞划痕实验检测WISP2下调对胃癌细胞迁移的影响;采用Transwell实验检测WISP2下调对胃癌细胞侵袭的影响;采用Western blotting检测WISP2下调对胃癌细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、神经-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达的影响。结果 WISP2在胃癌组织（61.2%）中的阳性表达率高于癌旁组织（11.8%）（P?<0.05）;与NC-shRNA组（84.74±9.61）% 比较,WISP2-shRNA组（57.18±6.05）%细胞划痕愈合程度下降（P?<0.05）;WISP2-shRNA组细胞侵袭个数（195.36±23.45）较NC-shRNA组（404.91±38.16）减少（P?<0.05）;与NC-shRNA组比较,WISP2-shRNA组细胞E-Cadherin的表达水平升高（P?<0.05）,N-Cadherin和Vimentin的表达水平下降（P?<0.05）。结论 WISP2在胃癌组织中高表达,下调WISP2的表达可抑制胃癌细胞的上皮间质转化和侵袭转移。