大鼠血管中α_1肾上腺素受体的两种亚型

α_1肾上腺素受体(α_1受体)激动引起的大鼠离体血管收缩,在主动脉可为不可逆性α_1受体拮抗剂CEC大部分阻断,而不受钙离子拮抗剂硝苯吡啶的影响;在肾动脉不受CEC阻断,却可为硝苯吡啶大部分阻断;在肠系膜动脉与门静脉则介于两者之间。竞争性α_1受体拮抗剂WB4101的pA_2值,肾动脉>肠系膜动脉>主动脉。根据已知α_1受体两种亚型的药理特征,上述结果提示大鼠血管中的α_1受体存在两种亚型,在主动脉内以α_(1b)亚型为主,在肾动脉内以α_(1a)亚型为主,在肠系膜动脉与门静脉内两种亚型的含量较为均衡。     

12月龄自发性高血压大鼠肾动脉α1肾上腺素受体亚型与同龄WKY大鼠的比较

采用RNA酶保护分析法及离体血管收缩实验比较12月龄自发性高血压大鼠(SHR)和同龄WKY大鼠肾动脉α₁肾上腺素受体(α₁-AR)亚型. 功能实验结果表明去甲肾上腺素(NE)引起SHR肾动脉收缩的pD₂值和最大收缩反应与WKY大鼠相比没有显著差异. 但舍吲哚和WB4101抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比显著增加,同时BMY7378抑制NE收缩SHR肾动脉的pA₂值与WKY大鼠相比无显著改变. 提示SHR肾动脉对NE的敏感性与WKY大鼠相比没有差异,但α_1A-AR在介导NE收缩SHR肾动脉中的作用与WKY大鼠相比增加. RNA酶保护分析法结果显示在SHR肾动脉α₁-AR三种亚型的mRNA水平与WKY大鼠相比没有显著改变. 提示α₁-AR亚型在介导收缩反应中的改变可能因受体蛋白水平和(或)受体后信号转导的改变所致.     

α_(1A)-和α_(1B)-肾上腺素受体介导HEK293细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶激活(英文)

目的:研究α_1-AR三种亚型对细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)的作用。方法:采用磷酸钙沉淀法进行转染,用放射配基结合实验测定α_1-AR表达量。用[~3H]胸腺嘧啶参入量测定细胞增殖,用免疫沉淀和髓鞘蛋白底物法测定CCDPK的活性。结果:三株表达α_(1A)-,α_(1B)-和α_(1D)-AR的细胞株表达受体密度约为0.6 nmol·g~(-1)。在普萘洛尔存在下,去甲肾上腺素(NE)作用24 h可浓度依赖地刺激HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成。NE 10 μmol·L~(-1)可促进HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成增加,刺激CCDPK活性的升高。NE不引起HEK293/α_(1D)-AR细胞DNA合成和CCDPK活性的显著改变。结论:在转染α_1-AR亚型的HEK293细胞中激动α_(1A)-或α_(1B)-AR可引起细胞增殖,激动α_(1D)-AR则无显著改变。     

人右胃网膜动脉的功能性α_1-肾上腺素受体亚型(英文)

目的:研究人右胃网膜动脉(RGA)中介导收缩的功能性α_1-肾上腺素受体(α_1-AR)亚型。方法:离体血管收缩功能实验。结果:在RGA中α_2-AR选择性拮抗剂育亨宾、α_1-AR选择性拮抗剂哌唑嗪及α_(1A)-AR选择性拮抗剂RS17053和5-MU,α_(1D)-AR选择性拮抗剂BMY7378和α_(1A)-与α_(1B)-AR选择性拮抗剂WB4101拮抗NE引起收缩效应的pA_2值分别为6.82±0.28、9.77±0.22、8.42±0.22、8.42±0.22、6.84±0.32和8.88±0.20,斜率分别为1.12±0.40、0.90±0.22、0.93±0.22、0.88±0.18、1.05±0.17、1.15±0.16。α_1-AR选择性拮抗剂的pA_2值与这些拮抗剂在表达α_(1A)-、α_(1B)-、α_(1D)-AR的细胞株上得出的pK_i值之间的相关系数分别为0.95、0.82和0.42。用α_(1B)-、α_(1D)-AR的不可逆选择性拮抗剂氯乙基可乐定(CEC)预处理RGA前后,NE的pD_2值分别为5.9±0.5和5.6±0.6,最大收缩分别为(8.9±3.2)g和(8.0±3.2)g,差异无显著性。结论:在RGA中NE引起的收缩效应主要由α_(1A)-AR介导,而α_(1B)-AR和α~(1D)-AR均不参与收缩效应。     

大鼠血管α1肾上腺素受体两种亚型减敏与增敏过程的差别

研究α肾上腺素受体不同亚型之间激动剂诱导的减敏和利血平化诱导的增敏过程的差别。采用大鼠离体血管收缩功能实验，观察主动脉、肾动脉和肠系膜动脉在ＣＥＣ１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１温育３０ｍｉｎ后，ＮＥ介导的累积浓度收缩曲线的变化，以观察不同血管的亚型差异；在观察减敏时，血管用ＮＥ１０μｍｏｌ．Ｌ＾－１预温育１ｈ，洗出后做ＮＥ的ＣＣＲＣ；在观察增敏的差异时，大鼠用ｒｅｓｅｒ－ｐｉｎｅ４ｍｇ．ｋｇ＾－１ｉｐ４     

胍丁胺对异丙肾上腺素诱发豚鼠乳头状肌后除极的影响(英文)

目的:研究胍丁胺(Agm)对异丙肾上腺素(Iso)诱发豚鼠乳头状肌早发和晚发后除极(EAD和DAD)的影响及其作用机制。方法:细胞内玻璃微电极技术。结果:(1)Agm明显抑制Iso诱发的EAD和DAD;(2)预先应用NOS抑制剂L-NAME0.5mmol·L~(-1),不能影响Agm1.0mmol·L~(-1)对Iso 20nmol·L~(-1)诱发EAD和DAD的抑制作用;(3)预先应用咪唑啉受体(IR)和肾上腺素能α_2受体(α_2-AR)拮抗剂idazoxan 0.1mmol·L~(-1)则可阻断这种作用。结论:Agm对Iso诱发EAD和DAD的抑制作用由α_2-AR和/或IR介导,并与钙内流减少有关。     

粉防己碱抑制豚鼠离体气道C神经纤维兴奋引起的收缩(英文)

目的:研究粉防己碱(Tet)对豚鼠离体气管/支气管的感觉神经C纤维兴奋的抑制作用.方法:记录电场刺激所致的C纤维兴奋所产生的标本收缩(phase Ⅱ)张力,了解Tet的作用.结果:Tet 0.3—30 μmol·L~(-1)抑制phase Ⅱ收缩,在气管/支气管上,Tet 1 μmol·L~(-1)的抑制率分别是:40±38％和75±22％;用氯苯那敏或阿托品作用后,Tet 1 μmol·L~(-1)的抑制率分别是70±16％和64±16％;Tet不抑制外源性P物质引起的标本收缩.结论:Tet 1μmol·L~(-1)抑制豚鼠离体气道收缩的机理与其抑制感觉神经C纤维兴奋释放神经肽的作用有关.     

12月龄与3月龄大鼠心脏α1肾上腺素受体亚型的比较

采用［¹²⁵I］BE2254放射配体结合实验和离体灌流左心房收缩功能实验, 比较12月龄与3月龄大鼠心脏α₁肾上腺素受体(α₁-AR)三种亚型分布及其介导的正性变力效应的差别. 结果显示与3月龄大鼠相比, 12月龄大鼠: (1) 心脏α₁-AR最大结合容量显著减少; 去甲肾上腺素(NE)通过激动α₁-AR引起的左心房累积浓度-收缩效应曲线显著右移; (2) (+)尼古地平, BMY7378和WB4101的高亲和性位点所占百分比显著下降; (3)氯乙基可乐定预处理使NE引起的左心房最大收缩效应的下降幅度, 以及舍吲哚, BMY7378和WB4101拮抗NE介导正性变力效应的pA₂值均无显著差异. 提示12月龄大鼠较3月龄大鼠心脏α₁-AR总数减少, 且以α_1A和α_1D-AR亚型更为显著; α₁-AR介导的正性变力效应明显降低, α_1B-AR的功能效率降低最为明显.     

α_(2B)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建

目的建立能够稳定表达α_(2B)-肾上腺素能受体(α_(2B)-AR)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)(EGFP-NFAT2)的稳转细胞株。方法构建具有潮霉素(Hydro)抗性的pcDNA3.1α_(2B)-AR重组质粒(pcDNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR),转染至表达EGFP-NFAT2的U2OS细胞(U2OS-EGFP-NFAT2细胞),使用Hygro 200 mg·L~(-1)压力筛选10 d后,进行NFAT2核转位实验筛选细胞株并用Z’因子法评价细胞模型的可靠性,采用实时定量PCR和Western蛋白印迹法,检测α_(2B)-AR的mRNA和蛋白表达水平,选择α_2-AR的激动剂盐酸右美托咪啶(DMED)和拮抗剂盐酸阿替美唑(ATI)通过NFAT2核转位实验评价α_(2B)-AR的功能活性。结果成功构建重组质粒pc DNA3.1-Hygro-α_(2B)-AR后,稳定转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞,采用NFAT2核转位实验筛选发现,编号12的细胞株相对核转位指数为0.445,活性最高;3次独立实验中,Z’因子分别为0.664,0.533和0.634。实时定量PCR结果显示,编号12的细胞株α_(2B)-AR mRNA表达水平是U2OS-EGFP-NFAT2细胞株的140倍,表达显著增加(P<0.01),且在20代次内表达稳定。Western蛋白印迹结果显示,编号12的细胞株出现明显的α_(2B)-AR蛋白条带,而U2OS-EGFP-NFAT2细胞中未检测到α_(2B)-AR蛋白表达。DMED可以浓度依赖性地提高该细胞株的核转位水平[EC_(50)=(2.616±0.121)nmol·L~(-1)],ATI可以浓度依赖性地对抗DMED的作用[IC_(50)=(89.05±0.22)nmol·L~(-1)]。结论成功构建了共表达α_(2B)-AR与EGFP-NFAT2的稳转细胞株,可用于靶向α_(2B)-AR化合物的筛选和受体分子机制的研究。     

氟伐他汀对自发性高血压大鼠阻力血管结构和功能的影响(英文)

目的:探讨氟伐他汀(HMG-CoA还原酶抑制剂)对自发性高血压大鼠阻力血管结构和功能的影响。方法:8周龄雄性SHR大鼠,氟伐他汀20mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃治疗。计算血管壁腔比作为阻力血管结构变化指标;应用离体主动脉和肠系膜动脉环对硝普钠和去甲肾上腺素反应的敏感性,观察治疗后血管的功能变化。结果:8周后,治疗组血管的壁腔比低于对照的SHR(0.44±0.09 vs 0.79±0.09,P<0.05);氟伐他汀能增加SHR主动脉对硝普钠舒张的敏感性,EC_(50)[(4.9 vs 190)pmol·L(-1)P<0.05];减弱主动脉和肠系膜动脉对去甲肾上腺素收缩的敏感性,EC_(50)[主动脉:(0.20 vs 0.02)nmol·L~(-1),P<0.05;肠系膜动脉:(1.46 vs 0.72)nmol·L~(-1),P<0.05]。结论:短期氟伐他汀治疗,改善SHR大鼠阻力血管的舒缩功能,同时也抑制了SHR大鼠在血压发展过程中伴随的血管壁肥厚现象。     

老年大鼠心脏肾上腺素受体亚型的改变(英文)

目的:研究老年心脏肾上腺素受体亚型的改变.方法:制备3月龄与25月龄Wistar大鼠心脏膜标本,分别采用~(125)I-BE2254与~(125)I-Pindold作放射配基结合分析,测定α_1与β-肾上腺素受体.结果:老年大鼠心脏的α_1与β-肾上腺受体密度分别由年轻大鼠的119±4与45.9±1.9pmol/g下降至70±6与36.4±1.6 pmol/g(P<0.01),α_1-AR降低的幅度大于β-AR.此外α_(1A)与α_(1B)亚型之比由年轻大鼠的39:61下降至26:74(P<0.05).结论:老年大鼠心脏肾上腺素受体减少,且不同亚型减少的程度不同.     

1-(2,6-二甲氧基)-2-(3,4-二甲基苯乙氨基)丙烷盐酸盐(DDPH)拮抗α1肾上腺素受体的特性

目的　研究DDPH对α₁-肾上腺素受体(α₁-AR)及其亚型的拮抗作用。方法　放射配体结合实验和离体血管收缩功能实验。结果　DDPH对¹²⁵I-BE2254与大鼠脑皮质和脾脏α₁-AR结合呈竞争性拮抗作用。pK_I值在两者间无显著性差别, Hill系数均接近于1.0。在分别稳定表达α_1A,α_1B或α_1D-AR的克隆HEK293细胞中,其拮抗的pK_I值α_1A和α_1D比α_1B-AR高约2倍,Hill系数均接近于1.0。并拮抗去甲肾上腺素(NE)介导大鼠主动脉,肾动脉和脾脏收缩的pA₂值,在三者间无显著差别,斜率接近1.0。结论　DDPH对α₁-AR有竞争性拮抗作用,但其作用对α₁-AR亚型无选择性。     

大鼠左心耳三种亚型α1肾上腺素受体对β肾上腺素受体正性变力效应的不同影响

采用电驱动离体大鼠左心耳收缩功能实验研究三种亚型α₁-肾上腺素受体(AR)激动时对β-AR介导正性变力效应的影响. 结果发现,RS 17053(选择性拮抗α_1A-AR)或WB 4101(选择性拮抗α_1A和α_1D-AR)可使去甲肾上腺素(NE)的累积浓度 收缩效应曲线(CRC)显著左移;在BMY 7378(选择性拮抗α_1D-AR)和RS 17053存在下,NE仅激动α_1B和β-AR,其CRC较单独激动β-AR时显著左移;在WB 4101和去氧肾上腺素(Phe)同时存在下(仅激动α_1B-AR),异丙肾上腺素(Iso)的CRC较对照显著左移;用BMY 7378阻断α_1D-AR后,NE的CRC不发生明显的偏移;用RS 17053和螺哌隆阻断α_1A和α_1B-AR,用Phe仅激动α_1D-AR时,对Iso的CRC也无影响. 结果说明在大鼠左心耳α_1A-AR抑制,α_1B-AR增强,而α_1D-AR则不参与对β-AR介导正性变力效应的调节.     

酪氨酸激酶参与α_(1A)肾上腺素受体介导的人胚胎肾细胞浆游离钙浓度升高(英文)

目的:研究酪氨酸激酶是否参与α_(1A)肾上腺素受体介导的人胚胎肾细胞(HEK293)浆游离钙浓度调节。方法:用Fura-2/AM荧光法测定细胞游离钙浓度,底物反应法测定酪氨酸激酶活性。结果:去甲肾上腺素(NE)可引起的HEK293细胞内游离钙浓度升高至(371±31)nmol·L~(-1),酪氨酸激酶抑制剂檞皮素和tyrphostin可抑制NE引起的细胞内游离钙浓度升高,但不抑制NE引起磷酸肌醇的生成,NE可引起HEK293细胞浆酪氨酸激酶升高1.73±0.72倍,这种作用可被PKC的抑制剂calphostin C和细胞内钙耗竭所抑制。结论:酪氨酸激酶参与α_1A肾上腺素受体介导的人胚胎肾细胞内游离钙浓度升高。     

布比卡因增强α_1受体介导大鼠胸主动脉收缩反应中血管内皮的作用

目的分析血管内皮在布比卡因(bupivacaine,BUP)增强苯肾上腺素(phenylephrine,Phe)诱发血管收缩反应中的作用。方法制备大鼠离体胸主动脉血管环,采用机械损伤或工具药干扰血管内皮的舒张功能。记录Phe作为α1受体激动剂诱发的动脉收缩反应。结果 BUP(30μmol·L~(-1))与内皮完整血管标本孵育20 min后,Phe诱发的血管收缩Emax值为(2.50±0.05)g,明显高于对照组标本的Emax值[(2.22±0.07)g,P<0.01]。孵育时间缩短至5、10或15min时,BUP无此增强效应。在内皮损伤动脉标本,同浓度BUP孵育20 min时,轻度但明显抑制低浓度Phe诱发的血管收缩反应(P<0.05)。在吲哚美辛、Ch TX、apamin和LNAME预处理的内皮完整血管标本上,ACh诱发的血管舒张反应消失;此时BUP(30μmol·L~(-1)孵育20 min)对Phe诱发的血管收缩反应无明显影响(P>0.05)。结论在大鼠离体胸主动脉,BUP对α1受体介导收缩的增强作用与其抑制血管内皮的舒张功能密切相关,这种抑制作用间接导致Phe诱发的血管收缩反应明显增强。     

大鼠处理普奈洛尔后改变α_1受体亚型介导的心功能(英文)

目的:研究普奈洛尔(Pro)作用后,大鼠心肌α_(1A)和α_(1B)受体亚型介导正性肌力和正性频率变化.方法:测定Pro大鼠和正常鼠左心室乳头状肌和右心房收缩力和心率.结果:给予Pro后,苯肾上腺素(Phe)使乳头状肌收缩力由53±17 mg增加到90±18 mg(P<0.05).Pro和对照组收缩力分别增加20±12和5±5 mg(P<0.05).氯乙基可乐定使两组收缩力变化无区别.5-甲基乌拉地尔存在时Phe使Pro组收缩力增加13±5mg,对照组无变化.正常和心率抑制时,Phe使两组动物α_(1B)介导心率增加无差别.结论:β受体阻断,α_1介导正性肌力增加主要由α_(1B)作用增强引起.     

多柔比星对大鼠离体胸主动脉和颈总动脉血管环的舒张作用及其机制

目的研究多柔比星(DOX)对大鼠离体胸主动脉和颈总动脉血管环的作用及其机制。方法采用离体血管环恒温灌流系统,通过累积加药法每10 min加入DOX依次使其终浓度递增为1,3,10,30和100μmol·L~(-1),观察其对基础状态、去氧肾上腺素(PE,1μmol·L~(-1))和氯化钾(KCl,60 mmol·L~(-1))预收缩的胸主动脉及颈总动脉血管环的作用,并采用左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、4-氨基吡啶(4-AP)、溴化四乙铵(TEA)、氯化钡(BaCl_2)、格列苯脲(Gli)、吲哚美辛(Indo)和普萘洛尔预处理探讨其对血管作用的可能机制。结果 DOX对基础状态下及KCl预收缩的胸主动脉和颈总动脉血管环张力无明显影响;DOX可浓度依赖性地舒张PE预收缩的内皮完整胸主动脉和颈总动脉环(P<0.05),且其对去内皮胸主动脉血管环也有舒张作用,但舒张程度弱于内皮完整组(P<0.05);一氧化氮合酶抑制剂L-NAME 0.1 mmol·L~(-1)、电压依赖性钾通道(K_V)抑制剂4-AP 1 mmol·L~(-1)、钙敏感性钾通道(K_(Ca))抑制剂TEA 1 mmol·L~(-1)和内向整流型钾通道(K_(IR))抑制剂BaCl_21 mmol·L~(-1)均可明显抑制DOX的舒血管作用(P<0.05),环氧化酶抑制剂Indo 0.01 mmol·L~(-1)、ATP敏感性钾通道抑制剂Gli 0.01 mmol·L~(-1)和β肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔0.01 mmol·L~(-1)对DOX舒血管作用无明显影响;DOX 1,10和100μmol·L~(-1)可浓度依赖性减弱无钙液中PE诱发的血管收缩,并可使氯化钙量效曲线右移。结论 DOX对大鼠离体胸主动脉和颈总动脉血管环有浓度依赖性舒张作用,其舒血管机制可能与血管内皮细胞一氧化氮/cGMP途径、K_V、K_(Ca)、K_(IR)、血管平滑肌细胞内钙释放和外钙内流有关。     

本刊主编——韩启德院士

近10年来,韩启德院士在α_1肾上腺受体α_1-AR亚型研究领域获得重要成果,1987年在国际上首先证实在α_1-AR中包含α_(1a)与α_(1b)两种亚型,这项具有突破性意义的发现很快得到国际学术界的公认,它在α_1-AR亚型研究的发展史上占有一定的地位,其主要     

吗啡、哌替啶及芬太尼对离体兔气管的影响

用电场刺激的方法研究吗啡(Mor),哌替啶(Pet)及芬太尼(Fen)对离体兔气管的影响,结果表明:Mor 53μmol·L~(-1)使气管收缩明显增强(P<0.01);Fen 1.9 μmol·L~(-1)使其明显减弱(P<0.05);Pet 705 μmol·L~(-1)不仅使其明显减弱(P<0.01),并可使之松弛;纳洛酮(Nal)2.2 μmol·L~(-1)对气管无影响(P>0.05),但能逆转Mor对气管的效应。提示:吗啡受体的兴奋可能是引起气管平滑肌收缩的机制之一。     

普鲁托品对兔血小板内钙的影响(英文)

目的:研究普鲁托品(Pro)对血小板内钙离子水平的作用,方法:用Fura 2-AM作荧光指示剂,测定血小板内钙浓度。结果:在胞外含CaCl_2 lmmol·L~(-1)时,Pro 10,20和40 μmol·L~(-1)对ADP,花生四烯酸(AA)和血小板激活因子(PAF)引起的血小板内钙变化分别由(420±57),(280±36)和(350±42)nmol·L~(-1)降至(320±26),(264±21)和(180±14)nmol·L~(-1),(210±17),(184±21)和(143±16)nmol·L~(-1)及(282±31),(223±30)和(165±15)nmol·L~(-1),在依他酸lmmol·L~(-1)存在时,Pro 10,20和40 μmol·L~(-1)呈浓度相关性减少ADP,AA和PAF诱导的血小板内钙释放及外钙内流,结论:Pro不仅抑制血小板的内钙释放,而且抑制其外钙内流。