人补体B因子cDNA克隆化及其在大肠杆菌中的表达

本文报告用免疫学方法从人肝cDNA文库中筛选到数个B因子cDNA克隆,它们分别位于Ba和Bb片段。通过对其中一克隆的改建,成功地在大肠杆菌中高效率地表达了重组人补体B因子片段,表达的人补体B因子融合蛋白约占细菌总蛋白量的20%。     

葡激酶基因克隆化和它在大肠杆菌中表达

萄激酶(staphylokinase)是金黄色葡萄球菌所产生的胞外蛋白,能溶解纤维蛋白,活化纤溶酶原,其作用如链激酶和尿激酶。其分子量为14600,比链激酶和尿激酶都小。血清型F或B噬菌体溶原在能转变不产生葡激酶的菌株可产生葡激酶株。说     

小鼠造血干细胞因子的cDNA克隆化及在大肠杆菌表达

造血干细胞因子（ＳＣＦ）是一种多功能造血生长因子，与其它造血生长因子协同作用，刺激不同分化阶段的造血细胞增殖和分化。本文采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从新生ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺组织克隆了ＳＣＦ膜外功能区ｃＤＮＡ，进而在大肠杆菌表达出具有生物学活性的重组蛋白。     

TCGF与T淋巴细胞克隆化

<正> T细胞是一个具有不同功能亚群、不同发育阶段、不同特异性表面标记或受体的高度异质性群体。若直接使用如此混杂的T细胞群来研究T细胞各亚群的功能的调节,显然是不合适的。因而,如能在体外建立均一     

小鼠G-CSF受体cDNA的克隆化

G-CSF在血细胞增殖分化过程中起着重要作用,小鼠和人G-CSF cDNA均已克隆,然而G-CSF诱导的信号转导机制还不清楚。本文作者从小鼠髓样白血病NFS-60细胞中分离出mRNA,逆转录为eDNA,在哺乳细胞表达载体CDM8中构建为eDNA文库,经~(125)I-G-CSF筛选出两个阳性克隆P~(162)和p~(J17)转染了p~(I62)和p~(J62)的COS-7结合~(125)I-G-CSF     

T细胞替代因子cDNA的克隆化

抗原刺激的B细胞的增殖与成熟受到一些可溶性因子的调节,这些可溶性因子由巨噬细胞和T细胞分泌,根据功能的不同可分为B细胞生长因子(BCGF)和B细胞分化因子(BCDF)两类.鼠T细胞杂交瘤细胞株B151K12可分泌一种T细胞替代因子(TRF),具有BCDF的作用,能诱导B     

准确快速的细胞克隆化实验研究

目前杂交瘤技术已较为成熟,但克隆化技术仍多采用经典的有限稀释法。此法操作较烦锁,计数误差大,单个克隆率低,亚克隆次数多,为获得抗体检测阳性孔达100％,常需2～3个月之久,工作量大。为了提高效率,我们设计了培养瓶内细胞精确计数稀释法,经对比研究及应用,优点显著,现介绍如下。 1 培养瓶内细胞精确计数稀释法 选择杂交瘤第一次检测阳性孔共10孔,分别用滴管吹打后随意稀释至0.5～1 ml左右。取一微滴     

乙型肝炎病毒preS1多肽在大肠杆菌中的表达与纯？…

获得大量完整的重组乙肝病毒多（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ１多肽纯品，以利ｐｒｅＳ１功能与免疫学性质的研究。方法比较不同表达载体及不同的培养，诱导和纯化条件，最大限度地使表达产物免受大肠杆菌蛋白酶的降解。结论缩短诱导时间、用一步法在变性条件下纯化表达产物可获得无明显降解的ｐｒｅＳ１完整蛋白。     

大肠杆菌PBR322质粒DNA在痢疾杆菌中的转化研究

将E.Coli.PBR322质粒用转化方法引进福氏志贺氏2a.3a菌(营养缺陷型菌株)中,以近一步证明耐药质粒的传递,实验获得成功.报告如下.     

DNA 改组在病毒新型疫苗研究中的应用

DNA改组是一种全新的体外人工进化模式,它改变了传统的进化途径,大大加速了蛋白质的进化进程.该技术自1994年建立以来,在医药和酶工程等领域得到了广泛的应用.本文综述DNA改组在病毒新型疫苗及其相关领域的研究进展.介绍DNA改组的原理和在体外人工进化上的优势、病毒疫苗研究、病毒载体的改造等方面的研究进展,同时对DNA改组中面临的困难也进行了剖析.     

乙型肝炎病毒DNA在肝癌患者基因组中的检测

目的：为了研究乙型肝炎病毒ＤＮＡ在人类基因组中的整合作用与肝癌发生之间的关系。方法：采用聚合酶链反应技术,对肝癌细胞基因组中的乙肝病毒ＤＮＡ第Ｖ 区段进行了测定。结果：１２ 例肝癌细胞基因组８ 例为阳性,１０ 例肝癌患者外周血细胞基因组均为阴性。结论：乙型肝炎病毒ＤＮＡ 的整合与肝癌发生有密切关系。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达

目的　获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒ＮＳ３ 抗原。方法　从重组质粒Ｉｗｑ２利用ＰＣＲ 反应扩增出ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段,克隆至表达载体ｐＰＲＯＥＸ ＨＴａ 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经ＩＰＴＧ 诱导重组工程菌,用ＳＤＳＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对重组蛋白进行鉴定。结果　酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌ｐＨＴＮＳ３／ ＤＨ５α且克隆的基因片段为ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 基因片段。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约４３ ８１０处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的１７ ．７ ％ 。用ＮｉＮＴＡ 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定发现重组蛋白可与ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＲＮＡ 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论　获得了具备免疫反应原性的ＧＢＶＣ／ＨＧＶ ＮＳ３ 抗原,该重组蛋白可用于ＧＢＶＣ／ＨＧＶ 感染的检测。     

小鼠胸腺树突状细胞系的克隆化及基本鉴定

目的：应用单细胞培养系统,对本室建成的胸腺基质细胞系ＭＴＳＣ４进行细胞克隆化并鉴定。方法：在单个细胞培养中,扩增出一个细胞长成的克隆,并使之稳定生长后,进行表面标志分子和倍增时间检查,并以其分泌的细胞因子测定其生物不特性及功能。结果;获得１４个细胞克隆,它们均表达树突状细胞抗原和ＭＨＣ－Ⅱ类分子,均无角蛋白,表明各克隆均为树突状细胞,起始的ＭＴＳＣ４也是树突状细胞系。     

用聚合酶链反应检测人肝细胞癌乙型肝炎病毒DNA和丙型肝炎病毒RNA

为研究乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＤＮＡ）与肝细胞癌的关系，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）分别检测４２例肝肿瘤组织中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。结果：１例胆管细胞癌组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性，１例胆管囊腺瘤ＨＢＶＤＮＡ阳性。４０例肝细胞癌组织中，单纯ＨＢＶＤＮＡ阳性１９例，单纯ＨＣＶＲＮＡ阳性３例，二者均阳性１０例。ＨＢＶＤＮＡ阳性率７２．５％，ＨＣＶＲＮＡ阳性率３２．５％。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ感染与肝癌组织学分型无关；且肝细胞癌中ＨＣＶ感染与ＨＢＶ未见相关。结果提示，我国ＨＢＶ感染仍是引起肝细胞癌的主要原因。但由于肝细胞癌患者中ＨＣＶ的感染率也较高，且有上升趋势，因此ＨＣＶ可能也是肝细胞癌发生的重要原因之一。     

热体克蛋白70在肝细胞癌中的表达及其意义

目的　探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法　采用免疫组化技术对 4 4例HCC和癌旁组织中HSP70的表达进行检测。结果　HCC中HSP70阳性率明显高于癌旁组织 (阳性率分别为 6 8.2 %和2 7.3% ,χ2 =7.3,P <0 .0 1)。HSP70表达与癌周淋巴细胞浸润 (χ2 =3.2 ,P >0 .0 5 )和转移 (χ2 =2 .3,P >0 .0 5 )无关 ,但与癌组织分化程度有关 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论　HSP70的异常表达与HCC的发生、发展有关 ,且可能是HCC发展、恶化的重要标志     

乙型肝炎病毒preS抗原在大肠杆菌中的高效表达与鉴定

利用ＰＣＲ和基因重组技术构建了乙型肝炎病毒完整ｐｒｅＳ抗原高效表达克隆，该克隆在大肠杆菌中表达一分子量约３１ｋＤ的融合蛋白，由ＭＳ２、白细胞介素３Ｎ端１４个氨基酸接头和ｐｒｅＳ抗原组成，在ＩＬ－３Ｎ端与ＭＳ２连接处有凝血酶识别位点，可被该酶切开。     

人Ⅱ型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达

目的：表达ＨＩＶ－２基因工程ｇａｇ抗原。方法：将编码ＨＩＶ－２型ｇａｇ的部分和全部ｐ５５ｇａｇ１／２基因,克隆到载体ｐＥＴ－１７ｂ后,分别在Ｅ．Ｃｏｌｉ ＢＩ２１中表达。结果;表达产物为５１和６１ｋＤ融合蛋白,并可与ＨＩＶ－２病人血清发生特异性反应。     

免疫毒素清除人骨髓中克隆化白血病细胞的研究

本实验用抗急性淋巴细胞白血病共同抗原(CALLA)的单克隆抗体与蓖麻毒素(Ri-cin)偶联的免疫毒素(79:Ricin)清除骨髓中克隆化白血病细胞。目的在于寻找减少自体骨髓移植后白血病复发可能性的有效措施。~3H-亮氨酸掺入实验结果表明,79:Ricin在