TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响

目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。     

TNP-470对结肠癌Lovo细胞生长的抑制作用

目的　探讨 TNP- 4 70对体内外人结肠癌 L ovo细胞生长的影响 .方法　采用 MTT法检测 TNP- 4 70对体外培养的 L ovo细胞的生长抑制作用 .建立结肠癌皮下移植瘤模型 ,16只裸鼠平均分为治疗组 (TNP- 4 70 30 mg· kg- 1 )和对照组(相同体积的生理盐水 ) ,4 wk后处死裸鼠 ,测量肿瘤体积 .肿瘤组织行病理学检查 ,采用 HE染色和 TUNEL 原位末端标记术检测体内肿瘤细胞的凋亡情况 .结果　 TNP- 4 70作用 72h,明显抑制体外培养的 L ovo细胞的生长 ,IC5 0为 5 5 .8μg·L- 1 . TNP- 4 70显著抑制了体内肿瘤的生长 ,治疗组肿瘤体积为 (731± 4 0 ) mm3,对照组为 (1345± 38) mm3,(P<0 .0 1) .治疗组 L ovo细胞凋亡率为 (2 1.4± 2 .1) % ,对照组为 (7.5±1.5 ) % ,(P<0 .0 0 1) .结论　 TNP- 4 70能够抑制结肠癌 L ovo细胞的体内外生长 ,其机制可能与诱导细胞凋亡有关 .     

血管生成抑制剂TNP-470对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44及其移植瘤生长的影响

目的：观察TNP－470对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44体内和体外生长的影响。方法：采用MTT法、软琼脂克隆法、流式细胞仪、光镜和透射电镜技术观察SHG－44细胞体内外增殖、克隆形成、细胞周期和形态学变化及异种移植瘤生长情况。结果：20－2000ng/mlTNP－470可显著抑制SHG－44细胞体外增殖,克隆形成率显著降低,G0／G1期细胞明显增多,S、G2／M期细胞减少。彩和30mg/kg体重TNP－470隔日皮下注射后,移植瘤体积缩小、重量显著减轻,组织出现明显调亡细胞和坏死。结论：TNP－470对SHG-44细胞的生长抑制作用与其调控细胞周期和诱导细胞凋亡相关,提示TNP－470作为一种血管生成抑制剂对胶质瘤细胞生长也具有直接抑制作用。     

血管生成抑制剂TNP-470抗肿瘤作用的研究进展

原发性实体肿瘤的生长和转移依赖于血管生成(Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ)。肿瘤细胞既可通过肿瘤血管从宿主获得营养和氧气,又可通过肿瘤血管源源不断地向宿主输送肿瘤细胞,并在机体的其它部位继续生长和诱导血管生成,导致肿瘤转移[1]。因此,若能阻止肿瘤血管的形成,也就可能抑制肿瘤的生长。近年来人们已开发和研究能破坏和抑制血管生成、有效地阻止肿瘤生长和转移的药物[2,3]。ＴＮＰ470以其高效低毒的特性被认为是目前最有前途的血管生成抑制剂之一,本研究拟对ＴＮＰ470的抗肿瘤作用研究进展作一综述。1　烟曲霉素的发现和ＴＮＰ470的合成…     

大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨

目的：培养大鼠血管平滑肌细胞。方法：手术显微镜下分离主动脉和肺动脉，再用翻转干涸法进行操作。结果：显微镜下分离组织，岢基本除净动脉纤维脂肪层和外膜，再用刀片轻刮内膜，可保证所贴组织块为地动脉中膜。传至第三代时，用台盼蓝检查细胞传代成活率９５％，光镜、电镜和免疫组化鉴定培养细胞，培养细胞纯度９６％。结论：贴块片简便易行、经济、又可以防止膜损伤，可为血管病理变化研究提供适宜的细胞。     

流体切应力对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨流体切应力（SS）对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）形态学影响。方法运用倒置相差显微镜和免疫组化ABC方法对VSMC进行鉴定，采用荧光显微镜和TuNEL—AP方法观察其变化。结果组织块贴壁法培养的VSMC呈典型的长梭形，α—actin染色显示95％以上VSMC呈阳性；SS强度分别为1．041、4．767和10．389dyne／cm^2冲击VSMC12h其凋亡百分率分别为（1．56±0．28）％、（1、95±0．23）％和（2、62±0．49）％，而对照组分别为（0、61±0．12）％、（0．55±0．16）％和（0、64±0．24）％，两组比较差异有统计学意义（P〈0.01），随着冲击时间的延长凋亡细胞有进一步增多的趋势。结论VSMC大量凋亡可由SS所诱导，颅内动脉瘤组织内VSMC过度凋亡可能与局部升高的SS密切相关。     

硒对大鼠血管平滑肌细胞表达细胞间黏附分子-1的影响

目的：观察抗氧化剂亚硒酸钠(Se)对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)细胞间黏附分子(ICAM)—1表达的影响，以探讨TNF—α介导单核细胞与VSMC黏附，致动脉粥样硬化及硒抗动脉粥样硬化的可能机制。方法：体外培养大鼠VSMC，分别为TNF—α(20ng／m1)及TNF-α(20ng／ml) Se(0.5-2.0μmol/L),孵有24h，采用细胞黏附实验、流式细胞术和RT—PCR测定ICAM—1蛋白及mRNA水平表达。结果：TNP—α可诱导VSMC ICAM—1表达增强；而硒可降低TNF—α诱导的ICAM—1mRNA水平及蛋白表达，且呈浓度依赖性。结论：抗氧化剂硒可抑制TNF—-α诱导的VSMC中ICAM—1的表达，减少单核细胞与VSMC黏附，这可能对延缓动脉粥样硬化的发生发展起一定作用。     

TNP-470和DDP联用对小鼠腹水瘤腹水生成的抑制作用

目的:为了验证0-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉醇(TNP-470)和顺铂(DDP)联用的增效作用.方法:将64只615小鼠腹腔内接种腹水瘤细胞株后,随机分为4组,然后腹腔内分别注射生理盐水(第1组),DDP(第2组),TNP-470(第3组)及联合用药(第4组),观察瘤细胞株对各组小鼠的腹水生成,瘤细胞数,存活率及生存时间.结果:DDP,TNP-470及联合用药组与生理盐水对照组相比可显著抑制615小鼠腹水的生成,减少瘤细胞数量,延长生存期(P<0.05);联合用药组与其它3组比较在瘤细胞计数和瘤细胞存活率方面均有显著性差异(P<0.05);在小鼠存活率及生存时间方面,联合用药组延长最明显;在用药过程中,联合用药组可引起体重下降,但停止用药后体重又可逐渐得到恢复.结论:TNP-470,DDP对小鼠腹水瘤腹腔种植后腹水的生成都有明显的抑制作用;TNP-470和DDP联用能起增效作用;体重下降这一副作用是可逆的.     

超声作用下声学造影剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察低机械指数超声作用下声学造影剂对平滑肌细胞增殖的影响。方法6孔板培养大鼠血管平滑肌细胞，加或不加声学造影剂，超声条件为连续波，频率2MHz，机械指数0．25，照射时间1min。分别于照射后3、24、48h行锥虫蓝染色，平行孔内的细胞进行胰酶消化后，用Coulter数器计算细胞数量，应用流式细胞术测定细胞周期。结果锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用。与对照组相比，超声加声学造影剂组24h内大鼠血管平滑肌细胞的增殖被抑制，48h后这一作用消失。结论在低机械指数超声作用下造影剂空化对平滑肌细胞增殖有一过性的抑制作用。     

Different responses of cell cycle between rat vascular smooth muscle cells and vascular endothelial cells to paclitaxel

Summary： Although previous reports showed dmg-eluting stent （DES） could effectively inhibit neointima formation, in-stent restenosis （ISR） remains an important obstacle. The purpose of this study was to investigate different effects of paclitaxel on proliferation and cell cycle regulators between vascular smooth muscle cells （VSMCs） and vascular endothelial cells （VECs） of rats in vitro. The cultured VSMCs and VECs of rats from the same tissues were examined by using immunohistochemistry, flow cytometry and Western blotting in control and paclitaxel-treated groups. The results showed paclitaxel could effectively inhibit proliferation of VSMCs and VECs. However, as compared with VECs, prolif- eration of VSMCs in paclitaxel-treated group decreased less rapidly. The percentage of cells in G0-G1 and G2-M phases was reduced, and that in S phase increased after treatment for 72 h. The expression of cyclin D1 and B1, p27 and PCNA in VSMCs of paclitaxel-treated group was up-regulated, but that of p21 down-regulated as compared with VECs. It is concluded that there are significant differences in the expression of cell cycle regulators and proliferation rate between paclitaxel-treated VSMCs and paclitaxel-treated VECs, suggesting that the G1 S checkpoint regulated by paclitaxel may play a critical role in the development of complications of DES, which provides new strategies for treatments of ISR.     

Effect of homocysteine on NF-kappaB activity in cultured rat vascular smooth muscle cells]

OBJECTIVE: To investigate the effect of homocysteine (Hcy) on nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) activity in cultured rat vascular smooth muscle cells (VSMCs). METHODS: Rat VSMCs were stimulated with 0.25 mmol/L Hcy. Cells were collected and nuclear protein was extracted at 30 min, 1 h and 2 h following stimulation. NF-kappaB activity was examined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). RESULT: Baseline NF-kappaB nuclear binding in VSMCs increased more than 1.76-fold at 30 min (P<0.01), 1.91-fold at 1h (P<0.01) and 1.84-fold at 2 h (P<0.01) following stimulation of Hcy. CONCLUSION: Hcy can enhance transient mobilization of N-kappaB in VSMCs, which suggests that some regulating effect of Hcy on VSMCs might be exerted through NF-kappaB activation pathway.     

超声作用下声学造影剂对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察低机械指数超声作用下声学造影剂对平滑肌细胞增殖的影响。方法6孔板培养大鼠血管平滑肌细胞,加或不加声学造影剂,超声条件为连续波,频率2 MHz,机械指数0.25,照射时间1 min。分别于照射后3、24、48 h行锥虫蓝染色,平行孔内的细胞进行胰酶消化后,用Coulter计数器计算细胞数量,应用流式细胞术测定细胞周期。结果锥虫蓝染色未观察到细胞毒性作用。与对照组相比,超声加声学造影剂组24 h内大鼠血管平滑肌细胞的增殖被抑制,48 h后这一作用消失。结论在低机械指数超声作用下造影剂空化对平滑肌细胞增殖有一过性的抑制作用。     

TNP-470与IL-2对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的：应用体外细胞培养法,探讨TNP-470对肺癌细胞诱导的血管内皮细胞增殖的影响及其机制,以及TNP-470与IL-2联合用药的效应。方法：用免疫细胞化学方法检测血管内皮细胞PCNA、VEGFR-2／Flk-1、FGFR的表达,采用阳性细胞计数法及图像分析法对结果进行分析：用流式细胞分析仪对血管内皮细胞的细胞周期进行分析。结果：TNP-470以剂量依赖方式抑制肺癌细胞条件培养液或细胞粉碎液诱导的血管内皮细胞PCNA、Flk-1、FGFR的表达（与对照组比较P〈0．05）。TNP-470与IL-2均可抑制血管内皮细胞进入S期．但两者联合应用时,其效应与各自单独应用无差异（P〉0．05）。结论：TNP-470通过降低内皮细胞表面Flk-1、FGFR的表达,抑制内皮细胞进入S期,使内皮细胞阻滞于G0／G1期途径,发挥其抑制血管内皮细胞增殖的效应：而IL-2则通过对内皮细胞的毒性或诱导凋亡作用而发挥其抑制内皮细胞增殖的效应．     

大鼠主动脉平滑肌细胞的体外培养和观察

目的 建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型，为动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制的研究提供了重要手段。方法 将大鼠主动脉翻转，两端结扎，用0.1%胶原酶消化血管内皮细胞，剩余血管剪成小块均匀种植于培养瓶底，加入DMEM培养液培养，观察血管平滑肌细胞的生长，结果 平滑肌细胞48h后贴壁生长，早期呈多角形，以后呈梭形伸展，胰酶消化后平滑肌细胞可传6－7代。结论 此方法简单易行，是获得血管平滑肌细胞的一种可靠方法。     

阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的作用

目的:研究阿托伐他汀对体外大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的作用.方法:采用组织块培养法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞.细胞分为正常组(常规细胞培养液)、钙化组(加入10 mmol/L β-磷酸甘油,0.1μmol/L胰岛素及50 μg/L维生素C钙化培养基)和阿托伐他汀组(按终浓度加入10μmol/L阿托伐他汀,作用24 h后,再加入钙化培养基诱导细胞钙化),连续培养14 d.茜素红S染色观察钙结节计数并测定细胞钙沉积含量.采用四唑盐比色法(MTF)测量细胞增殖.结果:阿托伐他汀组钙结节计数为(4.3±1.9)%,较钙化组(7.4±3.8)%明显减少,统计学差异显著(P＜0.01);同时阿托伐他汀组细胞钙沉积含量为(0.163±0.053)mmol/g,较钙化组(5.745±0.021)mmol/g明显减少,统计学差异显著(P＜0.01).MTT检测钙化组细胞增殖为0.136±0.048,较正常组0.045±0.020明显增加(P＜0.01);阿托伐他汀组细胞增殖为0.038±0.010,较钙化组明显减少(P＜0.01).结论:阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化有抑制作用.     

Effect of LPS on the proliferation and viability of rat vascular smooth muscle cell in vitro

Bacterialinfectionisacommoncauseofdiseasesinclinic,ofwhichendotoxemiaoftenleadtovascularwalldamage,edema,dilatation,causestructureandfunctionchangesofVSMC,arouseasevenDICorshock.l-PSisthemaintoxicelementofendotoxin.ItwasreportedthatsepticaemicshockinducedbyGram--negativebacteriainfectioncouldhurtendothelialcell,bloodplatelets,evendirectlyattackVSMCthroughdamagedvascularwallandmakethesecellsreleasesomeactivefactorswhichevokeaseriesofvascularreactions.Buttheexactmechanismoftheprocessisnucle…     

Effect of pingyangmycin on the growth and cell cycle of human vascular endothelial cells]

OBJECTIVE: To study the effect of pingyangmycin (PYM, bleomycin A5) on the proliferation and cell cycle of the cultured ECV304 cells, a human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) line. METHODS: The growth inhibition of PYM on ECV304 cells was measured by MTT assay and the changes in the cell cycle by flow cytometry. RESULTS: After 10 microg/ml PYM treatment of the cells for 24, 48, and 72 h, the inhibition rates were 44.7%, 59.7%, and 74.4% respectively, showing a dose- and time-dependent inhibitory effect, with the 50% inhibitory concentration (IC50) of PYM corresponding to treatment durations of 24, 48 and 72 h being 32.94, 2.56 and 0.75 microg/ml respectively. Flow cytometry showed that ECV304 cell cycle was arrested at G2-M phase after 24-hour treatment with 1 microg/ml PYM, with significant reduction in the cell ratio of S phase and increase of G2-M phase (P<0.01) CONCLUSION: PYM can effectively inhibit the proliferation of ECV304 cells, the mechanism of which might involve the blocking of cell cycle.