骨髓单个核细胞培养上清促进内皮细胞增殖作用

目的：探讨体外培养骨髓细胞分泌促血管生长因子的能力及培养上清对内皮细胞增殖的影响。方法：采用密度梯度离心法分离出大鼠骨髓单个核细胞进行体外培养,并连续收集4周培养上清。酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定上清中血管内皮细胞生长因子（VEGF）;以含有不同浓度上清的培养液培养人脐静脉内皮细胞,分析单个核细胞培养上清对内皮细胞增殖的影响。结果：加入单个核细胞培养上清各组MTT比色光密度值较对照组明显增加（P<0.05）。第1,2,3,4周骨髓单个核细胞体外培养上清中VEGF分别为（24.40±7.99,89.28±5.13,115.24±10.08,157.00±15.64）pg/ml。结论： 骨髓单个核细胞培养上清可促进体外培养的人脐静脉内皮细胞增殖,体外培养的骨髓单个核细胞可持续分泌VEGF。     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

p40同源二聚体对Th17细胞增殖及IL-17分泌的影响

目的研究p40同源二聚体（p40）：对银屑病患者外周血辅助性T细胞亚群17（Thl7）功能的影响。方法取C57BL／6小鼠骨髓,体外培养诱导分化Th0和Thl7细胞,采用流式细胞术检测（p40）：对细胞增殖和细胞内自介素17（IL-17）分泌的影响。提取正常人和银屑病患者外周血单个核细胞（PBMC）,酶联免疫吸附ELISA法检测和分析（p40）：对细胞培养上清中IL-17释放的影响。结果流式细胞仪检测结果显示：加入（p40）：对Th0细胞增殖无明显影响,而对Thl7细胞增殖分裂有显著促进作用;与未加入（p40）：的Thl7细胞比较,加入（p40）：的Thl7细胞能分泌更多的IL-17。与未加入（p40）。的银屑病患者外周血PBMC比较,加入（p40）：的银屑病患者外周血PBMC培养上清中的IL-17含量显著增高（P〈0．01）,加入与未加入（p40）：的正常人PBMC培养上清中的IL-17含量比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论细胞因子（p40）,在银屑病发病中具有重作用,揭示了p40单抗治疗银屑病有效的可能机制。     

肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞功能的研究

目的检测实验性肺动脉高压大鼠骨髓内皮祖细胞（EPC）的功能,探讨肺动脉高压发病机制。方法利用野百合碱诱导大鼠发生肺动脉高压,分离骨髓单个核细胞进行体外诱导培养以获得EPC集落,并对其骨髓内皮祖细胞的集落形成能力、增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果骨髓单个核细胞在体外培养下能够获得EPC集落,与对照组比较,肺动脉高压实验组诱导生成的EPC数量少（P〈0.05）,CD34和FLK-1阴性比例下降（分别为19.33%±3.27%vs 31.17%±4.40%和33.67%±3.50%vs 44.50%±3.78%,P均〈0.01）,细胞增殖能力下降（0.43±0.08 vs 0.64±0.07,P〈0.01）,贴壁细胞减少（6.835个±1.605个vs 10.175个±1.945个,P〈0.01）,细胞迁移能力下降（7.83个±1.94个vs 11.83个±2.48个,P〈0.05）。结论肺动脉高压的发生与骨髓内皮祖细胞功能的异常存在明显的相关性。     

脐血清体外对急性白血病病儿化疗后造血细胞增殖的影响

①目的　探讨脐血清体外对急性白血病化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法　采用体外粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）培养法,观察正常成人血清和脐血清,对正常造血细胞和急性白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果　脐血清组的正常骨髓ＣＦＵ－ＧＭ 产率明显高于成人血清组（ｔ＝ ６．９９３,Ｐ＜０．０１）,脐血清组的白血病化疗后骨髓ＣＦＵ－ＧＭ 产率亦高于成人血清组（ｔ＝ ３．０６０,Ｐ＜ ０．０５）。④结论　脐血清体外能促进正常骨髓和白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞的增殖。     

脐血清体外对急性白血病病儿化疗后造血细胞增殖的影响

①目的 探讨脐血清体外对急性白血病化疗后骨髓抑制期造血细胞增殖的影响。②方法 采用体外粒单细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）培养法,观察正常成人血清和脐血清,对正常造血细胞和急性白血病化疗后抑制期骨髓造血细胞增殖的影响。③结果 脐血清组的正常骨髓ＣＦＵ－ＧＭ产率明显高于成人血清组（t＝６．９９３,Ｐ＜０．０１）,脐血清组的 白血病化疗后骨髓ＣＦＵ－ＧＭ产率亦高于成人血清组（t=３．０６０,Ｐ＜０．０５）。     

辛伐他汀选择性抑制慢性髓性白血病细胞增殖并诱导凋亡

目的:探讨胆固醇合成限速酶3-羟3-甲基戊二酰辅酶A (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A , HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对慢性髓性白血病（chronic myelogenous leukemia , CML）细胞增殖和凋亡的影响。方法:正常骨髓和CML骨髓单个核细胞用10 mg*L－1辛伐他汀处理24 h后,接种于甲基纤维素培养体系中,分析粒单细胞集落刺激因子(colong forming unit-granulocyte macrophage, CFU-GM)集落形成能力。同时,用流式细胞仪测定辛伐他汀处理72 h后正常骨髓和CML骨髓单个核细胞中亚二倍体细胞以及DNA末端标记阳性细胞作为细胞凋亡的指标。结果:辛伐他汀可选择性抑制CML细胞增殖并诱导CML细胞凋亡,而对正常骨髓细胞无明显作用。结论:CML骨髓细胞较正常骨髓细胞对辛伐他汀敏感,表明该制剂作为CML化疗或体外净化进行自体骨髓移植具有潜在的应用价值。     

人骨髓细胞体外长期培养的建立

观察了由髂后上棘、胫骨穿刺抽吸的骨髓液及胸骨手术时刮取的骨髓液，以及在培养过程中不同时间用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（ＦＨ）分离骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）等因素对人骨髓细胞体外长期培养（Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｕｌｔｕｒｅ，ＬＴＨＢＭＣ）的影响。结果显示；由刮取的骨髓液建立的培养，其基质层细胞生长、培养上清液中非粘附细胞及粒单细胞集落形成单位数目均优于抽吸者。原因     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论 :人骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长     

激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究

目的 :证实激活骨髓 (Activated bone marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤 (LAK)细胞不同的生物学效应。方法 :应用重组白细胞介素 - 2 (r IL - 2 )、抗 CD3 单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞 ,以 MTT比色分析法测定 ABM、L AK细胞的杀伤活性 ,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒 -巨噬细胞系祖细胞 (CFU- GM)、红系祖细胞 (BFU- E)培养。结果 :r IL- 2 +抗 CD3 单抗激活的 ABM组杀伤活性最强 (6 5 .8± 9.2 ) % ,r IL - 2激活的 ABM组次之为 (5 6 .3± 7.9) % ,活性强于相同条件下的 L AK组 ,两组差异具有显著性 (P<0 .0 1)。增殖倍数与相同条件下的 LAK细胞相比差异亦具有显著性。体外激活 3～ 5 d的 ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比 BFU- E、CFU- GM形成率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,LAK细胞则不具有造血祖细胞活性。结论 :ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于 L AK细胞 ,且能保持造血祖细胞活性 ,抗 CD3 单抗能够促进 r IL - 2诱导的 ABM抗肿瘤活性和增殖效应 ,不损伤造血祖细胞活性 ,是优于 LAK细胞的过继免疫疗法。     

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

目的 :研究正常人骨髓基质祖细胞 ( CFU- F)在体外传代培养过程中的功能变化。方法 :采用体外液体单层和半固体培养法。结果 :F1传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位 ( CFU- E)和粒系祖细胞集落形成单位 ( CFU- GM)支持能力最显著 ,F2 代对有核细胞粘附能力最显著。结论 :F1代是进行第二次接种骨髓细胞的最佳时机 ,而对有核细胞的粘附能力主要与成纤维细胞有关。     

重组人白细胞介素3和白细胞介素6对骨髓基质细胞生长的调节作用

目的了解重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）和重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）对骨髓造血微环境的调节作用。方法应用成纤维细胞体外集落形成法，观察了ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６对成纤维细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）体外生长的影响。结果ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６能显著地刺激ＣＦＵ－Ｆ的生长，两者联合应用时对ＣＦＵ－Ｆ生长的刺激作用明显强于两者单用，表现出协同效应。结论ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６可促进基质细胞生长，对促进化疗和（或）放疗及骨髓移植后造血微环境的恢复和重建具有重要的临床应用潜能     

Double potentialities of tumoricide and hematopoiesis of human bone marrow cells activated by IL-2 and IL-3

The biomodulative and hematopoietic potentialities of IL-2 and IL-3 activatedbone marrow(ABM)cells from patients with lung adenocarcinoma were studied in vitro.Human bone marrow(BM)cells could be activated by IL-2 in culture for 7d.TheseIL-2 ABM cells had higher cytolytic activities against cells of H 7402 cell line and freshautologous adenocarcinoma cells and maintained the cytotoxicities longer than IL-2 acti-vated peripheral blood lymphocytes(APBLs),a point of possible importance in adoptiveimmunotherapy for cancer patients.The IL-2 ABM cells also had similar number ofBFU-E and CFU-GM to that had fresh BM cells if 1L-3 was added 48h alter IL-2 inculture.The IL-2 and IL-3 ABM cells might be used to eliminate tumor cells and tosupply reconstitutive elements of BM for autologous bone marrow transplantation.     

人骨髓中自然抑制细胞的抑瘤活性

目的研究人骨髓细胞中自然抑制细胞的抗肿瘤效应。方法分离并培养人骨髓中不同的细胞亚群，将不同的骨髓细胞亚群或其培养上清加入HL-6O或Kato-3肿瘤细胞培养体系中，检测肿瘤细胞的增殖反应，并检测电离辐射及蛋白质合成阻断剂对骨髓自然抑制活性的影响。结果具有自然抑制活性的骨髓细胞主要为CD34+CD33-细胞，其不但可以抑制丝裂素原刺激的人外周血单个核细胞的增殖，而且可以抑制肿瘤细胞株的增殖。自然抑制细胞发挥其自然抑制活性不需要细胞接触，但是蛋白质的合成则是这一过程所必需的，因为嘌呤霉素阻断自然抑制细胞发挥其自然抑制活性。此外，我们的结果表明，自然抑制细胞可分泌一种可溶性因子，IL－3和GM－GSF可以促进这一可溶性因子的产生。结论人骨髓细胞中自然抑制细胞具有显著的抗肿瘤效应。     

苦参联合胎肝低分子抑瘤物抗白血病及其机制

目的 :探讨苦参 (SF)、胎肝低分子抑瘤物 (LMW NTS)联合用药对正常人骨髓粒 巨噬系造血祖细胞(CFU GM )和急性髓性白血病细胞的影响及其作用机制。方法 :采用CFU GM集落培养、细胞液体培养、Wrigh giemsa染色、3H TdR掺入实验、DNA片段凝胶电泳和RT PCR等方法 ,观察SF和LMW NTS联用对白血病的作用。结果 :SF和LMW NTS联用 ,明显提高抑制白血病细胞增殖的能力 ,促进白血病细胞的凋亡 ,诱导白血病细胞中原癌基因c Myc的下调 ,抑制正常造血祖细胞CFU GM的作用明显低于抑制白血病细胞的作用。结论 :联合用药抗白血病的效果 ,较单用苦参或胎肝低分子抑瘤物明显提高     

异基因外周血干细胞的动员,检测及临床移植的应用研究

目的：探讨异基因外周血干细胞移植（ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ）供者经Ｇ－ＣＳＦ或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ动员后,采集的外周血干细胞（ＰＢＳＣ）移植物中的幼稚粒细胞与单个核细胞（ＭＮＣ）、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ之间的相关性和移植的剂量标准及临床应用效果。方法：对１１例ａｌｌｏ－ＰＢＳＣＴ供者用Ｇ－ＣＳＦ（９例）或Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ（２例）进行动员,于动员前及动员后,分别对外周血及ＭＮＣ惧物中的幼稚粒细胞、ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ进行检测计数,预处理方法主要用大剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）＋全身照射（ＴＢＩ）。结果：动员后外周血中的幼稚粒细胞与ＣＤ３４＾＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ同步增加,外周血ＭＮＣ中的幼稚粒细胞数与ＣＤ３４＾＋细胞数及ＣＦＵ－ＧＭ有较好的相关性。１１例患者全部植活和恢复造血功能,并为染色体核型     

苦参抗白血病作用及其机制

采用CFU GM和白血病CFU L集落培养、NBT/MTT还原试验和DNA的片段化分析法 ,观察了苦参对正常人骨髓、脐带血粒 巨噬系造血祖细胞 (CFU GM)和人急性髓系白血病HL 6 0细胞增殖、分化、凋亡的影响。结果表明 :5 ,10 ,15 ,2 0 μg·μl-1苦参均能明显抑制HL 6 0细胞增殖并诱导其凋亡 ,呈浓度 效应关系 ;其中 15 μg·μl-1苦参诱导HL 6 0细胞分化作用明显 ,且 5～ 15 μg·μl-1苦参对正常人造血祖细胞无明显的细胞毒作用。提示苦参在一定浓度范围内有选择性抗白血病效应。此结果为进一步研究和开发苦参并应用于肿瘤临床提供了实验依据。