豚鼠内淋巴囊上皮细胞的免疫组织化学特性

本文应用免疫组织化学技术探索了中间丝和Ｓ－１００蛋白在豚鼠内淋巴囊上皮细胞的表达，结果表明：囊上皮细胞不仅具有上皮细胞特异的中间丝角蛋白阳性反应，还具有间胚叶组织特异的中间丝波形蛋白强阳性反应。两特性的共存可能与该上皮具有吸收和分泌双重功能有关。Ｓ－１００蛋白强阳性反应表明此上皮细胞富含钙结合蛋白，可能与其调钙作用有关。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的:检测刺激性G蛋白(GS)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法:查阅Gs和Gi的基因序列,自行设计并委托Gibco公司合成引物,应用RT-PCR和原位杂交法检测Gas和Gai mRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果:扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp;正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论:正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和Gai mRNA的表达;G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

豚鼠内淋巴囊碳酸酐酶组化分布测定和超微定位

用组织化学、细胞化学结合图象分析，观察了豚鼠内淋巴囊（ＥＳ）碳酸酐酶（ＣＡＨ）的分布和超微定位。结果发现：在ＥＳ的近侧部仅少数上皮细胞有阳性反应，中间部和远侧部的大多数上皮细胞着色；中间部和远侧部ＣＡＨ阳性产物灰度值明显高于近侧部（Ｐ＜０．０１）。在ＥＳ上皮细胞的阳性产物主要位于内淋巴腔面细胞膜、微绒毛、细胞浆、侧膜皱褶和基侧膜皱褶处；表明ＣＡＨ在调节内淋巴的容量、离子转运及内环境稳定中起重要作用。     

豚鼠内淋巴囊的缺血病理改变

为了阐明内淋巴囊（ＥｎｄｏｌｙｍｐｈａｔｉｃＳａｃ，ＥＳ）的缺血病变，本文将１６只豚鼠ＥＳ供血动脉阻断，并在不同缺血时相对其病理损伤作光镜观察。结果：缺血早期ＥＳ上皮细胞混浊肿胀，气球样变，部分细胞崩解坏死，上皮下组织水肿出血；缺血中期上皮细胞萎缩变性，中间部皱褶带消失；缺血晚期上皮坏死区出现新生结缔组织及新骨，囊周缺血病变与Ｍｅｎｉｅｒｅ病囊周病理改变相似     

豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的扫描电镜观察

目的 探讨豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构特点。方法 用扫描电子显微镜观察正常豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构。结果 内淋巴管的管腔面光滑、平整，上皮细胞表面的微绒毛少且短。细胞间隐窝小而少。内淋巴囊近端部上皮细胞表面的微绒毛明显增多、变长，细胞间隐窝明显．偶尔可见细胞顶部的胞饮小泡。内淋巴囊的中间部腔面上皮突起，复合折叠形成褶皱，细胞间隐窝多而大，突向囊腔的细胞多，囊腔内充满细胞和细胞碎片。根据电子密度上皮细胞可分为亮细胞和暗细胞两型，其中暗细胞较多，两型细胞表面均有大量长的微绒毛。细胞顶部可见到较多的胞饮小泡。内淋巴囊远端部的结构与内淋巴管近似，腔面光滑，上皮褶皱小，无细胞间隐窝，上皮细胞以亮细胞为主，表面微绒毛少而短，几乎没有胞饮小泡。结论 内淋巴管及内淋巴囊各部分的结构存在明显的不同，各有特点，这种结构特点可能与其在内淋巴代谢中的不同作用有关。     

内淋巴囊手术

梅尼埃病是以发作性眩晕、波动性耳聋、耳鸣和（或）耳胀满感为特征的特发性内耳病。目前梅尼埃病的治疗尚无国际统一规范,主要是经验治疗。对于药物治疗无效的患者,可选择手术治疗。内淋巴囊手术属于保存听力的功能性手术,适应于早中期梅尼埃病患者,尤其是听力尚存在波动的患者。内淋巴囊手术主要分为内淋巴囊减压术和内淋巴囊引流术,其总体眩晕控制率在60%~80%。虽然对内淋巴囊手术的机制及疗效仍存在争议,但由于其手术方式符合生理要求,破坏性较小,内淋巴囊手术目前仍作为顽固性梅尼埃病患者的手术治疗初期的首选。     

内淋巴囊上皮细胞单克隆抗体的制作和特性

以显微解剖法取出的豚鼠内淋巴囊经超声波处理后，以其提取液作为原始抗原，探讨建立能够分泌识别内淋巴囊表面上皮细胞的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的系列杂交瘤。应用电镜免疫化学和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和聚丙酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）测定，该抗体显示具有和内淋巴囊上皮细胞进行显著的免疫组织化学反应的活性，类似的反应出现在肾脏的近曲小管和亨氏袢的上皮细胞上，与其它１５个脏器（包括大脑、膀胱、胆囊、肺和肝脏等）     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞G蛋白的表达及其意义

目的：检测刺激性G蛋白(Gs)和抑制性G蛋白(Gi)在内淋巴囊上皮的表达,为深入研究G蛋白的功能奠定基础。方法：查阅Gs和Gi的基因序列，自行设计并委托Gibco公司合成引物，应用RT—PCR和原位杂交法检测Gas和GαimRNA在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果：扩增的Gas和Gai片段长度分别为340bp和431bp；正常内淋巴囊上皮细胞内可见Gs和Gi的阳性颗粒。结论：正常豚鼠内淋巴囊上皮细胞存在Gas和GaimRNA的表达；G蛋白在内淋巴囊的信号转导和离子通道调节中可能起重要作用。     

大鼠内淋巴囊的增殖细胞

目的：了解大鼠内淋巴囊的细胞增殖状态。方法：选用１０只健康成年Ｓ－Ｄ大鼠,腹腔注射５－溴－２‘－脱氧尿嘧啶核苷后,取颞骨作组织学处理,用抗ＢｒｄＵｒｄ单克隆抗体,通过免疫组织化学技术,观察内淋巴囊Ｓ期细胞的定位与分析。结论：大鼠内淋巴囊具有细胞增殖功能,可能是内耳具有细胞更新功能的重要部位。     

豚鼠内淋巴管与内淋巴囊微血管模式及解剖差异

为研究内淋巴管及内淋巴囊微血管分布模式，通过墨汁血管灌流技术和图像分析方法对１０只豚鼠的颞骨（２０侧）内淋巴管和内淋巴囊做全面观察分析。结果：①２０侧颞骨中有１７侧（８５％）内淋巴管、内淋巴囊有脑膜后动脉和前庭后动脉两条供血来源，其余３侧（１５％）则发现前庭后动脉缺如；②脑膜后动脉在内淋巴囊的分布频率明显高于前庭后动脉（Ｐ＜０．０１），但两者在内淋巴管的分布频率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：内淋巴管、内淋巴囊的血供来源及微血管分布模式存在一定的解剖差异，脑膜后动脉是内淋巴囊血管网的主体     

内淋巴囊的外源性抗原特异性免疫应答

目的　研究内淋巴囊对于外源性胸腺依赖性抗原的特异性免疫应答。方法　用SD大鼠 32只 ,以抗原全身免疫后 ,经耳蜗底周向外淋巴腔注入相同抗原 ,分别于此后 1、3、7、14天处死动物取颞骨作组织学处理。然后应用免疫组化等技术 ,观察内淋巴囊的细胞浸润 ,免疫细胞增殖及其对抗原的吞噬清除作用。结果　内耳抗原接种后第 1、3天 ,内淋巴囊出现单核吞噬细胞浸润 ,第 7天出现浆细胞和淋巴细胞浸润 ;内耳抗原接种后第 3、7天 ,内淋巴囊的IgG阳性细胞增多 ,同时抗原被捕捉、递呈和吞噬。结论　内淋巴囊对外源性抗原可产生特异性免疫应答 ,是内耳局部免疫应答的重要场所。     

内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的 研究内淋巴囊上皮细胞透明质酸合成酶（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎｓｙｎｔｈａｓｅ）ｍＲＮＡ的表达及其意义。方法 在查阅核酸序列数据库基础上,采用Ｍｏｔｉｆ程序分析各物种（大鼠,小鼠,爪蟾,人类）透明质酸合成酶的保守序列,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶ｍＲＮＡ在内淋巴囊上皮细胞的表达。结果 内淋巴囊近侧端,中间部均有部分上皮细胞胞浆显示透明质酸合成酶ｍＲＮＡ的阳性表达。结论 在分子生物学水平证实了     

豚鼠内淋巴管与内淋巴囊微血管模式及解剖差异

为研究内淋巴管及内淋巴囊微血管分布模式，通过墨汁血管灌流技术和图像分析方法对１０只豚鼠的颞骨（２０侧）内淋巴管和内淋巴囊做全面观察分析。结果：①２０侧颞骨中有１７侧（８５％）内淋巴管、内淋巴囊有脑膜后动脉和前庭后动脉两条供血来源，其余３例（１５％）则发现前庭后动脉缺如；②脑膜后动脉在内淋巴囊的分布频率明显高于前庭后动脉（Ｐ〈０．０１），但两者在内淋巴管的分布频率无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：内淋     

内淋巴积水与肉淋巴囊免疫学研究进展

内淋巴积水的发病机理不清。近些年业，许多学注意与内淋巴囊的局部免疫反应具有十分密切关系。本就有关资料进行了综述。     

内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA的表达

目的 用寡聚核苷酸探针检测内淋巴囊和肾小管上皮细胞透明质酸合成酶mRNA表达的异同。方法 通过查阅核酸序列数据库,自行设计并合成了透明质酸合成酶寡聚核苷酸探针,应用原位杂交技术检测透明质酸合成酶mRNA在豚鼠内淋巴囊和肾小管上皮细胞的表达。结果 在内淋巴囊近侧端、中间部和肾小管部分上皮细胞胸浆显示透明质酸合成酶mRNA的阳性表达,但近曲小管的阳性细胞百分数稍多。结论 不但扩大了核酸杂交的应用范围,还为内淋巴囊和肾小管上皮细胞对水电解质平衡可能都具有透明质酸／透明质酸酶的双重调节作用提供了理论依据。     

豚鼠内淋巴囊Na—K—ATP酶亚基异构体的表达

目的 研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、 β亚基各个异构体的表达及其意义。方法 分别采用免疫组化汉和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织 Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果 Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体，且β2表达较β1表达更强，上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体，且α1表达较α2表达强，而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3 异构体表达。结论 内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成，它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。     

豚鼠内淋巴囊经颅快速取材方法的研究

目的通过建立豚鼠内淋巴囊快速取材方法,为了解其对内耳功能的影响提供活性良好的组织材料。方法将健康成年豚鼠在显微镜下经颅内进行活组织解剖,并用摄像系统记录解剖过程及结果,组织学验证结果。结果在豚鼠颅骨标本上准确定位内淋巴囊位置,并在显微镜下成功解剖出豚鼠内淋巴囊,组织学证实解剖位置为内淋巴囊。结论经颅内解剖豚鼠内淋巴囊是简单易行、准确可靠的快速取材方法。     

内淋巴囊的神经分布

目的：通过实验从形态学上直接验证内淋巴囊上存在神经纤维,为梅尼埃病的病因病理学研究提供新的思路。方法：使用成年SD大鼠15只,经活体心脏灌注,取双侧颞骨,常规石蜡包埋处理并切片。用免疫组织化学方法标记,确认抗体神经特异性烯醇化酶（neuronal specific enolase, NSE）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、神经微丝（neurofilament, NF）在内淋巴囊(Endolymphatic Sac, ES)上的表达。结果：在光学显微镜下,NSE、GFAP、NF一抗在内淋巴囊上皮及上皮下表达为棕黄色阳性着色颗粒。结论：内淋巴囊近侧端、中间段和远侧段均有神经纤维分布,以近侧段最为丰富。