Snail在17β雌二醇引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT),在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用.本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达,观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控.方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail,瞬时转染抑制Snail表达.10-8 mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞,用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性.结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后,可使ES-2细胞胞质突起变短,细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低;针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节,并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用.结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用,可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点.     

Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。     

Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

 目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。     

雌激素对关节软骨细胞生长因子mRNA表达的影响

目的　观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞生长因子mRNA表达的影响。方法　体外培养雌兔关节软骨细胞,分为 A、B 两组。A 组中分别加入 17β 雌二醇 0 mol/L (正常对照亚组)及 1×10-6 ~1×10-12 mol/L干预72 h;B组先以白介素(IL) 1β10 ng/ml干预24 h,随后分别加入17β 雌二醇0 mol/L(单用IL 1β亚组)及 1×10-6 ~1×10-12 mol/L作用 72 h。采用逆转录聚合酶链反应测定软骨细胞转化生长因子(TGF) β1、胰岛素样生长因子(IGF) Ⅰ、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达。结果　A组的 1×10-6、1×10-7、1×10-11、1×10-12 mol/L 17β 雌二醇亚组和B组的单用 IL 1β亚组的 TGF β1 mRNA 表达量低于A组的正常对照亚组,B组的 IL 1β+1×10-11、1×10-12 mol/L 17β 雌二醇亚组较单用 IL 1β亚组表达增加。A组的1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9、1×10-12 mol/L 17β 雌二醇亚组 bFGF mRNA 表达量较正常对照亚组多;B组的单用 IL 1β亚组不表达 bFGF mRNA , IL 1β+1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-11、1×10-12mol/L 17β 雌二醇亚组表达 bFGF mRNA。A组的正常对照亚组和 B组的单用 IL 1β亚组均不表达 IGF ⅠmRNA,A组的1×10-6~1×10-12 mol/L 17β 雌二醇亚组及 B组的 IL 1β+1×10-7、1×     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测不同浓度(10-10,10-8,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于Ishikawa细胞系不同时间(0 min,15 rmin,30 min和24 h)后ERRα mRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)作用于Ishikawa细胞系24 h后ERRα mRNA的变化.结果:10-10mol/L 17β-E2作用于Ishikawa细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA水平与未加E2相比均稍有增加,而10-8,10-6mol/L 17β-E2作用于细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA明显减小,以10-8mol/L作用后减少最明显.同时加入E2和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRα mRNA的减小作用被阻断.10-8mol/L孕酮作用于细胞系24 h后,ERRα mRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7,10-6和10-5mol/L孕酮后,ERRα mRNA表达均出现明显增加.结论:17β-E2可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRα mRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的.孕酮可增加ERRα mRNA的表达.     

雌激素对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及ERβ的表达

目的　研究雌激素 (E2 )对人宫颈癌HeLа细胞系增殖的影响及ERβ在细胞中的表达 ,探讨雌激素影响HeLа细胞增殖的可能机制。方法　采用细胞培养、MTT、流式细胞技术、激光共聚焦显微镜技术、RT PCR技术和DNA测序技术。结果　E2 (10 -8～ 10 -6mol/L)剂量依赖性地促进宫颈癌HeLа细胞的增殖 ,E2 (10 -6mol/L)可促进细胞周期由G1期进入S期 ,G1期的平均DNA含量由 (62 63± 0 42 ) %下降到 (5 1 43± 1 0 1) % ,S期的平均DNA含量由 (2 5 0 3± 1 81) %上升到 (3 2 17± 1 97) %。激光共聚焦检测到E2 (10 -6mol/L)可使细胞内Cа2 +浓度显著升高。RT PCR结果显示HeLа细胞表达ERβmRNA ,大小为 3 88bp ,DNA序列测定证实所得片段为人ERβ的其中一段。 结论　E2 可以通过调节细胞周期和细胞内Cа2 +浓度水平 ,从而调节宫颈癌HeLа细胞的增殖活动 ,并且E2 可能通过与ERβ结合 ,将增殖相关信号传递到细胞内。     

17β-雌二醇可促进胃癌细胞BGC823生长

目的:观察不同浓度17β-雌二醇(E2β)处理时,人胃癌BGC823细胞生长情况以及雌激素受体ERα36表达的变化,探讨E2 β在胃癌生长调节中的作用及相关机制.方法:BGC823细胞经10-10,10-11和10-12 mol/L浓度的E2β处理24 h和48 h.细胞生长通过WST1方法检测.RT-PCR,Western blot及灰度分析法检测ERα36mRNA水平及蛋白水平变化,其平均光密度值通过t检验分析,应用免疫荧光染色方法检测ERα36蛋白在细胞中的位置变化.结果:E2β可促进胃癌BGC823细胞生长,但随着其浓度的上升,E2β的促生长能力下降.E2β可促进ERα36 mRNA表达,该促进作用具有浓度依赖性.E2β处理BGC823细胞24 h时,ERα36蛋白表达上升,48 h时,ERα36蛋白表达下降.ERα36蛋白定位于细胞膜,E2β对BGC823细胞ERα36蛋白定位无明显影响.结论:E2β可促进胃癌细胞BGC823生长.E2β-ERα36可能通过膜信号通路参与了胃癌细胞的生长调节.     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

不同浓度雌激素对卵巢癌细胞VEGF-C和TGF-β_1表达的影响

目的观察在不同浓度的雌激素作用下,卵巢癌细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮细胞生长因子C（VEGF-C）表达的变化。方法在体外不同浓度（10-11、10-10、10-9、10-8mol/L 17β-E2）的17-β雌二醇（E2）作用下,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及ELISA方法,检测卵巢癌SKOV3细胞株VEGF-CmRNA的表达及TGF-β1分泌量水平的变化。结果 SKOV3细胞在E2的作用下,TGF-β1的分泌量呈剂量浓度反应,随着10-11~10-8mol/L17-βE2浓度的增加,TGF-β1的分泌量明显增加;随着雌激素浓度的增加,SKOV3细胞VEGF-C mRNA的PCR产物表达也呈递增趋势。10-11、10-10、10-9和10-8mol/L 17β-E2组与对照组比较,VEGF-C,TGF-β1的表达有显著性差异（P〈0.05）。结论雌激素可上调SKOV3细胞的VEGF-C mRNA表达、TGF-β1分泌水平,两者均呈浓度递增趋势。     

17-β雌二醇对人卵巢癌细胞株HO8910 KLK6基因表达的调节

目的：探讨17-β雌二醇（17-βE2）对雌激素受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶6（kallikrein 6， KLK6）基因mRNA和蛋白表达以及细胞增殖的影响。方法：取对数生长期的HO8910细胞，加入不同浓度(1×10^-7、1×10^-8、1×10^-9、1×10^-10mol/L)的17-βE₂培养72h后，收集细胞，分别采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）和流式细胞术，检测KLK6 mRNA和蛋白表达水平的变化，同时采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖活力和增殖周期的变化。 结果：与乙醇对照组相比，不同浓度的17-βE₂使得KLK6基因mRNA和蛋白的表达明显上升（P<0.01），同时G₀/G₁期细胞百分率下降,S期和G₂/M期细胞百分率升高, 细胞增殖活力增强。结论：17-βE₂对KLK6 mRNA和蛋白的表达具有上调作用，同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖。     

不同雌激素水平对大鼠血管内皮细胞功能及血管内皮细胞粘附分子1表达的作用

目的研究雌激素对雌鼠肺血管内皮细胞功能及血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的调节。方法（1）雌性SD大鼠24只分为假手术组、去势组、治疗组,采用放射免疫法检测血清中内皮素、前列环素的含量,铜-镉还原法测定血清中一氧化氮的产量。放射配体结合法检测肺血管内皮细胞中雌激素受体含量。（2）正常雌鼠肺培养的第2代血管内皮细胞,按不同浓度17-β雌二醇(17-βE2)分为A组（对照）、B组（3×10-8mol/L17-βE2）、C组（3×10-7mol/L17-βE2）;D组（3×10-6mol/L17-βE2）、E组（3×10-6mol/L17-βE2+3×10-6mol/L他莫西芬）处理48h,白细胞介素-1β作用后流式细胞仪分别检测各组VCAM-1表达量。结果(1)去势组雌鼠血中一氧化氮（18μmol/L±8μmol/L）、前列环素（8.5pg/ml±2.5pg/ml）均降低,治疗组二者水平明显升高（31μmol/L±7μmol/L,P<0.05;10.9pg/ml±3.4pg/ml）,而内皮素含量变化则相反（170pg/ml±39pg/ml;100pg/ml±32pg/ml,P<0.05）。(2)去势组雌鼠血管内皮细胞中雌激素受体含量(fmol/106cell）显著降低（6.7±0.5),治疗组雌激素受体含量维持在高水平（17.6±1.2,P<0.01）。(3)白细胞介素-1β作用后A组表达VCAM-1细胞百分率明显增高（17.5%±1.5%）,B、C、D组表达VCAM-1细胞百分率显著降低（15.4%±1.42%、12.4%±0.34%、8.7%±0.27%,P<0.01）。结论雌激素水平可明显影响雌鼠血管内皮细胞内皮素、一氧化氮、前列环素的分泌,并可影响雌鼠血管内皮细胞中雌激素受体含量。雌二醇均可降低白细胞介素-1β诱发的雌鼠血管内皮细胞VCAM-1表达增高。     

淫羊藿苷对白介素-1β诱导软骨细胞退变的保护作用

目的观察不同浓度淫羊藿苷（icariin, ICA）对IL-1β诱导软骨细胞退变的保护作用。方法原代分离培养新生24h大鼠四肢长骨干骺端透明软骨的软骨细胞,取P1代细胞,以4×103/孔接种96孔培养板,加入终浓度分别为1×10-7、1×10-6和1×10-5mol/L的ICA,MTT法分别测定12、24、36、48、60、72h后软骨细胞增殖情况。以1.2×105/孔接种6孔培养板,分别设置空白对照组（N组）、炎症刺激组（M组,加入10ng/mL IL-1β诱导软骨细胞退变）和淫羊藿苷低、高剂量组（ICA-L组和ICA-H组,炎症刺激组基础上加入ICA,终浓度分别为1×10-7、1×10-6mol/L）,连续干预72h。ELISA法测定培养上清液中Ⅱ型胶原（collagen-Ⅱ, Col-Ⅱ）和糖胺多糖（glycosaminoglycan, GAG）含量,RT-PCR法检测细胞Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶13（matrix metaloproteinase13, MMP13）、蛋白聚糖（aggrecan, Acan）和Sox9 mRNA表达情况。结果1×10-5mol/L ICA早期（24h）表现为抑制软骨细胞增殖（P<0.01）,72h后促进软骨细胞增殖（P<0.01）;1×10-7mol/L和1×10-6mol/L ICA干预36~72h后促进软骨细胞增殖（P<0.05）,但其中1×10-7mol/L在60h与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。ICA干预72h后,与M组比较,ICA-L和ICA-H组,GAG浓度均显著升高（P<0.05）,而Col-Ⅱ含量于ICA-L组降低、ICA-H组升高,但差异均无统计学意义（P>0.05）。ICA-L组Acan/Sox9 mRNA表达升高（P<0.01）,ICA-H组Col-ⅡmRNA水平升高而MMP13 mRNA表达降低（P<0.01）。结论淫羊藿苷能影响软骨细胞基质微环境,促进软骨细胞表型基因表达,抑制MMP13 mRNA表达,进而拮抗IL-1β诱导的软骨细胞退变。     

异补骨脂素和蜕皮甾酮对人乳腺癌T47D细胞增殖及ER亚型表达的影响

目的利用人乳腺癌T47D细胞观察异补骨脂素和蜕皮甾酮对雌激素受体阳性细胞增殖的作用,并检测其对T47D细胞雌激素受体亚型ERα、ERβ表达的影响。方法采用MTT细胞增殖实验观察中药补骨脂、川牛膝的两种活性成分:异补骨脂素和蜕皮甾酮对ERα、ERβ阳性细胞T47D增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞增殖周期的变化;用半定量RT-PCR法检测上述成分对靶细胞ERα、ERβmRNA表达情况的影响。结果10-6mol/L和10-7mol/L异补骨脂素和蜕皮甾酮能够显著促进培养的T47D细胞增殖,提高细胞分裂增殖指数,表现出雌激素样作用;RT-PCR结果显示:10-6mol/L和10-7mol/L异补骨脂素和蜕皮甾酮均可使ERαmRNA表达显著增加,异补骨脂素同时也可提高ERβmRNA表达。结论异补骨脂素和蜕皮甾酮具有植物雌激素作用,并可影响靶细胞ER亚型的mRNA表达水平。     

雌激素对MCF-7细胞P2Y2 mRNA的抑制作用

目的探讨在MCF-7细胞株中雌激素是否影响P2Y2 mRNA的表达。方法取生长良好的MCF-7细胞,以不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)、雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780、ERα拮抗剂MPP和ERβ拮抗剂PHTPP作用于细胞,应用实时定量RT-PCR方法测定细胞中P2Y2受体mRNA表达。结果在MCF-7细胞中,雌激素(1nmol/L～1μmol/L)下调P2Y2 mRNA的表达量从对照组的(73.79±8.91)%减少至对照组的(53.68±5.90)%,这种下调作用可以被ER拮抗剂ICI182780(1μmol/L)拮抗,ERα的拮抗剂MPP(50μmol/L)可以部分阻断雌激素(0.1μmol/L)的作用,而ERβ拮抗剂PHTPP(50μmol/L)对雌激素(0.1μmol/L)的作用无影响。结论雌激素通过ERα抑制P2Y2 mRNA的表达,这一途径可能参与了雌激素对MCF-7细胞的促增殖作用。     

孕激素对小鼠脾细胞淋球菌感染模型NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响

目的：研究孕激素对小鼠脾细胞淋球菌（Neisseria gonorrhoeae,Ng）感染模型中NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响。方法：体外分离、培养小鼠脾细胞后,分为如下5组：空白对照组、Ng组、Ng+1×10-9 mol/L孕酮组、Ng+1×10-8 mol/L孕酮组、Ng+1×10-7 mol/L孕酮组。培养3 d后收集细胞,采用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例,利用实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞NLRP3、Caspase?1p20、RORγt、Foxp3蛋白表达。ELISA法检测脾细胞培养上清中白细胞介素（interleukin,IL）?1β及Th17/Treg相关细胞因子IL?17、转化生长因子（transforming growth facfor,TGF）?β、IL?10水平。结果：脾细胞在淋球菌的刺激下,Th17细胞和Treg细胞比例增多,细胞内NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平升高,Caspase?1p20蛋白表达水平升高,细胞培养上清中IL?1β、IL?17、TGF?β、IL?10含量增高（P < 0.01）;加入孕酮预处理后,随着孕酮作用浓度的增高,Th17细胞比例、细胞内NLRP3和RORγt的mRNA和蛋白表达水平、Caspase?1p20蛋白表达水平、细胞培养上清中IL?1β和IL?17含量均明显降低,Treg细胞比例、细胞内Foxp3 mRNA和蛋白表达、细胞培养上清中TGF?β和IL?10含量均明显增高,与Ng组比较差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：孕激素可抑制Ng感染诱导的小鼠脾细胞NLRP3表达及Th17细胞分化,促进Ng感染诱导的Treg细胞分化。     

TGF—β1参与全反式维甲酸对大鼠肾脏系膜细胞MMP—2表达的调节

目的 研究全反式维甲酸（ATRA）对于大鼠肾脏系膜细胞表达MMP－2的影响以及转化生长因子－β1在这一过程中的作用。方法 采用Northern blot、Western blot和Zymography法检测ATRA对培养大鼠肾脏系膜细胞MMP－2mRNA、蛋白分泌及酶活性表达变化;ATRA对系膜细胞表达TGF－β1的作用,以及TGF－β1至ATRA调节MMP－2表达的影响。结果 证实ATRA可增加培养大鼠肾脏系膜细胞的MMP－2mRNA表达、MMP－2蛋白分泌和增强MMP－2酶活性。ATRA也可引起TGF－β1多肽呈剂量依赖型增加。反义TGF－β1几乎可以完全阻断活性TGF－β1的分泌。经反义TGF－β1转染的系膜细胞在10^-6mol/L ATRA作用下,其表达MMP－2mRNA的水平不发生变化,但是加入抗TGF－β1抗体时,在10^-6mol/L ATRA作用下系膜细胞表达MMP－2呈剂量依赖型下降。结论 ATRA可上调培养大鼠系膜细胞的MMP－2mRNA、蛋白分泌和MMP－2酶活性的表达;TGF－β1参与ATRA对MMP－2表达的调节,并为ATRA调节MMP－2作用所必需。     

基质金属蛋白酶-9在慢性同种移植肾病早期大鼠肾组织中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP9)在慢性移植肾病早期肾组织的表达及其与转化生长因子β1(TGFβ1)表达、小管间质单个核细胞浸润及血管平滑肌细胞增殖和移行的关系。方法以雄性Fisher大鼠作供体,雄性Lewis大鼠作受体进行同种肾移植,Fisher及Lewis雄性大鼠单肾切除作对照。移植后12周作肾功能、移植肾组织学检测,应用免疫组织化学方法测定肾组织中MMP9及TGFβ1子的表达,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肾组织MMP9mRNA表达水平及β肌动蛋白mRNA的表达。结果实验组大鼠12周时24h尿蛋白定量(g/d)0.025±0.028,与F344、Lewis对照组间24h尿蛋白水平差异无统计学意义;血清肌酐(μmol/L)96±36,显著高于F344组,与Lewis组比较差异无统计学意义;肌酐清除率(ml·min-1·100g体重-1)0.18±0.10,三组间差异无统计学意义。实验组大鼠肾动脉血管壁及肾间质MMP9(分别为0.095±0.020,0.32±0.09)与TGFβ1蛋白表达水平(分别为0.086±0.017,0.58±0.10)及肾组织MMP9mRNA表达水平(1.34±1.06)均显著高于对照组。相关分析结果显示,肾组织MMP9mRNA表达水平与间质单个核细胞浸润程度呈显著正相关,肾组织MMP9蛋白表达水平与间质中单个核细胞数量、血管平滑肌细胞数量、肾组织TGFβ1蛋白表达水平均呈显著正相关。结论MMP9在慢性移植肾病早期的病理变化中发挥关键性的作用,其产生机制与TGFβ1表达增强有关。     

雌二醇对EOMA细胞增殖、ERα、ERβ及VEGF表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对鼠源性血管瘤血管内皮细胞(EOMA细胞)生长,雌激素α、β受体亚型(ERα、β)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 用1、10、100 nmol/L 浓度的E2分别作用于EOMA细胞,同时设对照组(不加E2).四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点其对EOMA细胞生长的影响;Western blot检测EOMA细胞的ERα、β表达强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF的分泌水平.结果 1 nmol/L E2组在36 h时高于对照组(P<0.05);10 nmol/L E2组、100 nmol/L E2组各个时间点OD值均明显高于对照组(P<0.05),36 h时OD值最高(P<0.01).E2作用下10 nmol/L E2组ERα和ERβ水平及100.0 nmol/L E2组ERα水平较对照组均明显增高(P<0.05).24、48 h时,各浓度E2组与对照组的VEGF水平比较均差异有统计学意义(P<0.05),48 h时100 nmol/L E2组和10 nmol/L E2组VEGF水平均高于1 nmol/L E2组(P<0.05).结论 E2可促进EOMA细胞增殖,可能主要通过ERα、VEGF表达水平上调来实现.     

羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响

目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响.方法 培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10-7mol/L-1×10-9mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα 及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况.结果 与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P<0.01);在SK-BR-3细胞中,HSYA显著抑制了ERK1/2的表达,但对p-ERK1/2的表达影响不明显(P>0.05).结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用.     

选择性雌激素受体调节剂对MC3T3-E1细胞生长分化的调节

目的探讨选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)———雷洛昔芬对小鼠颅顶成骨细胞MC3T3-E1分化的调节及其机制。方法体外培养MC3T3-E1细胞,10-7mol/L的雷洛昔芬和雌激素受体拮抗剂ICI-182780刺激细胞,另设空白对照组,24、48、72 h后检测各指标。MTT法检测细胞增殖;微量酶标法检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞内β-catenin,雌激素受体α、β(estrogen receptorα、β,ERα、ERβ)mRNA的表达。结果 MC3T3-E1细胞分别加入10-7mol/L的雷洛昔芬和ICI-182780后,相对于对照组,雷洛昔芬处理组的促细胞增殖作用较强,在24 h增殖率最高,达(55.93±10.88)%;ALP活性增加,在48 h活性增加率最高,为(30.881±5.614)%;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均增高,有统计学意义(P<0.05)。ICI-182780组的促细胞增殖率、ALP活性降低;β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达均降低,有统计学意义(P<0.05)。结论雷洛昔芬可能通过上调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达促进MC3T3-E1细胞的增殖分化,而ICI-182780则下调β-catenin、ERα和ERβmRNA的表达抑制MC3T3-E1细胞的增殖和分化。