以临界值进行即刻法室内质控的探讨

ELISA竞争一步法检测抗-HBc的室内质控通常是用室内质控品来进行的.由于室内质控品的浓度较高,使得检测的吸光度A值较低,求得的吸光度值/临界值(S/CO)难以绘制Levey-Jennings质控图,对临界值样本不能起有效的质控作用.此外在基层医院由于标本量较少,检测的频次较低,加之使用室内质控品也存在着一定的困难,因而许多单位事实上不能按照要求进行室内质控.使用"即刻法"进行ELISA检测的室内质控虽有较多报道,然而以何种数据进行尚不一致.本文以抗-HBc检测为例探讨了直接以临界值(cut-off,CO)进行 "即刻法" 室内质控的方法,现报道如下.     

两种保存温度对生化室内冻干质控血清的影响

目的探讨临床常规生化检验室内质控中常用的质控冻干粉复溶后,两种保存温度(2～8℃冷藏7d和-20℃冷冻保存7d)测定结果的差异,选择合适的保存温度。方法英国朗道冻干粉质控品中值、病理值,用优级去离子水复溶,37℃静置30min后混匀、分装。每天经室温解冻后,测定两种温度下保存的质控品,统计结果进行方法学评价。结果 -20℃冷冻保存生化质控结果的变异系数、稳定性、精密度优于2～8℃冷藏保存。结论室内质控在控制实验室检验质量中起着举足轻重的作用。质控品是实验室质量控制的载体。冻干质控血清复溶后-20℃冰冻保存,测定前室温20～25℃放置30min解冻较为合适。     

不同保存条件对ELISA检测结果影响的观察

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段,在日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品、试剂开封后放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象,严重影响血液标本检测结果的正确性.导致室内质控图曲线的失控.为此,笔者对ELISA法试剂和质控品开封后分别在不同保存条件下和不同保存时间对检测结果的影响进行观察,报道如下.     

不同保存条件对ELISA检测结果影响的观察

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段．在日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品、试剂开封后放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象．严重影响血液标本检测结果的正确性．导致室内质控图曲线的失控．为此．笔者对ELISA法试剂和质控品开封后分别在不同保存条件下和不同保存时间对检测结果的影响进行观察．报道如下。     

多标记室内质控品在血液核酸筛查的应用分析

目的探讨HCV RNA、HBV DNA和HIV RNA多标记室内质控品在罗氏COBAS s201核酸血筛系统应用的可行性和有效性。方法用已知浓度HCV RNA、HBV DNA和HIV RNA室内质控标准品与核酸检测阴性血浆按1∶2∶5∶22的体积比配制成多标记室内质控品,同时配制相同浓度的单项目质控品作为对照组,配制当天(d1)用COBAS s201核酸检测系统单检模式分别检测4次,此后每天检测多标记质控品4次,连续检测7 d,分析多标记室内质控品与单项目质控品Ct值的差异以及4℃条件下不同保存时间Ct值的变化。统计分析本室2015年1-8月使用多标记室内质控品的质控数据,评价该室内质控模式的可行性和有效性。结果多标记室内质控品各项目与相同浓度的单项目质控品检测Ct值比较无差异(P0.05);在4℃条件下,HCV RNA和HIV RNA 7 d后的Ct值分别为(37.15±0.29)、(36.05±0.24)高于d1(P0.05),HBV DNA 6 d后的Ct值为(33.40±0.62)高于d1(P0.05)。各项目Ct值的均值和标准差(x±s),HCV RNA为36.41±0.77、HBV DNA为33.16±0.61、HIV RNA为35.37±0.54;3项目的 CV%分别为2.11%、1.86%和1.53%,均在允许范围内。结论核酸检测多标记室内质控品不会发生基质效应或被扩增抑制,配制后多标记室内质控品在4℃条件下可稳定保存至5 d;多标记室内质控品配制简便,节省试剂,可推广应用于血液核酸筛查室内质量控制。     

HBsAg冻干质控品复溶剂的探讨

为了提高HBsAg的检测质量，建立乙肝表面抗原（HB-sAg）定量检测的室内质控。用牛清蛋白代替蒸溜水作为溶剂复溶乙型肝炎表面抗原冻干室内质控品，采用同一批号的诊断试剂盒，随标本检测用牛清蛋白和蒸溜水复溶HBsAg冻干室内质控品，同时将质控品放置于不同的温度下保存，观察其稳定性，精密度。以牛清蛋白复溶保存的HBsAg质控品，     

HBsAg冻干质控品复溶剂的探讨

为了提高HBsAg的检测质量，建立乙肝表面抗原（HB-sAg）定量检测的室内质控。用牛清蛋白代替蒸溜水作为溶剂复溶乙型肝炎表面抗原冻干室内质控品，采用同一批号的诊断试剂盒，随标本检测用牛清蛋白和蒸溜水复溶HBsAg冻干室内质控品，同时将质控品放置于不同的温度下保存，观察其稳定性，精密度。以牛清蛋白复溶保存的HBsAg质控品，     

血气质控品检测结果的影响因素探讨

目的探讨影响血气质控品检测结果的主要原因。方法通过改变质控品的放置温度、振摇程度、放置时间等参数,并对比改变参数前、后的检测结果。结果温度对氧分压(PO2)的检测结果影响较大。质控品温度从室温降到4℃后,PO2、pH值、二氧化碳分压(PCO2)的改变差异均有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。振摇程度对检测结果无明显的影响。质控品打开后,随时间的推移,PO2逐渐增高。PO2和打开时间呈正相关(r=0.84,P<0.01)。结论在室内血气质控品检测时,需保证质控品的贮藏温度恒定,打开安瓿后应立即完成检测。     

不同保存条件下复溶生化质控品稳定性的比较

目的 通过比较复溶生化质控品在不同温度条件下保存时的稳定性,选择一种较好的质控品保存方法,在保证复溶质控品稳定性的前提下,为工作带来节约和方便。方法将同批号室内质控品严格操作复溶后,一种按说明书方法保存使用;另一种进行分装后在-5℃保存,观察1周内的稳定性;连续进行6周的实验比较。结果两方法各项目的日间精密度CV,除Ca的结果外,其他项目的结果均〈1／3的CLIA值,分装“冷冻”法的CV绝大部分低于“冷藏”法;两方法的t检验比较,各项目均P〉0．05,方差分析无统计学意义。结论分装“冷冻”法,可作为一种较理想的方法,来保存复溶的生化质控品。     

温育时间对酶联免疫吸附试验结果的影响

目的 探讨温育时间对FAME全自动酶免分析系统(以下简称FAME)进行酶联免疫吸附试验(ELISA)结果的影响,从而提高ELISA法检测结果的准确性.方法 根据FAME孵育巢温度变化曲线,延长ELISA温育时间,选择不同实验参数条件进行对照实验,再根据实验结果选择合适的补偿时间进行实验,所得数据采用SPSS 13.0 for Windows进行双变量相关分析.结果 乙型肝炎表面抗原阳性标本、阳性对照、0.5 ng/ml质控对照和1 ng/ml质控对照的吸光度(OD)值与温育时间延长呈正相关,阴性标本和阴性对照的OD值与温育时间延长无统计学意义.结论 适当延长ELISA温育时间,可提高FAME结果的准确性.     

核酸检测室内质控评价和关键控制点分析

目的探讨核酸扩增检测(nucleic acid amplification test,NAT)的室内质控评价方法及关键控制点。方法对NAT阳性标本病毒载量的自然对数(lnc)与Ct值进行相关性分析,利用"即刻法转L-J质控图法"对Ct值进行质控。将低浓度质控品按4℃保存时间不同分为7组,进行核酸检测,分析4℃保存时间对Ct值的影响。结果NAT阳性标本的Ct值与lnc的相关系数r=-0.901(P0.01)。质控品在4℃保存72 h后与0 h组比较,差异有统计学意义。结论应用质控图法进行NAT室内质控是可行的,4℃长时间保存对质控品的Ct值影响较大。     

用苯扎溴铵配制HBsAg(EIA)质控物

HBsAg(EIA)的1ng／ml或2ng／ml质控品通常购买市售商品,需-20℃保存。随着保存和使用期限的延长,其吸光度值发生改变,以致影响S／CO值。通过6年多的研究和应用,我们发现用苯扎溴铵(新洁尔灭)配制HBsAg(EIA)质控物,其性能稳定,方便适用,可替代市售质控品。     

Pre-S1室内质控品的建立与初步应用

目的 由于卫生部临检中心未提供前S1抗原(Pre-S1)室内质控品,该室自制Pre-S1室内质控品并进行评价.方法 采用全自动酶免分析仪对自制Pre-S1室内质控品进行重复性和稳定性评价.结果 Pre-S1室内质控品最佳条件变异(OCV)为5.26%,常规条件变异(RCV)为8.36%,表明其精密度良好;且在不同条件下稳定性良好.初步应用CV均<10%,且均值无渐高或渐低.结论 自制Pre-S1室内质控品,经济实用,弥补了卫生部临检中心未提供Pre-S1室内质控品的不足,能够有效开展Pre-S1的室内质控,值得推广.     

ELISA检测乙型肝炎HBsAg室内质控血清的试制和使用

为了提高HBsAg的检测质量,鉴别和控制诊断试剂的质量和操作误差,我们试制了乙型肝炎HBsAg室内质控血清.采用不同品牌,同一批号和不同批号的诊断试剂盒,随标本同时检测试制的HBsAg室内质控品.将质控品置不同的温度下保存,观察其稳定性,精密性. 实验证明:试制的HBsAg室内质控品放-20℃保存,第一次打开使用后放4℃保存,直至用完 ,以这种方式保存的HBsAg质控品在三个月内其稳定性良好,可适应于上海地区开展HBsAg室内质控使用.用质量较好的进口HBsAg诊断试剂,全自动机器操作,重复性较好,CV值为5% 左右,用国产HBsAg诊断试剂,手工操作,CV值为25%左右,为医院检验科开展HBsAg室内质控提供了较好的质控品和参照方法.     

人为操作因素对酶联免疫吸附法检测乙肝病毒血清标志物影响的探讨

目的研究探讨在检验日常工作中,人为操作因素对酶联免疫吸附法(ELISA法)检测乙肝病毒((HBV)血清标志物的影响情况。方法用ELISA法检测HBV血清标志物中具有代表性的表面抗原(HBSAG)及核心抗体(HB-CAB),对加样后加酶结合物间隔时间、终止反应后延时比色时间、洗板次数、反应温度等四个人为操作条件对结果的影响情况进行分析。结果 HBCAB随着加入样本后再加入酶结合物间隔时间的延长,无论是阴性对照、质控品还是血清样本的吸光度均呈下降趋势,假阳性率增加;HBSAG随着终止反应后比色时间的延长,其吸光度呈下降趋势,虽然幅度不大,但延时30分钟与立即比色相比,结果有统计学意义;从洗板次数来看,洗板4次、5次与6次的吸光度值随着洗板次数增加而降低,且各组间差异均呈在统计学意义;HBSAG在25℃反应温度时的吸光度明显要低于37℃反应温度时的吸光度,且强阳性的标本吸光度下降幅度更加明显。结论人为操作因素对ELISA法检测乙肝病毒血清标志物的影响很大,甚至会直接影响阴阳性结果的判断。为避免这种人为误差,在日常操作过程中各实验室应根据所用试剂的说明书编写各实验室的标准操作程序文件(SOP),并要求各操作人员严格执行,以尽量避免假阳性或假阴性结果的出现。     

降钙素原室内质控品的制备与应用

目的评价降钙素原(PCT)室内质控品的制备方法与应用价值。方法收集该院检验科日常工作中PCT检测水平正常和较高患者的血清标本,根据0.5 ng/L和2.0 ng/L两个医学决定水平,自制PCT高、低两水平室内质控品,每天与罗氏质控品共同进行检测,以评价自制PCT室内质控品的均匀性和稳定性。结果自制PCT室内质控品的瓶间不精密度分别为1.04%和0.96%,满足≤1/3室内不精密度要求。自制PCT室内质控品复融后稳定性评价结果均在控制范围内。长期稳定性评价结果显示,自制PCT室内质控品12个月的室内不精密度分别为4.36%和3.89%,均≤1/3允许总误差(TEa)(TEa=25%);根据12个月的质控图和Westgard规则判断,自制PCT室内质控品与罗氏质控品的相关性良好,无偏离现象,与罗氏质控品同步出现7次质控失控现象,均与试剂有关,校准后重新检测即在控。结论自制PCT室内质控品的均匀性、稳定性良好,在-20℃条件下保存时,稳定时间可达12个月,适用于实验室PCT检测系统的室内质量控制。     

输血相容性试验室内质控品的研制

目的研制出简易可行,可在一般实验室使用的质控品。方法选择10人份健康献血者的浓缩红细胞(O/AB型RhD阳性)制备红细胞质控品,取新鲜血浆(O/AB型RhD阳性)和抗-D(IgG)人血清配制血浆质控品。对制备好的质控品进行性能评价,包括重复性、稳定性、最佳条件与常规条件下测定比较以及微柱凝胶法与凝聚胺法测定比较。结果质控品的批内重复性CV均10%,批间重复性差异无统计学意义(P0.05)。在不同保存时间,条件及方法的条件下,质控品检测结果均无明显变化(P0.05)。统计分析6个月的室内质控结果,在控率为100%。结论成功研制出输血相容性试验室内质控品,该质控品具有较好的重复性,稳定性及实用性。     

全自动加样仪混匀参数对质控品检测结果的影响

目的 探讨在酶联免疫吸附试验(ELISA)加样过程中，全自动加样仪对室内质控品进行混匀处理的实验意义。方法 质控品在加样前均进行漩涡震荡混匀，后在相同的检测条件下经STAR全自动加样仪加至同1块酶免板中进行检测，比较质控品在加样针混匀与不混匀情况下S/CO值的差异以及2种情况下质控品检测值的频数分布，受混匀参数影响较大的质控品用同厂家不同批号试剂进行同样的试验并分析结果是否一致。结果 全自动加样仪不对质控品进行混匀处理时，抗-HCV质控品S/CO值明显低于混匀质控品的检测值(P<0.000 1)。部分检测系统所测不混匀抗-TP质控品以及抗-HIV质控品的S/CO值与该项目混匀质控品检测值也有差异(P<0.05)。未经加样针混匀的抗-HCV质控品有部分S/CO值分布在<2的区间。同厂家不同批号试剂分别检测抗-HCV质控品，混匀与不混匀处理的质控品检测值之间均存在差异(部分P<0.05)。结论 尽管加样前质控品均进行漩涡震荡混匀，如果STAR全自动加样仪不设置质控品混匀参数，部分质控品的检测结果依然会受到影响。     

血液病毒核酸筛查系统室内质控方法的建立及评价

目的建立并评价血液病毒核酸检测系统的室内质控方法。方法将浓度为200 IU/m L的HBV DNA、2 000 IU/m L的HCV RNA及2 000 IU/m L的HIV RNA质控标准品用已知阴性献血者血浆标本作不同倍数稀释,直至接近检测下限,确定合适质控品浓度后与献血者标本一同进行核酸提取、扩增,连续检测20次,用即刻法分析所得核酸扩增循环阈值(Ct值)结果,计算Ct值的均值(x珋)、标准差(s)和变异常数(CV),以x珋±2s为警告限,超过x珋±3s为失控限,以此分别建立核酸筛查室内质控图框架并分析室内质控结果。绘制Levey-Jennings质控图,统计180次室内质控结果,结合Westgard多规则质控方法,评价该室内质控模式的可行性和有效性。结果以HBV DNA为例,室内质控品浓度与Ct值的相关系数r=-0.920,在0.05水平达到高度相关。选择浓度100 IU/m L的HBV DNA室内质控品,连续测定20次的Ct值x珋为31.76,s为1.10,CV为3.46%。连续检测180次室内质控品Ct值的x珋为32.02,s为1.13,CV为3.53%。结论 Ct值可以作为室内质控的依据。本实验室选择的弱阳性质控品能增强当次实验结果的可靠性,可以排除因人员更换等实验条件的差异而导致的误差,可用于日常监控核酸提取扩增检测的有效性。     

自制人类免疫缺陷病毒抗体等质控血清及室内质控方法建立研究

目的用人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体酶联免疫试剂盒中阳性对照,制备室内质控血清。建立艾滋病酶联免疫检测的室内质控方法。进行方法可靠性和质控血清稳定性的评价,同时比较两个厂家生产的HIV抗体试剂盒进行自制质控血清室内质控结果以及自制丙型肝炎抗体、乙型肝炎表面抗原血清的室内质控结果的评价。方法将自制的HIV质控品与卫生部HIV质控品按照HIV抗体检测的SOP文件用HIV抗体试剂随患者进行检测,每天测定吸光度,计算S/CO値。连续检测20次计算S/CO值和s,以x±2s为控制限,以x±3s为失控限绘制质量控制框架图。每天随患者标本各加入1份自制质控品和1份卫生部购质控品进行质控将其各自的S/CO描在质控图上,应用多规则质量控制原则分析以发现当天测定批的误差以及误差原因。控制每批次检测的重复性,观察试剂盒间的差异进行两种质控血清质控结果的比对研究。结果自制HIV抗体质控血清方法科学可靠,减少了基质效应,能确保结果的准确性和可靠性。结论稀释阳性对照制备质控品,建立酶联免疫室内质控方法也适用于乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体等其他免疫项目的酶联免疫室内质控。不同厂家试剂用自制质控品进行质控结果无差异。