人纤溶酶原K1-3基因的表达及抗肿瘤作用研究

目的：研究人纤溶酶原K1-3基因的原核表达及其产物K1-3蛋白的抗肿瘤活性.方法：构建含K1-3基因的表达载体pBV-K13;转化E.coli DH5α;热诱导表达菌株E.coli DH5α（pBV-K13）的K1-3基因表达;表达产物经溶解、复性和纯化后进行鸡胚绒毛尿囊膜（Chorioallantoic membrane,CAM）活性分析和小鼠B16黑色素瘤抑制实验.结果：SDS-PAGE和Western blot分析结果证实K1-3基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物对人纤溶酶原抗血清具有特异免疫活性,并抑制CAM毛细血管生成及小鼠B16黑色素瘤生长.结论：原核表达的K1-3蛋白具有抑制血管生成和抗肿瘤作用.     

HSP65-MUC1 VNTR2融合蛋白的表达、纯化及其抗肿瘤作用

目的：通过基因工程手段在大肠杆菌中表达HSP65-MUC1 VNTR：融合蛋白、鉴定和纯化，并研究其在动物体内的肿瘤生长抑制活性。方法：通过PCR获得结核分支杆菌HSP65基因，以重叠PCR获得人MUC1基因VNTR的2个重复序列，构建原核重组表达载体HSP65-MUC1 VNTR2-pET28a（＋）。在大肠杆菌BL21（DE3）中利用IPTG诱导表达；利用单克隆抗体（mAb）进行Western blot鉴定，以Q柱和凝胶过滤纯化获得纯化蛋白。通过建立转染人MUC1基因的B16黑色素瘤小鼠肿瘤模型，在C57BL／6小鼠体内研究HSP65-MUC1 VNTR，融合蛋白的肿瘤生长抑制活性。结果：获得的结核分支杆菌HSP65基因和人MUC1基因VNTR区的2个重复片段，经测序证明分别与GenBank中结核杆菌HSP65基因和人MUC1基因的VNTR完全相符；构建的原核表达载体HSP65-MUC1 VNTR2-pET28a（＋）可稳定的可溶性表达HSP65-MUC1VNTR2蛋白；经Q柱和凝胶过滤纯化，纯化的目的蛋白纯度达95％以上；利用鼠抗人MUC1mAb对表达蛋白进行验证，结果阳性；小鼠肿瘤预防免疫实验表明，实验组小鼠抑瘤率大于对照组，且具有明显性差异。结论：成功地利用原核表达系统实现了对HSP65-MUC1 VNTR2蛋白的可溶性表达，并对其体内预防实验进行了初步研究，证明该融合蛋白能明显抑制表达MUC1的肿瘤生长。为进一步评价其作为肿瘤疫苗可能性的研究打下了基础。     

硫修饰脂质体包裹VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成及转移的抑制作用

目的：探讨硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸对肺癌血管生成和转移的抑制作用。方法：将硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸（ASODN）、正义寡核苷酸（SODN）、错义寡核苷酸（MODN）加入培养的Lewis肺癌细胞中，采用免疫组织化学方法检测肺癌细胞中VEGF蛋白表达，观察经ODN处理的条件培养基对牛主动脉内皮细胞增殖的影响。另外，复制小鼠Lems肺癌模型40只，随机分为对照组、VEGFASODN组、VEGFSODN组及VEGFMSODN组，每组10只，接种肿瘤细胞24小时内，给予脂质体、VEGFASODN、VEGFSODN、VEGFMSODN皮下注射，每周2次，连续4周。检测皮下肿瘤的变化和肺转移率，并用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD），超声检测肿瘤组织Ps、砌变化。结果：ASODN能够下调肺癌细胞中VEGF蛋白的表达，经ASODN处理的条件培养基能显著抑制牛主动脉内皮细胞的增殖。ASODN组小鼠肿瘤生长及肺转移受到显著抑制，MVD、PS、RI与其它各组相比有明显差异（P〈0．01）。结论：硫修饰脂质体包裹的VEGF反义寡核苷酸能够显著抑制肺癌血管生成，进而抑制肿瘤生长及转移。     

VEGF、ANG-1、ANG-2、TSP-1的表达与胆管细胞性肝癌血管生成和侵润转移的关系

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素-1（ANG-1）、血管生成素-2（ANG-2）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）的表达与胆管细胞性肝癌(CCC)血管生成和侵润转移的关系。方法： 对33例手术切除的CCC标本进行CD34、VEGF、 ANG-1、 ANG-2 和TSP-1的免疫组化染色，研究VEGF、ANG-1、ANG-2、TSP-1的表达与胆管细胞性肝癌血管生成和肿瘤门静脉侵犯、肝内转移、淋巴结转移以及肿瘤分化水平之间的关系。 结果： 本组CCC的微血管密度（MVD）为(87.2±52.6)/mm2，VEGF、ANG-1、ANG-2 和TSP-1的阳性率分别为75.6%、36.0%、57.6%和45.5%。VEGF和ANG-2的阳性表达与高MVD相关，TSP-1则与MVD负相关（P<0.01,P<0.05,P<0.01）。阳性TSP-1与肝内转移正相关（46.7% vs 5.6%，P<0.05）。结论： CCC瘤内的血管新生活跃，VEGF和ANG-2的阳性表达与CCC血管生成正相关，TSP-1则与其负相关，TSP-1的阳性表达还与肝内转移相关，VEGF、ANG-1、ANG-2的表达与肿瘤的侵润转移未见显著相关。     

粉尘螨第五组主要变应原（Der f5）的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

目的克隆表达粉尘螨第五组变应原（Dermatophagoides farinae,Derf5）基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法提取活粉尘螨总RNA,扩增Derf5片段,PCR产物与克隆载体pMD18-T连接,转化入大肠埃希菌JM109,经酶切及测序鉴定获得pMD18-Der f5阳性菌株,再提取质粒进行双酶切,与表达载体pET-30a（＋）连接,转化入大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blotting）鉴定其表达效果,Ni-IDA亲和层析柱纯化蛋白,利用尘螨病人血清鉴定其免疫原性。结果构建了重组质粒pMD18-Derf5和pET30a-Der f5,SDS-PAGE结果表明Der f5基因在BL21中获得良好的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,纯化的蛋白与病人血清有良好的IgE结合活性。结论获得广州地区Der f5的原核表达载体,高效表达纯化重组蛋白,初步鉴定了该蛋白的免疫原性。     

ANGPT2单克隆抗体对AML小鼠肿瘤组织血管增生和下游信号蛋白表达的影响

目的 探讨ANGPT2单克隆抗体对急性髓系白血病（AML）小鼠肿瘤组织血管增生、下游信号蛋白表达的影响。方法 建立AML小鼠模型20只，对照组与实验组各10只，采用免疫组织化学方法检测微血管密度及VEGF表达情况，采用Western blot检测下游信号通路蛋白TIE2、SHP2和PI3K的表达水平。结果 ANGPT2单克隆抗体治疗后，AML小鼠肿瘤组织微血管密度及VEGF表达水平显著下降79.29%(P<0.01)，下游信号通路蛋白SHP2蛋白表达水平上升59.43%,PI3K蛋白表达水平下降20.37%(P<0.01)。结论 ANGPT2单克隆抗体显著抑制AML小鼠肿瘤组织血管增生。     

益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长转移及血管生成的作用

目的：研究益气活血解毒方对小鼠Lewis肺癌生长及自发性肺转移的作用并探讨其作用机制。方法:复制小鼠Lewis肺癌模型并随机分组,腹腔注射给药 10 d 后，观察抑瘤率，HE染色观察瘤组织病理学变化，免疫组化法检测瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；给药 20 d 后，观察肺转移瘤结节数、瘤组织微血管密度（MVD），免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果:益气活血解毒方能减少小鼠Lewis肺癌肿瘤重量和肺转移灶数，高低剂量(24 mg·kg^-1·d^-1,12 mg·kg^-1·d^-1)抑瘤率分别为48.29%、37.26%，肺转移结节数分别为1.67、3.50，对照组为6.44；并能抑制肿瘤细胞PCNA的表达，降低肿瘤组织微血管密度,抑制肿瘤细胞及血清中VEGF的表达。结论:益气活血解毒方能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制VEGF表达,减少肿瘤血管生成有关。     

IFN-α抑制HUVECs以及荷人肝癌裸小鼠血管生成的实验研究

目的: 检测IFN-α体内外对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的抑制作用，探讨IFN-α抑制肝癌血管生成的机制。方法： 运用细胞增殖抑制试验、MTT试验、管样结构形成试验、移动抑制试验以及裸鼠体内移植瘤生长和血管密度测定探讨IFN-α对HUVECs的抑制作用。结果： IFN-α对HUVECs的细胞增殖、移动和管样结构形成试验有明显的抑制作用，体内实验提示试验组移植瘤直径明显小于对照组，微血管密度（MVD）亦明显低于对照组。结论： IFN-α可以通过抑制肿瘤的血管新生，起到抑制肿瘤生长的作用。     

灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对乳腺癌血管生成调节因子的作用

目的探讨灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对人源高恶性乳腺癌血管生成调节因子的作用。方法不同剂量的灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油分别刺激体外培养的人源高恶性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231细胞制作的荷廇小鼠,Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达变化,Real-time PCR检测肿瘤血管生成相关因子EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血小板反应素-1(TSP-1)、血小板衍生因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)转录水平的基因表达变化。结果灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均可在体内和体外抑制人源高恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表达,且有剂量依赖性;均可在体内和体外抑制VEGF RNA表达,增强血管生成抑制因子TSP-1 RNA表达;灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。结论灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均有抑制肿瘤血管生成因子表达和促进血管生成抑制因子表达的作用,其中灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。     

人源抗HBsAg scFv与重组复合干扰素融合蛋白的高效表达及活性鉴定

目的：制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)单链抗体(scFv)与重组复合干扰素(consensus interferon，cIFN)的融合蛋白，并鉴定其活性。方法：把人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白的表达载体pRA-cIFNscFv转化到大肠杆菌菌株BL21之后大量表达抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白。SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白，经纯化并变性复性包涵体蛋白后用ELISA、流式细胞仪、MTS非放射性活细胞比色定量法及HBsAg血凝抑制试验等进行融合蛋白的抗HBsAg抗体活性和干扰素活性测定。结果：SDS-PAGE和Western blotting结果显示，抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白在BL21大肠杆菌中大量表达，表达量超过10mg/L培养基；ELISA和流式细胞仪结果显示，所表达的目的蛋白具有抗HBsAg和IFNα的免疫活性，且特异性良好；MTS和HBsAg血凝抑制试验结果显示，融合蛋白具有明显的PLC/PRF/5细胞增殖抑制活性和HBsAg分泌抑制活性，表明所获得的抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白具有抗HBV病毒活性和HBV感染细胞增殖抑制活性。结论：用基因工程方法成功制备了人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白，此融合蛋白具有抗HBsAg抗体活性和IFNα活性，有待深入探讨此融合蛋白的应用价值。     

Liposome-mediated gene transfer of K1-5 suppresses tumor development and improves the prognosis of hepatocellular carcinoma in mice

It has been reported that kringle 1-5 (K1-5) has a potent and specific antiangiogenic activity. In the present study, we investigated the antitumor effect of gene transfer of K1-5 for hepatocellular carcinoma in mice. Inhibitory effect by the media of Cos-1 cells containing K1-5 on bovine capillary endothelial (BCE) cell proliferation was evaluated by a tetrazolium-based assay. For tumor growth, intrahepatic metastasis, and survival studies, intravenous injection of liposome–K1-5 cDNA complexes was performed to nude mice implanted with three hepatoma cell lines into the liver. Production of K1-5 was investigated by immunohistochemistry and Western blotting. The number of vessels in the tumor was counted in 0.125 mm² fields. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and angiopoietin (Ang)-1 and -2 in tumors was investigated by Western blotting. Serum ALT levels and body weight of the mice were measured. Proliferation of BCE cells was inhibited by 44% in the media containing K1-5. Gene transfer of K1-5 suppressed tumor growth of the three hepatoma cell lines, respectively. In the K1-5-treated group, survival period was prolonged and the number of intrahepatic metastases was reduced. Expression of K1-5 protein was detected on hepatoma cells and hepatocytes. The number of vessels in tumor tissues was decreased by K1-5 transfection. Expression of angiopoietin-2 in tumor tissues was suppressed by K1-5 transfection. Serum ALT levels and body weight of mice were not influenced by K1-5 transfection. These findings suggest that antiangiogenic gene therapy with K1-5 cDNA will be a safe and effective strategy to suppress the growth of hepatocellular carcinoma.     

醛酮还原酶AKR7A5蛋白的纯化及其对萘醌类化合物的底物特异性研究

目的:探讨小鼠醛酮还原酶AKR7A5蛋白对萘醌及其衍生物的底物特异性。方法:IPTG(异丙基硫代半乳糖糖苷)诱导BL21pLysS大肠杆菌中His标签的AKR7A5融合蛋白大量表达,利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱纯化His-AKR7A5融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的AKR7A5蛋白。使用AKR酶活性实验检测纯化的重组AKR7A5蛋白对萘醌类化合物的底物特异性。结果:经SDS-PAGE和Western blot验证,成功纯化了His标签的AKR7A5融合蛋白;AKR酶活性实验结果显示,重组AKR7A5蛋白对散沫花醌有中等亲和力,对胡桃醌和维生素K3有较低的亲和力,对1,4-萘醌无亲和力。结论:成功纯化了重组AKR7A5蛋白,并检测了其对萘醌类化合物的底物特异性,结果表明醛酮还原酶很可能选择性地参与萘醌类化合物的代谢。     

Baculovirus expression, purification and evaluation of recombinant pneumococcal surface adhesin A of Streptococcus pneumoniae.

Pneumococcal surface adhesin A (PsaA), with a molecular mass of approximately 37 kD by SDS-PAGE, is a common surface protein expressed by all 90 serotypes of Streptococcus pneumoniae. S. pneumoniae serotype 6B genomic DNA was amplified to generate a DNA fragment carrying the full-length psaA sequence and was cloned into a baculovirus expression system. We expressed either cell-associated or cell-free nonfusion PsaA polypeptides using two insect cell lines, Spodoptera frugiperda (Sf9) and Trichoplusia ni 5B1-4 (High-Five). Recombinant PsaA (rPsaA) polypeptides were partially purified by partitioning in PBS/Triton X-114 buffers and by weakly basic ion exchange filter chromatography. Membrane-bound 'hydrophobic rPsaA' (hrPsaA) expressed by either Sf9 or High-Five cells had a molecular mass of approximately 38 kD by SDS-PAGE and partitioned in a Triton X-114 phase, it reacted with both rabbit polyclonal and five monoclonal anti-PsaA antibodies by dot blot or Western blot analysis. High-Five-cell-expressed 'soluble rPsaA' (srPsaA) with a molecular mass of approximately 37 kD by SDS-PAGE, was isolated from the serum-free culture medium and did not partition in the Triton X-114 phase; it reacted with anti-PsaA rabbit polyclonal and mouse monoclonal antibodies by ELISA and Western blot analysis. Both rPsaA polypeptide forms were immunogenic in Swiss-Webster adult female mice. In an infant mouse model of bacteremia, survival rates for mice given mouse anti-rPsaA immune serum (from mice immunized with High-Five-expressed srPsaA; 20 microl, 1:50,000 titer) 24 h before bacteremic challenge were greater than for the control group (48 h postchallenge, 20 vs. 90% survival rates) when challenged with S. pneumoniae serotype 6B. These results indicate that rPsaA is immunogenic and elicits protective antibody in mice similar to native protein.     

Expression and characterization of Gag protein of HIV-1(CN) in Pichia pastoris

To express the core protein of HIV-1 of Chinese prevalent strain (HIV-1(CN)) in Pichia pastoris, the full-length gag gene was inserted into the secretory expression vector pHILS1. Linearized recombinant plasmid pHILGAG by SalI was electrotransformed into the yeast strain GS115, and the yeast transformants were identified by PCR. To induce the interest protein to be expressed, the PCR positive transformants were inoculated in the medium of BMGY and BMMY, mRNA of the strain was detected by RT-PCR, and the expressed protein was analyzed by SDS-PAGE, Western blotting and thin layer scanning. mRNA (1.3kb) was amplified by RT-PCR. SDS-PAGE and Western blotting analysis showed that the molecular mass of the expressed protein was 55kDa, which was similar to the expected value, and the expressed protein could react with McAb to HIV-1 p24. Thin layer scanning analysis demonstrated that the whole amount of the expressed protein was approximately 13% of the soluble protein in the supernatant. The recombinant yeast had good genetic stability. The optimal expression conditions of the engineering yeast were as follows: BMMY medium, 80-90% of dissolved oxygen, 1% methanol, and 3-day-cultivation course. Gag proteins were expressed under the optimal expression condition and purified via gel filtration chromatography. The purity of the interest protein was up to 85%. After the purified proteins were inoculated into BALB/c mice, the anti-HIV-1 antibodies in the immunized mice could be detected by Western blotting.     

人胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤模型建立及其用于观察载siRNA纳米微粒体内效应的研究

 目的：探讨建立人胰腺癌PANC-1裸鼠移植瘤模型的最佳实验方法,并应用该模型进行载基因纳米微粒体内效应的研究。方法：将不同数量PANC-1细胞悬液接种于BALB/c (nu/nu)小鼠右侧背部皮下,当肿瘤体积达100 mm3时尾静脉注射siRNACY5.5纳米复合物进行活体荧光成像。此外,于尾静脉注射负载siRNAKras纳米复合物,蛋白印迹及免疫组织化学染色法观察肿瘤组织Kras蛋白表达水平。结果：1×107 cells/300 μL 接种成瘤率达100%,成瘤时间＜2周。荧光呈像及组织学检查显示载siRNA纳米微粒可靶向聚集在肿瘤组织发挥体内基因沉默效应。结论:本研究报道的人胰腺癌裸鼠移植瘤模型建立方法成瘤率达100%,成瘤时间短,是研究药物示踪和观察疗效的理想模型。     

StathminsiRNA抑制人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡

目的: 探讨微管解聚蛋白stathmin对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长和细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法: 将0.1 mL SGC-7901细胞悬液(5×10¹⁰/L)接种于裸鼠背部一侧皮下,建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:PBS组(PBS治疗)、对照siRNA组(接种对照siRNA,终浓度为100 nmol/L)和stathmin siRNA组(接种stathmin siRNA,终浓度为100 nmol/L),治疗方式均为腹腔注射。连续2周观察荷瘤裸鼠的生长情况,免疫组织化学方法检测增殖抗原Ki-67的表达,采用TUNEL研究肿瘤组织中细胞的凋亡,Western blotting检测裸鼠肿瘤组织中stathmin、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果: Stathmin siRNA能明显抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),stathmin siRNA组中裸鼠移植瘤的重量明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。免疫组化结果表明,stathmin siRNA组中Ki-67的增殖指数明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。TUNEL结果显示,stathmin siRNA组的凋亡细胞数显著高于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。Western blotting结果表明,与PBS组和对照siRNA组相比,stathmin siRNA组中stathmin和Bcl-2蛋白的表达显著下调,而Bax蛋白表达明显上升(均P<0.05)。结论: Stathmin在胃癌细胞增殖和细胞凋亡的调控中发挥重要作用,本研究有望为胃癌分子靶向治疗提供理论依据。     

ISO-1对结直肠癌生长和微血管形成的影响

目的 观察选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对结直肠癌生长及其微血管形成的影响,并探讨其可能机制.方法 MTT法检测不同浓度ISO-1(0.01-100umol/L)在不同时间点(24、48和72 h)对CT26细胞增殖的影响.盲肠造疝原位移植瘤块术建立小鼠结直肠癌模型.将30只成功建模小鼠随机分为3组,分别每周两次腹腔注射相同体积ISO-1(0.2 ml,20 mg/kg)、5%DMSO和无菌生理盐水(NS).治疗后每周两次观察小鼠盲肠肿瘤大小,第4周时处死小鼠.ELSIA法测定小鼠血清中VEGF浓度;CD31染色标记血管内皮细胞测定肿瘤微血管密度(MVD).结果 在体外,ISO-1明显抑制CT26细胞增殖.在体内,ISO-1明显抑制小鼠肿瘤生长,第4周ISO-1组和DMSO组的抑瘤率分别为25.22%和9.65%,差异有统计学意义(P<0.01);并且,ISO-1组移植瘤质量明显小于DMSO组[(1.50±0.14)g比(1.80±0.14)g,P=0.017];与DMSO组比较,ISO-1降低小鼠血清中VEGF的水平[(14.62±6.49)ng/L比(63.34±10.22)ng/L,P<0.01]及肿瘤组织MVD[(16.6±3.7)比(35.8±7.3),P=0.002].结论 ISO-1抑制结直肠癌细胞增殖及原位移植瘤生长,其机制可能为LSO-1抑制MIF生物学活性,从而抑制肿瘤细胞增殖、下调VEGF表达与MVD.     

原位微波消融为诱导抗肝癌免疫反应提供有效抗原

目的： 研究微波消融（MWA）灭活的肝癌组织诱导抗肿瘤免疫反应的效能。方法: 建立C57L/J小鼠皮下肝癌MWA模型，观察MWA小鼠对抗Hepa1-6细胞冲击的效果，采用结晶紫染色分析法测定淋巴细胞的杀瘤活性。提取MWA灭活的肝癌组织与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-2（IL-2）缓释微粒配制成MWA瘤苗免疫小鼠，观察此瘤苗诱导保护性抗肿瘤免疫的效能。结果: 与对照组小鼠全部生长肿瘤相比，17％的MWA小鼠获得保护，荷瘤MWA小鼠的肿瘤生长受到显著抑制，小鼠的生存时间显著延长。MWA组无瘤小鼠的脾细胞能够特异性杀伤Hepa1-6细胞。MWA瘤苗保护免疫小鼠的效能比单用MWA灭活肝癌组织者高50％，与阳性对照的甲醛固定瘤苗相近。结论: 原位MWA能为诱导特异性抗肿瘤免疫提供有效抗原，细胞因子的使用加强了这一保护性免疫作用。     

腺病毒介导的肝癌靶向SEA-CD80基因治疗及免疫学机制的初步研究

目的: 观察肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A (SEA)/CD80基因重组腺病毒载体对肝癌的疗效,并对其免疫学机制进行初步研究.方法: 利用AdEasy腺病毒系统分别构建并制备甲胎蛋白(AFP)启动子和增强子Ⅰ调控的SEA和/或CD80基因重组腺病毒载体, 然后采用瘤体内直接注射的方式对小鼠皮下移植性肝癌进行治疗, 采用RT-PCR和Western blot方法检测腺病毒注射部位的SEA和CD80 mRNA和蛋白的表达情况; 采用ELISpot方法和LDH释放实验分别检测脾脏淋巴细胞中肝癌特异性IFN-γ分泌细胞的频数和细胞毒性T细胞(CTLs)对Hepa1-6细胞的特异杀伤活性; 通过观察荷瘤小鼠经治疗后肿瘤体积的变化及生存时间, 评价重组腺病毒对肝癌的治疗作用.结果: 我们构建的腺病毒能够使SEA和/或CD80 mRNA和蛋白靶向地在肝癌组织中表达; 与空载体组和PBS对照组相比, 双基因组和单基因组分泌IFN-γ的T细胞数量均明显增多, CTL对Hepa1-6细胞的特异性杀伤作用均明显增强, 荷瘤小鼠肿瘤体积明显减小, 生存期明显延长; 双基因组的疗效和对免疫系统的激活作用明显高于单基因组; CD80 和SEA的组之间、空载体和PBS组之间无明显差异.结论: 我们制备的肝癌靶向性重组腺病毒对肝癌有良好的治疗作用, 联合基因治疗优于单个基因治疗.