EB病毒BHRE1基因抗辐射作用的研究

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞抵抗放射线损伤能力的改变，构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转梁前后癌细胞在放射线照射后于裸鼠体内成瘤能力改变的情况。结果发现，在放射线照射前，ＢＨＲＦ１表达细胞在裸鼠体内形成肿瘤时间较晚，肿瘤重量较轻（Ｐ〈０．０１）；而经放射线照射后，ＢＨＲＦ１表达细胞在裸鼠体内的成瘤能力于对照组（Ｐ〈０．０１），经原位末端标记     

shRNA-hIAP2增强CNE-1鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

目的构建人凋亡抑制蛋白（ human inhibitor of apoptosis protein2, hlAP-2 ）的shRNA，靶向抑制hlAP-2基因联合放疗，探讨其对CNEl鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响。方法首先采用MTT法确定最佳放射剂量；再构建4条hlAP-2．shRNA沉默片段并用脂质体法转染CNEl细胞，最后采用实时荧光定量PCR（Q—PCR）和免疫印迹法（Westernblot，WB）筛选出最佳沉默shRNA序列；用最佳沉默shRNA序列转染CNEl细胞，分别设置转染放射线照射组与未转染放射线照射组，采用实时定量PCR和WB检测hlAP．2的基因及其蛋白表达；流式细胞术测细胞凋亡，transwell测细胞侵袭能力。结果MTr法明确4Gv为最佳放射剂量；Q-PCR和WB检测结果显示4条hlAP-2-shRNA均能有效抑制hIAP-2mRNA及蛋白表达（P〈0．05），以hIAP-2-shRNA2沉默效果最显著（P〈0．05）；Q—PCR和WB检测结果显示转染hlAP-2-shRNA2后照射组与未转染hlAP-2-shRNA2照射组的CNEl细胞中hlAP-2基因与蛋白表达比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞术检测结果显示转染hIAP-2-shRNA2后照射组比未转染hlAP-2-shRNA2照射组凋亡率差异具有统计学意义（P〈0．05）；transwell检测结果显示转染hIAP-2-shR-NA2后照射组与未转染hIAP-2-shRNA2照射组侵袭能力差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论转染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌细胞凋亡率，降低其侵袭能力，能够起到放疗增敏作用。     

小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％,P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05）,p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA下调,促进p53蛋白表达所致。     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

TNFRⅡ转基因诱导喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨肿瘤坏死因子受体2（tumor necrosis factor receptor 2,TNFRⅡ）转基因结合TNFα局部注射诱导喉鳞状细胞癌裸鼠模型肿瘤细胞的凋亡和杀伤肿瘤的效果,为喉鳞状细胞癌的基因治疗开辟新途径。方法：在利用人喉鳞状细胞癌Hep2细胞建立人喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型的基础上,以脂质体为载体采用体内转基因技术,活体转染人类TNFRⅡ并联合局部TNF-α注射,采用肿瘤大体观察、流式细胞术、免疫组织化学、TuneⅠ、透射电镜等方法观察TNFRⅡ转染前后肿瘤细胞TNFRⅡ表达水平、肿瘤细胞凋亡情况,综合评价对肿瘤杀伤和抑制的效果。结果：裸鼠喉癌移植瘤模型的成瘤率为94．5％。活体转基因48h TNFRⅡ表达水平达最高峰并在72h内维持较高水平。免疫组织化学方法证实TNFRⅡ主要表达在肿瘤细胞的细胞膜上,空质粒转染组肿瘤细胞几乎无TNFRⅡ表达。2000U TNFα局部注射对肿瘤的诱导凋亡和杀伤的抑制效率最高,表现为在TNFRlI转基因组动物治疗结束时肿瘤的体积为（1161．333±166．555）mm^3,瘤体重量为（1．100±0．832）g,瘤／鼠重为0．044±0．332,凋亡率为（38．226±13．671）％,与空质粒转染对照组相比具有明显差别。Tunel和超微结构观察发现前者的细胞凋亡明显高于后者。结论：通过TNFRⅡ活体转基因提高其蛋白表达水平可以明显提高TNFα局部注射杀伤喉癌移植瘤模型动物肿瘤细胞的效果,其机制是通过更有效诱导细胞凋亡来实现的。活体TNFRⅡ转基因结合TNFα局部注射有可能成为喉癌基因治疗的一个有效方法。     

下调组蛋白去乙酰化酶6对Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 观察下调组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylation 6,HDAC6)对人喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)Hep-2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并探讨其体内抗肿瘤机制.方法 将喉鳞癌Hep-2细胞注射入裸鼠皮下,1周后裸鼠荷瘤模型建成.将裸鼠分为3组进行治疗,即空白对照组、空载体组和HDAC6小干扰RNA( siRNA)组,监测肿瘤生长变化.采用免疫组织化学法检测不同组别裸鼠移植瘤瘤体内Ki-67增殖情况的变化.采用Western blot法检测转染HDAC6前后不同组别裸鼠移植瘤组织凋亡相关基因B淋巴细胞-2(bcl-2)及bcl相关X蛋白(bcl-associated x protein,Bax)表达的变化.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)检测转染HDAC6前后裸鼠移植瘤组织凋亡情况的变化.结果 HDAC6 siRNA转染荷瘤裸鼠后,与空载体组及空白对照组相比,HDAC6 siRNA组荷瘤裸鼠肿瘤体积显著下降(F =64.783,P＜0.05);原位杂交、免疫组织化学及Western blot结果表明,HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中HDAC6 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P值均＜0.05);Western blot结果显示HDAC6 siRNA转染组裸鼠肿瘤组织中Bax蛋白表达显著上调而Bcl-2的表达则显著下调,三组间比较差异具有统计学意义(P值均＜0.05);免疫组织化学结果显示转染HDAC6 siRNA组Ki-67染色阳性细胞数显著少于空载体组及空白对照组(F=25.793,P＜0.05);TUNEL结果表明,HDAC6转染组中细胞明显发生凋亡.结论 HDAC6 siRNA能有效抑制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的生长,并降低HDAC6和Bcl-2的表达,提高Bax的表达,为喉鳞癌的分子治疗提供了理论依据.     

Avastin联合重组腺病毒胸苷激酶自杀基因抗鼻咽癌的体内外实验

目的通过体内外实验初步探讨重组人血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）单克隆抗体Avastin和重组腺病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷（adenovirus—thynidine kinase／Ganciclovir，Ad-TK／GCV）自杀基因系统在鼻咽癌治疗中的价值。方法采用人VEGF ELISA试剂盒检测鼻咽癌CNE1细胞分泌的VEGF水平，四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl terazolium，MTT）法检测Avastin和Ad—TK／GCV对CNE1细胞的抑制作用，流式细胞仪和Hoechst 33342染色法探讨其作用机制。建立CNE1细胞荷瘤裸鼠移植瘤模型，分组在裸鼠肿瘤局部注射磷酸盐缓冲液、Avastin、Ad—TK／GCV、对照Ad—Lac—Z／GCV和Ad—TK／GCV＋Avastin。观察治疗后移植瘤生长情况、抑瘤率和肿瘤组织病理学改变。结果CNE1细胞分泌VEGF；Avastin对CNE1细胞无直接作用。随着Ad—TK感染复数和前体药物浓度的增加，Ad—TK／GCV对CNE1细胞的杀伤作用逐渐增强，旁观者效应的存在增强了这种杀伤作用。流式细胞仪分析显示Ad—TK组与对照组相比，死亡细胞的比率差异有统计学意义（t值分别为30．812和41．006，P值均为0．000）。Hoechst33342染色法显示Ad—TK组与对照组相比，凋亡细胞的比率差异有统计学意义（t=47．351，P=0．000）。CNE1细胞裸鼠体内实验显示Avastin组、Ad—TK／GCV组和Ad—TK／GCV＋Avastin组肿瘤增长缓慢，肿瘤体积在不同时间点小于对照组（P〈0．05或P=0．000）；平均瘤重均明显低于对照组（P值均为0．000）。病理检查示Ad—TK／GCV组、Ad—TK／GCV＋Avastin组肿瘤呈片状坏死，经Avastin治疗的鼻咽癌移植瘤边缘血管生成明显减少。结论体外实验观察到Avastin对鼻咽癌CNE1细胞无直接作用；Ad—TK／GCV系统通过引起细胞坏死和细胞凋亡杀伤CNE1细胞，旁观者效应的存在增强了自杀基因的杀伤作用。Avastin及Ad—TK／GCV自杀基因系统对鼻咽癌CNE1细胞荷瘤裸鼠移植瘤的生长有一定抑制作用，两种治疗联合产生协同作用。     

紫杉醇联合放疗治疗鼻咽癌裸鼠移植瘤Survivin mRNA的表达及其意义过程中

目的：研究紫杉醇联合放疗治疗鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的疗效及凋亡抑制基因Survivin的表达和意义。方法：建立鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤,分别进行紫杉醇（紫杉醇组）、放疗（放疗组）、紫杉醇＋放疗（紫杉醇＋放疗组）处理,测量移植瘤体积并对移植瘤标本进行苏木精-伊红染色、流式细胞仪检测凋亡指数及onestep RT—PCR检测Survivin mRNA的表达。结果：紫杉醇＋放疗组对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,抑制率为99．3％。与对照组相比,紫杉醇组、放疗组和紫杉醇＋放疗组的凋亡指数均明显增加（P〈0．05）,其中紫杉醇＋破疗组更为明显（P〈0．05）。紫杉醇组和放疗组的裸鼠移植瘤组织中Survivin mRNA的表达与对照组无明显差异（P〉0．05）,但紫杉醇＋放疗组中Survivin mRNA的表达显著下降（P〈0．05）。结论：紫杉醇联合放疗对鼻咽癌低分化移植瘤具有明显的杀伤作用,紫杉醇对鼻咽癌裸鼠移植瘤具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

蛋白激酶CK2α特异性siRNA对人喉癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究蛋白激酶CK2α特异性siRNA对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长和蛋白激酶CK2α表达的影响。方法：裸鼠皮下种植人喉癌Hep-2细胞,肿瘤长到一定大小时,在肿瘤局部注射蛋白激酶cK2a特异性siRNA表达质粒,观察肿瘤生长情况,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测蛋白激酶CK2α mRNA在肿瘤中的表达,应用免疫组织化学方法检测蛋白激酶CK2α蛋白在肿瘤中的表达。结果：转染蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒后,裸鼠移植瘤生长缓慢（P〈0．01）,裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2α mRNA和蛋白表达均较非特异干扰组和空白组明显下降（P〈0．05）。结论：蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达载体可以下调裸鼠移植瘤中蛋白激酶CK2α表达,抑制肿瘤生长。RNA干扰技术可能成为治疗喉癌的一种新途径。     

EGCG对鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤的放疗增敏作用以及对Survivin表达的影响

目的研究凋亡抑制基因Survivin的表达与EGCG对鼻咽癌CNE 2裸鼠移植瘤放疗增敏作用的关系。方法将低分化鼻咽癌细胞CNE 2接种于4～6周龄的雌性裸鼠皮下,待移植瘤生长至4～6?mm时,随机分为4组,分别采用NS、EGCG［50?mg/(kg·w）］、放疗（15?Gy）、EGCG给药24?h后再行放疗等方法分别处理各组裸鼠,处理前后分别测量裸鼠移植瘤的短径、体积。21?d后处死裸鼠,取出肿瘤并称重,将肿瘤组织分成两份,分别用来进行病理切片TUNEL染色以及RT PCR检测Survivin mRNR的表达。结果EGCG＋放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,肿瘤生长抑制率为89.3%,消退率为40.0％。与对照组EGCG组、放疗组相比,EGCG＋放疗组的凋亡指数均明显增加（P＜0.05),同时,伴有Survivin mRNR的表达显著下降（P＜0.05）。结论EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤可能具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

Flow cytometric analysis of BHRF1 expression prohibiting apoptosis induced by radiation.

The Epstein-Barr virus gene BHRFI has homology with proto-oncogene bcl-2, which can protect cells from apoptosis. In order to investigate the effect of BHRF1 expression on the anti-apoptotic ability of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells after irradiation, a high-BHRF1 expression vector was constructed and transfected into the NPC cell line CNE2. Then, the alteration of proliferation and apoptosis in the cells was tested by flow cytometry after cobalt 60 irradiation. The results showed that BHRF1 expression could increase G1 delay and decrease the cell percentage in S phase before irradiation, and reduce the apoptotic rate of CNE2 cells and increase the cell percentage in S phase after irradiation. The results suggest that BHRF1 expression is able to alter the cell cycle and protect CNE2 cells from apoptosis induced by radiation.     

鼻咽癌患者单个核细胞mIL-2R表达和血清sIL-2R水平的检测及意义

目的：探讨ＩＬ－２Ｒ与鼻咽癌发生、发展的关系。方法：应用间接免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ法对６２例鼻咽癌、２１例鼻咽良性病变和２６例健康对照者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激后的ｍＩＬ－２Ｒ和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。结果：１）鼻咽癌患者ｍＩＬ－２Ｒ表达显著低于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０５）;２）鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０１）;３）与无远处转移的鼻咽癌患者相比,有远处转移的鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ显著升高（Ｐ＜０．０１）;４）鼻咽良性病变与健康对照组之间ｍＩＬ－２Ｒ表达和ｓＩＬ－２Ｒ水平无显著差异。结论：结果提示ｍＩＬ－２Ｒ表达低下和ｓＩＬ－２Ｒ异常升高在鼻咽癌患者机体免疫抑制中可能起重要作用。     

鼻咽癌中VEGF的表达与树突状细胞含量的相关分析及临床意义

目的 探讨鼻咽癌组织中VEGF表达与树突状细胞含量的相关性。方法 选取鼻咽癌组织和鼻咽部淋巴组织各25例,采用ELISA方法检测组织中VEGF的表达,采用流式细胞仪检测组织中树突状细胞和调节性T细胞的含量并分析其相关性。结果 鼻咽癌组织中VEGF含量高于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=12.324,P<0.01);鼻咽癌组织中CD4+淋巴细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=14.304,P<0.01);而鼻咽癌组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞含量高于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=5.910,P<0.01);鼻咽癌组织中CD123+树突状细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=7.866,P<0.01),鼻咽癌组织中CD11c+树突状细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=3.411,P<0.01),鼻咽癌组织VEGF表达与CD4+CD25+淋巴细胞含量呈正相关(r=0.966 ,P<0.01),与CD123+树突状细胞含量呈负相关(r= -0.946,P<0.01),与CD11c+树突状细胞含量呈负相关(r= -0.954,P<0.01)。结论 鼻咽癌组织中VEGF表达与鼻咽癌组织中CD4+、CD25+调节性T细胞和树突状细胞的含量有关,可能参与鼻咽癌的免疫逃逸。     

Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的：F-box蛋白家族中的一员Skp2参与细胞周期抑制蛋白P27kip1泛素化降解,研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达增加。本研究旨在探讨Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及与鼻咽癌多项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法：鼻咽癌组39例,慢性鼻咽炎组24例。标本均经石蜡包埋,HE染色确诊。Skp2和P27kip1蛋白的检测采用免疫组化染色（PV-9000二步法）。结果：(1) Skp2在鼻咽癌组织中的阳性表达率为71.79%,明显高于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(41.67%),差异有统计学意义（P＜0.05）;P27kip1在鼻咽癌组织中的阳性表达率为35.90%,明显低于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(79.17%),差异有统计学意义（P＜0.01）;(2) Skp2、P27kip1的蛋白表达与鼻咽癌的临床分期、颅神经侵犯有关（P＜0.05）,与年龄、性别、分化程度、颈淋巴结转移无关（P＞0.05）;(3) Skp2、P27kip1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关（rs=-0.373,P=0.019）。结论：鼻咽癌中Skp2蛋白表达与靶蛋白P27kip1蛋白降解有关,Skp2、P27kip1可能与鼻咽癌的发生发展有关,联合检测Skp2、P27kip1蛋白表达可作为判断鼻咽癌生物学行为的指标之一。     

血管内皮生长因子在鼻咽癌组织中的表达及其与淋巴转移的关系

目的 检测鼻咽癌中血管内皮生成因子C(VEGF-C)的表达及微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),探讨鼻咽癌淋巴管生成及淋巴转移之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测58例鼻咽癌和20例鼻咽部炎性反应组织中VEGF-C的表达情况,并用淋巴管内皮细胞特异性抗体LYVE-1行免疫组化染色,计数肿瘤内MLVD,并结合临床病理特征进行分析.结果 鼻咽癌组和炎性反应对照组VEGF-C的阳性表达率分别为84.5%(49/58)和15.0%(3/20),差异有统计学意义(X2=32.309,P＜0.01).鼻咽癌组织MLVD为(28.6±6.2)个/视野,鼻咽炎性反应组为(10.5 4±3.0)个/视野,两组差异有统计学意义(t=12.491,P＜0.01).鼻咽癌组织中,有淋巴转移组VEGF-C阳性表达率(87.8%)明显高于无淋巴转移组(76.5%);有淋巴转移组MLVD(30.2 4±6.4)个/视野高于无淋巴转移组(24.8±3.6)个/视野,经统计学分析,差异均有统计学意义(t=3.259,P＜0.01).VEGF-C的表达与MLVD(t=3.512,P＜0.01)、淋巴转移(X2=7.715,P＜0.01)、临床分期(X2=4.250,P＜0.05),与病理分化程度无关(X2=0.000,P＞0.05).VEGF-C的表达与MLVD(t=3.512,P＜0.01)、淋巴转移(X2=7.715,P＜0.01,r=0.712)、临床分期(X2=4.250,P＜0.05,r=0.481)相关,与病理分化程度无关(X2=0.000,P＞0.05).结论 在鼻咽癌组织中VEGF-C呈高表达,VEGF-C表达与鼻咽癌组织MLVD、淋巴转移、临床分期密切相关.VEGF-C可能参与了鼻咽癌发生、浸润和转移的过程.VEGF-C与肿瘤组织微淋巴管密切相关,在鼻咽癌发展过程中起重要作用,可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点.     

E6．BARFlpN控自杀基因CD／UPRT．UL49的表达对鼻咽癌细胞的体外杀伤效应

目的体外实验观察及检测E6．BARFlP．CD,UPRT．UL49,5-Fc系统对鼻咽癌上皮细胞系2（nasopharyngealcarcinomaepithelial-2,CNE-2）的杀伤效应。方法用高效液相色谱法测定Y射线干预对前体药物5．氟胞嘧啶（5．fluorocytosine,5．Fc）转换效率的影响：用相对存活率表示γ射线联合前体药物5．Fc对转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE-2细胞和野生型CNE-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测1,射线联合前体药物5-Fc对转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE-2细胞的杀伤作用及旁杀效应。统计分析采用SPSSl0．0软件进行f检验及方差分析,P〈0．05表示有统计学意义。结果转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE．2细胞在接受放射治疗联合前体药物5．Fc的作用后,其生长受到不同程度的抑制。即使仅有10％的CNE一2细胞成功转染了自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49,亦可因旁杀效应而杀死37．46％的肿瘤细胞。结论E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49／5．Fc自杀基因,前体药物系统对鼻咽癌CNE-2细胞具有直接杀伤和旁杀效应。     

Association between high initial tissue levels of cyclin d1 and recurrence of nasopharyngeal carcinoma

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: Cyclin D1 expression and the rate of apoptosis have been reported to serve as important prognostic indicators in human cancers. The purpose of the present study was to determine the prognostic significance of both initial cyclin D1 expression and the apoptotic index in nasopharyngeal carcinoma. STUDY DESIGN: Cohort study. METHODS: Cyclin D1 protein levels and apoptosis in tumors and their corresponding adjacent, histologically normal tissues were determined at the time of initial diagnosis using immunohistochemical staining, Western blot analysis, and in situ end labeling, respectively, in 64 patients with T1-T4/N0-N2, poorly differentiated squamous cell carcinoma of the nasopharynx. All cases were treated by routine radiation therapy with a total median dose of 70 Gy and followed up for 10 years. RESULTS: High levels of cyclin D1 were found in 35 of 64 tumor specimens (54.7%); no cyclin D1--positive cells were determinable in normal epithelium of the nasopharynx. Rates of early local recurrence (within 5 y) were significantly higher (P <.01) for patients with high levels of cyclin D1 before radiation therapy (24 of 35 patients [68.6%]) as compared with patients with low or no expression (3 of 29 [10.3%]). Furthermore, patients bearing high levels of cyclin D1 had a poorer prognosis concerning 10-year survival than the others (P <.001), whereas overexpression of cyclin D1 did not correlate with the initial TMN classification (P >.05). According to the rate of spontaneous apoptosis in tumors below or above the median, patients were divided into two groups. There was no statistically significant difference for the overall survival between the two groups (P >.05). CONCLUSIONS: The present study demonstrates that cyclin D1 can be used as an indicator of recurrence and subsequent prognosis in nasopharyngeal carcinoma after radiation therapy. At the same time, the apoptotic state before radiation therapy is of no value in predicting the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma.