HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量

用HPLC-UV-ELSD法同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量。采用Nucleodur C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm ID)；以乙腈-0.1%乙酸水(50∶50)为流动相；紫外检测波长209 nm,蒸发光散射检测器漂移管温度50 ℃。结果显示，青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸能够达到很好分离。它们的线性范围分别为0.52～2.6 μg， r=0.999 4(n=5)； 0.022～4.4 μg， r=0.999 9(n=5)； 0.203～8.12 μg，r=0.999 8(n=5)。平均回收率分别为99.45%(RSD=2.3%， n=6)；102.37%(RSD=1.7%， n=6)；101.10%(RSD=0.79%， n=6)。本法简单、准确、快速，可同时测定青蒿药材中青蒿素、青蒿乙素和青蒿酸的含量。     

灯盏花乙素对J774A.1巨噬细胞中ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响

目的以LPS致敏的小鼠巨噬细胞J774A.1作为炎症细胞模型,研究灯盏花乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法利用碘化丙锭(PI)染色法检测LPS+ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞发生细胞焦亡的情况;免疫印迹法检测细胞裂解液和上清中IL-1β、caspase-1、HMGB1等蛋白的表达水平;基于微珠的免疫测定法(CBA)检测细胞上清中IL-1β的分泌水平。结果 ATP能够明显诱导LPS致敏的J774A.1巨噬细胞中caspase-1活化、成熟IL-1β(17 ku)和HMGB1释放至培养上清中,并诱导细胞焦亡;而灯盏花乙素预处理能够剂量依赖性地抑制ATP诱导的caspase-1活化以及成熟IL-1β、HMGB1的释放,并抑制细胞焦亡;同时,经腺苷酸环化酶抑制剂MDL12330A和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理,可以逆转灯盏花乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论灯盏花乙素通过调节PKA活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡,从而发挥抗炎作用。     

青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究

目的探讨青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应的影响,并研究青蒿琥酯对人结肠上皮细胞炎症治疗作用的可能机制。方法体外原代培养人结肠上皮细胞,并分为空白对照组,LPS诱导组,青蒿琥酯低、中、高剂量组,CCK-8法检测青蒿琥酯对人结肠细胞增殖的影响,ELISA法检测青蒿琥酯对人结肠上皮细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,Western blot检测青蒿琥酯对Traf6/p65信号通路的影响。结果与LPS诱导组相比,青蒿琥酯能显著改善LPS对人结肠上皮细胞增殖的抑制作用(P<0.05);与LPS诱导组相比,各剂量青蒿琥酯均显著降低了人结肠上皮细胞分泌的IL-6和TNF-α水平(P<0.05);免疫印迹法检测发现,各剂量青蒿琥酯组相对LPS诱导组细胞中Traf6和p-p65表达水平明显降低(P<0.05)。结论青蒿琥酯可抑制人结肠上皮细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf6/p65信号通路活化有关。     

抗疟新药青蒿素及其类似物的合成

青蒿素(1)是中药青蒿中提出的一个抗疟活性成分,可从R(+)-香草醛(16)通过关键中间体17进行全合成,利用光氧化反应把氢过氧基引入17的 C_6位构成1的过氧基团。同时合成了植物青蒿所含的已被分离鉴定的九个倍半萜化合物中的青蒿甲素(7)、青蒿乙素(3)青蒿丙素(脱氧青蒿素(?))、青蒿戊素(6)以及青蒿己素(5)。     

HPLC法测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、青蒿乙素和青蒿酸

目的建立HPLC法同时测定儿感退热宁口服液中连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3、青蒿乙素和青蒿酸。方法 Agilent TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:275 nm(0～21.0 min检测连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷)和210 nm(21.0～55.0 min检测去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3、青蒿乙素、青蒿酸);柱温25℃;体积流量0.9 mL/min;进样量:10μL。结果连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D_3、青蒿乙素和青蒿酸分别在3.47～69.40μg/mL(r=0.999 5)、18.78～375.60μg/mL(r=0.999 2)、6.64～132.80μg/mL (r=0.999 7)、2.57～51.40μg/mL (r=0.999 5)、4.86～97.20μg/mL(r=0.999 3)、4.23～84.60μg/mL(r=0.999 8)、0.79～15.80μg/mL(r=0.999 1)、2.16～43.20μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为98.76%、100.12%、99.34%、97.57%、98.29%、99.25%、96.87%、98.02%,RSD值分别为1.53%、0.89%、0.91%、1.38%、1.02%、0.83%、1.26%、1.15%。结论所建立的方法结果准确,可用于儿感退热宁口服液中多成分的质量控制研究。     

青蒿琥酯对人大肠癌Lovo细胞侵袭影响的初步研究

目的观察青蒿琥酯对大肠癌细胞的侵袭作用,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(20、80、160μmol·L-1)作用于人大肠癌Lovo细胞,软琼脂集落形成实验检测青蒿琥酯对Lovo细胞锚着不依赖性增殖的影响;Transwell侵袭实验检测其对Lovo细胞侵袭的影响;Western blot方法分别检测Lovo细胞内HMGB1和MMP-2蛋白质水平的表达情况。结果青蒿琥酯能有效抑制Lovo细胞的增殖和侵袭能力,且呈剂量依赖性(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度青蒿琥酯处理组HMGB1和MMP-2蛋白表达逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯可明显抑制大肠癌Lovo细胞侵袭,其机制可能与抑制HMGB1蛋白,下调MMP-2表达有关。     

青蒿琥酯对大鼠佐剂性关节炎的抗炎免疫研究

目的研究青蒿琥酯对佐剂性关节炎大鼠的抗炎免疫机制。方法建立佐剂性关节炎大鼠模型,随机分为空白组、AA模型组、甲氨蝶呤阳性药物对照组和青蒿琥酯大、中、小剂量组(20.0,10.0,2.5 mg.kg.d-1),并灌胃给药。ELISA法检测各组对单核细胞趋化因子(MCP-1)、调节活化T细胞表达和分泌因子(RANTES)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。结果青蒿琥酯大、中、小剂量组能显著降低血清TNF-α,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);青蒿琥酯小剂量组与其大、中剂量组或者与甲氨蝶呤组比较差异有统计学意义(P<0.05);青蒿琥酯各剂量组均能显著降低血清中MCP-l和RANTES的表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);而青蒿琥酯小剂量组与大、中剂量组或者与甲氨蝶呤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯抗炎和免疫调节作用可能是与抑制炎症因子相关。     

秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的 制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。方法 采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测。采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%。MTT结果显示,IC50为2.24 mmol·L-1,并呈现时间-剂量依赖关系。流式细胞仪(FCM)检测表明, G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论 秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡。     

青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞增殖并可促进细胞凋亡的作用机制。方法:大鼠肝星状细胞体外培养,分别用含梯度质量浓度(0,1,5,12.5,25,37.5μg·ml-1)青蒿琥酯的培养基培养24 h。采用Western blot方法检测青蒿琥酯对大鼠肝星状细胞HSC-T6内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用实时荧光定量PCR方法检测随着药物浓度的变化在RNA水平上的变化。结果:0~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯作用大鼠肝星状细胞24 h后蛋白β-catenin和GSK-3β(ser9)逐渐降低(P<0.05)并且有一定的剂量相关性,而GSK-3β逐渐升高(P<0.05)。实时定量PCR结果提示,1~37.5μg·ml-1的青蒿琥酯能抑制β-catenin的表达,且呈剂量相关性。但是GSK-3β在低剂量青蒿琥酯(1~12.5μg·ml-1)的时候并无明显变化(P>0.05),在高剂量青蒿琥酯(12.5~37.5μg·ml-1)抑制GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:青蒿琥酯抑制大鼠肝星状细胞与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞Caspase-3表达的影响

目的 研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)系HFL-Ⅰ细胞体外生长的影响,为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据.方法 采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-Ⅰ细胞生长的影响,用流式细胞术测定细胞凋亡率;RT-PCR法测定凋亡相关蛋白Caspase...     

大鼠血浆中毛萼乙素的HPLC测定

建立了HPLC法测定大鼠血浆中的毛萼乙素.采用液相萃取法处理血浆样品,色谱柱为C_(18)柱,流动相为乙腈-水(43:57),检测波长233nm.毛萼乙素在40～8 000 ng/ml浓度范围内线性关系良好.方法回收率101.6%～106.5%,日内、日间RSD为4.3%～12.4%.     

青蒿琥酯改善哮喘幼鼠气道重塑的作用

目的 探讨青蒿琥酯对卵清蛋白诱导的哮喘幼鼠气道重塑的影响及作用机制。方法 将SD幼鼠随机分为正常组、模型组(卵清蛋白激发)、阳性对照组(在模型组基础上给予0.2 mg·kg^-1的地塞米松)、低剂量组(在模型组基础上给予10 mg·kg^-1的青蒿琥酯)、高剂量组(在模型组基础上给予20 mg·kg^-1的青蒿琥酯)、激动剂组(在模型组基础上给予20 mg·kg^-1的青蒿琥酯和100 mg·kg^-1的尼日利亚菌素钠盐),每组10只。处理结束后检测幼鼠气道重塑相关指标,使用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)通路相关蛋白和mRNA表达水平,用酶联免疫吸附测定法检测炎性因子表达水平,用瑞氏-吉姆萨染色法检测肺泡灌洗液中炎性细胞分类和计数。结果 正常组、模型组、阳性对照组、高剂量组和激动剂组的NLRP3 mRNA表达水平分别为1.00±0.10、2.36±0.26、1.08±0.11、1.33±0.12和2.14±0.26,胱天蛋白酶1(ca...     

抗疟植物黄花蒿中青蒿酸的绝对构型研究

从中国东北部产黄花蒿中分离得到主成分青蒿酸（１）．通过分析青蒿酸对溴苯酰甲酯的Ｘ－衍射结晶学数据，确定了青蒿酸的绝对构型．另外，从同植物中还分离得到少量青蒿素（２），以及青蒿乙素（３），谷甾醇和豆甾醇．     

青蒿琥酯抑制Twist1蛋白表达和血管再生以及降低口腔鳞癌细胞Tca8113转移的作用

目的 研究青蒿琥酯抑制Twist 1表达、降低口腔鳞癌细胞的转移及对血管生成的抑制作用.方法 采用50、100、150、200 μg·mL-1的青蒿琥酯体外培养的口腔鳞癌细胞,然后分别采用Western blot法、MTT法、划痕实验及流式细胞仪检测不同浓度的青蒿琥酯干预对口腔鳞癌细胞Twist1表达、增殖、迁移及凋亡的影响;采用鸡胚尿囊膜检测青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管生成的影响.结果 与对照组对比,青蒿琥酯可抑制Twist1蛋白的表达、口腔鳞癌细胞的增殖和迁移,且存在时间和剂量依赖性;青蒿琥酯可引起细胞的凋亡,处理组的细胞凋亡率显著高于对照组;青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管新生有一定的抑制作用(P＜0.05).结论 中药青蒿琥酯可抑制Twist 1蛋白的表达、细胞增殖、迁移,同时可有效抑制血管再生.     

灯盏花乙素苷元不同给药剂量的大鼠药动学比较

目的:比较灯盏花乙素苷元不同剂量给药的大鼠药动学。方法:12只大鼠随机均分为2组,分别单剂量灌胃给予灯盏花乙素苷元在20和200 mg·kg~(-1),用高效液相-电化学色谱法(HPLC-ECD)测定给药后不同时间血浆中灯盏花乙素苷元及其代谢物灯盏花乙素的浓度,计算AUC_(0-24h)。色谱柱为Kromasil C_(18)柱(150 mm×4．6 mm,5μm);流动相为pH 2．6的50 mmol·L~(-1)磷酸盐缓冲液-甲醇-四氢呋喃(60:40:10);流速为1．0 mL·min~(-1);分析电压为100 mV。结果:灯盏花乙素苷元20 mg·kg~(-1)剂量给药时,原型药完全被代谢,血浆中只检测到代谢产物灯盏花乙素;200 mg·kg~(-1)剂量给药时,血浆中代谢产物灯盏花乙素和原型药灯盏花乙素苷元共存。灯盏花乙素苷元200 mg·kg~(-1)剂量时,代谢产物灯盏花乙素的AUC值相仅较20 mg·kg~(-1)剂量时提高3倍(1934．83 vs 536．51 ng·mL~(-1)·h)。结论:大小剂量下灯盏花乙素苷元的药动学行为呈非线性。     

青蒿琥酯对小鼠巨细胞病毒性肺炎的治疗作用

为了探索青蒿琥酯对小鼠巨细胞病毒性肺炎的治疗作用及其机制,应用滴鼻法建立携带绿色荧光蛋白的小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus-green fluorescent protein, MCMV-GFP)感染的巨细胞病毒性肺炎模型。动物福利和实验过程均遵循广州医科大学动物伦理委员会的规定。将BALB/c-nu小鼠随机分为5组:空白对照组、巨细胞病毒肺炎模型组、青蒿琥酯60、120和240 mg·kg-1组。观察小鼠生存期和肺组织病理变化,并进一步进行分子机制研究。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色法检测肺组织的病理变化;荧光定量PCR (polymerase chain reaction)方法检测肺组织中MCMV主要即刻早期基因1 (major immediate early 1, Mie1) mRNA的表达;免疫荧光法检测MCMV-GFP的表达; ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay)检测肺上清炎症因子白细胞介素6 (interleukin 6, IL-6)、IL-10和肿瘤坏死因子α...     

灯盏花乙素苷元对大鼠血栓形成和血液流变学的影响

目的:研究灯盏花乙素苷元对大鼠血栓形成、血小板聚集和血液流变学的影响。方法:大鼠连续灌胃灯盏花乙素苷元(100,50,25 mg.kg-1)7 d。电刺激大鼠颈动脉复制动脉血栓模型,记录血栓形成时间;结扎大鼠下腔静脉复制静脉血栓模型,记录血栓湿重和干重;采用0.5×10-4mol.L-1的二磷酸腺苷(adenosine d iphosphate,ADP)诱导血小板聚集,测定最大聚集率;大鼠皮下注射肾上腺素复制血瘀模型,测定红细胞沉降率、全血表观黏度和血浆黏度。同时设灯盏花乙素(100 mg.kg-1)阳性对照。结果:灯盏花乙素苷元能够明显延缓大鼠动脉血栓形成时间,抑制静脉血栓形成,抑制ADP诱导血小板聚集,降低血瘀模型大鼠的红细胞沉降率和血黏度。结论:灯盏花乙素苷元具有抗血栓形成、抗血小板聚集、改善血液流变学指标的作用,疗效优于灯盏花乙素。     

青蒿琥酯对类风湿关节炎滑膜细胞TNF-α分泌的抑制作用及其机制研究

目的研究青蒿素衍生物青蒿琥酯对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响,并进一步探讨其机制。方法来自活动性RA患者的FLS用脂多糖(LPS)刺激和青蒿琥酯处理,TNF-α水平用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定,核因子(NF)-κB活性检测采用电泳迁移率改变试验(EMSA)。结果青蒿琥酯显著抑制LPS诱导的TNF-α分泌,并且呈剂量依赖性。青蒿琥酯对LPS刺激的NF-κB活化有明显抑制作用,NF-κB抑制剂二硫代氨基吡咯烷(PDTC)亦显著抑制LPS刺激的滑膜细胞分泌TNF-α。结论青蒿琥酯通过调节NF-κB活性抑制LPS诱导的RA滑膜细胞分泌TNF-α,提示青蒿琥酯可能具有抑制RA滑膜炎症的作用。     

不同产地的青蒿药用成分含量研究

目的：研究不同产地的青蒿药用成分的含量。方法：从全国各地采集22批青蒿药材,通过高效液相色谱法测定药材中的青蒿酸、青蒿乙素、青蒿素和东莨菪内酯的含量,并以所测含量为指标,进行相关分析和聚类分析。结果：相关分析和聚类分析均显示,不同产地的青蒿中上述4种成分含量差异较大,各自聚为一类。结论：青蒿活性成分的积累与产地有一定的相关性。     

黄药子配伍甘草分煎液与合煎液中黄独乙素含量的比较

目的:比较黄药子配伍甘草前后毒性成分黄独乙素含量的变化。方法:采用PLATISILTM-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%冰乙酸(40:60)为流动相,检测波长为210nm,柱温为25℃。结果:黄独乙素在37.5μg.mL-1～310.0μg.mL-1呈良好的线性,r=0.9999。黄独乙素含量:黄药子单煎液分煎液合煎液。结论:黄药子配伍甘草后其毒性成分黄独乙素含量有所下降,可能是其配伍减毒的原因之一。