沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的探讨沉默lncRNA MAFG-AS1对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞HOSE和3种卵巢癌细胞(SKOV3、HO8910、OVCAR3)中MAFG-AS1和miR-143-3p的表达。荧光素酶报告基因检测和qRT-PCR验证MAFG-AS1与miR-143-3p的靶向调控关系。以SKOV3细胞为研究对象,分别构建沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p的卵巢癌细胞株。应用MTT法检测细胞活力,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,应用Western Blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1和p21及凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果与HOSE组比较,3种卵巢癌细胞中MAFG-AS1的表达显著上调,miR-143-3p的表达显著下调。pc DNA组、pc DNA-MAFG-AS1组、si-NC组、si-MAFG-AS1组miR-143-3p表达水平比较差异有统计学意义(P0.05)。miR-143-3p是MAFG-AS1的靶基因,MAFG-AS1可负性调控miR-143-3p的表达。沉默MAFG-AS1或过表达miR-143-3p均可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达,促进p21和Bax蛋白表达。抑制miR-143-3p表达可逆转沉默MAFG-AS1对卵巢癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论沉默MAFGAS1通过上调miR-143-3p表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡 侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测正常卵巢上皮细胞HOSE和卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p和CK2β的表达；采用双荧光素报告基因实验验证miR-627-3p和CK2β之间的靶向关系；建立miR-627-3p过表达及miR-627-3p和pcDNA-CK2β共转染的SKOV3细胞株，采用CCK-8法检测细胞活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 HOSE组、SKOV3组、ES-2组及OVCAR3组miR-627-3p的表达水平分别为(1.00±0.12)、(0.21±0.04)、(0.41±0.07)及(0.32±0.06),差异有统计学意义(F=183.037,P<0.05)。与正常卵巢上皮细胞HOSE相比，卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p表达显著降低，CK2β表达显著增加，差异均有统计学意义(均P<0.05);CK2β是miR-627...     

LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制

目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。     

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。 结论 宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

miR-199a和lncRNA SNHG12在宫颈癌中的表达水平、相关性及临床意义

目的研究微小RNA 199a (miR-199a)和长链非编码RNA小核宿主基因12 (lncRNA SNHG12)在宫颈癌中的表达水平、相关性及临床意义。方法选取2012年6月-2014年12月该院病理存档的220例宫颈组织标本及病理资料为研究对象,其中宫颈炎75例(对照组),宫颈上皮内瘤变(CIN) 71例(CIN组),宫颈癌74例(CC组)。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测各宫颈组织中miR-199a和lncRNA SNHG12表达,并分析其与宫颈癌临床病理参数的关系;采用Pearson法分析宫颈癌组织中二者表达关系;采用Kaplan-Meier生存曲线法分析宫颈癌患者5年生存率;采用COX分析影响宫颈癌患者预后的危险因素。结果对照组、CIN组、CC组患者宫颈组织中miR-199a表达水平依次降低,lncRNA SNHG12表达水平依次升高(均P0. 05)。miR-199a、lncRNA SNHG12表达水平与宫颈癌患者病理类型、FIGO分期、淋巴结转移有关(均P0. 05),与患者年龄、分化程度、浸润深度无关(均P0. 05)。宫颈癌患者癌组织中miR-199a、lncRNA SNHG12表达水平呈负相关(r=-0. 518,P0. 05)。miR-199a低表达组宫颈癌患者5年生存率为9. 52%,显著低于miR-199a高表达组(75. 47%),差异有统计学意义(χ2=35. 09,P0. 05); lncRNA SNHG12高表达组宫颈癌患者5年生存率为21. 74%,显著低于lncRNA SNHG12低表达组(72. 00%),差异有统计学意义(χ2=17. 45,P0. 05)。COX多因素分析显示,miR-199a、lncRNA SNHG12表达水平及淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(均P0. 05)。结论宫颈癌组织中miR-199a低表达,lncRNA SNHG12高表达,二者呈负相关,且与宫颈癌患者5年生存率及预后有关,是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素,有潜力成为监测宫颈癌病情发展及预后评估的有效指标。     

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。     

miR-374a-3p靶向Syk对ox-LDL诱导内皮细胞损伤及炎症反应的影响

目的探讨miR-374a-3p对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤及炎症反应的影响及作用机制。方法实验分为ox-LDL组、对照(Con)组、miR-NC组、miR-374a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-374a-3p组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-374a-3p组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-Syk组、ox-LDL+miR-374a-3p+pcDNA3.1组、ox-LDL+miR-374a-3p+pcDNA3.1-Syk组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-374a-3p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)检测脾酪氨酸激酶(Syk)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量水平;荧光素酶报告实验检测miR-374a-3p和Syk的靶向关系。结果 ox-LDL作用的HUVEC中miR-374a-3p低表达,Syk高表达;细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,TNF-α、IL-6含量显著升高(P<0.05)。过表达miR-374a-3p和抑制Syk表达抑制ox-LDL作用的HUVEC凋亡和炎症因子TNF-α、IL-6的释放。miR-374a-3p靶向调控Syk,过表达Syk逆转了miR-374a-3p对ox-LDL作用的HUVEC损伤及炎症因子释放的抑制作用。结论过表达miR-374a-3p可抑制HUVEC凋亡和炎症因子的释放,保护ox-LDL引起的HUVEC损伤及炎症反应,其机制可能与Syk有关。     

miR-96-5p靶向IRS1对麦芽酚铝致PC12细胞凋亡的影响

目的探讨miR-96-5p在麦芽酚铝致PC12细胞凋亡中的影响及其作用机制。方法于2021年1月, 取对数生长期的PC12细胞, 分为空白对照组和低、中、高剂量组, 分别采用0、100、200、400 μmol/L的麦芽酚铝处理24 h, 收集各组细胞, 采用流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR检测miR-96-5p和胰岛素受体底物1(IRS1)mRNA表达水平, Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、IRS1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p和IRS1的靶向结合关系。采用miR-96-5p inhibitor转染PC12细胞24 h构建miR-96-5p抑制细胞和阴性对照细胞, 将细胞分为空白对照组、阴性对照组、铝染毒组、铝染毒+阴性对照组、铝染毒+miR-96-5p抑制组、miR-96-5p抑制组, 采用miR-96-5p inhibitor和IRS1 siRNA转染PC12细胞24...     

miR-150-5p在卵巢癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在卵巢癌组织中的表达水平及其通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响。方法选取2016年4月—2018年12月于武警上海总队医院妇科就诊的82例卵巢癌患者作为研究对象,患者年龄22～65周岁,平均(43.5±6.8)岁。采用qRT-PCR检测病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。以人卵巢癌SKOV3细胞株作为空白对照组,转染miR-150-5p抑制剂的人卵巢癌SKOV3细胞株作为miR-150-5p抑制剂组,转染阴性对照质粒的人卵巢癌SKOV3细胞株作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase,p-Akt)p-Akt蛋白的表达。结果 82例卵巢癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为(1.64±0.10)和(0.99±0.08),差异有统计学意义;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达差异无统计学意义,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为(0.11±0.03),明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异分别为(9.61±1.32)%、(24.54±3.61)%和(33.78±3.72)%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组48 h细胞凋亡率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组的细胞凋亡率为(16.65±2.93)%,明显高于空白对照组[(0.74±0.10)%]和阴性对照组[(1.79±0.21)%],差异有统计学意义。荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义;Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组(P0.01);结论 miR-150-5p在卵巢癌中作促癌基因,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

LINC00943靶向调控miR-125a-5p对幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响

目的 探讨LINC00943对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响及其分子机制。方法 将GES-1细胞分为Control组、Hp组、Hp+si-NC组、Hp+si-LINC00943组、Hp+miR-NC组、Hp+miR-125a-5p组、Hp+si-LINC00943+anti-miR-NC组和Hp+si-LINC00943+anti-miR-125a-5p组,实时荧光定量PCR检测LINC00943和miR-125a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫蛋白印迹检测凋亡蛋白表达;酶联免疫吸附法检测白细胞介素-8(IL-8)和IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00943和miR-125a-5p靶向关系。结果 与Control组比较,Hp组LINC00943表达、凋亡率、Bax蛋白、IL-8、IL-1β、LDH升高,miR-125a-5p表达、Bcl-2蛋白降低(P<0.05);敲减LINC00943或过表达miR-125a-5p可减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤;LINC00943靶向调控miR-125a-5p...     

miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的：探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法：在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果：与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细...     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

长链非编码RNA核富含丰富的转录本1对癫痫模型海马神经元凋亡的影响和作用机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)对癫痫细胞模型海马神经元凋亡的影响及作用机制,以期为NEAT1成为癫痫治疗的新靶点提供依据。方法 于2019年8月—2020年10月期间,体外培养大鼠海马神经元细胞,无镁诱导制备癫痫海马神经元模型,实验分为:对照组(正常细胞外液)、模型组(无镁细胞外液)、转染对照组(转染非特异性siRNA+无镁细胞外液)和转染组(转染NEAT1特异性siRNA+无镁细胞外液)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测NEAT1和miR-29b-3p的表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1是否靶向调控miR-29b-3p,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测海马神经元细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果 与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率及NEAT1、Bax、TLR4和NF-κB的表达水平升高(F＝50.980、73.668、65.635、13.203、10.292,P＜0.05),IL-1、IL-6和TNF-α的含量增多(F＝33.107、33.857、51.129,P＜0.05),miR-29b-3p和Bcl-2的表达水平降低(F＝145.023、67.655,P＜0.05);而抑制NEAT1的表达能够降低神经元凋亡,抑制Bax、TLR4和NF-κB的表达,促进miR-29b-3p和Bcl-2的表达,减少IL-1、IL-6和TNF-α的分泌。双荧光素酶报告基因实验证实NEAT1和miR-29b-3p的靶向关系。结论 lncRNA NEAT1靶向下调miR-29b-3p的表达阻断TLR4/NF-κB信号通路来抑制癫痫模型海马神经元的凋亡。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

微小RNA-195靶向趋化因子5抑制滋养细胞增殖、迁移和侵袭及其机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-195通过靶向调控趋化因子(CCL)5对胎盘滋养细胞增殖、侵袭的影响及其分子机制。方法 采用随机数字表法,选取2018年8月至2019年8月在徐州市中心医院定期产前检查的70例孕妇,按照是否合并子痫前期(PE),将其分为PE组(n=40)和对照组(n=30)。选取2组受试者分娩时自胎盘母-胎界面组织中分离的滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞为研究对象,针对PE组胎盘滋养层细胞分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。根据转染结果,将PE组胎盘滋养层细胞分为miR-195 mimics亚组、miR-NC亚组、miR-195+pcDNA亚组、miR-195+pcDNA-CCL5亚组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测研究组与对照组胎盘组织中miR-195、CCL5 mRNA相对表达水平;MTT实验检测各亚组滋养细胞增殖能力,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察各亚组滋养细胞迁移能力,Western blotting法检测CCL5、PI3K及AKT蛋白相对表达水平;Pearson相关性分析对miR-195及CCL5表...     

miR-15-5p靶向调控SMAD5表达抑制子宫内膜腺癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨miR-15-5p抑制人子宫内膜腺癌细胞(HEC-1-A)上皮间质转化(EMT)的机制。方法构建SMAD53'-UTR-荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告基因检测,观察miR-15-5p对SMAD53'-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定SMAD5是否为miR-15-5p的靶基因。将miR-15-5p模拟物(agomir)与miR-15-5p抑制物(antagomir)及其对应的对照组分别转染至HEC-1-A细胞中,并进行EMT诱导培养,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot检测各组细胞SMAD5在mRNA及蛋白水平的相对表达量;了解miR-15-5p对EMT标志物的表达影响。结果双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-15-5p可以结合在SMAD5的3'-UTR区域,而不能结合在SMAD3的3'-UTR区域,表明miR-15-5p的靶基因应为SMAD5。正常HEC-1-A细胞转染miR-15-5p的模拟物或抑制物后,SMAD5表达显著下调或上调,也表明miR-15-5p的靶基因是SMAD5。结论SMAD5是miR-15-5p的靶基因,miR-15-5p可通过靶向调控SMAD5的表达抑制人子宫内膜腺癌HEC-1-A细胞的EMT。