癌相关纤维母细胞对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的 探讨癌相关纤维母细胞(CAFs)对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,为胃癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点。方法 (1)原代培养正常纤维母细胞(NFs)和CAFs,用CCK8实验和流式细胞仪检测间接共培养后,NFs和CAFs对MGC-803细胞增殖和凋亡能力的影响;(2)通过transwell共培养小室建立MGC-803与CAFs相互作用的体外模型,分析CAFs对MGC-803迁移和侵袭能力的影响。结果 (1)与NFs相比,CAFs在体外传代培养过程中,仍高表达波形蛋白(Vimentin)、纤维母细胞活化蛋白(FAP);(2)与NFs组相比,CAFs促进MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,但是抑制其凋亡。结论 CAFs在胃癌的生长、迁移和侵袭等过程中起着重要的作用,并且可能成为胃癌治疗的新靶点。     

高迁移率族蛋白B1介导癌症相关成纤维细胞促进结直肠癌转移的机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导癌症相关成纤维细胞(CAFs)活化在结直肠癌转移中的作用。方法 从结直肠癌及癌旁组织中,分离提纯癌旁正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,分别与人结直肠癌细胞SW480共培养,划痕实验和Transwell侵袭实验检测NFs和CAFs对SW480迁移、侵袭的作用。免疫组化法检测HMGB1在结直肠癌、癌旁正常结直肠组织中表达。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NFs、CAFs中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平。ELISA法检测上清液中HMGB1表达。应用小干扰RNA (siRNA)技术抑制CAFs细胞内HMGB1基因表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测阴性对照转染组(CAFs-siNC组)与HMGB1-siRNA转染组(CAFs-siHMGB1组)中HMGB1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因和蛋白的表达情况,2组细胞分别与SW480细胞共培养后,划痕实验和Transwell侵袭实验验证HMGB1表达对SW480迁移和侵袭的影响。结果 NFs与SW480细胞共培养迁移率为(25.51±46.96)%,侵袭细...     

前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1 功能活化

[摘要] 目的：探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1 迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法：超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview 检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1 细胞与前列腺癌外泌体（40 μg/ml）共孵育后,激光共聚焦显微镜观察WPMY-1 细胞对PKH67 标记的外泌体的摄取情况,Transwell 实验检测WPMY-1 细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9 等三种肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)分子表达水平,Wb检测EGFR和ERK1/2 蛋白磷酸化水平。结果：电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构,外泌体粒径分布集中在100 nm左右,其标志蛋白CD63 和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外,外泌体还表达EGFR、HER2 和SRC 等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1 细胞与外泌体共孵育后,共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体,明显促进WPMY-1 细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）;与对照组比较,外泌体（40 μg/ml）处理后WPMY-1 IL-8、PDGFB及MMP9 表达水平增高（P<0.05 或P<0.01）;且外泌体促进了WPMY-1 细胞EGFR和ERK1/2 的磷酸化（P<0.01）。结论：前列腺癌细胞可通过外泌体作用于基质细胞WPMY-1,使其高表达多种CAF 相关分子,促进EGFR 和ERK1/2 的磷酸化,增强其迁移和侵袭能力。     

SCRN1在口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞中的表达及对HSC3细胞株生物学特性的影响

目的:探究胞吐作用相关蛋白(SCRN1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中的表达及对CAFs分泌MMP2功能的影响,进一步研究CAFs对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。方法:通过免疫组织化学染色(IHC)检测SCRN1在OSCC组织及癌旁组织中的表达。原代培养、分离、纯化、验证正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,用免疫细胞化学染色法(ICC)、蛋白免疫印迹(WB)、qRT-PCR检测NFs、CAFs中SCRN1的表达情况。CCK-8、Transwell实验检测NFs、CAFs及CAFs-shSCRN1增殖、迁移及侵袭能力。收集NFs、CAFs上清并用ELISA和明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)水平及活性,然后分别与HSC3细胞株共培养,探究两种上清共培养对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。沉默CAFs的SCRN1基因后,收集CAFs、CAFs-shSCRN1和CAFs-Vector上清并检测MMP2水平及活性,然后分别与HSC3共培养,探究三种上清培养条件对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果:SCRN1在OSCC组织中阳性表达率及表达水平...     

骨髓间充质干细胞源外泌体miR-21-5p 通过下调PHLPP2 促进前列腺癌PC-3 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）来源的外泌体对前列腺癌细胞PC-3 的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法：采用qPCR检测miR-21-5p 在前列腺癌细胞系中的表达水平。采用电子显微镜观察BMSC分离出的外泌体形态,Western blotting 检测外泌体表面标志物的表达以及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-21-5p 和同源血小板富亮氨酸复重蛋白磷酸酶2（PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase 2,PHLPP2）的靶向调控关系。向PC-3 细胞培养液中加入10 μl 的BMSC外泌体悬液（Exo 组）、转染sh-PHLPP2 或antagomiR,CCK-8 和Transwell 实验检测PC-3 细胞增殖和迁移能力。结果：miR-21-5p 在前列腺癌PC-3 细胞系中高表达。成功分离BMSC培养液上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察到外泌体典型的囊泡状结构,且表达CD9、CD63 和CD81 等特异性蛋白。Exo组中PC-3 细胞的增殖、侵袭[ （421.34±22.45）vs（200.09±14.22）个,P<0.05]、迁移能力和N-cadherin、Vimentin和miR-21-5p的表达水平均显著高于对照组（均P<0.05）。证实PHLPP2 是miR-21-5p的靶基因。与对照组相比,Exo 组和sh-PHLPP2 组PC-3 细胞中PHLPP2 的表达明显降低（0.66±0.09、0.42±0.05 vs 1.09±0.08,均P<0.01）,细胞增殖、侵袭和迁移[ （87.23±12.67）%、（82.45±10.13）% vs（66.46±9.13）%]能力均显著提高（均P<0.01）,E-cadherin 表达水平显著降低而N-cadherin 和Vimentin 表达水平显著升高（均P<0.05）。结论：miR-21-5p 在前列腺癌PC-3 细胞系中高表达,BMSC外泌体miR-21-5p通过靶向下调PHLPP2提高PC-3 细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

癌相关成纤维细胞源性SULF1对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响和机制

目的:探讨癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)衍生的硫酸酯酶1(sulfatase1,SULF1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)进展的影响。方法:从癌旁组织和NSCLC组织中分离正常成纤维细胞(normal fibroblasts, NFs)和CAFs,将NFs-CM和CAFs-CM与NSCLC细胞共培养。干预CAFs中SULF1的表达。CCK8检测细胞增殖,Transwell检测侵袭,Western Blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin)和Wnt/β-catenin通路核心蛋白(Wnt3、β-catenin)的表达。构建裸鼠成瘤模型,评估CAFs分泌的SULF1对肿瘤生长的影响。结果:与NFs-CM相比,CAFs-CM促进NSCLC细胞增殖、侵袭和EMT(P<0.01)。与CAFs^si-NC-CM组相比,CAFs^si-SU...     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

唾液腺腺样囊性癌来源的外泌体促进癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探索人唾液腺腺样囊性癌不同细胞系分泌的外泌体对其癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:使用ExoEasy Maxi Kit (Qiagen,Hilden,Germany)试剂盒提取外泌体,通过透射电镜、纳米粒子跟踪分析（NTA）、蛋白免疫印迹Western blotting技术鉴定提取的肿瘤外泌体。并在外泌体的干预下,采用CCK-8法、平板克隆形成实验、细胞划痕及Transwell实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果:透射电镜及纳米粒子跟踪分析（NTA）检测显示:提取的外泌体主要直径在30~150 nm之间,其形态呈典型的“茶托型”结构;Western blotting检测到外泌体特异性标志蛋白CD9、CD63及TSG101呈阳性表达。CCK-8法及平板克隆实验显示唾液腺腺样囊性癌来源的外泌体可增强其癌细胞增殖能力（P<0.05）。细胞划痕及Transwell实验表明其外泌体可增强癌细胞迁移及侵袭能力（P<0.05）。结论:唾液腺腺样囊性癌不同细胞系均分泌外泌体。唾液腺腺样囊性癌外泌体可增强其癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、黏附及侵袭的影响

目的:研究乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、黏附和侵袭能力的影响.方法:首先,从6例乳腺癌病人肿瘤及癌旁正常乳腺组织块分别分离培养成对的CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs).然后,通过Transwell小室将CAFs或NFs与乳腺癌MDA-MB-231细胞体外共培养,进行增殖(MTT)、侵袭、黏附实验及流式细胞仪细胞凋亡检测.结果:MDA-MB-231与CAFs或NFs共培养后乳腺癌细胞的增殖活性显著增强(P＜0.05).与NFs相比,这种差异在同CAFs共培养组更为明显(P =0.011).与CAFs共培养之后,MDA-MB-231的早期凋亡显著减少(P=0.026);而与NFs共培养之后则无显著差异.CAFs或NFs对MDA-MB-231细胞的细胞周期和晚期凋亡无明显影响.与CAFs或NFs共培养24小时后,MDA-MB-231细胞的侵袭、黏附能力明显增强,黏附数目为(34.7±4.84)个/视野(CAFs)和(20.16±0.09)个/视野(NFs),(P =0.000);侵袭数为(89±4.62)个/视野(CAFs)和(81.6±6.08)个/视野(NFs),(P＜0.05).结论:CAFs能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、减少其早期凋亡;同时对乳腺癌细胞的黏附和侵袭能力有促进作用.可是NFs的作用较CAFs为弱.有关CAFs影响乳腺癌肿瘤细胞的生物学特性的机制有待于进一步研究.     

癌相关成纤维细胞对喉癌细胞系Hep-2生物学行为影响的体外研究

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)在体外的分泌功能及对喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响.方法 提取江西省肿瘤医院2016-09-09 1例喉鳞状细胞癌手术患者的癌组织及癌旁组织,进行喉癌CAFs及正常成纤维细胞(NFs)的原代培养.ELISA试剂盒测定CAFs和NFs培养上清液中MMP-2、MMP-9的浓度.制备...     

三七总皂苷对前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移的抑制作用

探讨三七总皂苷对人前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移的抑制作用,初步研究该药物的作用机制,并为前列腺癌的药物治疗及扩展tPNS的临床应用提供实验依据。方法:采用MTT实验、细胞计数、伤口愈合实验等方法检测tPNS对PC-3细胞增殖及迁移的影响;采用Western blot及明胶酶图分析等方法对增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、血管细胞间黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）及迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinases 2,MMP-2）等进行检测。通过检测p38 MAPK及ERK途径的磷酸化变化,探讨tPNS对PC-3细胞作用的可能信号途径。结果:tPNS可抑制PC-3细胞增殖,随着tPNS浓度（200、400、800 mg/L）的增加,对PC-3细胞的抑制率分别增加至13.0%、29.5%和35.9%（P<0.05）。tPNS下调PC-3细胞增殖标志物PCNA的表达水平,该效应呈量效及时效关系。tPNS（200、400、800 mg/L）可显著抑制PC-3细胞迁移。tPNS还可显著下调迁移相关蛋白MMP-2及黏附分子VCAM-1的表达水平。tPNS可显著增加p38 MAPK的磷酸化水平,但对ERK磷酸化影响不明显。结论:tPNS抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及迁移活性,这些生物学作用可能与该药抑制PCNA、VCAM-1、MMP-2的表达及激活p38 MAPK信号通路有关。      

胰腺癌相关性成纤维细胞中前列腺环素合成酶对胰腺癌细胞作用研究

目的 探究胰腺癌相关性成纤维细胞(CAFs)中的前列腺环素合成酶(PGIS/PTGIS)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关作用机制。方法 利用GEPIA、Kaplan-Meier等数据库分析PGIS在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达差异;通过q-PCR检测PGIS在CAFs及人胰腺星状细胞(HPSC)中的表达差异;通过CoCl₂化学诱导构建肿瘤微环境缺氧模型,检测胰腺癌及CAFs细胞的PGIS表达水平;利用siRNA转染、慢病毒感染的方式分别构建敲低和过表达PGIS的CAFs细胞,通过CCK-8增殖、Transwell迁移及侵袭等实验探究敲低和过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过小鼠胰腺原位成瘤探究过表达PGIS的CAFs细胞在体内对胰腺癌细胞增殖的影响;通过Western blot检测过表达PGIS的CAFs细胞对胰腺癌PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响。结果GEPIA、Kaplan-Meier数据库分析显示,与正常胰腺组织相比,PGIS在胰腺癌组织中高表达,并且与患者不良预后相关(P<0.05);与HPSC细...     

LMO2蛋白在前列腺基质细胞中介导的IL-11、FGF-9旁分泌促进前列腺癌细胞增殖与侵袭

背景与目的：前列腺癌多发生于前列腺外周带,前列腺增生多发于前列腺移行带。前列腺疾病的带性差异机制可能与前列腺组织微环境有关。该研究的前期研究提示,不同区带来源的前列腺基质细胞对上皮细胞的作用存在明显差异,基因芯片筛查发现LMO2蛋白在前列腺外周带基质细胞高表达与前列腺癌发生、发展密切相关。该研究旨在分析前列腺基质细胞LMO2基因的表达对前列腺癌细胞系增殖、侵袭能力的影响及其机制。方法：分别应用慢病毒过表达载体和短发卡RNA(shRNA)建立过表达和低表达LMO2的前列基质细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测LMO2 mRNA和蛋白的表达;将不同处理的前列腺基质细胞分别同PC-3细胞共培养,利用CCK-8检测PC-3的增殖能力,利用基质胶侵袭实验检测PC-3的侵袭能力;利用生物素标记的人蛋白抗体芯片检测过表达LMO2的前列腺基质细胞条件培养基中蛋白因子表达变化。结果：成功建立过表达及低表达LMO2的前列腺基质细胞;CCK-8实验及基质胶实验提示,与过表达LMO2的前列腺WPMY-1基质细胞共培养后,PC-3细胞的增殖和侵袭能力增强;与低表达LMO2的CAFs细胞共培养后,PC-3细胞的增殖和侵袭能力降低;蛋白芯片检测发现过表达LMO2后,前列腺外周带基质细胞分泌白介素-11(interleukin-11, IL-11)和成纤维细胞生长因子-9(ifbroblast grouth factor-9,FGF-9)增多。结论：LMO2基因在前列腺外周基质细胞中的高表达可能与前列腺癌的发生、发展有关;过表达LMO2的前列腺基质细胞通过旁分泌IL-11、FGF-9等细胞因子促进前列腺癌细胞增殖与侵袭。     

APP在TGFβ诱导的前列腺癌PC-3细胞转移过程中的作用机制

目的 探究APP(淀粉样前体蛋白)的表达在TGFβ诱导的前列腺癌PC-3细胞的迁移和侵袭中的作用.方法 常规培养前列腺癌PC-3细胞后,使用浓度为20 ng/ml的TGFβ处理细胞48 h.通过Transwell迁移小室观察TGFβ对前列腺癌PC-3细胞迁移和侵袭能力的影响.通过蛋白印迹和qPCR方法检测TGFβ处理后...     

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的：腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因（Ad-ING4）对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法：将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响：流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC．3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果：腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase．3基因表达和下调bcI-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37％,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论：腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。     

SRC激酶抑制剂对前列腺癌细胞侵袭与增殖的影响

目的:以PP2[4-Amino-5-(4-Chloro-Phenyl)-7-(t-Butyl)Pyrazolo(3,4-d)Pyrimidine]药物(src激酶抑制剂)处理前列腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,探讨PP2对前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:PP2处理前列腺癌细胞PC-3,Western blot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果:PP2处理PC-3细胞后,src表达水平明显降低,E-cadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显(P<0.05)。结论:PP2通过提高细胞黏附分子E-cadherin的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖和侵袭能力。     

CAFs对乳腺癌细胞生物学特性的影响及机制探讨

目的：通过乳腺癌间质成纤维细胞（ carcinoma-associated fibroblasts,CAFs）与乳腺癌细胞系MDA-MB-231共培养的体外细胞实验及裸鼠接种的在体动物实验,观察CAFs对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移活性的影响,并探讨其作用机制。方法：体外实验：分离培养浸润性导管癌组织中CAFs和正常成纤维细胞（ normal fibroblasts,NFs）,然后分别与乳腺癌细胞MDA-MB-231体外共培养,采用MTT法、流式细胞仪、Ma-trigel人工模拟基底膜法分别检测乳腺癌细胞的增殖、凋亡、细胞黏附和侵袭能力。动物在体实验：选择乳腺癌细胞系MDA-MB-231、CAFs和NFs,结合生理盐水（NS）、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其配体拮抗剂AMD3100,组成不同的组别并接种于裸鼠（共6组）。观察肿瘤的大小,有无淋巴结、肺、肝脏转移。留取血标本及肿瘤组织行SDF-1表达水平的检测。结果：MDA-MB-231与CAFs和NFs共培养后乳腺癌细胞的增殖活性显著增强,其中CAFs的作用较NFs更强（P＝0.011）;CAFs组的黏附能力（34.70±4.84个/视野）明显强于NFs组（20.16±3.09个/视野）,P＝0.000;而CAFs组的侵袭性（89.0±4.62个/视野）也明显强于NFs组（81.6±6.08个/视野,P＝0.045）。CAFs组中的MDA-MB-231的早期凋亡率（2.9±2.4）较NFs组（5.0±4.2）明显降低（P＝0.026）;MDA231﹢CAFs ﹢NS 组的种植肿瘤平均体积最大（9.092±2.662cm3, P＝0.000）;此外,该组共有4只（66.6％）,MDA231﹢NS组有2只（33.3％）存在腋窝淋巴结转移,未见肝肺转移灶。在MDA231﹢CAFs﹢NS组中,血标本 SDF -1值（75.25±16.23pg/ml）、肿瘤组织标本中 SDF -1mRNA值（11.686±8.926）、组织中SDF-1蛋白表达水平（1.006±0.327）均为最高,与其他各组相比均有统计学差异（ P＝0.000）。结论：CAFs可影响乳腺癌肿瘤细胞的生物学特性,具有促进肿瘤细胞增殖,增强其黏附、侵袭及转移能力。其机制可能是通过乳腺癌间质成纤维细胞分泌SDF-1与其特定的受体CXCR4结合这一信号通路来实现的。     

环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制

目的 探讨环状RNA hsa＿circ＿0001922对前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子机制。方法 qRT-PCR、RNA FISH分别检测hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中的表达水平及定位。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,使用克隆形成、Transwell实验及划痕实验检测PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的能力;qRT-PCR、Western blot检测抑制hsa＿circ＿0001922后EMT通路相关分子表达水平。结果 环状RNA hsa＿circ＿0001922在前列腺癌细胞PC-3中表达上升(P<0.01)且存在于细胞质和细胞核中。靶向抑制hsa＿circ＿0001922后,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05),E-cadherin mRNA表达水平上升(P<0.05),而Vimentin mRNA水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果与上述一致(均P<0.05)。结论 环状RNA hsa＿circ＿0001922可能通过EMT途径促进PC-3细胞的增殖、迁移及侵...     

癌源性外泌体对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的 探究乳腺癌细胞来源的外泌体对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。方法 使用超速离心法对人乳腺癌MCF-7细胞培养液中的外泌体进行提取和纯化,通过透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,Western blot实验鉴定外泌体的标志蛋白。以外泌体与MCF-7细胞共培养48 h后的细胞为实验组,以未处理的MCF-7细胞为对照组。用MTT法、克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、流式细胞术实验和Western blot实验检测乳腺癌源性外泌体对MCF-7细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、凋亡及上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。结果 透射电子显微镜下外泌体的形状为典型的杯托状或者凹的半球状结构,直径40~110 nm;Western blot实验结果显示外泌体标志性蛋白CD9及CD81均明显表达;MTT和克隆形成实验结果显示,实验组细胞增殖及克隆形成能力较对照组明显增强(P＜0.05);划痕实验和侵袭实验结果显示,与对照组相比,实验组细胞迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.001);流式细胞术分析显示,在外泌体刺激的乳腺癌细胞中,凋亡细胞的百分比显著低于对照组(P＜0.05);Western blot结果显示,乳腺癌来源的外泌体增加了N-cadherin和Vimentin的表达,降低了E-cadherin表达,促进了乳腺癌EMT过程(P＜0.05)。结论 乳腺癌细胞来源的外泌体能增强肿瘤细胞的细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,促进乳腺癌EMT过程,并抑制肿瘤细胞凋亡。表明肿瘤来源外泌体可能作为细胞间信号转导的介质,在促进肿瘤生长和转移的信息传递方面发挥重要作用。