枸杞多糖对Caco-2细胞P-糖蛋白作用的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 采用MTT法确定药物实验剂量;采用Rh-123摄取法评价P-gp的功能;利用流式细胞术与免疫荧光抗体检测P-gp的表达;采用经典的Caco-2细胞单层模型,研究P-gp外向转运这一动态过程受枸杞多糖作用后的变化.结果 由MTT法得到枸杞多糖＜100μg·mL-1时,细胞的存活率＞90％;枸杞多糖使细胞内Rh-123累积增加,对功能表现为抑制作用;高浓度组(100μg·mL-1)枸杞多糖对P-gp表达有诱导作用;高浓度组(100μg ·mL-1)枸杞多糖使Caco-2细胞单层模型外排率(ER)降低,对P-gp有抑制作用.结论 枸杞多糖对P-gp功能表现为抑制作用,而对P-gp表达表现为诱导作用.     

环糊精包合作用对在体大鼠肠道P-糖蛋白药泵的影响

目的研究环糊精包合作用对P-糖蛋白底物药物体内吸收的影响。方法以P-糖蛋白底物盐酸小檗碱为模型药物,使用大鼠在体单向肠灌流装置,采用高效液相色谱法分别测定灌流液中盐酸小檗碱和酚红的浓度变化;研究2-羟丙基-β-环糊精(HP-β-CyD)对盐酸小檗碱肠道吸收的影响,以此评价环糊精包合作用对P-糖蛋白药泵的影响。结果盐酸小檗碱、盐酸小檗碱/HP-β-CyD物理混合物及盐酸小檗碱/HP-β-CyD包合物在大鼠空肠的吸收速率常数(Ka)分别为(0.45±0.029)、(0.70±0.087)、(2.39±0.119)×10-2·min-1,有效渗透系数(Peff)分别为(0.43±0.028)、(0.63±0.098)、(2.17±0.145)×10-3min·cm-1。HP-β-CyD对盐酸小檗碱的包合作用促进了大鼠肠道对盐酸小檗碱吸收。HP-β-CyD与盐酸小檗碱混合给药也能促进药物的吸收,但其作用远低于包合作用。结论环糊精的包合作用将有可能成为提高P-糖蛋白底物药物生物利用度的有效手段。     

P-糖蛋白抑制药逆转肿瘤多药耐药的研究进展

P-糖蛋白（permeability glycoprotein，P-gp）过度表达是多药耐药（multidrug resistance，MDR）产生的主要原因，P-糖蛋白抑制药可以抑制P-糖蛋白对肿瘤药物的外排作用，使肿瘤细胞内的药物浓度提高，从而逆转肿瘤MDR，第3代P-糖蛋白抑制药具有高效、低毒、选择性高等特点，中药可以通过多种途径抑制P-糖蛋白的表达和功能，从而逆转MDR。     

P-糖蛋白对布格呋喃大鼠肠道吸收的影响

本研究采用Caco-2细胞摄取和转运模型、大鼠小肠在体循环灌注、大鼠离体小肠翻转肠小囊模型及P-糖蛋白抑制剂维拉帕米(verapamil)和环孢素(cyclosporine A，CsA)研究P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)对布格呋喃(buagafuran)自肠道吸收的影响，UV-HPLC方法测定布格呋喃含量。实验结果表明，布格呋喃可被Caco-2细胞转运和摄取，维拉帕米和环孢素可使布格呋喃由Caco-2细胞绒毛面(apical，A)向基底面(basolateral，B)的转运较对照组增加1.4和1.35倍，基底面向绒毛面的转运则减少为对照组的71%和75%。维拉帕米和环孢素可使低浓度布格呋喃摄取量分别增加4.4和3.4倍。布格呋喃自大鼠小肠吸收较快，灌流90 min后残留量仅为10%。维拉帕米和环孢素可加快布格呋喃吸收，以灌流后30 min最为明显(分别提高12.4%和21.5%)。在大鼠小肠翻转肠小囊内液中布格呋喃浓度可在10 min内下降86%。维拉帕米和环孢素均可使小囊液和小囊匀浆中布格呋喃含量明显升高。以上结果提示，布格呋喃是P-糖蛋白的底物，P-糖蛋白可阻碍布格呋喃在小肠的吸收。肠道P-糖蛋白的外排作用可能是导致布格呋喃生物利用度低的重要原因之一。     

药用辅料抑制P-糖蛋白外排泵的研究进展

P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是一种ATP依赖性药物外排泵,广泛分布在机体的各个组织中,可降低某些药物的生物利用度,同时也是引起肿瘤细胞产生多药耐药的重要原因之一。一些药用辅料可抑制P-gp的外排作用,同时具有低毒、无药理活性和安全性高的优点。本文着重综述了对P-gp外排具有抑制作用的3类药用辅料(非离子型表面活性剂、聚合物和脂质)的研究进展,并简单介绍了P-gp的结构、功能和研究模型等。     

盐酸度洛西汀对Caco-2细胞P-糖蛋白功能及表达的影响

目的 研究盐酸度洛西汀(DLX)对Caco-2细胞上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 将Caco-2细胞分为阴性对照组、维拉帕米10 μmol/L阳性对照组(VER组)和DLX 0.2、5、10 μmol/L不同浓度处理组.采用流式细胞术检测DLX干预后Caco-2细胞内罗丹明-123的荧光强度和细胞膜上P-gP的表达量.结果 与阴性对照组相比,DLX 0.2、5、10 μmol/L均显著抑制罗丹明-123从Caco-2细胞的外排(96.3±4.5 vs.129.5±14.5、131.2±7.0、135.6±17.1)(P＜0.05),而对P-gp阳性率无明显改变(90％ vs.94％、91％、89％)(P＞0.05).结论 DLX能抑制Caco-2细胞上P-gp的功能,降低罗丹明-123从Caco-2细胞中的外排,但并不影响P-gp的表达.     

P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响

目的 研究Caco-2细胞模型中P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响.方法 采用HPLC法测定转运液中蝙蝠葛碱的含量;采用Caco-2细胞模型双向转运实验,考察不同浓度维拉帕米、环孢素A和醋酸地塞米松3种p-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响.结果 加入3种P-糖蛋白抑制剂后,蝙蝠葛碱的Papp(A-B)均有一定程度增加,而Papp(B-A)均有显著降低(P＜0.05),即均抑制了蝙蝠葛碱的外排转运.结论 外排转运体P-糖蛋白对蝙蝠葛碱有外排作用,蝙蝠葛碱可能为P-糖蛋白底物.     

P-糖蛋白对番荔枝酰胺衍生物FLZ在Caco-2细胞模型中跨膜转运的影响

目的考察转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)对番荔枝酰胺衍生物FLZ体外跨血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)转运的影响。方法采用体外培养的Caco-2细胞建立体外BBB模型,研究1,5,10μM FLZ跨膜转运特性。并探讨加入P-gp抑制剂5μM zosuquidar后FLZ跨膜转运的表观渗透系数和外排率的变化。结果 FLZ在Caco-2细胞模型上显示出了极性转运特性,Papp(B~A)>Papp(A~B),并呈现出良好的剂量依赖关系。同时FLZ在Caco-2细胞的跨膜转运中也呈现外排现象,1,5,10μM FLZ的外排率ER值分别为2.56,3.67和5.06。P-gp抑制剂zosuquidar可以显著降低FLZ外排,增加转运。10μM FLZ的外排率由5.06降低为1.94,下降了2.6倍。结论 FLZ具有P-gp的底物特性,P-gp参与了FLZ在BBB跨膜转运中的外排。     

基于大鼠在体单向肠灌流模型研究P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱肠吸收的影响

目的:研究P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱肠吸收的影响。方法:采用在体单向肠灌流法进行小肠吸收实验,利用HPLC法测定灌流液中蝙蝠葛碱的浓度,考察不同浓度P-糖蛋白抑制剂环孢素A、醋酸地塞米松和维拉帕米对蝙蝠葛碱肠吸收的影响。结果:与对照组相比,高浓度和中浓度环孢素A对蝙蝠葛碱的Ka、Papp、P%、吸收量和累积吸收量均有显著性影响(P<0.05),而低浓度时上述参数差异无显著性(P>0.05);与对照组相比,高、中、低3个浓度醋酸地塞米松对蝙蝠葛碱的Ka、Papp、P%、吸收量和累积吸收量均有显著性影响(P<0.05);与对照组相比,高浓度维拉帕米对Dau的Ka、Papp、P%、吸收量和累积吸收量均有显著性影响(P<0.05),而中浓度和低浓度时上述参数无显著性差异(P>0.05)。结论:P-糖蛋白抑制剂环孢素A、醋酸地塞米松和维拉帕米对蝙蝠葛碱均有促吸收作用,其作用大小顺序为醋酸地塞米松>环孢素A>维拉帕米;P-糖蛋白对Dau的肠吸收有外排作用,蝙蝠葛碱为P-糖蛋白底物。     

CYP3A和P-糖蛋白对布格呋喃在大鼠小肠吸收的影响

本研究采用大鼠小肠在体单向 (single-pass) 灌流模型, 收集灌流后不同时间点灌流液和肠系膜静脉血, 应用GC-MS联用法测定灌注液和血浆中的布格呋喃含量, 并计算布格呋喃渗透系数［P_lumen = −(Q/2πrl) Ln(C_out/C_in) 和P_blood = (ΔM_B/Δt)/(2πrl)］, 从而反映布格呋喃的代谢变化。同时, 观察CYP3A选择性抑制剂醋竹桃霉素 (TAO)、CYP3A和P-糖蛋白 (P-gp) 共同抑制剂环孢素A (CsA) 和P-gp选择性抑制剂LSN335984对布格呋喃自大鼠肠道吸收的影响。结果表明, 在大鼠小肠在体单向灌流模型中加入LSN335984、TAO和CsA后, 大鼠肠系膜静脉血中布格呋喃的累积量分别为73.4、82.9和98.3 pmol·cm⁻², 与对照组比较分别增加3.9倍、4.6倍和5.6倍, 代谢分别减少12%、11%和21%。提示CYP3A和P-gp选择性抑制剂可明显减少布格呋喃在大鼠肠道的首过效应, 促进布格呋喃的肠道吸收。由此可见, P-gp与CYP3A两者联合作用是引起布格呋喃口服生物利用度低的重要因素, 两者对布格呋喃小肠吸收均具有重要影响。     

大鼠小肠原位灌流与Caco-2细胞法研究柠檬苦素吸收机制

柠檬苦素广泛存在于柑橘类水果中, 具有抗菌、抗病毒、镇痛、抗炎和抗癌等活性, 但其口服生物利用度较低。本文意在研究柠檬苦素在肠道内的吸收机制, 为其今后的研究奠定基础。实验通过大鼠原位肠灌流和体外Caco-2细胞法进行。大鼠原位肠灌流结果显示, 柠檬苦素可能通过肠道促进扩散机制吸收, 吸收差且在全肠段都有吸收, 没有部位选择性。Caco-2细胞实验结果显示, 维拉帕米和酮康唑能显著提高柠檬苦素的吸收, 而丙磺舒的影响不明显。柠檬苦素吸收较低和生物利用度较差, 可能是P-gp外排以及CYP3A4代谢共同参与的结果。柠檬苦素的肠吸收机制研究将为其剂型设计和临床应用提供重要的参考。     

花椒毒素在小肠中的吸收机制研究

花椒毒素(Xanthotoxin,Xan)是一个具有强光敏性的呋喃香豆素类化合物.临床上通常口服花椒毒素后结合长波紫外光照射来治疗中重度银屑病病人,即补骨脂素光化学疗法.但是口服花椒毒素后血药浓度和达峰时间个体差异较大,给部分病人造成严重的不良反应或治疗的失败[1].因此,本文研究不同浓度的Xan在Caco-2单层细胞模型和大鼠肠灌流模型中的吸收情况,并对Xan肠吸收机制进行了探讨,从而为改进补骨脂素光化学疗法提供有用信息.     

F127/SWCNTs对P-gp底物在大鼠小肠吸收影响的研究

目的:考察3种F127/SWCNTs载体系统的稳定性及对小肠P-糖蛋白(P-gp)药泵的抑制作用.方法:将F127/SWC-NTs稀释至不同浓度后于4℃放置15d,检测CNTs含量、粒径、Zeta电位等参数的变化;采用大鼠在体单向灌流模型进行肠吸收试验,以P-gp特异性底物罗丹明123(R-123)大鼠回肠段的吸收速率...     

外翻肠囊法研究Pluronic/SWCNTs对P-糖蛋白底物罗丹明123小肠吸收的影响

目的：考察3种Pluronic/SWCNTs载体材料对小肠P-糖蛋白（P-gp）药泵的抑制作用。方法：采用外翻肠囊模型进行肠吸收实验,以P-gp特异性底物罗丹明123（R-123）大鼠肠吸收参数为考察指标,研究Pluronic/SWCNTs对R-123肠吸收的影响。结果：Pluronic/SWCNTs可以显著增加R-123在各肠段的累计吸收量与吸收速率常数,特别是在浓度为5 μg·mL^-1与10 μg·mL^-1时作用最明显（P<0.05）。结论：Pluronic/SWCNTs可以通过抑制P-gp药泵作用改善P-gp底物药物的小肠吸收,在口服载药系统的应用中具备很大的潜力。     

药物肠道吸收研究方法概述

口服药物肠道吸收的研究方法主要包括体外法、体内法和在体法,对这3种研究方法进行简要介绍。鉴于在体肠灌流法操作简便、技术成熟、可控性强,同时又保证了神经内分泌调节与淋巴液血液供应的完整性等特点,更能反映药物吸收的真实情况,因此重点介绍了在体肠灌流法,并对在体肠灌流法中使用的循环灌流法和单向灌流法常用的几种灌流液体积校正方法等进行综述,为研究口服药物肠道吸收试验设计提供借鉴和参考。为保证试验的可操作性和实验结果的准确性,认为应根据所研究药品的性质、实验要求、试验条件等多方面因素综合考虑,选择适宜的试验方法,进而为药物剂型的开发和临床合理用药提供依据。     

流式细胞仪筛选P-糖蛋白的底物或抑制剂

目的以Caco-2细胞模型筛选妥舒沙星、斯帕沙星、辛伐他汀是否为P-糖蛋白(P-gp)的底物。方法以Caco-2细胞为模型,以酮康唑、兰索拉唑为对照,用流式细胞仪测定妥舒沙星、斯帕沙星、辛伐他汀对Caco-2细胞表面的P-gp转运罗丹明-123的影响,经筛选得到可能为P-gp底物的药物后,再用药物转运实验,验证其是否为P-gp的底物。结果妥舒沙星和斯帕沙星存在明显抑制P-gp向细胞外转运罗丹明-123的作用;在加入P-gp抑制剂(酮康唑)后,妥舒沙星的PappBL→AP/PappAP→BL由10.03±0.47降至0.93±0.19,斯帕沙星PappBL→AP/PappAP→BL由2.54±0.12降至1.02±0.04。结论流式细胞仪联用罗丹明-123可简单有效地从多种药物中筛选出可能是P-gp底物的药物(如妥舒沙星和斯帕沙星)及转运机制等。