木瓜苷对小鼠胶原性关节炎的预防作用及初步机制

目的　研究木瓜苷 (GCS)预防用药对小鼠胶原性关节炎 (collagen inducedarthritis,CIA)的影响 ,并探讨其初步机制。方法　昆明种小鼠随机分为 6组 :正常对照组、模型组、木瓜苷三个剂量组和青藤碱组 (SIN) ;鸡Ⅱ型胶原免疫小鼠诱导继发性关节炎 ;足爪容积测定法、关节炎评分法和跖曲踝关节疼痛评分法观察关节炎的发生情况 ;观察胸腺指数、脾脏指数变化 ;3 H TdR参入法检测T、B细胞增殖反应 ;IL 1、IL 2活性的检测采用小鼠淋巴细胞增殖法 ;ELISA法检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平 ;分光光度法测定局部踝关节PGE水平。结果　小鼠免疫后d 2 4 ,足爪出现红肿 ,继发性炎症高峰期在d 36 ,4 0后炎症逐渐减轻。GCS(6 0、12 0、2 4 0mg·kg-1)和SIN(10 0mg·kg-1)ig对CIA小鼠继发性关节炎有明显的抑制作用 ,降低CIA小鼠踝关节中增高的PGE ;CIA小鼠脾脏指数增加 ,而胸腺指数未见明显的改变 ,GCS能降低增加的CIA小鼠脾脏指数 ,对胸腺指数无明显影响 ;GCS(6 0、12 0、2 4 0mg·kg-1)和SIN (10 0mg·kg-1)使CIA小鼠增高的ConA和LPS诱导的T细胞和B细胞增殖反应降低 ;使T细胞和PMΦ分别产生的高水平IL 2和IL 1降至正常范围 ;并降低CIA小鼠血清中升高的抗CⅡ抗体。结论　GCS和SIN具有明显的抗炎作用 ,此作用可能是通过抑制     

积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定

应用流动相中添加β-环糊精法,建立了HPLC法测定积雪草总苷中的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的含量.采用C_(18)色谱柱,以乙腈-4 mmol/L β-环糊精溶液(25:75)流动相,检测波长204 nm.积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B均在2～20μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.25%、98.41%和100.15%,RSD分别为1.12%、1.21%和1.20%.     

HPLC法测定积雪草配方颗粒中羟基积雪草苷和积雪草苷含量

目的 建立积雪草配方颗粒中羟基积雪草苷和积雪草苷的HPLC含量测定方法。方法 色谱柱为UltimateAQ-C₁₈ 柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈（A）-2 mmol/Lβ-环糊精溶液为流动相进行梯度洗脱（0~30 min： 21% A→23% A;30~60 min：23% A→25% A）,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃,检测波长205 nm。结果 羟基积雪草苷和积雪草苷分别在0.187 7~3.754 μg和0.184 3~3.686 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r>0.999 5）。经专属性、重复性、精密度、加样回收率、稳定性实验,结果均符合《中华人民共和国药典（2015年版）》方法验证的要求。结论 该含量测定方法适用于积雪草配方颗粒中羟基积雪草苷和积雪草苷的含量检测。     

鸡Ⅱ型胶原对小鼠胶原性关节炎的治疗作用

目的　研究鸡Ⅱ型胶原 (CⅡ )对小鼠胶原性关节炎(CIA)的治疗作用。方法　在建立小鼠CIA模型的基础上 ,观测关节积分变化 ,同时检测脾淋巴细胞增殖反应 ,白细胞介素 1(IL 1)和IL 2。结果　CⅡ 5、10、2 0 μg·kg-1ig× 7d能明显减轻CIA小鼠的关节炎症 ;抑制CIA小鼠过高的ConA诱导的脾细胞增殖反应及小鼠腹腔巨噬细胞IL 1的过度产生 ,降低脾细胞IL 2的产生 ;同时病理检查亦发现CⅡ治疗用药可以减轻CIA小鼠的骨膜增生和炎细胞浸润。结论　CⅡ对CIA具有治疗作用 ,其机制与免疫功能调节有关。     

HPLC测定不同产地和不同时间的积雪草中的积雪草苷和羟基积雪草苷

目的 测定不同产地及不同采收季节的积雪草中积雪草苷、羟基积雪草苷的含量.方法 采用Agilent C18色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长205 nm,柱温30℃.结果 积雪草苷和羟基积雪草苷平均的回收率分别为99.5%、100.3%,RSD分别为1.06%、1.21%(n=6).结论 不同产地中的积雪草苷、羟基积雪草苷的含量有差异.广西南宁地区产积雪草中,6～10月采收的积雪草中积雪草苷、羟基积雪草苷含昔较高.     

新型免疫抑制剂FTY720对大鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

目的观察新型免疫抑制剂FTY720对大鼠胶原诱导性关节炎发生和发展的影响。方法以胶原诱导大鼠关节炎模型,从第1次免疫造模开始,大鼠分别予以FTY720(0.1、0.6mg·kg-1)和雷公藤多苷(6、12mg·kg-1)灌胃治疗,连续4周。观察记录大鼠活动和关节炎指数、体重、足底厚度和足爪肿胀;血常规分析大鼠外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞变化;流式分析外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞变化;组织学及免疫组织化学分析炎性关节病理改变和滑膜组织中CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化。结果 FTY720给药后能抑制大鼠关节炎的发生和发展,明显降低大鼠外周血淋巴细胞特别是CD4+T淋巴细胞数量和滑膜组织中CD4+T淋巴细胞数量。结论 FTY720可有效控制大鼠胶原诱导性关节炎的发生和发展,其作用机制可能是通过抑制外周血CD4+T淋巴细胞浸润到滑膜组织。     

黄芩苷对胶原诱导性关节炎大鼠抗炎作用研究

目的研究黄芩苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的抗炎作用并探讨其对白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和核因子(NF)-κB信号通路的影响,为其应用于类风湿关节炎临床治疗提供实验依据。方法 Wistar雌性大鼠制备CIA模型,将关节炎评分>2的CIA大鼠采用随机数字表法随机分为模型对照组(0.9%氯化钠注射液)、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)、黄芩苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组6只持续处理30 d。另外选取6只正常大鼠作为正常对照(0.9%氯化钠注射液)。检测大鼠关节炎症状,关节组织进行放射评估和组织病理检测。定量检测血清中TNF-α和IL-1β水平,蛋白质印迹法检测关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白表达。结果黄芩苷能减轻CIA大鼠的关节肿胀,明显抑制关节滑膜炎症和关节软骨及骨破坏,明显降低血清中TNF-α、IL-1β含量,抑制关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白水平表达。结论黄芩苷抑制CIA大鼠炎症可能是通过抑制炎性细胞因子的产生和NF-κB信号转导途径而发挥治疗作用的。     

积雪草苷类化合物对神经系统药理作用研究进展

积雪草总苷是积雪草的主要活性成分,其中的单体成分包括积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草酸等,在临床上主要用于治疗皮肤损伤,促进创面愈合以及瘢痕修复等。近年来发现积雪草苷类化学成分对神经系统也存在着多种药理活性,如抗抑郁、抗痴呆、对脊髓损伤以及脊髓神经细胞变性的保护、对抗脑缺血损伤以及镇痛、抗惊厥等。综述积雪草苷类化学成分对神经系统的药理作用研究进展,希望为该类化合物治疗神经系统疾病的研究与应用及新药开发提供理论依据。     

非T细胞结合肽(FNS007)对小鼠胶原性关节炎的抑制作用及其机制

目的研究非T细胞结合肽(FNS007,又称NTAP)对小鼠Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的关节炎(CIA)的抑制作用及其机制。方法牛CⅡ加弗氏佐剂诱导小鼠胶原性关节炎动物模型。发病小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、阳性药(阿巴西普)组、FNS007低剂量(1.2 mg·kg~(-1))、中剂量(2.4 mg·kg~(-1))和高剂量(4.8 mg·kg-1)治疗组,发病入组当天尾静脉注射给药,以后隔天1次,直至治疗结束。给药后d 28处死小鼠。给药期间测量小鼠爪厚度和踝关节宽度;关节评分法检测关节炎发生情况;实验结束后,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和抗CⅡ抗体水平;X线分析FNS007对CIA小鼠4爪骨损伤的作用;对小鼠踝关节进行组织病理学检查。结果与模型组比较,FNS007给药后能明显抑制CIA小鼠的爪厚度和踝关节宽度,明显降低小鼠的关节炎症评分,明显降低血清IFN-γ、IL-6及抗CⅡ抗体水平,小鼠X线评分降低,踝关节的病理损伤明显减轻。结论FNS007对CⅡ诱导的小鼠胶原性关节炎有明显抑制作用,其机制为竞争抑制T细胞活化,抑制CIA小鼠体内致炎性细胞因子的分泌,抑制抗CⅡ抗体的产生,减轻组织损伤和骨破坏,从而对小鼠CIA发挥治疗作用。     

大鼠胶原诱导性关节炎模型的制备及评价

目的:制备型胶原诱导性关节炎大鼠模型(CIA模型)。方法:将40只大鼠随机分为正常组和模型组。以酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测模型组和正常组大鼠血清中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,同时采用组织病理学和X线摄片的方法显示关节炎大鼠的发病程度和病理学特征。结果:与正常组相比,模型组在免疫后第36天关节肿胀达到最高峰。ELISA法检测结果显示模型组TNF-α的水平均较正常组大鼠明显增高(P<0.05)。组织病理学和X射线摄片结果显示,关节软骨组织、骨组织和滑膜组织呈典型的关节炎病变。结论:胶原诱导的大鼠关节炎模型,其病理特征和人类类风湿关节炎(RA)极为相似,为进一步深入研究人类RA的发病机制及其临床治疗提供了有价值的实验材料。     

白芍总苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞的作用及机制

目的研究白芍总苷(TGP)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞的作用及机制。方法采用鸡II型胶原诱导大鼠CIA模型，胶原酶和胰蛋白酶消化法分离培养大鼠滑膜细胞，透射电镜观察滑膜细胞超微结构的变化，MTT法检测滑膜细胞的增殖能力，滑膜细胞培养上清液中IL-1活性的测定采用小鼠胸腺细胞增殖法，TNFα和PGE₂含量的测定采用放射免疫测定法。结果TGP能有效改善CIA大鼠滑膜细胞超微结构的变化，抑制其过度的增殖反应和产生IL-1，TNFα和PGE₂的水平。结论TGP对CIA大鼠功能亢进的滑膜细胞具有明显的抑制作用，其作用机制可能与其抑制滑膜细胞的过度增殖和分泌能力有关。     

茶多酚对胶原诱导性关节炎大鼠足爪组织MMP-2蛋白表达水平的影响

目的：探讨茶多酚对Ⅱ型胶原乳化剂诱导关节炎大鼠的治疗作用及机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松对照组（2 mg·kg－1·d－1）和茶多酚治疗组（200 mg·kg－1·d－1）,采用Ⅱ型胶原弗氏完全佐剂法（collagen-in-duced arthritis,CIA）建立类风湿性关节炎大鼠模型。记录大鼠足趾体积的变化,酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清IL-1β、PGE2水平,免疫组化法检测大鼠足爪组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白水平的表达。结果与模型组比较,茶多酚治疗组大鼠踝关节肿胀明显减轻（P＜0．05）,大鼠血清IL-Iβ、PEG2水平明显降低（P＜0．05）,足爪组织细胞中MMP-2蛋白表达明显下降（P＜0．05）。结论茶多酚对CIA大鼠关节炎有抑制作用,其机制可能与抑制炎症介质IL-1β、PEG2,下调MMP-2蛋白表达有关。     

紫雪散对大鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用及其机制研究

目的研究紫雪散对大鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用及其机制研究。方法 Wistar大鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、吲哚美辛片(2 mg/kg)组以及紫雪散0.5、1.0 g/kg组,每组10只。建立大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型。大鼠初次免疫后第12天开始灌胃给药,给药容量10 m L/kg,1次/d。对照组、模型组均灌胃给予同体积生理盐水。各组均持续给药3周。测量大鼠左后足踝宽度、厚度和周长,计算关节炎指数。观察大鼠踝关节病理。采用ELISA法测定血清炎症因子血小板活化因子(PAF)水平、环氧合酶-2(COX-2)活性、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用比浊法测定血清循环免疫复合物(CIC)水平。结果给药7 d,紫雪散组踝关节宽度、厚度显著低于模型组并能持续到给药21 d。紫雪散组滑膜细胞增生明显减轻,滑膜组织充血水肿明显减轻。与模型组比较,紫雪散组全身表现评分、关节肿胀指数和关节炎指数均显著降低(P0.05、0.01、0.001)。与模型组比较,紫雪散0.5、1.0 g/kg组血清PAF水平显著减少,COX-2活性显著降低(P0.001)。与模型组比较,紫雪散0.5、1.0 g/kg组血清TNF-α、CIC水平显著减少(P0.05、0.01、0.001)。结论紫雪散对大鼠胶原诱导性关节炎损伤具有治疗效果,其机制可能与紫雪散的抗炎和抗氧化作用有关。     

芍药苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号的调节作用

目的研究芍药苷(paeoniflorin,Pae)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号转导的调节作用。方法用鸡Ⅱ型胶原诱导胶原性关节炎。在免疫后d16~23,胶原性关节炎大鼠灌胃给予Pae(25、50、100mg·kg-1)。通过足爪肿胀和关节炎指数评价关节炎。采用Western blot技术检测滑膜细胞中抑制性G蛋白(Gi)表达。用放免法检测滑膜细胞中cAMP水平,用激酶发光分析法测定滑膜细胞中蛋白激酶A(PKA)的活性。结果胶原性关节炎大鼠出现明显的继发性炎症反应。滑膜细胞中Gi蛋白表达增加,而cAMP水平和PKA活性明显降低。Pae抑制胶原性关节炎大鼠的炎症应答。在100mg·kg-1,Pae抑制Gi的表达。在50mg·kg-1和100mg·kg-1剂量,Pae提高cAMP水平和PKA活性。体外研究发现,Pae(2·5、12·5、62·5mg·L-1)降低滑膜细胞中Gi的表达,而提高降低的cAMP水平和PKA活性。结论胶原性关节炎大鼠滑膜细胞中G蛋白偶联的信号转导与滑膜炎病理机制密切相关;Pae对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用是通过调节G蛋白偶联的信号转导实现的。     

积雪草苷的抗菌作用及对小鼠实验性泌尿系统感染的治疗作用

目的:研究积雪草苷的体内外抗苗作用。方法:采用平皿二倍稀释法测定积雪草苷对37株标准菌株及临床分离致病菌株的最低抑菌浓度(MIC);采用小鼠膀胱上行性肾感染模型,观察积雪草苷在0．68～3．36 g·kg-1剂量时灌胃给药对大肠埃希菌26的清除作用,用Bliss程序计算药物清除细菌的半数有效剂量(ED50)和95％置信限。结果:积雪草苷对37株标准及临床分离菌株显示较强的抗菌活性,尤其对各种耐药细菌,包括耐甲氧西林的金葡球菌(MRSA)、表葡菌(MRSE),耐5种氨基糖苷类抗生素、产钝化酶的粪肠球菌,产β-内酰胺酶、产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌和醋酸钙不动杆菌,以及耐哌拉西林的铜绿假单胞菌的MIC值与三金片相近。积雪草苷对小鼠膀胱上行性肾感染大肠埃希菌26的清除细菌作用较强,积雪草苷和三金片的ED50分别为1．87和3．16 g·kg-1(P<0．01)。结论:积雪草苷具有良好的体内、外抗菌活性,尤其对于泌尿系统感染。     

国产白细胞介素-1受体阻滞剂对胶原性关节炎大鼠淋巴细胞及巨噬细胞功能的影响

目的:观察国产白细胞介素-1受体阻滞剂(IL-1ra)对大鼠胶原性关节炎(CIA)的影响.方法:鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,关节评分法观察关节炎的发生情况;3H-TdR掺入法检测T细胞、B细胞增殖反应;采用小鼠淋巴细胞增殖法检测IL-1活性;放免法检测大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)和前列腺素E2(PGE2)的含量.结果:CIA大鼠在致炎后d10,出现关节红肿,刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)诱导的T和B淋巴细胞增殖反应增强;PMΦ产生IL-1,TNF-α,PGE2的水平升高.IL-1ra(7.5,30,120mg·kg-1·d-1)和阳性对照组(anakinra 120mg·kg-1·d-1)sc,连续7d,均能减轻CIA大鼠关节局部炎症,降低关节评分;IL-1ra(30,120mg·kg-1·d-1)能明显降低CIA大鼠过高的T淋巴细胞增殖反应,IL-1ra (7.5,30,120mg·kg-1·d-1)能明显降低CIA大鼠B淋巴细胞增殖反应;降低CIA大鼠PMΦ产生过高的IL-1,TNF-α及PGE2水平.结论:IL-1ra对CIA大鼠淋巴细胞和巨噬细胞的增殖反应具有抑制作用.