金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的建立金黄色葡萄球菌随机扩增ＤＮＡ多态性（ＲＡＰＤ）分型技术，以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法对临床分离的１５株金黄色葡萄球菌，酚氯仿法提取其ＤＮＡ后行ＲＡＰＤ分型，同时进行噬菌体分型。结果１５株临床分离株大多数产生独特而稳定的ＲＡＰＤ带型，可分成５个噬菌体型和１４个ＲＡＰＤ谱型。采用同一反应体系，产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现ＲＡＰＤ谱型。结论ＲＡＰＤ基因分型技术不需已知核酸序列，分型率高，分辨力强，简便快捷，可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志，是分子流行病学研究的有效方法。     

用AP—PCR技术分析金黄色葡萄球菌DNA的多态性

金黄色葡萄球菌是医院内感染的主要病原菌，在流行病学方面占有重要地位。寻找一种简便的好方法对其分型利于追踪传染源。以往常用噬菌体分型，但方法繁杂，操作中易发生误差，结果不稳定。本文采用近年新建立的ＡＰ－ＰＣＲ技术分析金黄色葡萄球菌ＤＮＡ的多态性，并进一步探讨其在分型方面的应用。１　材料和方法１１　菌株来源　３２株金黄色葡萄球菌均于１９９７年３月至１１月取自哈尔滨医科大学附属第二医院、哈尔滨市儿童医院的临床分离株。并按“伯杰细菌鉴定手册”第八版要求系统鉴定、编号。１株金黄色葡萄球菌标准株（ＡＴＣＣ…     

随机引物聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）基因分型的方法用于；临床流行病学调查。方法优化ＡＰ－ＰＣＲ方法并与抗生素敏感谱分型法比较，评价ＡＰ－ＦＣＲ基因分型法的可靠性与分辨力；并对４９株ＭＲＳＡ进行ＡＰ－ＲＣＲ基因分型。结果４９株医院感染的ＭＲＳＡ可分为１０个ＡＰ－ＰＣＲ谱型，主要谱型为 Ａ３型，分型率 １００％；其中 ４１株 ＭＲＳＡ为流行病学相关株。结论 ＡＰ－ＰＣＲ基因分型是一种经济、快捷、可靠的分型方法；是在分子水平上对微生物感染进行病原学、发病机理及流行病学研究较理想的工具。     

新生儿铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分子流行病学研究

对在６个月内从１２１名产科新生儿中的３０名检出的３１株铜绿假单胞菌进行ＲＡＰＤ指纹图谱分析和血清学分型。２４株为Ｏ：６血清型，６株属于另外３个血清型，１株未能分型。ＲＡＰＤ分型率为１００％。３１个菌株分成５个ＲＡＰＤ谱型。２５株为Ｒ：１型，其它６株为另外的４个谱型。血清型不同的新生儿菌株的ＲＡＰＤ谱型亦不相同。２株Ｏ：１型的菌株，其ＲＡＰＤ谱型却不同。同期分别来自４个其他科室的５名患者的５株Ｏ：６型ＰＡ菌的ＲＡＰＤ谱型各自不同，与新生儿Ｏ：６型的ＲＡＰＤ谱型也不同。结果表明，铜绿假单胞菌在产科新生儿的暴发流行，Ｏ：６／Ｒ：１型为暴发流行菌株；ＲＡＰＤ分型率高，分辨力强，快速简便，颇具医院感染分子流行病学研究的应用价值。     

金黄色葡萄球菌的定量耐药谱分型

我们对临床分离的１４４株金黄色葡萄球菌作了定量耐药谱分型和噬菌体分型。将相似性系数Ｅ引入菌株相似性分析,大大提高了耐药谱分型的辨别力和重复性。我们还采用Ｈｕｎｔｅｒ介绍的辨别力指数Ｄ来评价方法的辨别力,使辨别力数字化。     

PFGE方法在医院感染病原学监测中的应用

目的应用ＰＦＧＥ对我院１９９５年９月～１９９６年１１月间，金黄色葡萄球菌引起的医院感染进行病原学监测。方法收集、鉴定分离菌株，检测ＭＲＳＡ，分析病历资料并进行了ＰＦＧＥ分型研究。结果共分离到８４株金黄色葡萄球菌，ＭＲＳＡ４４株（５２．４％）。病历资料显示有５３株为医院感染菌，其中４１株为ＭＲＳＡ；经ＰＦＧＥ分析儿科、肾内科、皮科、骨科等有ＭＲＳＡ流行株存在，社区感染菌多为散发。结论引起医院感染的金黄色葡萄球菌多为ＭＲＳＡ，ＰＦＧＥ是一个研究感染流行情况、进行感染管理的有力手段     

随机扩增多态DNA指纹技术的研究及在检测医院感染中的应用

目的 探讨医院感染常见病原菌的基因鉴定及分型方法,了解其分子流行病学情况。方法 优化随机扩增多态ＤＮＡ指纹技术（ＲＡＰＤ）的实验条件,利用ＲＡＰＤ技术成功地检测了儿科病房呼吸道合肥病毒（ＲＳＶ）、脑外科病房铜绿单胞菌（ＰＡ）及血液病房白色念珠菌（ＣＡ）的医院感染。同时进行了ＲＳＶ分离、ＰＡ菌和ＣＡ菌培养。结果 构建了金黄色葡萄球菌（ＳＡ）、志贺菌（ＳＢ）、大肠埃希菌（ＥＣ）、肠炎沙门菌（Ｓａｌｍ（     

用RAPD技术分析甲型溶血性链球菌DNA

目的 应用ＲＡＰＤ技术分析甲型溶血性链球菌ＤＮＡ多态性并对其分型。方法 随机设计１７ｂｐ和１０ｂｐ两条引物,采用近年来建立起来的ＲＡＰＤ技术对３０株甲型溶血性链球菌ＤＮＡ进行扩增,扩增产物经凝胶电泳后得到指纹图。结论 甲型溶血性链球菌ＤＮＡ用ＲＡＰＤ技术分析,把该菌进一步分型且方法操作简单,结果准确、稳定。     

136株金黄色葡萄球菌产毒及噬菌体分型的研究

目的研究136株金黄色葡萄球菌肠毒素噬菌体分型,探讨马鞍山市金黄色葡萄球菌分离株的肠毒素产生情况以及该菌在此地区的流行特点。方法运用m in iVIDAS全自动荧光免疫分析仪检测肠毒素,采用常规方法进行噬菌体分型。结果136株金黄色葡萄球菌肠毒素检测中有106株为阳性,总阳性率77.9%;23种噬菌体分型有111株被分成12个型别,有90%是Ⅲ群,有25株用本次噬菌体系统无法分型,分辨率达81.6%。结论该地区产肠毒素的金黄色葡萄球菌占有很高的比率,以Ⅲ群噬菌体为主要流行株。     

随机扩增多态DNA技术用于大肠杆菌基因分型的研究

采用随机扩增多态ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｐｈｉｃ ＤＮＡ，简称ＲＡＰＤ）技术，用二组引物对８株大肠杆菌进行了基因分型，发现二组引物均能将８株菌分成４个基因型，其中血清型相同，但来自不同国家和地区的３株被分成二个基因型，表明这三株菌基因组ＤＮＡ间存在差异。４株从同一病人体内不同次分离到的血清型相同的菌株呈同一指纹图谱。说明该４株菌渊源于同一菌株，结果显示该方法的可分型性     

随机扩增多态性DNA技术用于鼠疫耶尔森氏菌基因分型的研究

目的 对来自全国不同疫源地、不同生态型的１０３株鼠疫耶尔森氏菌进行基因分型研究。方法 用随机扩增多态性ＤＮＡ技术（ＲＡＰＤ）。结果 将鼠疫耶尔森氏菌分成两种基因型别：全国大部分菌株为ＲＡＰＤ－１型,青海省境内的大部分菌株为ＲＡＰＤ－２型。结论 不同生态型的鼠疫耶尔森氏菌基因结构存在差异,为鼠疫耶尔森氏菌的基础研究和防治提供依据。     

金黄色葡萄球菌医院感染的临床和基因遗传聚类分析

目的为控制医院金黄色葡萄球菌感染,揭示其病原体特性及流行病学规律。方法对２８例金黄色葡萄球菌感染患者的临床资料和病原菌的药敏试验和ＰＲＡＤ基因聚类进行分析。结果医院感染患者ＭＲＡＳ占６０．７１％,ＭＳＳＡ３９．２８％,病原体对青霉素耐药率达８６．１％,对常用一二代头孢菌素和喹诺酮药物的敏感率低于４０％。噬菌体Ⅲ型构成比占６０．７％,ＰＲＡＤ聚类分型产生３个聚类群。结论对感染患者进行临床和细菌病原学特征分析,可提供病原菌传播与生存的本质资料     

某院金黄色葡萄球菌感染ＰＦＧＥ 溯源分析

摘要：目的　利用脉冲场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＰＦＧＥ） 技术对某院新生儿室发生的 １ 例金黄色葡萄球菌院内感染进行调查和溯源分析。方法　对某院新生儿室环境和新生儿室患者样本进行 采样和细菌培养。对金黄色葡萄球菌采用ＰＦＧＥ 检测技术进行分子分型。结果　医生工作站电脑键盘分离 出１例金黄色葡萄球菌，新生儿病房环境监测未发现金黄色葡萄球菌。ＰＦＧＥ 分析显示，未分离出与院内 感染株同源的菌株。结论　应用ＰＦＧＥ 技术对新生儿病区的院内感染株进行监测，新生儿病区并未发生金 黄色葡萄球菌院内感染株的暴发流行。 关键词：院内感染；金黄色葡萄球菌；同源性分析；脉冲场凝胶电泳；流行病学调查 中图分类号：Ｒ３７８．１，Ｒ４４６．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１８）０４ ０２９４ ０３     

耐甲氧西林葡萄球菌感染基因诊断的实验研究

目的探明沈阳地区ＭＲＳＡ感染状况及耐药机理。方法采用酶标－多聚酶链式反应（ＥＤ－ＰＣＲ）方法对沈阳地区３所医院分离的７６株葡萄球菌耐甲氧西林（ＭｅｃＡ）基因进行检测。结果ＭｅｃＡ基因阳性２３株，耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的检出率为３０．３％，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）检出率占金黄色葡萄球菌总数的２１．７％。采用微量液体稀释法、琼脂稀释法以及ＭＲＳＡ鉴别培养法等３种方法与之相比较，经统计学处理ＥＤ－ＰＣＲ法与其它３种方法的一致性非常有意义（Ｐ＜０．０１）。以ＭＲＳＡ鉴别培养法作为诊断ＭＲＳ的参考标准，ＥＤ－ＰＣＲ法敏感性为９５．５％，特异性为９６．３％。结论ＥＤ－ＰＣＲ法与其它３种方法相比，具有简便、快速、敏感性高、特异性强等优点     

RAPD分型方法在一次新生儿医院内感染暴发调查中的应用

ＲＡＰＤ分型方法在一次新生儿医院内感染暴发调查中的应用北京医科大学（１０００８３）鲁凤民刘霜叶鸿瑁１９９５年２～３月间，北京市某综合医院婴儿室发生一起葡萄球菌感染暴发。我们采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈ...     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因诊断及多重PCR SCCmec基因分型方法的建立

目的建立对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因诊断和金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型的方法。方法对临床分离的11株金黄色葡萄球菌采用双重PCR(femA和mecA)鉴定,再将鉴定为MRSA的临床菌株和3株标准株用多重PCR方法在一个反应体系(针对MRSA的8个基因)中进行SCCmec基因分型。结果临床分离株中有6株鉴定为MRSA,对其和MRSA标准株的多重PCR基因分型结果显示,两株临床株为SCCmecⅡ型,4株为Ⅲ型,标准株SA-w2为Ⅰ型,MRSA252为Ⅱ型。结论该研究可以很好地对临床MRSA进行基因诊断和分型,对MRSA的诊断和分型、耐药研究以及分子流行病学有重要意义。     

医院感染金黄色葡萄球菌的流行与耐药机制

目的对医院感染金黄色葡萄球菌进行基因分型,研究流行菌株的传播及其耐药的分子机制,以控制医院感染的发生。方法对分离的21株金黄色葡萄球菌进行RAPD分型,并进行mecA、gyrA、grlA基因分析,研究其耐药机制。结果21株金黄色葡萄球菌根据RAPD带型可分为3型,其中Ⅰ型12株,是医院感染的主要流行株;在临床分离的17株金黄色葡萄球菌中14株对甲氧西林和喹诺酮类均耐药;在耐药株中除1株(13064)外,其余菌株均检测出mecA基因;14株耐药株中均存在gyrA和(或)grlA突变;gyrA突变点为gyrA 84位TCA→TTA,gylA突变点为grlA80位TCC→TTC。结论RAPD基因分型技术简便快捷,可为医院感染金黄色葡萄球菌准确分型,是分子流行病学研究的有效方法;医院医院感染的金黄色葡萄球菌流行株主要为Ⅰ型,有可能经飞沫传播;17株临床分离株中14株存在多重耐药,并有相应的基因变异。     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

农村医疗站物表金黄色葡萄球菌脉冲场电泳分型

目的:了解农村医疗站物表分离的金黄色葡萄球菌的基因型及耐药性.方法:采用脉冲场凝胶电泳技术对金黄色葡萄球菌进行分型.结合药物敏感试验进行分析.结果:17株金黄色葡萄球菌的脉冲场谱分6型(A-F),耐药性试验结果显示菌株对21种药物耐药,最多耐药种类达18种,出现13种耐药谱,菌株存在多重耐药性.结论:在医疗站物表金黄色葡萄球菌的分子流行病研究中,脉冲场凝胶电泳是一种较好的基因分型方法.     

47株金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的基因分型研究

目的 研究金黄色葡萄球菌临床血流感染分离株的分子流行病学特征.方法 收集2006年1月至2008年12月解放军总医院分离的临床血流感染金黄色葡萄球菌菌株(共47株),标本来源均为患者静脉血.采用琼脂稀释法检测所有菌株对多种抗生素的耐药性,PCR方法 检测pvl毒素基因,DiversiLab~(TM)Rep-PCR分型系统分析菌株的同源性;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体/mec(SCCmec)分型以及ST239型别的快速筛查;综合分型和药敏试验结果,挑选部分代表菌株进行多位点序列分型(MLST).结果 47株血流感染金黄色葡萄球菌中,pvl基因检出率为4.3%.MRSA占51.1%.MRSA均为SCCmec Ⅲ型菌株;Rep-PCR分为A～L共12个型,其中A型为最主要的型,共22株(46.8%),所有的MRSA均属于A、B两型.结论 47株临床血流感染金黄色葡萄球菌中的MRSA绝大部分为多重耐药克隆ST239-MRSA-SCCmecⅢ型.