血红素氧化酶-1对紫绀型兔心脏复氧及缺血再灌注损伤的保护作用

近来的研究结果表明，血红素氧化酶-1(HO-1)及代谢产物是一种较强的内源性抗氧化物质。本研究旨在探讨长期低氧对紫绀型心脏HO-1活性的影响，以及HO-1活性改变对紫绀型心脏缺氧／复氧及缺血／再灌注损伤的影响及可能机制。     

瘢痕中HIF-1α的表达及其与VEGF和HO-1的关系

目的:探讨HIF-1α减轻瘢痕内缺氧环境的机制。方法:采用免疫组化法检测烧伤后肉芽、不同时期瘢痕和正常皮肤中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor1α,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、血红素氧化酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的表达,采用权重方法分别对各组瘢痕的HIF-1α、VEGF、HO-1表达结果进行量化,分析各自规律及相互间关系。结果:随瘢痕的成熟,HIF-1α、VEGF、HO-1表达强度均逐渐减弱,相互间具有正相关性(P<0.01)。结论:HIF-1α、VEGF、HO-1在瘢痕成熟过程中起重要作用,HIF-1α可能通过诱导VEGF、HO-1的表达,促进血管生成、成熟,增加组织内供氧,来减轻瘢痕内缺氧环境。     

血红素氧化酶-1保护异种胰岛移植物及机制研究

目的:探讨钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)诱导血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)过表达对异种胰岛移植物的保护作用及其可能的机制.方法:采用大鼠对受体鼠胰岛移植模型.按术前不同处理方式将分离纯化的胰岛随机分为3组:A组胰岛体外培养36 h;B组胰岛与50 mmol/L的HO-1诱导剂CoPP共培养36 h:C组胰岛与50 mmol/L的CoPP及50 mmol/L的诱导阻断剂锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)共培养36 h.RT-PCR及Western印迹法检测各组胰岛HO-1 mRNA及蛋白表达.受体鼠也随机分为3组,每组11只,分别接受上述3组胰岛;比较各组受体鼠血糖维持正常之时间.ELISA法检测受体鼠血清IFN-γ、TNF-γ、IL-10及IL-1γ的含量.结果:CoPP预处理可诱导胰岛HO-1 mRNA和蛋白过表达.B组受体鼠血糖维持正常时间为(14.63±1.19)d.与A组的(9.88±2.17)d及C组的(9.38±1.60)d相比,有显著差异(P＜0.01),而A、C两组间无显著差异(P＞0.05).B组受体鼠血清IL-10含量为(72.97±9.74)pg/mL,与A组的(30.57±3.94)pg/mL及C组的(45.55±8.26)pg/mL比较,差异有统计学意义,P值分别为0.005及0.02.而3组间血清IFN-γ、TNF-γ及IL-1γ含量无显著差异(P＞0.05).结论:CoPP体外诱导HO-1过表达对异种胰岛移植物具保护作用;该作用可能与IL-10有关.     

血红素加氧酶-1对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 新生SD大鼠8只,日龄1～3 d,原代培养心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(C组)常规培养8 h;缺氧复氧组(HR组)采用缺氧2 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型;血晶素组(Hemin组)缺氧前24 h及缺氧即刻,培养基中加入Hemin,终浓度为20 μmol/L;血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组)缺氧前24 h及缺氧即刻培养基中同时加入Hemin及ZnPP,终浓度均为20 μmol/L.各组细胞均接种于35 mm培养皿(2 ml/皿)或50 ml培养瓶(3 ml/瓶),每组45皿和3瓶.于复氧结束后采用蛋白印迹法测定心肌细胞HO-1表达,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)活性,超声破碎细胞离心后取上清,采用硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与C组比较,其余3组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平及HO-1表达升高,心肌细胞存活率及SOD活性降低(P＜0.05).与HR组比较,Hemin组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平降低,HO-1表达、心肌细胞存活率及SOD活性升高(P＜0.05),Hemin+ZnPP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).HR组和Hemin+ZnPP组细胞缺氧复氧损伤明显,Hemin组细胞缺氧复氧损伤减轻.结论 HO-1可减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

丙泊酚诱导血红素氧化酶-1表达抑制氧糖剥夺大鼠海马神经元凋亡及机制研究

目的 研究丙泊酚诱导血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白表达抑制氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.方法 将培养7d的新生(出生24～48 h)SD大鼠海马神经元随机均分为五组:C1组,海马神经元全量换液后再继续培养24 h;C2组,海马神经元接受50μmol/L丙泊酚处理1h后,再继续培养24 h;D组,海马神经元进行缺糖缺氧培养1h后复糖复氧,再继续培养24 h;P组,海马神经元缺糖缺氧的同时接受50 μmol/L丙泊酚处理;Z组,在海马神经元进行缺糖缺氧的同时加入锌原卟啉(ZnpplX)使其终浓度为10 μmol/L后处理同P组.每组分别取12孔海马神经元,用Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用免疫细胞化学染色法检测HO-1蛋白和Bcl-2蛋白的表达.结果 与C1组比较,C2、D及P组海马神经元HO-1和Bcl-2蛋白的表达均增加,D、P及Z组凋亡率显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与D组比较,P组海马神经元HO-1和Bcl-2蛋白表达均增加,凋亡率下降(P＜0.01).与P组比较,Z组海马神经元HO-1和Bol-2蛋白的表达均降低,凋亡率则明显升高(P＜0.01).结论 丙泊酚通过诱导氧糖剥夺海马神经元表达HO-1,进而上调Bcl-2,从而抑制氧糖剥夺海马神经元的凋亡,可能是丙泊酚神经保护作用的机制之一.     

血红素氧合酶-1对移植的异种心脏的保护作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对移植的异种心脏的保护作用及其可能机制。方法应用NI H小鼠到Wistar大鼠颈部异位心脏移植模型,术前对供者分别用HO-1的诱导剂CoPP或HO-1的阻滞剂ZnPP进行处理,术后受者相应接受CoPP或ZnPP处理,部分受者同时接受环孢素A(CsA)处理,并设空白对照组和单用CsA组。分别用免疫组化、逆转录聚合酶链反应、Westernblot蛋白印迹杂交等检测移植心组织中HO-1、HO-1mRNA、凋亡蛋白酶-3以及信号传导与转录因子-3(STAT-3)的表达,测定心肌组织中HO-1的活性,采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡情况,比较不同处理因素之间的差异。结果单一接受CoPP者(CoPP组)移植心脏存活时间长于空白对照组及单一接受ZnPP者(P<0.01),但短于同时接受CoPP和CsA处理者(CoPP CsA组,P<0.01);CoPP组及CoPP CsA组HO-1、HO-1mRNA的表达及HO-1的活性均高于其余各组(P<0.01),其心肌细胞凋亡数和凋亡蛋白酶-3低于其余各组(P<0.05),而STAT-3高于其余各组(P<0.01)。结论CoPP诱导产生的HO-1可延长NI H小鼠到Wistar大鼠异种移植心脏的存活时间,该作用可能与STAT-3激活、凋亡蛋白酶-3受抑制而导致心肌细胞凋亡发生率下降有关。     

血红素氧合酶-1在感染性休克大鼠肾功能损伤中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在感染性休克大鼠肾功能损伤中的作用.方法 健康清洁级SD大鼠80只,月龄3～4月,体重260～330 g,雌雄不拘,随机分为4组(n=20):对照组(C组)、感染性休克组(S组)、感染性休克+ZnPP-Ⅸ组(SZ组)和ZnPP-Ⅸ组(Z组).C组静脉注射生理盐水0.5 ml,2 h后腹腔注射50 mmol/L碳酸氢钠溶液1 ml;S组静脉注射LPS 10 mg/kg,2 h后腹腔注射50 mmol/L碳酸氢钠溶液1 ml;SZ组静脉注射LPS 10 mg/kg,2 h后腹腔注射ZnPP-Ⅸ10 μmol/kg;Z组静脉注射生理盐水0.5 ml,2 h后腹腔注射ZnPP-Ⅸ10 μmol/kg.于腹腔注射碳酸氢钠溶液或ZnPP-Ⅸ后4 h时,检测碳氧血红蛋白浓度(COHb)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的浓度和尿α1-微球蛋白(α1-M)浓度、N-乙酰-a-D-氨基葡萄糖酐酶(NAG)活性、视黄醇结合蛋白(RBP)浓度、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性、肾组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、HO-1 mRNA、HO-2 mRNA、HO-1和HO-2的表达水平.结果 与C组比较,S组和SZ组血清Cr、BUN的浓度、尿α1-M、RBP、NAG、γ-GT水平、COHb、肾组织MDA、HO-1 mRNA、HO-1水平升高,肾组织SOD活性降低(P<0.05),Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S组比较,SZ组血清Cr、BUN的浓度、尿α1-M、RBP、NAG、γ-GT水平和肾组织MDA含量升高,肾组织SOD活性、COHb和肾组织HO-1 mRNA、HO-1水平降低(P<0.05);4组大鼠肾组织HO-2 mRNA、HO-2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 肾组织HO-1对感染性休克大鼠的肾功能可产生一定的保护作用.     

γ干扰素对缺氧肠上皮屏障功能影响及其机制

目的 观察γ干扰素(IFN-γ)对缺氧肠上皮细胞屏障功能的影响,探讨其分子机制.方法 对HT-29细胞进行缺氧及IFN-γ处理,检测跨上皮电阻(TER)、缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)蛋白及肠三叶因子(ITF)、黏蛋白3(mucin-3)、CD73、CD55、血小板活化因子受体(PAFR) mRNA表达的变化.结果 缺氧+ IFN-γ使TER明显下降(较常氧和缺氧下降33.8％、28.3％),使HIF-1α蛋白较缺氧降低72.1％,使ITF、mucin-3、CD73、CD55、PAFR mRNA分别较缺氧降低53.3％、31.1％、74.6％、62.4％,但PAFR mRNA水平两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IFN-γ能使缺氧肠屏障功能降低,与IFN-γ使HIF-1α蛋白降低,并抑制HIF-1α下游的肠屏障调节因子密切相关.     

富半胱氨酸61通过FoxO1通路介导SCD1的表达调控结肠癌对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究

目的 探讨富半胱氨酸61(CCN1)降低结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的作用及其分子机制.方法 收集结肠癌及癌旁组织,体外培养结肠癌细胞和正常结肠上皮细胞、HCT-116细胞和5-FU耐药细胞,RT-qPCR检测SCD1和CCN1 mRNA的表达水平;培养HCT-116细胞,分别转染pcDNA3.1和C...     

血红素氧合酶-1/一氧化碳系统对感染性休克肺损伤的保护机制

感染性休克引起的急性肺损伤( ALI)是临床常见的急危重症之一,发病率和病死率较高,其发病机制及防治措施已成为国内外学者研究的重点.血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)是催化血红素生成一氧化碳(CO)、胆绿素和铁离子的一种限速酶[1].已有研究表明,HO-1/CO对感染性休克肺损伤有保护作用[2,3].本文就HO-1/CO系统在感染性休克肺损伤中的保护机制进行综述.     

富含半胱氨酸蛋白61在骨形成与修复中的作用

与细胞外基质相关的富含半胱氨酸61(CYR61/CCN1)是CCN家族成员之一,可调节细胞的黏附、迁移、增殖和分化,并在胚胎形成和肿瘤发生与形成过程中发挥重要作用;也被认为是成血管因子,可促进血管形成.CYR61/CCN1在骨形成和骨折愈合过程中均有表达,抑制其在骨折中的作用可明显抑制骨折愈合.在研究CYR61/CCN1的成血管等作用基础上,进一步研究其在骨形成与骨修复中的作用及作用机制,有助于促进对骨形成与骨折愈合机制的新认识.对CYR61/CCN1在骨生物学中的作用及其机制研究,也可为骨形成和骨折愈合方面的研究带来新发现和新方向.     

血红素加氧酶-1在七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 新生健康清洁级SD大鼠15只,日龄1～3d,处死后取心室肌组织,原代培养心肌细胞,以1×106个/ml接种于6孔培养板或以2× 105个/ml接种于24孔培养板,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n＝25):对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)采用缺氧2h,复氧1h的方法制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型;七氟醚预处理组(S+ H/R组)细胞经2.5％七氟醚预处理20min后行药物洗脱10 min,再行缺氧复氧处理;锌原卟啉+七氟醚预处理组(ZnPP+ S+ H/R组)细胞经HO-1抑制剂锌原卟啉3 μmol/L孵育1h后,行七氟醚预处理及缺氧复氧处理.于复氧结束后测定心肌细胞HO-1表达、细胞凋亡率、细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放程度、细胞色素C(Cyto C)表达及培养液LDH和CK活性.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞HO-1和胞浆Cyto C表达上调,线粒体Cyto C表达下调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PTP开放度升高(P<0.01).与H/R组比较,S+H/R组心肌细胞HO-1和线粒体Cyto C表达上调,胞浆Cyto C 表达下调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PIP开放度降低(P<0.01).与S+H/R组比较,ZnPP+ S+ H/R组心肌细胞HO-1和线粒体Cyto C表达下调,胞浆CytoC表达上调,培养液LDH、CK活性、细胞凋亡率、[Ca2+]i和PTP开放度升高(P<0.01).结论 HO-1表达上调参与了七氟醚预处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

血红素氧合酶-1抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用

目的研究血红素氧合酶-1(HO-1)抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。方法采用脂质体介导基因转染技术将PcDNA3-HO-1质粒转入血管内皮细胞。用间接免疫荧光技术在蛋白质水平检测HO-1在血管内皮细胞上的表达;用γ-干扰素(INF-γ)活化血管内皮细胞;用CFSE标记植物血凝素(PHA)活化的JurkatT细胞;采用粘附阻断实验观察转染HO-1的血管内皮细胞和JurkatT细胞间的粘附作用。结果HO-1可在人血管内皮细胞系中稳定表达;转染HO-1的活化内皮细胞与JurkatT细胞的粘附作用显著下降,CFSE标记的阳性率为21.24%,而未转染的对照组CFSE标记的阳性率为56.16%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.05);应用HO-1抑制剂ZnPP后,粘附抑制作用消失。结论HO-1可以明显抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。     

HO-1活性变化对HIF-1基因表达的影响

目的：探讨血红素氧化酶1（HO-1）活性变化对缺氧诱导因子1（HIF-1）基因表达的影响及其可能机制。方法：利用乏氧培养箱建立胃癌细胞株的缺氧诱导模型,采用RNA干扰技术使HO-1基因沉默,设为转染组（Z组）;利用血晶素（Hemin）诱导使HO-1活性升高,设为Hemin组（H组）;对照组（D组）仅做乏氧培养。分别用RT-PCR和免疫组织化学技术测定各组HO-1和HIF-1的mRNA及蛋白质含量。结果：Z组HO-1和HIF-1的mRNA和蛋白质水平明显低于D组（P〈0.01）,而H组明显高于D组（P〈0.01）。结论：HO-1在接受HIF-1调节的同时,对HIF-1有正反馈的作用。这为今后利用RNA干扰等基因技术治疗恶性肿瘤提供了实验依据和理论基础。     

血红素加氧酶-1对氧糖剥夺海马神经元CDK5-ATM-P53信号转导通路的影响

目的 评价血红素加氧酶-1(HO-1)对氧糖剥夺神经元细胞周期蛋白依赖激酶5(CDK5)-共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)-P53信号转导通路的影响.方法 培养7d的海马神经元,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):正常培养组(C组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素(HO-1诱导剂)组(D+H组)和氧糖剥夺+血晶素+锌原卟啉(HO-1抑制剂)组(D+H+T组).C组采用正常培养方法培养.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H+T组神经元同时用10μmol/L血晶素和10 μmol/L锌原卟啉处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.培养24h后,MTT法检测神经元存活情况,TUNEL法检测神经元凋亡情况,RT- PCR法检测HO-1 mRNA表达,Western blot 法检测HO-1、CDK5、ATM和P53蛋白表达.结果 与C组比较,D组神经元HO-1 mRNA、HO-1、CDK5、ATM和P53蛋白表达上调,神经元存活率降低,神经元凋亡率升高(P＜0.01);与D组比较,D+H组神经元HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达上调,CDK5、ATM和P53蛋白表达下调,神经元存活率升高,神经元凋亡率降低(P＜0.01);与D+H组比较,D+H+T组神经元HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达下调,CDK5、ATM和P53蛋白表达上调,神经元存活率降低,神经元凋亡率升高(P＜0.01).结论 HO-1可通过阻断氧糖剥夺海马神经元CDK5- ATM-P53信号转导通路抑制神经元凋亡.     

血红素氧合酶-1/一氧化碳体系的脏器保护作用

近年来,血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)体系对各脏器保护作用的研究较为广泛.HO-1/CO体系几乎分布于所有的组织和器官,除血红素外,在缺血、缺氧、炎症、应激、感染性休克、机械性损伤、重金属和细胞因子等因素诱导下其活性可显著增强,对多种脏器起保护作用.本文就HO-1/CO体系在多个系统、器官的脏器保护作用做一综述. HO-1/CO的生物学特性 血红素氧合酶(HO)是血红素代谢过程中的限速酶,在血红素降解代谢的第一个限速步骤起催化作用,它降解血红素产生一氧化碳(CO)、胆绿素(biliverdin)和Fe2+.这个反应的三种产物全部具有抗氧化、抗炎、抗凋亡和抗增殖的作用.     

转染血红素氧合酶—1基因减轻人肝细胞体外缺氧—复氧损伤

目的 探讨血红素氧合酶-1重组腺病毒载体(Ad-HO-1)体外转染人肝细胞的转染效果及其对肝细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 取人肝细胞系L-02细胞,滴加低温保存的Ad-HO-1,分别培养24 h、48 h和72 h(24 h组、48 h组和72 h组),并以加入空载体腺病毒共培养的L-02细胞为空白对照.采用逆转录聚合酶链反应法检测各组肝细胞HO-1 mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法检测各组肝细胞的HO-1表达率;在倒置荧光显微镜下观察转染24 h和72 h的肝细胞中绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.取空白对照组肝细胞(培养48 h)和48 h组肝细胞,缺氧培养4 h后再有氧培养8 h,采用四甲基偶氮唑盐法测定两组肝细胞存活率.结果 24 h组、48 h组和72 h组HO-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组,且随着转染时间的延长,HO-1 mRNA的表达水平逐渐升高.空白对照组HO-1的表达率为2.0%,24 h组为29%,48 h组为85.6%,72 h组为84.6%.基因转染后24 h和72 h,可以观察到L-02细胞中EGFP的表达.经历缺氧-复氧实验后,空白对照组肝细胞的存活率为(37.7±3.5)%,48 h组肝细胞的存活率为(89.4±5.2)%,二者相比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ad-HO-1在体外能有效的转染人肝细胞;与未转染者相比,转染肝细胞的缺氧-复氧损伤程度较轻.     

血红素加氧酶1修饰MSCs的相关研究进展

目的对血红素加氧酶1(Heme oxygenase 1,HO-1)修饰MSCs的相关研究进展进行综述。方法广泛查阅HO-1修饰MSCs的相关研究文献报道,对HO-1修饰MSCs的意义、效应及其相关机制进行总结综述。结果 HO-1修饰MSCs具有重要的研究价值,能够有效增强MSCs移植入体内后在复杂内环境下的抗氧化应激、抗凋亡特性,同时有效增强了MSCs的免疫调节功能,在各种疾病模型及研究领域中提高了MSCs的抗损伤、修复及免疫调控效果。结论 HO-1修饰MSCs的基础研究取得显著进展,有望应用于临床试验,并为干细胞治疗提供一定的理论依据及参考价值。     

RNA结合蛋白FOX1对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞氧化应激的影响

目的:探究RNA结合蛋白FOX1(RBFOX1)在人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧(H/R)模型中对细胞氧化应激及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法:构建HK-2细胞缺氧/复氧(缺氧16 h,复氧4 h)模型,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测RB...     

血红素加氧酶-1对器官移植保护作用的研究进展

血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)是机体血红素降解过程的限速酶,它可将血红素分解为一氧化碳(CO)、游离铁和胆绿素.目前HO-1及其降解血红素的代谢产物体系在抗氧化、抗凋亡、抗炎症、舒张血管及细胞保护等方面的作用受到了普遍关注.HO-1在器官移植中的作用已成为研究热点,现就HO-1在器官移植中细胞保护作用的研究进展作如下综述.