恒河猴对人单克隆抗体多次注射的应答

应用鼠McAb进行体内治疗时最主要的一个限制因素是,患者会产生抗鼠免疫球蛋应答。许多非免疫相容性患者或灵长类都可对鼠McAb的多次注射产生这样的应答。由于大多数抗鼠免疫球蛋白的应答都具有抗独特型的性质,而抗独特型抗体可以很有效地封闭McAb的活性,故推测人McAb也会面临同样的问题。但作者发现,给灵长类注射人McAb虽可诱可导抗独特型抗体,但并不产生免疫定答。此外还发现,放射标记与非放射标记的抗体稳定性差别较大。     

应用单克隆抗体测定纤维连结蛋白ELISA方法的建立

本文介绍用McAb作为包被和检测抗体进行双抗体夹心ELISA来测定人血浆纤维连结蛋白。通过实验找出最佳条件,即两种McAb混合使用,在McAb和酶结合物稀释液内加入4％PEG及使用TMBI底物的最适浓度等,该法敏感性可达80ng/ml,可作为临床常规方法使用。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠，测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明，被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素莹克隆抗体(McAb)的保护作用，其中3株有明显的保护作用．并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

一种简便快速筛选双位点单克隆抗体方法的建立

本文建立了一种无需对单克隆抗体(McAb)进行纯化和酶标记,利用市售酶标记抗体既可筛选双位点McAb的简易方法。其基本原理是,首先将待筛选McAb与酶标抗体制成McAb-酶标抗体复合物,再以此复合物作示踪剂进行夹心ELISA。若夹心孔OD492值高于第一、二阴性对照孔之和者, 提示所筛选McAb可能为双位点抗体。文中还对应用该方法时的注意事项进行了讨论。     

抗精氨酸支原体单克隆抗体的制备

本室制备了4株(A11、E5、F5、D1)抗精氨酸支原体的单克隆抗体(McAb )。用APAAP桥联酶标技术测定该抗体腹水效价为1:640～1:40 960,A11抗体的Ig类型是IgM,而E5、F5及D1均为IgG1。建立的4株能稳定分泌抗精氨酸支原体的McAb,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。该McAb用于检测细胞培养中的支原体污染,可特异性地检出精氨酸支原体,达到快速、准确的要求。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠,测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)的保护作用,其中3株有明显的保护作用,并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

ABO血型McAb取代常规人血清血型试剂的可行性探讨

为了获得可用于大量细胞培养生产血型单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,本文在7次细胞融合中,建立了35种分泌抗A、抗B McAb的细胞株,并对其细胞培养上清抗体效价≥1:128的6种McAb进行特性分析和临床验证,实验结果表明,这些细胞具有工业生产血型 McAb的潜力,本文对所得McAb替代现用人血清血型试剂的可行性进行探讨。     

脂蛋白(α)单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

应田淋巴细胞杂交瘤技术,建立了4株抗人血清脂蛋白(α)(LP(a))杂交瘤细胞株(BH6、BH7、BH11和BH21),并以制备的单克隆抗体(McAb)对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ig亚类测定:BH6为IgG1,BH7、BH11和BH21均为IgG2a,腹水效价为1×10~(-7)。特异性测定:LP(α)McAb与载脂蛋白(apo)AⅠ、AⅡ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E,人血清白蛋白,纤维蛋白溶酶原(pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实,BH6和BH21为识别LP(α)上同一抗原决定簇的McAb;BH7和BH11则为针对LP(α)上另一抗原决定簇的McAb。分别利用单株和混合株McAb标记酶建立了可应用于人血清LP(α)含量测定的ELISA双抗体夹心法。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅱ.鉴定和理化性质

利用免疫电泳、琼脂双扩散试验、PHA和 PHA抑制试验、ELISA和 ELISA抑制试验以及抗体结合力测定等证明,我们以前建立的3株杂交瘤细胞株所分泌的抗体均为IgG_4无反应性抗人 IgG McAb。 实验证明,含这类McAb的小鼠腹水,在理化性质上与多克隆抗体有所不同。将冻干或加叠氮钠4℃保存或直接放-30℃可维持效价至少达5月之久。本文所得有关该 McAb 的理化特性可为今后使用和生产这类 McAb 提供理论指导,文中还讨论这类 McAb 的应用价值。     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

McAb为传染病的病原研究和临床诊断等提供了新的手段和制剂。由于每一株杂交瘤分泌的McAb的特性可能各不相同,而其中McAb对相应抗原的亲和力高低是决定其用途的重要依据之一,因此有必要及早确定。经典的测定抗体亲和力方法一般是以抗原抗体反应的平衡常数K值表示,但K值的求得需对抗原抗体进行纯化、定量,方法烦琐,不能常规使用。本文采用ELISA法测定,虽不十分精确,但操作简便,无需特殊试剂和设备,能快速而明确地比较出各株McAb对病毒抗原亲和力的相对高低。 测定了32株抗肾综合征出血热(HFRS)     

抗癌胚抗原鼠/人嵌合抗体的体内及体外活性

由于鼠源性McAb在人体长期反复应用可产生人抗小鼠抗体(HAMA),近年来人们采用构建鼠/人嵌合抗体以降低鼠McAb的免疫原性。本文作者用基因工程方法构建了抗癌胚抗原(CEA)鼠/人嵌合抗体基因,并在小鼠骨髓瘤细胞中表达出嵌合抗体。活性检测结果表明;所制备的嵌合抗体既保持了亲代鼠McAb的特异性亲和力。又具有更强的体内及体外生物学活性。     

抗白血病患者IgM同种型和独特型McAb识别抗原表位的分析

本文应用间接ELISA试验,混合ELISA夹心试验,ELISA抑制试验对抗B-CLL患者血清IgM同种型和独特型McAb的特异性和亲和力进行了分析。并采用ELISA双抗体相加试验,检测了McAb识别抗原的表位。试验结果表明,14株McAb中10株为抗独特型McAb,4株为抗同种型McAb。对ELISA双抗体相加试验测得结果经微机集群处理分析,可将4株抗同种型McAb分成2组,10株抗独特型McAb分成4组。ELISA相加试验结果与间接混合ELISA抑制试验结果一致。结果提示,14株McAb至少可以识别6个不同的抗原表位。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备

目的 制备人血管内皮细胞生长因子受体Ⅱ(Kinase insert domain tontaining receptor,KDR)胞外Ⅲ区的单克隆抗体(McAb)，探讨其抑制VEGF诱导的体外活性。方法 在大肠杆菌中表达重组KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。融合蛋白经抗E—tag柱分离纯化后免疫Balb/c小鼠，采用传统杂交瘤技术制备抗KDR胞外Ⅲ区McAb，采用ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性，并测定单克隆抗体对VEGF165刺激脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的中和活性。结果 成功筛选出一株能稳定分泌KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1D3)，其分泌抗体亚类为IgGl。该McAb可明显阻断VEGF165对脐静脉内皮细胞株ECV304的刺激增生作用。结论 抗人血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外Ⅲ区McAb可通过封闭KDR而抑制VEGF活性，McAb 1D3具有潜在治疗肿瘤的活性。     

单克隆抗体在肿癌诊断治疗中的作用

杂交瘤细胞株产生单克隆抗体(McAb)是近年来生物医学科学中的一项重大突破,与重组DNA技术的遗传工程并驾齐驱,一起导致了生物医学领域内的一场革命,推动了许多学科的发展。McAb与常规血清相比,具有不可胜数的优点。正常免疫血清不可避免地包含着数以百计的不需要的抗体,而每一抗体都有其各自的靶子。McAb可用以纯化各种抗原、分析     

用基因工程表达的HBcAg制备抗-HBcAg单克隆抗体及其初步应用

用基因工程表达的NBcAg免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以ELISA抑制法检测抗体,获得28株分泌抗-HBc McAb的杂交瘤细胞系。对其中7株进行了克隆化,培养上清抗体滴度1:320～1:2560,免疫小鼠腹水和血清滴度1:10万～1:80万。Ig类型测定2株IgG1、2株IgG2a、1株IgG3、2株IgM。杂交瘤细胞系在体外连续传代培养6个月及液氮冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。得到的McAb只与HBcAg反应且能被HBcAg特异阻断,证明其特异性高。用ELISA间接法测定了McAb的相对亲和力,从50％最大结合的浓度分析结果,7株McAb的相对亲和力为2E6>2F5>2B11>2C10>1A7>1B7>1H7,浓度范围为0.6～10μg/ml。2E6和2C10 2株McAb与HRP结合,用ELISA双抗休夹心法筛选出2F5、2B111和H7 3株McAb适合作为包被抗体。2F5与2E6-HRP配对,建立了快速McAb-ELIS抑制法测定患者血清中抗-HBc。用本法测定了222份临床患者血清标本,结果与“华美”试剂盒测定结果基本一致。     

酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

抗伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立抗伏马菌素B1（FB1）的单克隆杂交瘤细胞株,制备抗FB1的单克隆抗体（McAb）。方法采用FB1-KLH偶联物小剂量长周期免疫BALB/c小鼠后,采用细胞融合方法获得分泌抗FB1的杂交瘤细胞株,采用多次亚克隆的方法建立了4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株。腹水诱生法获得大量McAb,采用抗体亚类测定试剂盒鉴定抗体的亚类,SDS-PAGE测定抗体分子量,McAb的特异性和灵敏度用间接竞争抑制ELISA。结果免疫小鼠血清检测结果显示经过5次免疫后血清的效价稳定在1×10-6,经过4次亚克隆后建立4株稳定分泌抗FB1抗体的杂交瘤细胞株,获得腹水,纯化抗体,抗体亚类属于IgG2a类,轻链为κ,轻链和重链的相对分子质量分别是55000和32000,ELISA检测抗体特异性显示可与FB1发生特异性反应,采用此抗体建立间接竞争抑制ELISA方法的线性范围在2～500ng/ml。结论制备了特异性和灵敏度较高的抗FB1单克隆抗体,为建立伏马菌素免疫学检测方法打下良好基础。     

应用卵巢癌腹水免疫复合物解离抗原(OC_(41))制备单克隆抗体及其OC_(41)特性的研究

应用含有未知肿瘤抗原制备单克隆抗体(McAb),可能是难以获得高特异性抗肿瘤McAb的原因之一。我们从卵巢上皮癌患者腹水中提取免疫复合物(IC),并将其解离为抗体和抗原(OC_(41))免疫荧光证实,解离出的自身抗体与卵巢癌相关;而解离出     

抗骨髓瘤蛋白λ链IgM类单抗的纯化及其活性分析

<正> 本文应用Sephadex G200层析柱直接从小鼠腹水中纯化抗骨髓瘤蛋白λ链IgM类McAb,并对其在280nm波长各吸收峰蛋白的抗体活性进行了测定,现将结果报告如下。