应用PCR技术快速检测伤寒沙门氏菌

目的 研究伤寒沙门氏菌的快速检测方法.方法 采用PCR技术通过两对引物扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性DNA片段及inv A和inv E DNA版段,并用其它致病菌作为对照.结果 仅伤寒沙门氏菌各出现一条特异性扩增带,与已知阳性对照相符,确定为阳性.结论 该PCR方法可用于伤寒沙门氏菌的快速检验,具有抗干扰性强、灵敏性高的特点.     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌

本文采用扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性片段的两对引物，用ＰＣＲ法检测伤寒沙门氏菌与非伤寒沙门氏菌，结果表明阳性符合率达１００％，且反应体系中达１０２ｃｆｕ／ｍｌ浓度时，伤寒沙门氏菌即可检出。检查伤寒确诊患者粪便标本４份，ＰＣＲ扩增均阳性。     

伤寒沙门氏菌扩增片断长度多态性——银染体系的建立

目的建立伤寒沙门氏菌AFLP—银染体系。方法对EcoRⅠ和MseⅠ两种限制性内切酶用量、酶切时间、连接产物及预扩增产物的稀释倍数等进行研究。结果建立了伤寒沙门氏菌AFLP—银染体系在20μl的酶切体系中,含基因组DNA 250ng,EcoRⅠ和MseⅠ各2.5U,37℃下酶切3h;21℃连接过夜;连接产物稀释10倍后进行预扩增;预扩增产物稀释50倍后再进行选择性扩增;选择性扩增完成后加等量Loading buffer,90℃变性3min,立即冰浴;在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分析;银染法检测PCR产物。结论AFLP—银染体系有望在伤寒沙门氏菌的多态性研究和流行病学调查中发挥重要作用。     

我国伤寒沙门氏菌的分子流行病学特征:Ⅱ.部分伤寒沙门氏菌的16S rRNA基因多态性

利用PCR扩增标记的Dig-dUTP-16S rRNA基因为探针,分析我国不同时间和地区分离的119株伤寒沙门氏菌和1株鼠伤寒沙门氏菌染色体经PstI消化后的16S rRNA基因限制性图谱。结果发现,各菌株的杂交片段范围为7.0~26.5kb,每个菌株有5~10条杂交带不等。通过对每个菌株的杂交结果进行数值分类,119株伤寒沙门氏菌可分为38个RTs,其中新疆伊犁1991年流行菌株和大连1990年爆发菌株大部分(13/20)为同一RT;从国内各高发省份分离的一些流行株也有相同的RT;而一些地区的散发菌株具有独特的RT;鼠伤寒沙门氏菌的RT则更为特别。对39个RTs进行聚类分析发现:国内的一些流行菌株,爆发菌株在遗传距离0.55处聚成一大类;而散发菌株,非流行菌株则在0.70处聚成另一类。此外,从健康带菌者分离的菌株251所具有的RT单成一类。鼠伤寒沙门氏菌的距离更远。     

非伤寒沙门氏菌肠道感染和败血症

沙门氏菌约有2200种血清型,尽管大多为非人类沙门氏菌,但不少可引起人类的疾病。人类非伤寒沙门氏菌病的临床表现轻重不一,可有轻到重度的胃肠炎、肠伤寒、严重的败血症,以及诸如骨髓炎和脑膜炎等局灶性感染。作者在1981年1月～1988年3月期间对非伤寒沙门氏菌性败血症的发生率和年龄分布进行了系统的观察。从208例病人中分离到220株非伤寒沙门氏菌,分别从脑脊液(1株)、血(14株)和粪便(205株)中分离     

一种伤寒沙门氏菌分型的新方法

目的 探讨伤寒沙门氏菌分型的新方法。方法 利用PCR扩增标记的Dig-dUTP-16SrRNA基因探针,分析40株伤寒沙门氏菌染色体经Pst Ⅰ消化后的16SrRNA基因限制性图谱。结果 40株伤寒沙门氏菌的分属14个不同的RT,各菌株杂交片段范围为4．4kb-29.7kb,每个RT内有杂交带5－10条不等,绝大多数为5－6条。结论 伤寒长期在某些地区流行可能与一些核糖核酸型仅出现这些地区,存在相对的地区性有关;同一个暴发点菌株具有相同的RT。16SrRNA基因限制性图谱分析可作为追踪传染源和探明传播途径的方法。     

我国伤寒沙门氏菌的分子流行病学特征Ⅱ．部分伤寒沙门氏菌的16SrRNA基因多态性

利用ＰＣＲ扩增标记的Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ－１６ＳｒＲＮＡ基因为探针，分析我国不同时间和地区分离的１１９株伤寒沙门氏菌和１株鼠伤寒沙门氏菌染色体经ＰｓｔⅠ消化后的１６ＳｒＲＮＡ基因限制性图谱。结果发现，各菌株的杂交片段范围为７．０～２６．５ｋｂ，每个菌株有５～１０条杂交带不等。通过对每个菌株的杂交结果进行数值分类，１１９株伤寒沙门氏菌可分为３８个ＲＴｓ，其中新疆伊犁１９９１年流行菌株和大连１９９０年爆发菌株大部分（１３／２０）为同一ＲＴ；从国内各高发省份分离的一些流行株也有相同的ＲＴ；而一些地区的散发菌株具有独特的ＲＴ；鼠伤寒沙门氏菌的ＲＴ则更为特别。对３９个ＲＴｓ，进行聚类分析发现：国内的一些流行菌株，爆发菌株在遗传距离０．５５处聚成一大类；而散发菌株，非流行菌株则在０．７０处聚成另一类。此外，从健康带菌者分离的菌株２５１所具有的ＲＴ单成一类。鼠伤寒沙门氏菌的距离更远。     

两株无鞭毛鼠伤寒沙门氏菌的微生物学诊断

1981年锦州医学院附属医院儿科病房发生两起鼠伤寒沙门氏菌院内交叉感染,我们从2例患肺炎兼有腹泻的病儿粪便中分离出两株无鞭毛“B”群沙门氏菌。经常规检验,不能确定其型别。但经采用紫外线照射以诱导菌株释放噬菌体,并侵染鼠伤寒沙门氏菌LT:株进行增殖,用此噬菌体为转导媒介,处理两株无鞭毛菌株后,终于确定两株无鞭毛细菌为典型的双相鼠伤寒沙门氏菌。     

脉冲场电泳技术在一起鼠伤寒沙门氏菌食物中毒病原溯源中的应用

目的 对食物中毒主要病原菌鼠伤寒沙门氏菌进行分子分型,研究分析其相关性,以达到准确溯源,从而快速有效的控制由其引起的食物中毒的目的.方法 用Xba I酶切某起食物中毒分离到的33株鼠伤寒沙门氏菌后,应用脉冲场凝胶电泳技术进行分型.结果 酶切后的脉冲场凝胶电泳凝胶图有13条带,所有分离到的鼠伤寒沙门氏菌的图谱完全一致,相似度达100%.结论 所分离到的33株鼠伤寒沙门氏菌具有相同来源,厨师与该起食物中毒密切相关,脉冲场凝胶电泳技术可应用于由鼠伤寒沙门氏菌引起的突发公共卫生事件病原准确溯源.     

甘肃省部分地区鼠伤寒沙门氏菌噬菌体分型、耐药性及质粒检测

我们于1990年7月～1991年8月从食物中毒、腹泻病患者排泄物中分离出276株鼠伤寒沙门氏菌,并进行了噬菌体分型、耐药性测定、质粒检测试验。现报告如下。材料与方法:(1)测试菌株:276株鼠伤寒沙门氏菌是从本省兰州市、武威市、白银市、临夏4市搜集。(2)标准菌株:大肠ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、金萄菌ATCC25923;质粒检测用标准E·Coli V517;均由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。(3)鼠伤寒沙门氏菌噬菌体:由中国医学细菌保藏     

鼠伤寒沙门氏菌与耐药性之间的关系

鼠伤寒沙门氏菌是世界各地沙门氏菌属流行中最常见的病菌。美国1963～1967年发生180宗沙门氏菌流行,其中44宗由本菌所致。法国1958～1970年分离的沙门氏菌属总数中,鼠伤寒沙门氏菌占15～20%。英国1964～1966年小牛感染本菌有所增加。德黑兰从1962～1973年对菌痢所作的流行病学研     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌H及Vi抗原基因的应用研究

应用巢式聚合酶链反应技术，通过两种引物（共四对）分别对伤寒沙门氏菌鞭毛Ｈ和Ｖｉ抗原基因扩增，并用非伤寒沙门氏菌作对照。实验表明，两种基因的扩增产物均是特异的，Ｈ抗原基因引物仅对伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因扩增，Ｖｉ抗原基因引物对伤寒沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原基因扩增，余均为阴性。扩增Ｖｉ抗原基因比扩增Ｈ抗原基因敏感，当反应体系中达０．５个菌细胞时，Ｖｉ抗原基因就可检出，而鞭毛抗原基因则需５个菌细胞。检测９２例伤寒患者血液标本，血培养阳性２８例（３０．４３％），巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因阳性３３例（３５．８６％），Ｈ抗原基因阳性３１例（３３．７０％）。伤寒发病早期，当机体伤寒特异性抗体尚处于低水平时，应用巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因，可提高伤寒的诊断率，使该病得到早期治疗     

用相应噬菌体快速鉴定鼠伤寒沙门氏菌的报告

用自已分离的鼠伤寒沙门氏菌(STM)噬茵体 L_1对136株 STM 和20余株非 STM 进行了裂解试验,结果130株 STM 被裂解,裂解率为95.6%。其它伤寒、痢疾杆菌20余株均不裂解。证明噬菌体裂解试验具有特异、快速、简易等特点,适合各种环境的检验。     

鼠伤寒沙门氏菌噬菌体分型及药敏试验

鼠伤寒沙门氏菌噬菌体分型及药敏试验苏州市卫生防疫站任德生林建国鼠伤寒沙门氏菌是引起食物中毒和腹泻，特别是引起婴幼儿院内感染的重要病原菌。为摸清我市鼠伤寒沙门氏菌噬菌体型别分布及药敏情况，我们收集了２７株鼠伤寒沙门氏菌进行噬菌体分型及耐药性试验，现将结...     

伤寒沙门氏菌在伤寒病人及其带菌者骨髓内的变异

伤寒沙门氏菌在伤寒病人和带菌者骨髓内发生变异,已在骨髓细胞体外培养中得到证实。本文作者选择12例不同病期的伤寒病人(20～67岁)、26名带菌者、5名伤寒病人的密切接触者及5名对照者,分别用直接免疫荧光法和间接免疫荧光法(用兔抗伤寒沙门氏菌L型血清)检查骨髓片中伤寒沙门氏菌和L型。同时取粪便、尿液、血液、胆汁及骨髓进行细菌培养和血清学诊断。     

从伤寒病人分离的甲型副伤寒沙门氏菌药敏结果

近年来甲型副伤寒在绍兴地区呈局部流行 ,为了解甲型副伤寒沙门氏菌的耐药情况 ,对 1998年以来从伤寒病人血液中分离的 76株甲型副伤寒沙门氏菌进行了常用抗菌药物的敏感性测定。1　材料与方法76株甲型副伤寒沙门氏菌于 1998年以来从住院和门诊伤寒患者血液中分离 ,其中绍兴市第六人民医院 4 6株 ,绍兴第二医院 30株 ;住院患者 72株 ,门诊患者 4株 ;有 3株自复发病人血液中检出。沙门氏菌属诊断血清系卫生部兰州生物制品研究所生产。药敏试验采用琼脂扩散法 ,Ｍ -Ｈ琼脂购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所 ;药敏纸片为法国生物 -梅里埃公司…     

伤寒和副伤寒沙门氏菌接合性R质粒的检测

近年来,国内外关于伤寒沙门氏菌抗药性的报道越来越多。但关于从抗药性伤寒及副伤寒沙门氏菌检测R质粒,国内尚少报道。作者检测了各菌株对五种抗生素的抗药性并进行了接合性R质粒的检测,现将实验结果报告如下。材料与方法一、实验菌株107株伤寒沙门氏菌分别引自黑龙江省(54株,1980年分离)、吉林省(39株,1978～1980年分离)和辽宁省(14株,1958～1963年及1980年分离);2株乙型副伤寒沙门氏菌来自吉林省。全部菌株均经形态、生化     

分离发酵乳糖的伤寒沙门氏菌的实验研究

伤寒沙门氏菌不发酵乳糖,但有发酵乳糖的变种。笔者近几年自健康带菌者检查分离出2株发酵乳糖的伤寒沙门氏菌,现报告如下:     

聚合酶链反应结合斑点杂交技术检测伤寒沙门氏菌的临床应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性的ＤＮＡ片断，再用地高辛标记探针与之杂交检测，并用非伤寒沙门氏菌作对照，结果仅伤寒沙门氏菌阳性。实验表明，当标本中伤寒沙门氏菌含量达１０ｃｆｕ／ｍｌ时，即可检出。在伤寒发病早期，当机体抗体水平尚处于低水平时，应用ＰＣＲ斑点杂交检测伤寒沙门氏菌可提高伤寒的诊断率；在伤寒病程后期，应用ＰＣＲ斑点杂交检测治疗后带菌状态具有重要价值。     

山东省伤寒沙门氏菌噬菌体分型和耐药性检测

近年来国内伤寒疫情有逐年上升趋势,而不少伤寒暴发是由耐药性强的M_1噬菌体型伤寒沙门氏菌引起,我省至1989年尚未见M_1型菌株的报道。为了解山东省伤寒沙门氏菌噬菌体型别及耐药性的变化,为现场防治提供科学依据,我们将收集保存本省各地1979年至1991年分离的伤寒沙门氏菌进行了噬菌体分型和耐药性的测定,现将结果报告如下: