M-CSF对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

揭示巨噬细胞集落刺激因子是否能保护单核巨噬细胞免受过氧化损伤。方法以Ｌ９２９细胞条件培养液作为Ｍ－ＣＳＦ来源,以细胞显微形态,细胞活力等指标,观察了Ｍ－ＣＳＦ对叔丁基氢化物诱导的巨噬细胞系ＲＡＷ２６４．７细胞氧化损伤的影响。结论Ｍ－ＣＳＦ对单核巨噬细胞的氧化损伤具有保护作用。     

M-CSF基因转染对RAW264.7细胞氧化损伤的影响

目的 揭示巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）对单核／巨噬细胞氧化损伤的影响。方法采用真核细胞基因导入的脂质体转染方法,建立了两侏Ｍ～ＣＳＦ基因过表达的ＰＡＷ２６４．７细胞系,并观察了氧化剂叔丁基氢过氧化物（ｔｂＯＯＨ）对该ＲＡＷ２６４．７细胞的氧化损伤作用。结果用Ｍ－ＣＳＦ基因转染的ＲＡＷ２６４．７细胞具有较强的分泌有活性Ｍ－ＣＳＦ的能力,而与正常ＲＡＷ２６４．７细胞相比,Ｍ－ＣＳＦ过表达的ＲＡＷ     

氧化剂对RAW264.7细胞M-CSF

目的:揭示氧化应激对巨噬细胞巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)基因表达的影响。方法:采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,观察氧化剂叔丁基氢过氧化物(tbOOH)对RAW264.7细胞M-CSFmRNA表达的影响。结果:一定浓度的tbOOH(1.5×10-4mol/L)能够诱导RAW264.7细胞M-CSFmRNA表达,且随tbOOH浓度的增加,其对M-CSFmRNA的诱导作用增强;另外,环己酰亚胺(cycloheximide)及acetovanilone可减弱tbOOH对RAW264.7细胞M-CSF表达的诱导。结论:tbOOH可诱导RAW264.7细胞M-CSFmRNA的表达,且作用在转录水平,该过程中有新的蛋白质合成及内源性活性氧产生的参与。     

M-CSF诱导MnSOD表达减轻RAW264.7细胞氧化损伤

为探讨巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）对单核巨噬细胞氧化损伤的保护作用,以富含M－CSF的小鼠L929细胞条件培养液（L929－CM）作为M－CSF来源,以小鼠巨噬细胞系RAW264．7为模型,从形态学上观察了M－CSF对叔丁基氢过氧化物（tbOOH)引起的RAW264。7细胞氧化损伤的保护作用;并采用酶活性测定、TR－PCR等方法,他M－CSF对RAW264．7细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性及基因表达的影响。结果发现,M－CSF可以减轻tbOOH对RAW264．7细胞的氧化损伤;M－CSF可以提高细胞总SOD活性;M－CSF还可增强RAW264．7细胞MnSOD mRNA的表达,且这一诱导作用可被放线菌素D（actinomycinD)阻断。提示M－CSF可通过诱导细胞MnSOD表达而减轻RAW264．7细胞的氧化损伤。     

M-CSF对RAW264.7细胞抗氧化系统的影响

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,Ｍ－ＣＳＦ）抗单核／巨噬细胞氧化损伤的作用机理,揭示Ｍ－ＣＳＦ对小鼠巨噬细胞系ＲＡＷ２６４．７细胞抗氧化系统影响。方法：以Ｌ９２９细胞条件培养液为Ｍ－ＣＳＦ来源,采用酶活笥测定等生化测定方法,考察Ｍ－ＣＳＦ细胞内还原型谷胱甘肽含量、脂质过氧化物含量、过氧化氢酶活性、谷胱甘肽还原酶活性等检测指标     

MicroRNAs途径在RAW264.7细胞中作用的初步研究

目的通过检测microRNAs生成的关键酶Dicer在RAW264.7细胞不同功能状态下的表达差异研究microRNAs途径在其中产生的作用。方法采用QRT-PCR、流式细胞术等对RAW264.7细胞在不同功能分化状态下的Dicer酶进行检测。结果GMCSF与MCSF分别刺激RAW264.7细胞诱导其增殖分化后,Dicer酶的mRNA水平显著增高,但随刺激时间呈现不同趋势(P<0.01);在诱导凋亡死亡状态下,RAW264.7中Dicer酶的表达下降30%(P<0.01);LPS与IL-4分别诱导RAW264.7细胞分化为M1和M2型,Dicer的表达与M1、M2型相关炎性因子的表达有相关性。结论 MicroRNAs调控途径参与并影响RAW264.7不同功能状态。     

TGF-β对RAW264.7细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨TGF-β对RAW264.7细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RANKL和M-CSF诱导RAW264.7细胞培养24 h后,用不同浓度TGF-β分别作用RAW264.7细胞24、48、72 h。使用CCK-8试剂盒、流式细胞术及RT-PCR检测破骨前体细胞增殖、凋亡和特征性基因的表达差异。结果不同浓度(1、2、5 ng/mL)的TGF-β均能抑制RAW264.7细胞增殖,且与时间、浓度有关。TGF-β(5 ng/mL)处理组培养72 h后与其他浓度处理组相比,细胞增殖明显降低,细胞总凋亡率及线粒体凋亡通道相关基因Caspase-3、Caspase-8表达升高,差异具有显著性(P0.05)。结论 TGF-β抑制RAW264.7细胞增殖,促进其凋亡,表明TGF-β在骨改建中发挥重要作用。     

Krüppel样因子4基因干扰对RAW264.7细胞凋亡和吞噬的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW264.7巨噬细胞Krüppel样因子4(KLF4)基因,建立稳定干扰细胞株,观察其对细胞增殖、凋亡和吞噬活性的影响.方法 针对小鼠KLF4基因设计合成重组KLF4 shRNA质粒,脂质体法将重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株.Western blot法检测细胞中KLF4蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;荧光素标记的大肠杆菌结合流式细胞仪检测细胞的吞噬活性.结果 KLF4 shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的KLF4蛋白的表达,抑制率76％以上;从第3天开始,shKLF4组细胞的生长速度明显低于NC组(转染阴性质粒pGPU6/GFP/Neo-NC)(P ＜0.05);WT组(野生型RAW264.7)、NC组和shKLF4组的细胞凋亡率分别为:1.73％、6.85％和12.76％,shKLF4组明显高于NC组(P＜0.05);各组细胞的平均荧光强度分别为:WT组(122.0±2.80)、NC组(48.97±5.69)和shKLF4组(80.10 +4.61),与NC组相比,shKLF4组的细胞吞噬活性明显增高(P＜0.05).结论 成功构建了稳定干扰KLF4基因表达的RAW264.7巨噬细胞株,KLF4下调能够明显抑制RAW264.7细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的吞噬活性.     

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14、P38、iNOS表达的影响

目的 探讨槐定碱不同给药方式对内毒素诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞表达CD14、p38 MAPK及i NOS的影响及意义。方法 采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型;实验细胞分为4组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱预处理组、槐定碱预混合组;分别利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p38、i NOS m RNA表达量及蛋白表达量。结果 槐定碱2种给药方式(预处理及预混合)均可显著下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、i NOS m RNA及CD14、p-p38、i NOS蛋白表达;槐定碱与LPS预混合可下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14 m RNA表达,而槐定碱预处理对CD14 m RNA表达无明显影响。结论 槐定碱可能通过调控CD14、p38、i NOS表达与活化发挥抗内毒素效应。     

姜黄素对LPS刺激RAW264.7细胞PGE_2和IL-10影响

目的:观察姜黄素对脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞炎症因子的影响。方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度姜黄素进行干预,ELISA法检测培养上清液中抗炎细胞因子IL-10和炎症因子PGE2含量。结果:姜黄素可抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进抗炎因子IL-10表达,并呈一定量效关系,其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关。结论:姜黄素呈浓度依赖性地抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进IL-10表达。     

Effect of macrophage colony stimulating factor overexpression on oxidative injury/resistance of RAW264.7 cells

Oxidative injury to monocytes/macrophages is considered one of the key factors in atherogenesis. Macrophage colony stimulating factor (M-CSF) also plays an important role in the stages of atherosclerosis. Some researchers showed that M-CSF accelerated pathological changes in the early stages of atherosclerosis. However, other reports suggested that exogenous M-CSF could prevent the progress of atherosclerosis. To further investigate the role of M-CSF in atherogenesis and to elucidate the effect of M-CSF on the oxidative injury to monocytes/macrophages, RAW264.7 cell lines overexpressing M-CSF were established by applying the lipofectin transfection method. The oxidative injurious effect of tert-butylhydroperoxide on the established cell lines was investigated. Two M-CSF-transfected RAW264.7 cell lines secreted large amounts of M-CSF. Compared with the non-transfected RAW264.7 cells, M-CSF-overexpressing RAW264.7 cells were more vulnerable to oxidative injury. We conclude that M-CSF could aggravate the oxidative injury due to macrophages in some situations. Received: 21 August 2002 / Accepted: 12 March 2003 Correspondence to Z.-J. Pang     

草木犀石油醚提取物对小鼠巨噬细胞促炎介质的影响

目的 研究草木犀石油醚提取物在体外的抗炎作用.方法 采用小鼠巨噬细胞系RAW 264.7建立炎症细胞模型,加入10 μg/L的LPS培养液和不同浓度的草木犀石油醚提取物进行干预.ELISA法检测上清液中TNF-α, IL-1β, IL-6和NO的分泌量;实时荧光定量RT-PCR检测TNF-α, iNOS 和 COX-2的 mRNA表达;Western 印迹法检测COX-2 蛋白的表达.结果 草木犀提取物干预后细胞所分泌的炎性介质(TNF-α, IL-1β, IL-6和NO)与模型组相比均显著降低(P＜0.01),并存在剂量依赖关系;RT-PCR结果显示干预后细胞TNF-α,iNOS和COX-2的mRNA表达水平显著降低(P＜0.01),也存在剂量依赖关系;Western印迹结果显示草木犀石油醚提取物及地塞米松干预后COX-2蛋白水平明显降低(P＜0.01).结论 草木犀的石油醚提取物通过下调LPS诱导的巨噬细胞表达炎性介质而发挥其体外抗炎作用, 且其下调作用呈剂量依赖性.     

核内M-CSF对NIH3T3细胞内微丝的影响

目的建立M-CSF核内稳定表达的NIH3T3细胞系,探讨核内M-CSF对细胞骨架的影响。方法经脂质体介导核内定位表达重组体pCMV/M-CSF转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用Rt-PCR、免疫细胞化学鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用考马斯亮蓝染色细胞微丝测定M-CSF进入细胞核后对细胞骨架的影响。结果RT-PCR结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSFmRNA;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。考马斯亮蓝染色结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。结论核内M-CSF可引起NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。     

槐定碱抑制LPS诱导巨噬细胞株NF-κB表达

 摘 要：目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63mg/L,作用5、30、60、120min,分别获取细胞与培养液。RT - PCR与Western Blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P < 0.01);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P < 0.01)。结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF – α分泌是其抗内毒素作用机制之一。