他克莫司对糖尿病大鼠肾组织NF-κB调节的影响

目的观察糖尿病大鼠肾组织NF-κB的变化,探讨他克莫司(FK506)肾脏保护作用的机制。方法采用腹腔内注射链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型。随机均分为对照组(A组)、模型组(B组)、FK506 0.5 mg/kg.d给药组(C组)及FK506 1.0 mg/kg.d给药组(D组)。4周后观察大鼠肾重/体重(RKW)、24 h尿白蛋白排泄率(UAER)及肾组织病理形态改变。应用免疫组化法和Western blot法检测肾组织中NF-κB p65及NF-κB p-p65的表达。结果 C、D组大鼠UAER明显低于B组(P<0.05,P<0.01)。D组大鼠RKW明显低于B组(P<0.05)。C、D组容积较B组均明显降低(P<0.05),D组肾小管间质-损伤指数也明显低于B组(P<0.01)。免疫组化法结果显示B组大鼠肾组织NF-κB p-p65蛋白表达明显高于A组(P<0.01),而与B相比,C、D组肾组织NF-κB p-p65表达明显减少(P<0.01,P<0.01)。Western blot法结果显示B组肾组织NF-κB p65表达较A组增加5.33倍,C、D组肾组织NF-κB p65表达较B组分别下降26.32%与47.37%。B组肾组织NF-κB p-p65表达较A组增加7.57倍,C、D组肾组织NF-κB p-p65表达较B组分别下降56.67%和70.00%。结论 FK506能显著改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其分子机制可能与下调NF-κB表达有关。     

FTY720与他克莫司对脊髓损伤有显著疗效

目的:探讨FTY720与他克莫司(FK506)对脊髓损伤后神经功能保护作用的差别.方法:雄性SD大鼠48只随机分为4组,FTY720治疗组,FK506治疗组,损伤(不给药)组和正常对照.参照Allen's法建立T10脊髓损伤动物模型,分别予FTY720与FK506治疗.伤后1、3、7、14、21天行BBB评分及斜板试验,伤后3周行体感诱发电位(SEP)检查及T10段脊髓切片HE染色.结果:神经功能BBB评分、斜板最大角度及体感诱发电位检测,FTY720治疗组均优于FK506治疗组,差异有显著性(P＜0.05);HE染色可见损伤组脊髓内大量神经元坏死,用药治疗各组神经元坏死较轻,其中以FTY720组最轻.结论:脊髓损伤后早期应用FYY720与FK506治疗均有显著疗效,两者相比又以FTY720效果更优.     

间歇性高糖对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52EA转分化的影响

目的:探讨间歇性高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52EA转分化干预作用。方法:NRK-52E细胞分为空白组、正常葡萄糖组、高糖组、间歇性高糖组,分别作用72 h后,Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶-2(MMP-2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)的表达;CM2H2DCFDA试剂盒检测活性氧(ROS)含量。结果:高糖组及间歇性高糖组NRK-52E细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达均上调;间歇性高糖组TGF-β1、MMP2以及α-SMA表达水平较高糖组高(P均<0.05),其ROS含量也显著高于高糖组(P<0.01)。结论:间歇性高糖能通过氧化应激诱导肾小管导管上皮细胞表达TGF-β1、MMP2,并促进NRK-52EA细胞转分化为α-SMA细胞。     

赛氏与进口他克莫司用于同种肝移植的有效性和安全性比较

目的观察同种肝移植患者使用中美华东制药有限公司生产的他克莫司(Tac)胶囊(赛氏)或进口Tac进行三联免疫抑制剂治疗的临床有效性和安全性。方法采取随机对照、前瞻性临床研究,将60例肝移植受者随机分入Tac国产组和进口组,分别使用国产Tac+吗替麦考酚酯(MMF)+激素和进口Tac+MMF+激素免疫方案治疗。两组患者肝移植术后24h口服Tac,起始剂量为0.05～0.1mg/(kg.d),每12h给药1次,术后90d内维持谷浓度水平6～10ng/mL范围内,90d以后维持为2～6ng/mL,直至观察终点(术后90d)。收集术后90d内受试者生命体征、不良事件、血常规、尿常规、肝功能、血糖、血脂及Tac的谷值浓度信息。结果观察期内证实的急性排斥反应Tac国产组和进口组都为10%(3/30);肝肾毒性反应及感染发生率两组差异无统计学意义(P>0.05),Tac国产组发生高血压和高脂血症比进口组少(P>0.05),但Tac国产组出现高血糖比进口组多(P>0.05)。结论国产Tac与进口Tac在临床应用上有同等的有效性和安全性。     

他克莫司联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性脊髓损伤后的再生修复实验研究

目的观察用他克莫司(tacrolimus,FK506)联合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)移植对脊髓损伤后再生的影响,进一步探讨两者对急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用和机制。方法钳夹法制作SD(Spraque-Dawley)大鼠急性脊髓损伤动物模型30只,随机分成三组。A组为单纯损伤组,B组为单纯骨髓干细胞移植组,C组为骨髓干细胞联合FK506组。A、B、C三组一周后再次手术,暴露出原脊髓损伤处,A组将生理盐水10μl用微量注射器注入于脊髓损伤区域远近端;B、C两组将体外培养的骨髓间充质干细胞10μl用微量注射器分别注入于脊髓损伤远近端;C组同时另行腹腔再注射0.25%FK506一次,用量1mg/kg。期间加强动物的护理,于术前、术后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分、斜板实验及后肢行为学评分观察神经恢复情况。8周后取材,行免疫组化检查及病理学检查。结果各组BBB评分B、C两组大鼠后肢运动功能恢复较明显,B、C组注射细胞后2周开始出现后肢活动,逐步恢复排尿,伤后4周变化最为明显,可见明显后肢活动和尾巴的摆动,伤后8周,已可见协调运动,C组的恢复情况较B组为快,BBB最高评分可达14分,A组亦有所恢复,但程度较轻。B、C两组评分高于A组,B、C两组统计学上有差异(P<0.05)。C组与A组在6周以后的评分有显著性差异(P<0.01)。斜板实验和后肢行为学评分与BBB评分类似。免疫组化显示:A组切片见伤处为瘢痕连接,结构紊乱,邻近有明显空洞形成,未见神经轴索通过。B、C组亦见瘢痕形成,但可见少量神经轴索样结构。A组伤处邻近神经元胞体NF200阳性细胞较少,邻近脊髓组织GFAP阳性细胞亦较少。B组伤处可见GFAP及NF阳性纤维,但排列较紊乱,无正常结构。C组较B组邻近脊髓神经元胞体NF200阳性细胞较多,GFAP阳性细胞亦较多。C组大鼠脊髓损伤边缘Nogo阳性神经元较A、B两组明显减少。结论脊髓损伤的大鼠移植的大鼠骨髓间充质干细胞在脊髓损伤部位能长期存活,并能向邻近脊髓内迁徙,骨髓间充质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用;联合应用FK506有协同效果;脊髓损伤后功能恢复需要一个多种神经因子共同参与的复杂的微环境。     

他克莫司对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响。方法应用链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型。分别给予FK506 0.5、1.0 mg/kg.d灌胃,共4周。随机分对照组、模型组、FK506(0.5,1.0 mg/kg)组。4周后观察大鼠肾重/体重(RKW)与尿白蛋白排泄率(AER),并行肾小管-间质病理形态学分析。应用免疫组化法检测肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与波形蛋白(Vimentin)的表达。结果FK506 1.0 mg/kg给药组大鼠相对肾重、肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化显示模型组肾小管间质E-cadherin表达阳性面积明显低于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达阳性面积明显高于模型组(P<0.01),模型组肾小管α-SMA与Vimentin表达明显高于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达明显低于模型组(P<0.01)。结论 FK506可部分上调E-cadherin及下调α-SMA与Vimentin在肾小管间质中的表达,抑制糖尿病大鼠肾小管-间质转分化,从而起到肾脏保护作用。     

白蛋白联合低氧对NRK-52E细胞凋亡的影响

目的:探讨白蛋白联合低氧对肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响.方法:应用流式细胞技术检测NRK-52E细胞在不同质量浓度白蛋白(0、10、20、30和40 g/L)和常氧(含体积分数为5%CO2的空气)条件下培养24 h的凋亡率,得到最适的白蛋白质量浓度;再应用流式细胞技术检测NRK-52E细胞在30 g/L白蛋白和低氧(体积分数为1%O2、5%CO2和94%N2)联合培养24 h的凋亡率,同时设常氧对照组、低氧对照组和常氧+30 g/L白蛋白培养组.采用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达.结果:在常氧环境下NRK-52E细胞凋亡率随白蛋白质量浓度的增加而增高(F=55.748,P＜0.001).常氧对照组、低氧对照组和常氧+30 g/L白蛋白培养组及低氧+30 g/L白蛋白培养组NRK-52E细胞凋亡率(F=112.174,P＜0.001)、bax mRNA(F=114.522.P＜0.001)和bcl-2 mRNA(F=63.097,P＜0.001)的表达差异均有统计学意义.低氧+30 g/L白蛋白培养组的凋亡率[(37.36.±4.95)%vs(25.59±3.32)%.P＜0.05)和bax mRNA的表达(2.54±0.19vs1.87±0.19,P＜0.05)高于常氧+30 g/L白蛋白培养组,而bcl-2 mRNA的表达则低于常氧+30 g/L白蛋白培养组[(0.42±0.08)vs(0.66±0.05)](P＜0.05).结论:低氧可加剧向蛋白诱导的NRK-52E细胞凋亡,其机制可能与促进bax mRNA高表达和bcl-2 mRNA低表达有关.     

他克莫司对肾小管上皮细胞转分化早期CTGF、VEGF表达的影响

目的探讨不同剂量的他克莫司(FK506)对肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用及其对早期结缔组织生长因子(CTGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法以体外培养的HKC为研究对象,分4组:(1)对照组;(2)转化生长因子-β1(TGF-β1)(8ng/mL)组;(3)FK506(10、30、60ng/mL)组;(4)TGF-β1(8ng/mL)加FK506(10、30、60ng/mL)组。应用形态学、免疫组化技术、和半定量反转录PCR(RT-PCR)观察FK506对TGF-β1诱导的HKC转分化的作用及对α-SMA、CTGF、VEGF表达的影响。结果与对照组比较,48h后TGF-β1组HKC细胞呈现出长梭形外观,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CTGF、VEGF的表达明显增多(P<0.01),FK506组α-SMA、VEGF及CTGF的表达差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β1加FK506组比TGF-β1组α-SMA、VEGF及CTGF随FK506的浓度增加表达明显降低(P<0.05)。结论 FK506对TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化早期可能通过下调VEGF、CTGF的表达起抑制作用。     

环孢素A使谷丙转氨酶升高切换他克莫司的临床观察

我院近2年对肾脏移植手术后,部分病人应用免疫三联药物环孢素A(CsA)、激素(Pred)、霉酚酸酯(MMF),进行抗排斥反应治疗。现将24例出现谷丙转氨酶升高,通过切换他克莫司(FK506)药物的临床资料报告如下。     

自体血清联合0.1％他克莫司滴眼液治疗慢性移植物抗宿主病相关干眼的临床研究

目的:观察自体血清联合0.1％他克莫司(FK506)滴眼液对慢性移植物抗宿主病(cGVHD)相关干眼的治疗效果.方法:回顾性分析2016年1月至2018年11月在我院诊治的造血干细胞移植术后cGVHD相关干眼患者12例(24眼)的临床资料,患者给予0.1％他克莫司(FK506)滴眼液联合自体血清、人工泪液进行治疗4周....     

ATP缺失对大鼠近端肾小管上皮细胞中肌动蛋白磷酸化水平的影响

目的:研究ATP缺失时大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)肌动蛋白磷酸化水平的改变?方法:建立细胞的体外ATP缺失模型,用免疫印迹技术检测细胞内骨架组分及胞浆组分中肌动蛋白的分布变化;用二维电泳法分离并比较细胞内磷酸化和非磷酸化的肌动蛋白含量的改变;用免疫共沉淀法及免疫印迹技术检测ATP 缺失后细胞内肌动蛋白酪氨酸?苏氨酸及丝氨酸磷酸化水平变化?结果:ATP缺失处理后细胞内F-肌动蛋白含量逐渐增加,G-肌动蛋白含量逐渐减少;ATP缺失细胞内磷酸化肌动蛋白量明显增加,肌动蛋白的磷酸化程度随ATP缺失时间延长而增加;ATP缺失处理后肌动蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐升高,且与ATP缺失程度呈相一致;肌动蛋白苏氨酸磷酸化水平无明显变化?结论:ATP缺失后近端肾小管上皮细胞肌动蛋白出现聚合过程,可能与细胞中肌动蛋白磷酸化酪氨酸水平增加有关?     

他克莫司对TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的 研究他克莫司(FKS06)对转化生长因子-β 1(TOF-β 1)刺激人肾小管上皮细胞(HKC)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,以探讨其抗肾小管间质纤维化的机制.方法 以体外培养的HKc为研究对象,分为以下4组:①阴性对照组.②TOF-β 1(8ng/m1)阳性对照组,③TOF-β 1(8ng/m1)加FK506(10、30、60ng/m1)组.应用免疫组化方法检测VEOF蛋白的表达,应用RT-PCR方法检测VEOFmRNA、α-SMAmRNA的转录水平.结果 阴性对照组HKC有基础量的VEGF和微量的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.阳性对照组细胞呈现出长梭形外观,α-SMA与VEGF表达明显上调与阴性对照组有显著差异(P<0.01).FK506以剂量依赖的方式抑制TGF-β 1诱导的β-SMA及VEGF的表达(P<0.0或P相似文献   

益母草石油醚提取物对大鼠肾小管上皮细胞的毒性研究

【目的】观察益母草石油醚提取物（petroleum ether extract，PEE）对大鼠肾小管上皮细胞的毒性影响及其机制。【方法】将NRK52E大鼠肾小管上皮细胞用不同剂量的PEE处理，HE染色光镜下观察各组NRK52E细胞总数及凋亡指数，并提取各组细胞蛋白质，用WesternBlotting方法观察各组BCl-2，HO-1（血红素加氧酶-1）表达水平。【结果】体外培养结果显示PEE可使大鼠肾小管上皮细胞凋亡增加（P〈0．001）。可致NRK52E细胞总数明显减少（P〈0．001）。同时小剂量益母草石油醚提取物也可使NRK52E细胞17．31—2、H0-1表达增加（P〈0．01）。【结论】PEE对肾小管上皮细胞的损伤机制是引起凋亡增多，该机制并非通过下调抗凋亡蛋白BCL-2途径，益母草致毒性成分可能主要在于石油醚提取物中。     

FK506对肾脏保存中肾细胞凋亡的影响

目的探讨肾脏保存中肾细胞凋亡及FK506的作用。方法建立离体大鼠肾脏模型,采用细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL),分别检测肾脏保存2、4、8、16h组肾细胞凋亡及FK506对其表达的影响。结果FK506保存组8、16h组肾细胞凋亡指数明显低于对照组(P<0.05)。结论FK506使肾脏保存中肾细胞凋亡减少。FK506对肾脏保存过程中的损伤具有保护作用。     

他克莫司对多发性硬化大鼠髓鞘碱性蛋白的动态变化及影响

目的探讨他克莫司（FK506）对多发性硬化（MS）大鼠髓鞘碱性蛋白检测的动态变化及影响。方法将试验动物随机分为两组,对照组（10只）予以实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）＋生理盐水组;研究组（12只）在EAE诱导的第1～7天,每日腹腔内注射剂量为1 mg/kg的FK506,其中急性发作期8只,缓解期4只。检测研究组和对照组周围血和脑脊液髓鞘碱性蛋白（MBP）的水平,并动态观察应用他克莫司治疗前及治疗后不同时间MBP的变化情况。结果研究组血清和脑脊液中的MBP水平均显著高于对照组（P〈0.05）。且两组脑脊液中的MBP水平均显著高于血清中MBP水平（P〈0.05）。研究组大鼠急性发作期及缓解期血清及脑脊液中MBP水平分别明显高于对照组（P〈0.01）,且大鼠急性发作期MBP水平血清及脑脊液中均分别显著高于MS缓解期（P〈0.01）。且大鼠脑脊液MBP和血清MBP水平呈正相关（r=0.562,P〈0.01）。12只大鼠予以他克莫司腹腔注射后,治疗后的第3天及治疗后第7天血清和脑脊液MBP水平均较治疗前明显降低,且脑脊液MBP水平较血清MBP水平降低更明显（P〈0.01）。结论通过检测周围血和MBP的水平,并动态观察应用他克莫司治疗前及治疗后MBP的变化情况,一方面对判断MS预后、病情严重程度和临床诊断具有重要的临床意义,另一方面可能为预防多发性硬化的临床复发提供一种有效的新药提供指导依据。     

他克莫司对大鼠血糖的影响及其作用机制

目的 观察不同浓度的他克莫司对大鼠血糖的影响。方法选取雄性SD大鼠30只,体重70～85 g,随机等分为三组。 A组大鼠为他克莫司加五脂胶囊组,每日给予他克莫司(普乐可复 Astellas Ireland Co., Ltd生产)2 mg/kg和五酯软胶囊(四川光大制药有限公司生产)0.2粒/kg; B组为他克莫司组,每日给予他克莫司2 mg/kg; C组为对照组,每日给予同等量生理盐水,三组大鼠均在空腹时灌胃给药,用药1h后喂食。用药时间为5个月。每月监测大鼠他克莫司血药浓度和空腹血糖。结果在用药的1~5个月期间,A组大鼠他克莫司血药浓度均明显高于B组。在用药的第1个月和第2个月,三组大鼠空腹血糖无明显差异(P>0.05),用药第3个月后,A、B两组大鼠血糖均明显高于对照组(P<0.01),A组大鼠血糖略高于B组,二者之间差异并无统计学意义(P>0.05);用药第4、5个月后A、B两组大鼠的血糖持续升高,并且A组大鼠血糖明显高于B组(P<0.01);A组的胰岛素分泌指数和敏感指数均明显低于C组(P<0.01)。 结论他克莫司通过减少胰岛素的分泌、增加胰岛素抵抗导致大鼠血糖升高,这种升血糖作用呈时间依赖性和浓度依赖性。     

异亮氨酸对他克莫司发酵的影响

研究了前体氨基酸对发酵合成他克莫司的影响,结果显示:在发酵初期添加2.5 g/L的异亮氨酸(Ile),他克莫司产量提高约59%。有机酸分析和丙酰CoA合成酶与丙酰激酶活性测定的结果显示:异亮氨酸的加入显著增加了丙酸(Pro)的浓度,在产物合成期丙酰CoA合成酶的最大酶活提高到600 U/g。由此表明该前体氨基酸促进他克莫司发酵合成的原因可能是其促进了丙酰CoA等前体物质的合成,从而增进了内酯环的形成。     

HPLC检测他克莫司软膏剂中他克莫司的含量

目的 建立并验证高效液相色谱法检测他克莫司软膏中他克莫司的含量.方法 Ultimate(R) XB-Diol色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为正己烷-正丁基氯-乙腈;检测波长 225 nm;流速 1.7 mL/min;温度:室温.结果 他克莫司的线性范围Y=2 600.7X-583.82,相关系数...     

他克莫司治疗对母乳喂养的影响

背景:因为免疫抑制剂的安全性尚未确定,对实体器官移植的受者产妇通常不建议进行母乳喂养。有限的资料显示婴儿通过乳汁接受的他克莫司的量很少。本报道分析了1例肾移植患者,使用浓度-时间曲线下面积计算乳汁和血液中他克莫司的含量比。病例:女性,29岁,每日服用他克莫司4m g及一些与移植相关的药物,其婴儿健康,3个月大,为纯母乳喂养。他克莫司在乳汁和血液中的含量比是0.23,乳汁中的平均浓度是1.8μg/L。婴儿的吸收量约为母亲用药剂量的0.5%(校正体重后)。结论:婴儿接触乳汁中的他克莫司量很少,提示母亲应用他克莫司治疗与母乳喂养不矛盾。…