聚合酶链反应中污染的预防与解除

PCR试验具有很高的敏感性,但如污染问题得不到很好地控制和解决,则不能保证其特异性.以下分别对如何预防及解除污染进行阐述.     

定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值

随着分子生物学技术的发展 ,聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断 ,如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、遗传性疾病的基因序列、人类白细胞表面抗原 (ＨＬＡ)配型、法医学方面的鉴定工作等。目前基因芯片的问世 ,将分子生物学技术又推向一个新的高潮。现就临床实验室开展ＰＣＲ技术及ＰＣＲ技术检测病原微生物及肿瘤基因的临床意义和定量ＰＣＲ技术 ,谈谈我们的看法。1.目前国内临床实验室应用ＰＣＲ技术存在的问题 :在设施方面 ,如仪器显示的温度与孔内的温度不一致 ,有孔内差…     

PCR实验室的污染及控制措施

目的分析PCR实验室污染途径。方法针对PCR实验室不同的污染途径采取不同的控制措施。结果通过一系列控制措施,达到了有效预防和控制污染的发生。结论 PCR实验由于具有高灵敏度,容易产生污染,必须针对不同污染途径采取不同控制措施,以避免污染产生的风险。     

聚合酶链反应试验中散发污染问题探讨

聚合酶链反应试验的假阳性结果可由散发污染引起。本文使用巢式ＰＣＲ技术从未分选母体外周血提取的ＤＮＡ中检测胎儿特异γ－染色体序列，在３７例孕妇标本中随机选择了２０例观察重复试验对结果的影响，结果表明：９例结果在两次试验中都阳性的均怀男性胎儿，２例结果在两次扩增中不一致。为散发污染所致。     

聚合酶链反应中污染环节的分析

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术,该技术通过重复94℃～95℃变性、37℃～55℃复性、72℃延伸等简单的3个温度,能将靶DNA扩增数百万倍,获得极高的检测敏感性,操作者稍不注意就会造成污染,极微量的污染便可导致假阳性结果,现分别对污染和如何判断污染及污染源的追踪等3个部分进行阐述。1污染为了使读者重视操作堆积化及其重要性,我们将PCR整体绘制成PCR污染示意图,并分别叙述各区的相互关系,图中分为4个区,即污染1区、清洁区、污染2区、交叉污染区等。见图1。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速，准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法，根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率，快速，简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌，应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪例标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致。     

聚合酶链反应检测霍乱弧菌

为快速、准确地检测霍乱弧菌，控制霍乱流行，研究建立了一种聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。根据霍乱弧菌肠毒素ＣＴ基因序列，自行设计一对特异引物，扩增片断为２９６ｂｐ，同时采用一种高效率、快速、简便的方法提取并纯化ＤＮＡ，该法能成功地检测各种样品中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。应用ＰＣＲ技术和常规分离培养方法对９０９份腹泻患者粪便标本和１８份环境水样标本进行平行检测。结果表明，两种方法的检测结果一致，粪便标本阳性率为４．２％（３８／９０９）；水样标本为２２．２％（４／１８），其中１份粪便标本和１份水样标本，是经过第２次增菌培养后，检出用性，而ＰＣＲ方法未见假阳性及假阴性结果。表明ＰＣＲ方法准确、快速、灵敏，并可在２、３小时内检测出含３个菌细胞的标本。因此，该方法可广泛应用于检测各种临床、环境标本中的产ＣＴ肠毒素Ｏ１群霍乱弧菌。     

长聚合酶链反应（LPCR）的进展

聚合酶键反应（PCR）是一种体外扩增DNA的有效技术。目前该技术主要用于扩增数百个到上千个碱基对（kb）的DNA片段。但是在许多分子遗传学研究中，如基因图谱分析，则需扩增更长的DNA片段才有价值。长片段DNA的PCR扩增近年已有报道[1]，例如选择不同的耐热DNA聚合酶、改过缓冲浪成份及循环条件等，可以扩增出10～15kb的片段，但产量低，多数实际应用仍限制于5kb以内。直到1994年，Barnes［2］和Cheng［3］等对DNA合成中碱基错配现象和模板DNA的损伤两个问题进行了研究并探讨了解决办法，其结果使PCR扩增）噬菌体DNA达42kb，扩…     

清除聚合酶链反应扩增产物污染的方法探讨

聚合酶链反应(PCR)具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点。但也常因标本受PCR扩增产物污染而产生假阳性结果。因此，控制外源性DNA污染已成为各实验室非常关注的问题。近年来，人们采用了许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物，但结果报导不一。为选择一种消除实验室DNA污染的最佳方法，我们选用六种传统的消毒法进行对比研究。现将结果报告如下。     

聚合酶链反应检出痰中结核杆菌

结核杆菌的快速检出与鉴定是结核病防治工作中的重要课题。最近发展的聚合酶链反应(PCR)可将结核菌基因组的一个片段在体外进行几何级数量扩增,从而使检出快速、灵敏。本文用PCR进行101例结核病人痰中结核杆菌检出,并与传统的浓缩、培     

逆转录聚合酶链反应检测风疹病毒

为了早期诊断风疹感染，应用逆转录。聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对８０例临床怀疑风疹感染患者的咽拭物检测风疹病毒。ＰＣＲ阳性者４３例，占５３％；同时用酶联免疫吸附法对每份血清作了ＩｇＭ检测，阳性者１２例，占１５％。统计学处理（Ｐ＜０．０１），表明两种检测方法差异有显著性。扩增产物的特异性通过地高辛标记探针的点杂交分析得到证实。该ＲＴ－ＰＣＲ方法具有快速、早期、灵敏度高和特异性强的特点，有希望发展成为临床诊断胎儿风疹感染的一种重要手段，并为产前咨询提供可靠的依据。     

实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒聚合酶基因变异

目的　建立一种在拉米夫啶治疗过程中的聚合酶酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸(YMDD)基序变异的检测方法。方法　根据寡核苷酸探针与模板结合时 ,不匹配碱基显著影响熔解温度的原理 ,设计合成 2条荧光标记的特异性探针 ,用实时荧光聚合酶链反应 (PCR)方法对 2 97例患者的 35 4份标本进行YMDD变异检测。结果　 35 4份标本中 ,检出YMDD变异株 15 6份 ( 44 1% ) ,其中混合株占 34% ( 5 3/15 6 ) ;有 9份血清标本同时进行了DNA序列分析 ,测序结果同本试验检测的结果完全一致 ;同时发现YMDD变异与血清谷丙氨酸转氨酶异常相关 (P <0 0 1)。结论　本研究建立的实时荧光PCR方法简便、快速、灵敏、经济 ,可用于临床拉米夫啶治疗中YMDD变异的检测。     

聚合酶链反应的质量控制

聚合酶链反应用于临床病原微生物检测的质量控制包括室内质量控制和室间质量评价，室内质控的核心问题就是要避免交叉污染，这首先要求有严格的实验室管理和训练有素的操作人员，此外设立阴、阳性对照以及ＰＣＲ结果的准确判读都是有效的必不可少的室内质控措施，室间质量评介国外只是近几年才开始的一项工作，本文亦对其作了简略的介绍。     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌

本文应用与幽门螺杆菌染色体ＤＮＡ高保守区序列互补的引物对，建立聚合链反应检测技术，对２８种非ＨＰ菌及１６株ＨＰ进行检测，特异性１００％，敏感性达到能检出１ｐｇ染色体ＤＮＡ（相当于１００个菌细胞）水平，对３６例接受胃镜检查病人的胃活检组织进行检测，ＨＰ阳性率４７．２％（１７／３６），而对照方法中细菌培养ＨＰ阳性率３３．３％（１２／３６），快速尿素酶试验ＨＰ阳性４１．６％（１５／３６）。结果提示ＰＣＲ     

临床标本聚合酶链反应的影响因素探讨

聚合酶链反应是一种核酸体外扩增技术。近年来已广泛应用于病原性微生物检测、遗传及肿瘤的诊断等生物学领域。作为一种诊断工具，PCR具有超凡的敏感性，但是，由于PCR方法的结果受诸多因素的影响，如技术操作、标本前处理、试剂等，所以实际应用于临床诊断尚存在许多问题，为了保证PCR结果的可靠性和准确性，本文探讨了临床标本PCR技术检测的影响因素及控制方法。