1,25-二羟维生素D3抑制慢性哮喘模型小鼠肺组织α-滑肌肌动蛋白的表达及气道重塑

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH) 2D3]对慢性哮喘模型小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及气道重塑的影响.方法:卵白蛋白致敏激发建立慢性哮喘小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、哮喘组及VD组.HE染色及天狼星红染色观察各组气道结构及上皮下纤维化,并用计算机图像分析系统评价各组气道重塑;Western blot法及实时荧光定量PCR法检测各组的α-SMA表达.结果:(1)哮喘组出现炎性细胞浸润增多、上皮细胞脱落、上皮下纤维化及平滑肌细胞层增厚等气道重塑的结构改变,而1,25-(OH)2D3的干预可有效减轻上述病理改变;(2)VD组肺组织α-SMA的mRNA及蛋白表达水平均显著低于哮喘组,但仍高于对照组(P＜0.05).结论:1,25-(OH) 2D3能降低哮喘小鼠肺组织α-SMA的表达并有效抑制哮喘气道重塑.     

宫颈癌患者血清中1,25-二羟维生素D3表达与患者预后的关系

目的：探讨宫颈癌患者血清中1,25-二羟维生素D3表达与患者预后的关系。方法：选取2019年1月至2021年1月罗源县医院收治的110例宫颈癌患者为研究对象,另选取同期于罗源县医院就诊的宫颈上皮内瘤变患者100例和体检健康女性100例作为对照,采集血液样本并分别检测三组血清1,25-二羟维生素D3水平,分析1,25-二羟维生素D3表达与宫颈癌患者临床特征及预后的关系。结果：三组血清1,25-二羟维生素D3水平比较差异显著（F=3.965,P<0.05）;宫颈癌组患者血清中1,25-二羟维生素D3水平为（22.84±3.35）μg/L,明显低于宫颈上皮内瘤变组的（31.72±3.89）μg/L及健康对照组的（33.02±5.68）μg/L(t=17.768/15.988,P<0.05);高临床分期、发生淋巴结转移、出现远端转移的宫颈癌患者血清1,25-二羟维生素D3水平较低（P<0.05）,而患者血清1,25-二羟维生素D3的表达与其年龄、肿瘤大小、月经情况、临床病理分型、肿瘤分化程度不存在明显相关性（P>0.05）;维生素D缺乏组患者的血清1,25-二羟维生素D...     

粉防己碱对转化生长因子-β1诱导的人近端小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的拮抗效应及其机制。方法体外培养的HK-2随机分为正常对照组、Tet组(100ng/ml)、TGF-β1(5ng/ml)组和TGF-β1(5ng/ml)+Tet(100ng/ml)组。Westernblot法检测细胞中TβRI蛋白、SnoN蛋白水平、Smad7蛋白水平和Smad2/3磷酸化水平的改变;半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法观察细胞中TβRI mRNA、Smad7 mRNA、SnoN mRNA表达的改变。免疫荧光检测间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 Tet能抑制TGF-β1诱导α-SMA的表达,显著上调SnoN mRNA和蛋白的表达(P<0.01);Tet对TβRI表达、Smad2/3的磷酸化及Smad7的表达没有影响。结论 Tet能抑制人近端小管上皮细胞转分化,其机制与Tet上调SnoN表达有关。     

白细胞介素-1β在人肾小管上皮细胞转分化中的作用及Janus激酶2抑制剂AG490的影响

目的 探讨Janus激酶2抑制剂AG490对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响. 方法 将体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs)分为空白对照组、IL-1β(5 ng/ml)刺激组及AG490干预组(IL-1β 5 ng/ml+AG490 10 μmol/L).分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测细胞角蛋白-18(CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达. 结果 正常肾小管上皮细胞内其自身标志物CK-18高表达(1.25±0.08),而α-SMA表达很少(0.17±0.01).IL-1β刺激组随刺激时间延长CK-18表达逐渐减少(24 h:0.69±0.04,48 h:0.52±0.03,72 h:0.30±0.01),而α-SMA蛋白合成逐渐增加(24 h:0.56±0.04,48 h:1.05±0.07,72 h:1.43±0.07),与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).AG490干预能使CK-18的表达逐渐恢复(24 h:1.07±0.07,48 h:0.93±0.06,72 h:0.83±0.06),并减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用(24 h:0.33±0.01,48 h:0.52±0.01,72 h:0.61±0.04),且作用显著(均P＜0.05).免疫细胞化学染色观察结果与其一致. 结论 炎症因子IL-1β通过降低肾小管上皮细胞CK-18表达,上调α-SMA表达,促使肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞;Janus激酶2抑制剂AG490能部分阻断IL-1β对肾小管上皮细胞的促转分化作用.     

肝细胞生长因子对肾小管上皮细胞转分化及整合素连接激酶表达的影响

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）在转化生长因子β1（TGF-β1）介导的肾小管上皮细胞转分化中的作用及对整合素连接激酶（ILK）表达的影响。方法将体外培养人肾小管上皮细胞（HKC）分为正常对照组、TGF-β1刺激组和HGF干预组。应用Western blotting方法检测ILK、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达,实时RT-PCR法测定ILK、α-SMA、纤维连接蛋白（Fn）、E钙黏蛋白（E-cadherin）的mRNA表达。结果在TGF-β1刺激组,ILK和α-SMA的蛋白表达量显著增加,ILK、α-SMA和Fn的mRNA表达量也明显升高,E-cad-herin mRNA表达量则明显降低（与正常对照组比较,P〈0.001）。而在HGF干预组,ILK、α-SMA的蛋白表达量以及ILK、α-SMA、Fn的mRNA表达量均较TGF-β1刺激组显著降低,E-cadherin mRNA表达量则明显升高（与TGF-β1刺激组比较,P〈0.01）。结论HGF能抑制TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化,并可降低ILK蛋白和mRNA表达水平。     

ERKl／2信号通路在高糖诱导的HK-2上皮间质转分化中的作用

目的：观察高糖诱导的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路活化在上皮间质转分化中的作用,从而探讨延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养HK-2细胞,随机分为正常对照组、高糖组、ERK1/2通路抑制剂PD98059＋高糖组和高渗组,处理72 h后收集细胞,应用免疫细胞化学方法检测α-SMA、CK18的表达;应用Western blot法检测磷酸化ERK1/2、总ERK1/2表达水平的变化。结果（1）正常对照组胞质有大量CK18蛋白阳性表达,而α-SMA蛋白表达呈阴性;高糖组胞质中可见大量α-SMA蛋白强阳性染色,而CK18蛋白呈阴性表达;经PD98059处理后,CK18表达较高糖组染色深,而α-SMA表达较高糖组染色浅;高渗组胞质中CK18呈阳性表达,α-SMA表达呈阴性。（2）正常对照组可见少量总ERK1/2表达,p-ERK1/2蛋白仅有微量表达;经高糖刺激48 h后,总ERK1/2表达较正常对照组无明显差异,p-ERK1/2蛋白表达明显增加（P＜0.05）;而使用PD98059处理后,总ERK1/2的变化不大,但p-ERK1/2蛋白的表达却显著降低（P＜0.05）;高渗组与正常对照组无显著差异。结论 ERK1/2信号通路可能参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化过程,阻断 ERKl/2可部分抑制人近端肾小管上皮细胞的转分化,进而延缓肾小管间质纤维化的发生和发展。     

IL-33诱导气道上皮细胞发生间质转分化样改变

目的探讨白细胞介素-33(IL-33)对小鼠气道上皮细胞细胞间质样转分化(EMT)的影响。方法体外培养小鼠上皮细胞,将小鼠气道上皮细胞分为三组,分别为IL-33组、抗IL-33组及对照组。IL-33组、抗IL-33组分别给予0.04 mg/ml的IL-33抗体和抗IL-33抗体刺激小鼠气道上皮细胞48 h,对照组不做处理;采用Western blot方法分别检测三组EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ)表达水平;应用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定EMT标志物E-钙黏蛋白、α-SMA及Ⅰ型胶原m RNA水平的表达,应用SPSS 17.0软件进行统计处理,两组间比较采用t检验。结果与对照组相比,IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原在蛋白水平的表达明显增高(1.45±0.12,P<0.05;1.52±0.10,P<0.01);IL-33组α-SMA及Ⅰ型胶原的基因表达比对照组增高(79.1±4.62 vs.50.2±3.59,P<0.05;69.8±5.89 vs.48.2±3.56,P<0.05);IL-33组E-钙黏蛋白在蛋白水平的表达比对照组低(0.82±0.08,P<0.05),IL-33组E-钙黏蛋白的基因表达比对照组降低(80.4±4.39 vs.145.9±7.82)。抗IL-33组与对照组E-钙黏蛋白、α-SMA及Ⅰ型胶原在蛋白和基因水平表达无统计学差异(P>0.05)。结论 IL-33能刺激小鼠气道上皮细胞发生间质转分化样改变。     

基于TGF-β1/AKT信号通路的西格列汀对人肾小管上皮细胞转化的干预及机制

目的:观察西格列汀(sitagliptin,SIT)对高糖诱导的肾小管上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的干预效应及对AKT信号通路的影响,探讨西格列汀防治早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为正常组(NG,5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,60 mmol/L葡萄糖)、西格列汀组(SIT组,60 mmol/L葡萄糖+1,5,10μmol/L西格列汀)、TGF-β1抑制剂组(60 mmol/L葡萄糖+5μmol/L SB-431542)。MTT法检测细胞活力;ELISA法检测细胞中TGF-β1蛋白分泌;蛋白质印迹法检测细胞中Akt蛋白磷酸化水平及EMT指标蛋白质变化。结果:高糖提高了肾小管上皮细胞的活力,促进TGF-β1蛋白分泌,激活AKT蛋白磷酸化,降低细胞中上皮表型蛋白质E-cadherin的表达,并增加间质表型蛋白质α-SMA的表达。西格列汀显著降低HK-2细胞的活力,降低高糖环境下TGF-β1蛋白分泌,降低AKT蛋白磷酸化水平,改善E-cadherin表达的减少及α-SMA表达的增加。结论:西格列汀可以改善高糖诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化,此效应可能与抑制TGF-β1/AKT信号通路有关。     

HGF对AngⅡ介导的肾小管上皮细胞转分化的影响及相关信号转导通路的研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素II(AngII)介导的肾小管上皮细胞转分化(TEMT)的影响以及是否与信号转导和基因转录激活子(STAT3)信号转导通路有关。方法体外培养人近曲小管上皮细胞并分为4组,即对照组,AngII(AngII:10-6 mol/L)组,HGF(HGF:8μg)组,AngII(AngII:10-6 mol/L)+HGF(HGF:8μg)组,用RT-PCR的方法检测4组中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及β-actin的mRNA表达,用Western方法检测4组中PSTAT3及β-actin的蛋白表达。结果与对照组相比,HGF组α-SMA mRNA表达减少,P-STAT3蛋白表达下降,AngII组与之相反;与AngII组比较,AngII+HGF组α-SMA mRNA表达减少,P-STAT3蛋白表达下降。结论HGF可抑制AngII介导的肾小管上皮细胞转分化,且此作用可能通过对STAT3信号转导通路的抑制而达到的。     

维生素D及其受体在强直性脊柱炎患者中的表达及其临床意义

目的：研究As患者PBMC维生素D受体（VDR）mRNA的表达及血清25-羟维生素D,和1,25-二羟维生素D3的水平,探讨其与AS疾病活动性（BASDAI、CRP、ESR）的相关性。方法：选取26例AS患者（As组）和年龄、性别与之相匹配的13名健康志愿者（健康对照组）。采用SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测两组受检者PBMC的VDRmRNA表达水平,应用ELISA法检测两组受检者血清25-羟维生素D3和1,25-二羟维生素D3水平,分析VDRmRNA表达水平、血清25-羟维生素D3和1,25-二羟维生素D3水平与临床相关指标（BASDAI、CRP、ESR）的关系。结果：As患者PBMC的VDRmRNA表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）,VDRmRNA表达水平与临床相关指标（BASDAI、CRP、ESR）无关（P〉0．05）。AS患者血清25．羟维生素D3、1,25-二羟维生素D3水平分别为（5．3±2．6）μg／L、（12．8±6．0）ng／L,明显低于健康对照组（14．7±3．5）μg/L、（32．6±18．5）ng／L（P均〈0．01）。AS患者血清1,25-二羟维生素D3的水平与BASDAI（r=-0．481,P〈0．05）、ESR（r=-0．535,P〈0．01）、CRP（r=-0．674,P〈0．01）均呈负相关。血清25-羟维生素D,水平与BASDAI、CRP、ESR无关（P〉0．05）。结论：As患者VDRmRNA表达水平升高,但与As的疾病活动无关。As患者血清1,25-二羟维生素D3水平下降,与疾病活动呈负相关,可作为AS疾病活动的指标之一。AS患者PBMC的VDR活化可能与1,25-二羟维生素D,的作用无关。     

1,25-二羟维生素D3治疗对早期糖尿病肾病相关炎性因子的影响

目的探讨早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者体内1,25-二羟维生素D3与血清炎性因子水平的变化,观察1,25-二羟维生素D3对早期DN患者相关炎性因子的影响。方法 2型糖尿病患者238例中无蛋白尿者100例为DM组,初诊早期DN者138例为DN组,DN组再随机分为治疗组和对照组各69例。在血糖、血压稳定1周后治疗组给予常规治疗+骨化三醇胶丸,对照组给予常规治疗,2组疗程均为3个月。比较各组患者1,25-二羟维生素D3、24h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化。结果治疗前DN组1,25-二羟维生素D3水平低于DM组(P<0.05),白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、血浆纤溶酶原激活物抑制物-1及尿结缔组织生长因子水平均高于DM组(P<0.05);治疗后DN治疗组上述炎性因子水平及24h尿蛋白定量均较治疗前降低(P<0.05),1,25-二羟维生素D3水平升高(P<0.05),对照组治疗前、后各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论早期DN患者1,25-二羟维生素D3缺乏,炎性因子水平高,补充骨化三醇胶丸可改善患者炎症状态。     

冬虫夏草对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞ILK表达的影响

[目的]观察糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶(ILK)的表达及冬虫夏草对其表达的影响.[方法]雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=12)、糖尿病模型组(D组,n=12)、糖尿病冬虫夏草干预组[C组,n=12,冬虫夏草1000 mg/(kg·d)灌胃].成模后第8周末及16周末各组分别处死6只大鼠,测定24 h尿蛋白排泄量、血肌酐;HE及MASSON染色法观察肾脏病理改变;免疫组织化学法检测ILK、E钙粘蛋白(E-cad)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达.[结果]①与N组比较,D组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积明显增加(P<0.01).②D组大鼠肾小管上皮细胞E-cad阳性表达显著低于N组,TGF-β1、ILK和α-SMA阳性表达均显著高于N组;E-cad表达和TGF-β1表达呈负相关(rs=-0.60,P<0.05);ILK、α-SMA表达和TGF-β1表达呈正相关(rs=0.88,P<0.01;rs=0.91,P<0.05).③C组大鼠肾小管间质损伤指数、肾闻质胶原面积较D组明显减弱,其肾小管上皮细胞的E-cad的表达较D组明显增加,TGF-β1、ILK和α-SMA表达较D组均明显减弱(P<0.01).[结论]冬虫夏草能通过下调ILK表达发挥肾脏保护作用.     

整合素连接激酶抑制剂对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)抑制剂在人近端肾小管上皮细胞转分化中的作用及可能机制。方法对数生长期人近端肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为对照组(无糖DMEM/F12培养液)、高糖组(30.0mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液)、抑制剂组(30.0 mmol/L葡萄糖DMEM/F12培养液+30.0μmol/L QLT0267 100μL),培养48h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测HK-2细胞ILK、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,P-Akt)相对表达量,反转录PCR法检测ILK mRNA、纤连蛋白(fibronectin,Fn)mRNA表达量。结果对照组HK-2细胞呈椭圆形或圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长;高糖组细胞向长梭型转变,细胞间紧密连接消失,呈离散状生长;抑制剂组细胞改变同高糖组,但程度较轻;高糖组、抑制剂组HK-2细胞E-cadherin相对表达量(0.43±0.04、0.80±0.05)均低于对照组(1.04±0.05)(P0.05),且高糖组低于抑制剂组(P0.05);高糖组、抑制剂组P-Akt相对表达量(0.49±0.05、0.31±0.03)均高于对照组(0.21±0.01)(P0.05);且高糖组高于抑制剂组(P0.05),高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK相对表达量(0.52±0.02、0.51±0.02)均高于对照组(0.22±0.01)(P0.05),高糖组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);高糖组、抑制剂组及对照组HK-2细胞Akt相对表达量(0.91±0.03、0.92±0.02、0.94±0.05)比较差异均无统计学意义(P0.05);高糖组、抑制剂组HK-2细胞ILK mRNA(1.83±0.23、1.64±0.07)、Fn mRNA相对表达量(2.06±0.07、1.79±0.06)均高于对照组(0.83±0.04、1.14±0.08)(P0.05),且高糖组Fn mRNA相对表达量高于抑制剂组(P0.05),ILK mRNA相对表达量与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论ILK抑制剂QLT0267可抑制ILK下游效应分子Akt的磷酸化,减少Fn、E-cadherin下调,从而抑制或延缓肾小管上皮细胞转分化进程。     

TGF-β1/Smad信号通路在大黄素干预人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨大黄素干预白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化过程中是否涉及对TGF-β1/Smad信号通路的调控.方法:用5 mg/mL人白蛋白刺激体外培养的HK-2细胞,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达水平.结果:白蛋白呈时间依赖性诱导α-SMA、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调.使用一定浓度的大黄素干预后,明显抑制了白蛋白诱导的上述效应.相关性分析显示:TGF-β1、Smad2 mRNA的表达与α-SMA mRNA的表达呈正相关,与E-cadherin mRNA的表达呈负相关.结论:大黄素抑制人白蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程中,TGF-β1/Smad信号通路发挥了重要作用.     

糖尿病肾病中肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的意义

目的:通过糖尿病肾病(DN)患者肾脏标本及DN大鼠模型,探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)在DN中的意义。方法:肾穿刺活检取DN患者肾脏组织,通过Western blot检测E-cadherin及α-SMA蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA的表达,Real time-PCR检测ColⅠRNA基因的表达,并检测空腹血糖、血清肌酐及24h尿蛋白水平。注射链脲佐菌素建立大鼠DN模型,分别于建模后1、2、4、8、12及24周处死动物并取肾脏组织,并用上述同样方法检测相关指标。结果:DN患者中E-cadherin表达下降,α-SMA及ColⅠ mRNA表达上调。DN组大鼠肾组织α-SMA蛋白及ColⅠ mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.05);相关分析结果提示,DN组大鼠α-SMA、ColⅠ的变化趋势与血糖、24h尿道白及肌酐的变化呈正相关;E-cadherin蛋白表达与上述生化指标的变化呈负相关。结论:EMT能够导致DN患者肾功能的下降,在DN进展中起重要作用。     

氯沙坦对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨D-半乳糖致衰老大鼠肾脏中是否存在肾小管上皮细胞转分化及血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦对其的影响。方法:大鼠随机分为3组:对照组、模型组、治疗组,每组12只。D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老模型。观察肾组织病理改变,免疫组化方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖性细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:模型组肾小球体积增大,局灶节段性肾小球硬化,肾小管腔扩大,灶状小管萎缩,间质纤维化,而治疗组肾组织改变与模型组相比有所减轻。模型组α-SMA、PCNA的表达较对照组明显升高,而治疗组α-SMA、PCNA的水平较模型组减低(P<0.05)。结论:氯沙坦可以抑制α-SMA、PCNA的表达,抑制小管上皮细胞转分化,抑制细胞外基质的积聚,从而减轻衰老。     

秦皮乙素调控miR-486-5p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤的机制研究

目的 探讨秦皮乙素(Esc)对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤的影响及分子机制.方法 肾小管上皮细胞HK-2随机分为对照(Con)组,高糖(HG)组,Esc低、中、高浓度(HG+ Esc-L、M、H)组,HG+ anti-miR-NC组,HG+ anti-miR-486-5p组,HG+ Esc+ miR-NC组以及HG+ Esc+ miR-486-5p组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-486-5p表达水平.结果 Esc低、中、高浓度处理后,高糖诱导的HK-2细胞中IL-6、TNF-α水平及miR-486-5p表达水平逐渐降低,凋亡率逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05).抑制miR-486-5p表达后,高糖诱导的HK-2细胞中IL-6、TNF-α水平及细胞的凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-486-5p和Esc同时处理后,IL-6、TNF-α水平及细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Esc通过下调miR-486-5p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症损伤.     

Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的影响

目的观察Apelin-13对高糖诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响并探讨其可能机制。方法用Apelin-13(10~(-8)、10~(-7)和10~(-6)mol/L)预处理HK-2细胞30 min后,用含D-葡萄糖(30 mmol/L)的培养基培养HK-2细胞48 h。免疫荧光检测HK-2细胞中间充质细胞的标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,透射电镜观察HK-2细胞的超微结构,Western-Blot检测上皮细胞的标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-SMA及自噬相关蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组的细胞呈现长梭形,细胞间隙明显增宽,E-cadherin蛋白表达显著性下调(t=4.751,P=0.011),而α-SMA蛋白表达显著上调(t=3.846,P=0.016),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t_1=5.271,t_2=4.695,t_3=6.753,P_1=0.009,P_2=0.012,P3=0.002),p62表达显著降低(t=4.562,P=0.012)。与高糖组比较,Apelin-13(10~(-7)和10~(-6)mol/L)+高糖与高糖组比较,明显抑制了细胞形态的变化,细胞形态大多数呈椭圆型,E-cadherin蛋白表达显著上调(t_1=3.495,t_2=4.124,P_1=0.019,P_2=0.013),而α-SMA蛋白表达显著下调(t_1=4.014,t_2=4.283,P_1=0.014,P_2=0.012),自噬体数量明显增多,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值均显著增加(t_1=3.487,t_2=4.059,t_3=5.342,t_4=4.271,t_5=5.360,t_6=5.851,P_1=0.018,P_2=0.014,P_3=0.009,P_4=0.011,P_5=0.005,P_6=0.004),p62表达显著降低(t_1=4.342,t_2=3.557,P_1=0.012,P_2=0.019)。结论 Apelin-13抑制了高糖诱导的肾小管EMT,其机制可能与Apelin-13诱导肾小管上皮细胞自噬有关。     

TGF-β1诱导体外培养人肾小管上皮细胞的表型转化

目的观察TGF-β1诱导体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2细胞的表型转化。方法免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测TGF-β1诱导培养HK-2细胞,其上皮细胞标记物和间充质细胞标记物表达的改变。结果在TGF-β1浓度分别为1μg/L、5μg/L和10μg/L条件下,诱导培养HK-2细胞48h,免疫细胞化学染色显示各诱导组细胞均出现了间充质细胞标记物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的可疑阳性表达;继续诱导72h,细胞α-SMA阳性表达明确;同时上皮细胞标记物E-钙粘连蛋白表达明显降低甚至消失,广谱角蛋白阳性表达未见明显改变。在TGF-β1浓度为5μg/L诱导组,α-SMA阳性表达为最强。RT-PCR结果也显示TGF-β1诱导42h,HK-2细胞出现了间质细胞标记物α-SMA和波形蛋白mRNA表达的增高,间充质细胞标记物mRNA表达的增高也是以5μg/L TGF-β1组为最明显,上皮细胞标记物细胞角蛋白-19mRNA的阳性表达未见明显改变。结论 TGF-β1可诱导体外培养HK-2细胞出现上皮向间充质细胞的表型转化,表型转化能力与TGF-β1剂量相关。     

1,25-二羟维生素D3治疗对早期糖尿病肾病炎性因子的影响

目的 探讨早期糖尿病肾病( diabetic nephropathy,DN)患者体内1,25-二羟维生素D3与血清炎性因子水平的变化,观察1,25-二羟维生素D3对早期DN患者相关炎性因子的影响.方法 2型糖尿病患者238例中无蛋白尿者100例为DM组,初诊早期DN者138例为DN组,DN组再随机分为治疗组和对照组各69例.在血糖、血压稳定1周后治疗组给予常规治疗+骨化三醇胶丸,对照组给予常规治疗,2组疗程均为3个月.比较各组患者1,25-二羟维生素D3、24 h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化.结果 治疗前DN组1,25-二羟维生素D3水平低于DM组(P＜0.05),白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、血浆纤溶酶原激活物抑制物-1及尿结缔组织生长因子水平均高于DM组(P＜0.05);治疗后DN治疗组上述炎性因子水平及24 h尿蛋白定量均较治疗前降低(P＜0.05),1,25-二羟维生素D3水平升高(P＜0.05),对照组治疗前、后各指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 早期DN患者1,25-二羟维生素D3缺乏,炎性因子水平高,补充骨化三醇胶丸可改善患者炎症状态.