兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备兔抗人精子顶体精子溶菌酶样蛋白1结合蛋白(SAS1B)多克隆抗体.方法 构建pET-22b-SAS1 B-His质粒,转化E.coli.BL21(DE3)细胞,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导SAS1B重组蛋白表达.用层析纯化后的蛋白免疫日本大耳白兔制备SAS1B多克隆抗体.ELISA检测SAS...     

人精子顶体膜相关蛋白SAMP32 DNA避孕疫苗的构建

目的探讨构建hSAMP32DNA疫苗的方法。方法根据GenbankhSAMP32cDNA序列设计引物,RT-PCR得到hSAMP32DNA,将其亚克隆至pGEM-T载体,酶切鉴定后测序;再构建pcDNA3.1(+)-hSAMP32质粒,并对质粒DNA定量。结果(1)人睾丸组织中提取的总RNA显示2条清晰条带,分别对应28S、18S;RT-PCR扩增产物与预期的目的基因hSAMP32长度一致;(2)RT-PCR产物与载体pGEM-T连接后测序,显示其与Genbank的hSAMP32基因序列一致;(3)超螺旋的pcDNA3.1(+)-hSAMP32DNA疫苗不含内毒素。结论应用亚克隆技术构建hSAMP32DNA避孕疫苗的载体pcDNA3.1(+)-hSAMP32,为研制避孕疫苗奠定实验基础。     

环孢素A结合蛋白研究进展

环孢素Ａ结合蛋白（ＣｙＰ）是一个广泛分布、高度保守的新发现的蛋白质家族。它有肽酰脯氨顺反异构酶活性，能催化蛋白质的折叠、装配及转运，调节细胞信号传导过程，介导环孢素Ａ的免疫抑制作用。本文就ＣｙＰ家族的分布、分类、结构特征以及生物学功能的研究现状作一综述。     

精子蛋白Sp32/OY-TES-1基因mRNA表达的探讨

目的了解精子蛋白Sp32／OY—TES-1基因mRNA的表达特点,研制癌-睾丸抗原（CTA）的肿瘤疫苗。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测95例正常人组织及125例人肿瘤组织中Sp32／OY—TES-1 mRNA的表达,随机选取RT-PCR阳性产物12份进行DNA测序;对所得数据进行统计学分析。结果Spa2／OY—TES-1在正常和肿瘤组织中的表达频率分别为68．4％（65／95）和44．00％（55／125）,两者比较有统计学意义（P〈0．05）。在24种不同器官的正常组织中,21种表达Sp32／OY—TES—1基因mRNA（87．50％）。DNA测序结果证实,RT-PCR产物为Sp32／OY—TES-1基因。结论Sp32／OY—TES-1基因的mRNA在正常组织中广泛表达,它是否可归为睾丸和肿瘤限制性表达的基因尚需进一步研究。     

着丝粒蛋白A的生物学功能研究进展

自从20世纪80年代着丝粒蛋白特异抗血清ACA被发现至今,现已有9种着丝粒蛋白被定名,其中着丝粒蛋白A（CENP—A）是最早被发现者之一。近年来,关于CENP—A与肿瘤细胞增殖的关系越来越受到关注,本文就其生物学功能的研究进展做一综述。     

附睾分泌蛋白与精子成熟的研究进展

哺乳动物精子成熟是通过与附睾管腔微环境相互作用而实现的,精子通过在附睾内转运过程中与附睾蛋白相互作用获得运动和精卵识别结合能力.附睾蛋白通过直接或间接参与精子膜修饰或有助于保护精子的完整性参与精子成熟过程,与精子成熟相关的附睾蛋白的研究将有助于推动男性生殖医学的研究进展,同时有可能对附睾环节的男性避孕带来新的思路和突破.     

精子蛋白sp32/OY-TES-1mRNA及其蛋白在正常组织表达的探讨

目的 了解正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的表达量是否存在差异以及该蛋白的表达情况,为sp32/OY-TES-1表达谱增加更多信息.方法 提取40例(19种)正常组织总RNA,逆转录-聚合酶合成cDNA,普通PCR检测cDNA质量;构建目的 基因sp32/OY-FES-1及看家基因HPRT质粒,制备标准品,绘制标准曲线,建立实时定量PCR(TaqMan)方法和优化反应体系,检测组织中sp32/OY-TES-1和HPRT的表达,sp32/OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示.通过制备的OY-TES-1多克隆抗体,结合免疫组织化学检测sp32/OY-TES-1蛋白在多种正常组织中的表达.结果 正常组织中sp32/OY-TES-1mRNA阳性率为72.50%(29/40);2.非睾丸正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量值(目的 基因/看家基因)为0.000 1～0.495 0,呈对数正态分布;3.睾丸组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量为44.9,是其他正常组织的91～1 000倍;4.免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、4例精子、3例外周血白细胞和1例肾),除4例精子和1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应.结论 sp32/OY-TES-1 mRNA广泛地表达在各种正常组织,表达量因组织不同而异;睾丸组织是所检测的正常组织中其mRNA表达量最高的组织.而sp32/OY-TES-1蛋白比其mRNA更具有限制性表达的特点.     

重组人睾丸精子结合蛋白对蛋白激酶A活性的影响

为探讨人睾丸精子结合蛋白(TSBP)在精子获能及顶体反应中可能发挥的作用,检测了TSBP重组蛋白在体外转染细胞系中对蛋白激酶A活性的影响。构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,稳定转染HEK293细胞后,蛋白免疫印迹检测到培养细胞中融合蛋白的表达。选择表达量高的细胞克隆,扩增并用金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6-TSBP。用放射自显影法检测HEK293细胞中蛋白激酶A(PKA)活性,发现重组质粒转染组PKA活性高于对照组,确定了TSBP对PKA活性的促进作用。     

人精子结合蛋白HBRP的抗体制备及定位

目的制备人类新的精子结合蛋白HBRP的单克隆抗体,确定其在精子的定位及其与精子功能相关的作用。方法分别利用PCR、Western blot、动物免疫、血清纯化等方法得到HBRP单克隆抗体,用ELISA方法检测抗体滴度;利用间接免疫荧光方法观察HBRP在精子的定位。结果经纯化鉴定获得HBRP融合表达蛋白;首次获得HBRP单克隆抗体;应用制备的单克隆抗体,确定HBRP主要结合在精子尾部的中段和主段。结论 HBRP结合在人成熟精子尾部的中段和主段,提示其参与精子运动功能的调控。     

细菌蛋白糖基化修饰的生物学功能及应用研究进展

细菌在维持人体健康和诱导疾病的发展中扮演着重要角色,其生物学功能常与蛋白质表面附着的聚糖有关。近年来,细菌蛋白的糖基化修饰受到越来越广泛的关注。随着合成生物学的不断发展,以及人们对蛋白糖基化修饰系统的深入研究,部分蛋白糖基化修饰系统已经应用于工程菌中,独立发挥蛋白质修饰作用,使得"定制糖蛋白"成为可能。本文就细菌蛋白糖...     

环孢素A结合蛋白的生物学功能

环抱素A结合蛋白（cyclophilins，CyP）是一类在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质。它有肽基脯氨酰顺/反异构酶（peptidylprolylcis/transisomerase,PPIase）活性、核酸酶活性、分子伴侣功能以及多种细胞因子特性。这些特征决定了CyP对细胞生命活动的维持有重要作用。     

HCV核心蛋白致细胞癌变机制的研究进展

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)感染经常导致受感染个体的持续性感染，并进一步发展为慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma HCC)，因此危害极大。已经证明HCV核心(core)蛋白具有多种生物学功能，能与许多病毒、细胞基因及其产物相互作用，很可能参与了HCV的致病过程。文章主要综述了近年来关于HCV core蛋白在HCV感染的致癌过程中可能参与的有关机制的研究进展。     

细胞红蛋白的研究进展

细胞红蛋白(cytoglob in,CYGB)是新发现的第4种携氧球蛋白,其基因序列与血红蛋白、肌红蛋白及脑红蛋白有明显的序列同源性。人CYGB为单拷贝基因,定位于染色体17q25,cDNA序列全长共5 188 bp,开放阅读框为522 bp,可编码190个氨基酸。CYGB主要以单体形式存在于成纤维细胞及神经元细胞中,组织分布广泛。CYGB呈六配位脱氧亚铁(Fe2+)形态,具有较强的氧亲和力,与胶原形成有关,且可能具有氧气载体与储氧、氧感受器、一氧化氮解毒、抗氧自由基、生物酶和神经保护等功能。CYGB的表达受缺氧诱导。     

白介素18结合蛋白研究进展

白介素 1 8结合蛋白 (IL - 1 8BP)是一种新近发现的蛋白因子 ,具有胞外 Ig样受体结构特征 ,并与某些病毒编码的蛋白有较高的同源性。它能与 IL - 1 8特异性结合并阻断其相关的生物学功能。由于其在免疫调控及免疫预防方面的特殊作用而受到广泛关注。     

人类精子成熟蛋白家族首次系统揭秘

由山东省干细胞工程技术研究中心、烟台大学李建远教授率领的研究团队,经过十年的潜心研究,在人类精子成熟相关蛋白研究中取得重大突破,在解析了正常人附睾基因表达谱的基础上,解析了人类附睾、睾丸蛋白表达谱,建立了相应1030种蛋白抗体库,并定位蛋白317种,进行了分类编号与命名。该成果得到国际承认。     

白细胞介素-32与疾病的关系研究进展

IL-32是新发现的一种促炎症细胞因子,它与多种疾病的发生发展有着密切关系。该文主要从IL-32的命名、产生、特性及其与多种疾病的关系进行介绍。     

真菌免疫调节蛋白的研究进展

真菌免疫调节蛋白(Fungal immunomodulatory protein，Fip)是近年来从一些高等担子菌(蘑菇类)子实体中提取的与植物凝集素和免疫球蛋白的结构和免疫功能相似的一类小分子蛋白质。自1989年Kino等从赤灵芝子实体中分离提取出第一种真菌免疫调节蛋白(LZ-8)以来，目前已分别从赤灵芝，松杉灵芝，金针菇和草菇中的子实体中提取出4种真菌免疫调节蛋白，它们的氨基酸组分别具有60％～70％的同源性，并且具有相似的免疫生物学活性。根据这4种真菌免疫调节蛋白的氨基酸序列，     

CCIO蛋白功能及在疾病中的作用研究进展

Clara细胞是一种分布于哺乳动物肺脏末端细支气管的非纤毛、非浆液分泌上皮细胞,具有多种生物学功能。在气管支气管树分叉处的Clara细胞是支气管上皮细胞的祖细胞,有助于损伤后上皮再生。Clara细胞10．kD蛋白（claraeell10-kDprotein,CCl0）是Clara细胞分泌的一种分子量为10-kD的分泌蛋白。     

钙结合蛋白S100A11生物学功能及其相关疾病研究进展

<正>S100家族是一个分子量在9~14kD之间、以独特的螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix)EF手型基序为特征的、可以形成二聚体和多聚体的多基因调控酸性钙结合蛋白家族,主要存在于脊椎动物中[1],在细胞内外发挥其独特的生物学功能。S100家族到目前为止至少包含21个成员,其中16个S100蛋白的编码基因位于人1号染色体q21区域[2]。S100家族是多功能信号蛋白家族,转导钙依赖性细胞调节信号,参与调控多种生物学过程,例如调控蛋白磷酸化和去磷酸化、调节关键酶的活性、调节细胞骨架的组成、参与调控细胞生长、运动和分化、维持胞内外钙离子平衡等[3-5]。     

人SRY基因表达及表达蛋白的结合功能研究

目的研究人类性别决定基因（ｓｅｘｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｎｔｈｅＹｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＳＲＹ）表达蛋白对下游基因的调节作用。方法将ＳＲＹ基因ＨＭＧ结构域片段与表达载体ＰＥＴ－１５ｂ－进行重组，构建了ＳＲＹ基因的表达质粒ＰＥＴＳＹ，转入大肠杆菌中表达，组氨酸结合树脂柱纯化表达蛋白，与苗勒氏管抑制因子基因（Ｍüｌｅｒｉａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＭＩＳ）启动子区片段进行凝胶电泳阻滞试验及竞争试验。结果获得ＳＲＹ基因表达蛋白，分子量接近２０．８Ｕ（２１ｋＤ），凝胶电泳阻滞试验及竞争试验表明，ＳＲＹ表达蛋白能特异结合位于１９号染色体的ＭＩＳ基因的启动子区。结论提示ＳＲＹ基因对ＭＩＳ基因转录具有调节作用。