S-O_2-1菌苗对小鼠淋巴细胞的作用

动物实验和初步临床应用表明有抑制肿瘤生长作用的S-O_2-1菌苗,在体外能直接刺激小鼠脾细胞淋巴细胞的增殖,并协同增强脾细胞的Con A增殖反应、S-O_2-1菌苗诱导和增强小鼠腹腔粘附细胞的抑制活性,后者表现在直接抑制脾细胞和肠系膜淋巴结细胞对Con A和S-O_2-1菌苗的增殖反应。腹腔转移菌苗活化的腹腔粘附细胞能抑制受体小鼠对SRBC的PFC应答。提示:S-O_2-1菌苗诱导增强巨噬细胞的抑制活性,以致间接抑制淋巴细胞的免疫应答。     

S-O_2-1细菌核糖体制剂对小鼠淋巴细胞的作用

<正> 我们实验室曾报道了 S-O_2-1细菌核糖体制剂是低毒、高效的免疫增强剂,能激活小鼠的单核巨噬细胞系统,增强小鼠腹腔粘附细胞对S_(180)肿瘤细胞的体外细胞毒作用,还能促进小鼠NK细胞活性,并能在体外诱生Ⅰ型干扰素和抑瘤因子。但关于该核糖体对淋巴细胞的作用还不清楚,本文观察S-O_2-1菌核糖体制剂对淋巴细胞的作用,从中探讨其免疫调节与抑瘤作用机理。     

S-O_2-1菌苗的免疫效应和抗肿瘤活性

本文报告我们自己分离的革兰氏阴性杆菌(S-O_2-1)菌苗对小鼠的免疫效应和抗肿瘤活性的研究。实验证明该菌苗主要作用于单核巨噬细胞系统,还能激发免疫淋巴细胞释放淋巴因子,对移植艾氏腹水癌的小鼠有较高的保护力,并能抑制癌细胞在小鼠腹腔内增殖,表明该菌苗有一定程度的佐剂性能。     

S-O_2-1菌苗诱生干扰素的研究 Ⅱ小鼠脾脏细胞体外诱生

本文表明S-O_2-1菌苗具有较强的诱导小鼠脾细胞产生干扰素的能力。将事先用菌苗免疫的C57BL/6小鼠脾细胞体外培养时,即使不加菌苗也能产生较高滴度的干扰素活性,该活性在免疫后4天制备的脾细胞培养中开始出现,免疫后7天则达高峰(7.47±0.31 log_2U/ml),以后逐渐下降。若培养时添加菌苗,干扰素高峰出现稍晚些,于免疫后10天达高峰,但滴度明显上升(9.10±0.26 log_2U/ml)。另外,C57BL/6正常小鼠的脾细胞(5×10~6细胞/ml)添加菌苗(0.1亿菌/ml)体外培养12小时后可开始测出干扰活性,培养48小时后活性达高峰(8.23±0.30log_2U/ml)。该干扰素具有小鼠Ⅱ-型干扰素相同的特性。我们在实验中还发现,将S-O_2-1菌苗与刀豆素A(Con A)合用诱生的干扰素滴度明显高于两者单独使用时诱生滴度的累加值。     

S-O_2-1菌苗诱生干扰素的研究 Ⅰ小鼠体内诱生

本文研究了免疫增强剂——S-O_2-1菌苗在小鼠体内诱生干扰素的能力。结果表明,给(57BL/6小鼠注射菌苗1.5×1O~9菌/只后,血清中干扰素活性明显升高,于尾静脉注射后2小时,干扰素滴度达高峰(9.06±0.34log_2U/ml)。该干扰素具有小鼠I-型干扰素相同的理化特性。实验还表明,由S-O_2-1菌体提取的核糖体和脂多糖(LPS)亦均具有诱生干扰素的活性。因此我们推测,s-O_2-1菌苗诱生干扰素的能力可能对其抗肿瘤活性的发挥起一定的怍用。     

S-O_2-1菌苗对小鼠免疫细胞的作用

本文探讨 S-O_2-1菌苗对小鼠淋巴细胞和单核吞噬系统的影响。正常小鼠接种菌苗后,脾脏T细胞百分率剧烈下降、胸腺显著缩小。脾脏细胞的抗 SRBC抗体应答和 GVH反应性明显降低。经 ALS处理的免疫低下小鼠接种菌苗后,抗 SRBC应答和GVH反应性的抑制更加明显。这些结果表明该菌苗具有抑制T细胞功能活性。另一方面,接种菌苗的小鼠,无论对无机碳粒还是对鸡红细胞,都显著加快了廓清速率,其腹腔细胞形成 EA花环能力也成倍上升,提示菌苗对单核吞噬系统有强烈刺激作用。以上资料证明,S-O_2-1菌苗的免疫刺激效应不在T细胞方面,而是针对单核吞噬系统。     

氯喹对S_(180)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的探讨氯喹(CQ)对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑瘤作用及其可能机制。方法采用40只S_(180)荷瘤小鼠分为模型组,氯喹低剂量组,氯喹中剂量组,氯喹高剂量组进行体内抑瘤实验,观察不同浓度氯喹对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用;透射电子显微镜观察氯喹作用下荷瘤鼠肿瘤细胞超微结构的变化;流式细胞术检测氯喹诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡的情况;免疫组织化学方法检测相关凋亡因子Bcl-2、细胞色素C和Cle-Caspase-3的表达情况;Western blotting检测荷瘤组织Bcl-2和Cle-Caspase-3蛋白表达水平的变化以及线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量的变化。结果与模型组相比较,氯喹处理组小鼠移植肉瘤S_(180)生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小(P0.05);透射电子显微镜观察发现,与模型组比较氯喹处理组肿瘤细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成;各剂量组氯喹均可诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡,使抗凋亡因子Bcl-2表达下调,凋亡因子Cle-Caspase-3表达上调(P0.05);并且氯喹能够降低线粒体内细胞色素C蛋白的表达,提高细胞质细胞色素C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内细胞色素C向细胞质内释放。结论氯喹能够抑制小鼠S_(180)肉瘤的生长,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,从而发挥抑瘤的作用。     

S-O_2-1细菌细胞壁骨架的制备及其对巨噬细胞的激活作用

本实验提取的S-O_2-1细菌细胞壁骨架(Cell Wall Skeleton,S-CWS)测出有16种氨基酸。 实验证明,经过S-CWS激活后的小鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数均有提高,酵母(YC)花环形成率达对照组的3.3倍。 巨噬细胞对肿瘤细胞的体外细胞阻滞实验结果证明,经S-CWS激活后的巨噬细胞对肿瘤细胞的阻滞效应(Cytostasis effect)显著提高。     

鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究

目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。     

金荞麦E药理作用的研究

金荞麦E即为金荞麦成份之一。实验结果表明:金荞麦E能显著抑制小鼠肉瘤S_(180),子宫颈癌u-14及Leuis肺癌等肿瘤的生长,但不能延长带白血病P_(388)小鼠的存活时间。同时金荞麦E抗瘤活性的有效剂量范围大,PD给药更为明显。P.o金荞麦对S_(130)、u-14、Leuis肺癌的最大抑瘤率     

CEA 迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的:观察已构建的含有CEA625-667 基因单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体的DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法:建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果:与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度(P <0.01),其中,pcDNA-triCEA625-667 疫苗组的抑制作用明显优于pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01),而二者均不能抑制CEA 阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。pcDNA-CEA625-667 疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d 相比有显著差异(P<0.01);pcDNA-triCEA625-667 疫苗组生存时间(48.50依6.73)d 明显高于生理盐水对照组和pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA 阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论:无论是单倍体还是三串联体的DNA 疫苗,均能够明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA 阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。     

荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK和LAK活性

观察了Ｓ１８０腹水瘤荷瘤小鼠早期及晚期脾细胞部份免疫功能的变化，并分析了其变化的相关性。结果显示在荷瘤早期脾细胞ＮＫ活性、ＬＡＫ活性及淋巴细胞转化反应已明显下降，与荷瘤晚期比无显著差异。ＮＫ活性与ＬＡＫ活性变化呈正相关，但淋巴细胞转化与ＮＫ活性及ＬＡＫ活性变化无关。说明荷瘤小鼠的脾细胞免疫功能抑制发生较早，检测一项免疫指标不能全面反映细胞免疫功能。     

人IL-6基因转染的小鼠黑色素瘤细胞B16-IL-6~ 致瘤性降低的实验研究

应用细胞因子基因转染的瘤苗治疗肿瘤是近年来肿瘤基因治疗的重要进展之一。本研究采用磷酸钙DNA共沉淀法将人IL-6基因转染入B16黑色素瘤细胞中,筛选出一株高分泌IL—6(240U/ml)克隆(B16—IL—6~ ),B16—IL-6~ 细胞体外生长能力减弱,小鼠皮下接种后肿瘤结节形成率降低,生长速度减慢,并对再次接种野生型B16细胞具有抵抗作用。小鼠静脉接种后形成的肺转移结节数显著减少,荷瘤小鼠存活期延长。结果表明IL-6基因转染的肿瘤细胞致瘤性显著下降。并能诱导机体产生抗肿瘤免疫功能。     

一种植物由来的糖蛋白(郑氏植物蛋白)--肿瘤相同性抗原的研究

目的：研究一种植物提取物的肿瘤相同抗原性及其在肿瘤早期诊断上的应用。方法：采用^3H掺入法测定了淋巴细胞和肿瘤细胞增殖反应；将人新鲜肿瘤组织块移植于小鼠，观察肿瘤在异种动物体内成活情况。瘤细胞DNA含量用流式细胞仪测定。通过凝胶层析及SDS-PAGE等方法对该提取液进行了化学成分鉴定。结果：该植物提取物对恶性肿瘤和癌前病变患者的淋巴细胞增殖有很强的刺激作用(P＜0．01)，但对正常人淋巴细胞无刺激作用。提取物对70％以上肿瘤患者的肿瘤细胞增殖有刺激作用。将人新鲜肿瘤组织块移植到经该提取物预处理的幼鼠后，成活率达90％以上，而且可以成功传代；未经提取物预处理的小鼠，30天后肿瘤组织死亡而被吸收。经初步鉴定，该提取物的化学成分为50kD的糖蛋白。结论：该植物糖蛋白具有肿瘤抗原活性或肿瘤相同抗原性，这种特性可应用于肿瘤诊断、治疗和肿瘤疫苗制备等。     

A cancer vaccine based on the marine antimicrobial peptide pardaxin (GE33) for control of bladder-associated tumors

The marine antimicrobial peptide (AMP) GE33, also known as pardaxin, possesses antimicrobial and anticancer properties, and modulates host signaling. GE33 has cytotoxic effects on murine bladder carcinoma (MBT-2) cells. Here, we investigated the potential of GE33 combined with inactivated MBT-2 as a cancer vaccine. The presence of up to 12.5 μg of GE33 did not inhibit the proliferation or endogenous nitrous oxide (NO) levels of RAW264.7 cells. However, the secretion of MCP-1, IL-6, and IL-12 by RAW264.7 cells was affected by GE33. We proceeded to test the effectiveness of the vaccine by immunizing mice at 7, 14, and 21 days of age, and injecting live MBT-2 cells on the 28th day. Tumor growth by the 58th day was attenuated in mice treated with the vaccine, as compared to the control group. Induction of MBT-2 specific-tumor antigens was increased in mice immunized with our vaccine. Furthermore, activation of T-cell receptors, cytotoxic T-cells, and NK cells was enhanced, and these showed high specificity for targeting tumor cells. Finally, immunization controlled excess recruitment of monocytes, lymphocytes, T-helper cells, and NK cells, and decreased the expression of VEGF. This report provides empirical evidence that our GE33-based vaccine enhances antitumor immunity in mice.     

Enhanced immunogenicity to food-and-mouth disease virus in mice vaccination with alphaviral replicon-based DNA vaccine expressing the capsid precursor polypeptide (P1)

Recently, alphavirus replicon-based DNA vaccines, also known as suicidal DNA vaccines, have emerged as an important strategy to enhance the potency of DNA vaccines. In this study, two different types of DNA vaccines encoding the capsid precursor polypeptide (P1) of foot-and-mouth disease virus (FMDV) were constructed and the immunogenicity were investigated and compared in mouse model. The first DNA vaccine, pcDP1, is a conventional plasmid DNA vaccine in which P1 was driven directly by a cytomegalovirus promoter. The second DNA vaccine, pSCAP1, is a Semliki Forest virus (SFV) replicon-based DNA vaccine encoding the same antigen. In vitro expression and characterization indicated that two vaccine vectors could correctly produce the P1 antigen. However, pSCAP1 could induce obvious apoptosis of the transfected cells. After immunization in BALB/c mice, the P1-specific ELISA antibodies, neutralizing antibodies, as well as lymphocyte proliferative responses induced by pSCAP1 were significantly higher than those obtained in mice immunized with pcDP1. Notably, mice immunized with the pSCAP1 had the determined ability of clearing virus in their sera after FMDV challenge. These results indicate that the SFV replicon-based DNA vaccine pSCAP1 are more effective than conventional DNA vaccine and it can be considered a promising approach for the development of a safety and efficacious vaccine against FMDV.     

糖原诱出小鼠腹腔中性粒细胞对肿瘤细胞杀伤能力的测定

研究证明糖原具有显著性的诱发小鼠腹腔中性粒细胞的作用；糖原诱出的小鼠腹腔中性粒细胞对腹水型Ｓ１８０肿瘤细胞的细胞毒性杀伤能力与生理盐水诱出的腹腔细胞相似，但低于糖原活化的巨噬细胞，研究结果表明糖是一种理想的小鼠腹腔中性粒细胞诱导剂。糖原诱出的小鼠腹腔中性粒细胞具有一定程度的抗肿瘤能力，但不如糖原诱发的巨噬细胞的抗肿瘤作用显著。     

HCVE2-gAD融合DNA疫苗的构建及其细胞免疫效果评价

目的 将丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）包膜糖蛋白E_2与脂联素球部结构域（gAD）进行基因融合后构建DNA疫苗,并通过免疫小鼠评价其所诱发的HCV E_2特异性细胞免疫应答.方法 根据E_2与gAD的基因序列设计引物,分别扩增出不含跨膜区的E_2基因和添加连接肽的gAD基因,再利用重叠PCR将二者融合,以pVRC为载体构建DNA疫苗质粒,经体外转染293T细胞并用Western Blot证实其表达后,采用皮内注射加卡钳电极电转的方式于0、3、6周免疫BALB/c小鼠,取脾细胞进行ELISPOT检测分析其所诱发的E_2特异性T细胞免疫应答水平.结果 成功构建了能有效表达E_2-gAD融合蛋白的新型DNA疫苗,经皮内电转方式免疫小鼠后可获得比单独E_2疫苗更强的HCV特异性T细胞免疫应答.结论 gAD基因的融入可在一定程度上增强疫苗的免疫原性,为新型HCV DNA疫苗的进一步发展和优化莫定基础.