罗格列酮对高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞炎症和增殖的影响

目的 探讨罗格列酮(RSG)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMCs)炎症和凋亡的影响及其可能的分子机制.方法 以不同浓度的葡萄糖和罗格列酮单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,ELISA方法检测培养基中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平;采用流式细胞术检测VSMCs细胞凋亡率及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达;Western印迹检测胞浆中VSMCs Bcl-xl蛋白表达及NF-κBp65和IκBα的表达.结果 高葡萄糖浓度(11.2、22.5 mmol/L)培养可明显增加上清中MCP-1的浓度,促进VSMCs增殖,抑制其凋亡,上调Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,同时使NF-κB p65表达增加,IκBα表达下降;30及100 μmol/L RSG以浓度依赖形式减少VSMCs对MCP-1的分泌,抑制高葡萄糖培养下(11.2、22.5 mmol/L)VSMCs Bcl-xl、Bcl-2表达,促进其凋亡;下调NF-κBp65表达,促进IκBα表达.RSG拮抗剂GW9662(10 μmol/L)预处理可部分拮抗RSG的作用.结论 RSG可能通过对NF-κB通路的调控,减少炎症因子MCP-1分泌,下调Bcl-xl、Bcl-2表达,从而抑制高糖葡萄糖培养下的VSMCs炎症反应并促进其凋亡,从而在2型糖尿病大血管病变的防治中发挥重要作用.     

罗格列酮对CXCL16诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究罗格列酮对CXCL16诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用。方法利用MTT法观察CXCL16对离体培养血管平滑肌细胞增殖作用的影响以及罗格列酮对这一增殖的影响。结果罗格列酮能抑制CXCL16诱导的血管平滑肌的增殖。结论罗格列酮能够抑制CXCL16对血管平滑肌的增殖。     

罗格列酮对高糖诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响及其机制

目的观察不同葡萄糖浓度培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的变化,以及罗格列酮（RGZ）对其分泌的影响。方法用不同浓度的葡萄糖和RGZ单独或联合孵育大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用ELISA方法检测培养基中MCP-1的水平,Western Blot方法检测各组所收集细胞胞浆中NF-κBp65和IκBα的表达。结果高葡萄糖浓度培养（11．2,22．4mmol／L）的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌的MCP-1[分别为（340．87±43．92）pg／ml和（664．87±23．07）pg／m1]明显高于对照组[-（132．20±5．81）pg／ml],RGZ抑制了高葡萄糖孵育下大鼠胸主动脉平滑肌细胞MCP-1蛋白表达水平并呈浓度依赖性,RGZ拮抗剂GW9662（10μmol／L）预处理可部分拮抗其作用。MCP-1水平的变化与细胞浆NF-κB、IκB的表达变化相伴随。结论高糖可以诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌MCP-1,并呈现浓度依赖性;RGZ可抑制高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞分泌MCP-1水平,上述作用在一定浓度范围内呈现剂量依赖性。高糖诱导平滑肌细胞分泌MCP-1很可能是通过NF-κB通路来调控的。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及可能的机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,取第4～8代细胞进行实验.用终浓度为1 μmol/L血管紧张素Ⅱ诱导6 h,随机分成对照组(含10% FBS的DMEM培养基)、1 μmol/L血管紧张素Ⅱ组、不同浓度罗格列酮(20、30、40及50μmol/L) 干预组,30 μmol/L罗格列酮干预不同时间组 (6、12、18及24 h).分别采用MTT和流式细胞术观察血管平滑肌细胞增殖和增殖周期的变化;逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定不同干预条件下血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ组吸光值明显高于对照组(P<0.01),20、30、40及50μmol/L罗格列酮干预12 h及30μmol/L 罗格列酮干预6、12、18及24 h后,吸光值明显降低(P<0.05或P<0.01);血管紧张素Ⅱ组增殖指数和S期细胞分数明显高于对照组(P<0.01).随着罗格列酮干预浓度的增加或干预时间的延长,增殖指数、S期细胞分数及处于S期分数均明显下降(P<0.05或P<0.01).与血管紧张素Ⅱ组相比,不同浓度(20、30及50μmol/L)罗格列酮干预12 h及同一浓度(30μmol/L)干预不同时间(6、12及24 h)显著升高血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 罗格列酮至少部分通过上调血管紧张素Ⅱ2型受体表达,阻止血管平滑肌细胞从G0/G1期向S期、G2/M期转化,从而抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖、迁移,发挥血管保护作用.     

罗格列酮对大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖和调亡的影响

目的观察罗格列酮对大鼠颈动脉损伤后平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为3组,即对照组、手术组、治疗组。手术组及治疗组均给予左侧颈总动脉球囊损伤,治疗组给予罗格列酮灌胃治疗。术后2周取损伤血管行HE染色及光镜观察,计算内膜面积（NIA）、内弹力板围绕面积（IELA）及管腔狭窄指数（SI）。免疫组化法检测平滑肌细胞增殖率,Tunnel法检测平滑肌细胞凋亡率。结果术后2周,手术组内膜面积、管腔狭窄指数显著高于对照组（P<0.01）;经治疗后,治疗组内膜面积、管腔狭窄指数显著低于手术组（P<0.01）。手术组细胞增殖率显著高于对照组（P<0.01）,而治疗组细胞增殖率显著低于手术组（P<0.01）。手术组细胞凋亡率显著低于对照组（P<0.01）,而治疗组细胞凋亡率显著高于手术组（P<0.01）。结论罗格列酮可以促进血管平滑肌细胞凋亡,抑制其增殖,从而减轻损伤血管的再狭窄。     

罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察罗格列酮对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞凋亡及磷酸化Smad2/3表达的影响.方法 高脂饮食复制SD大鼠高脂血症模型,酶消化法原代提取SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,取5～8代细胞进行实验.无血清培养24 h后:实验一分为4组:①对照组,②罗格列酮组(本实验所用罗格列酮均为100 μmol/L),③罗格列酮+过氧化物酶体增生激活受体γ(PPAR-γ)阻断剂GW9662组,④罗格列酮+抗转化生长因子β1(anti-TGF-β1)组,分别用Western blot于1 h检测磷酸化Smad2/3水平,24 h后流式细胞学检测细胞凋亡;实验二分2组:①对照组,②100 μmol/L罗格列酮组,分别于0、0.5、1、2,6、12和24 h,用Western-blot检测磷酸化Smad2/3水平.结果 24 h后罗格列酮组细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05),罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+抗转化生长因子β1组细胞凋亡率较罗格列酮组明显降低(P<0.05);罗格列酮处理后0.5 hVSMC p-Smad2/3表达水平明显高于对照组(P<0.05),且1 h迭高峰(P<0.05),p-Smad2/3水平达到高峰后又较快下降(P<0.05);罗格列酮+GW9662组和罗格列酮+anti-TGF-β1组p-Smad2/3表达水平较罗格列酮组低(P<0.05).结论 罗格列酮可能通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ,诱导血管平滑肌细胞磷酸化Smad2/3表达水平上调从而诱导血管平滑肌细胞凋亡.     

罗格列酮对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）在体外对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法应用CCK-8比色法检测不同浓度（25、50、100、200μmol/L）RSG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;实时荧光定量PCR法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果RSG对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率与浓度呈正相关。肝癌HepG2细胞的凋亡率与RSG浓度呈正相关;与对照组比较,加药组S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高（P均〈0.05）。100、200μmol/L RSG组的凋亡细胞较对照组明显增加,且浓度越高增加越显著。RSG干预肝癌HepG2细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调,而Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达上调。结论RSG可通过激活PPARγ、调节Bcl-2和Bax的水平而在体外抑制肝癌细胞生长,并诱导其凋亡。     

罗格列酮对高糖诱导下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

以大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1)为靶细胞,观察不同浓度不同时间罗格列酮(RSG)对高糖培养的系膜细胞的作用,发现RSG在一定范围内以剂量和时间依赖关系抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,阻止系膜细胞由G1期进入S期,并诱导细胞凋亡。RSG有效减轻了高糖诱导的肾小球系膜细胞的病理损伤。     

罗格列酮对高糖环境下内皮祖细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察高糖环境对内皮祖细胞(EPC)的损伤作用及罗格列酮对其的保护作用.方法 将健康志愿者骨髓单个核细胞接种于包被有人纤维黏连蛋白的培养板中,培养7天后获得正分化的EPC.贴壁细胞随机分为对照组、高糖组和高糖加罗格列酮组,分别于24h、96h后MTT测定3组细胞增殖功能,PI单染法检测其凋亡率.结果 高糖作用24h促进EPC的增殖能力,与对照组比,其OD值更大(P<0.05),且凋亡率没有明显增加(P>0.05).96h后,高糖明显抑制其增殖能力,OD值低于对照组(P<0.05),且凋亡率明显增加(P<0.01).罗格列酮干预后OD值比高糖组明显增加(P<0.05),且凋亡率明显降低(P<0.01).结论 长期高糖作用可抑制EPC增殖功能,使凋亡率增加;罗格列酮可能保护高糖环境下EPC的增殖能力并降低凋亡率.     

罗格列酮对高糖诱导RIN-m细胞凋亡的作用及其机制探讨

目的探讨罗格列酮对高糖诱导的RIN-m细胞凋亡作用及其机制。方法采用分别含5.5 mmol/L葡萄糖、33.3 mmol/L葡萄糖、5.5 mmol/L葡萄糖＋10μmol/L罗格列酮及33.3 mmol/L葡萄糖＋50μmol/L罗格列酮的培养液培养RIN-m细胞。以放射免疫法检测胰岛素分泌水平。以流式细胞仪及TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡情况。同时行免疫细胞化学染色,半定量分析Bcl-2和Bax的表达。RT-PCR检测胰腺十二指肠同源盒-1（PDX-1）mRNA表达。结果长期高糖可导致RIN-m细胞胰岛素分泌功能下降、凋亡率增加2.7倍（P〈0.05）。罗格列酮可以增加高糖环境下RIN-m细胞胰岛素的分泌、降低RIN-m细胞凋亡率（P〈0.05）。长期高糖可以降低RIN-m细胞Bcl-2/Bax的比例,并下调PDX-1 mRNA表达（P〈0.05）。10μmol/L罗格列酮即可增加高糖环境下RIN-m细胞Bcl-2/Bax表达的比例及上调PDX-1 mRNA表达（P均〈0.05）。结论罗格列酮对RIN-m细胞有直接的保护作用,这种保护作用可能与罗格列酮增加了Bcl-2/Bax表达比例和上调PDX-1 mRNA表达,进而抑制RIN-m细胞凋亡有关。     

红景天及红景天苷对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:探讨中药红景天及其主要成分红景天苷对高糖培养下血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用及机制。方法:将对数增殖期的VSMCs随机分为低糖(5 mmol/L)培养和高糖(25 mmol/L)培养两组,每组再分为5个亚组,分别在普通培养基(对照组)、低浓度红景天(0.3 mmol/L)、高浓度红景天(0.5 mmol/L)、低浓度红景天苷(0.3 mmol/L)、高浓度红景天苷(0.5 mmol/L)5种干预条件下培养24 h,采用BrdU法观察VSMCs增殖情况,Elisa法检测活性氧(ROS)水平和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性。结果:低糖培养下各亚组间VSMCs增殖无差异,ROS水平和NADPH氧化酶活性亦无差异。在高糖培养条件下,VSMCs增殖明显,ROS水平和NADPH氧化酶活性明显升高;加入红景天/红景天苷后,VSMCs增殖、ROS水平和NADPH氧化酶活性明显被抑制,并且存在一定的浓度依赖性。结论:红景天及红景天苷可抑制高糖诱导的VSMCs增殖,可能与抑制氧化应激水平有关,红景天苷可能是红景天发挥这一作用的主要成分。     

白藜芦醇通过SRIT1/NOX-p47信号通路抑制高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖

目的研究白藜芦醇(Res)对高浓度葡萄糖孵育下的血管平滑肌细胞(VSMC)SRIT1及NADPH氧化酶-p47(NOX-p47)蛋白表达的影响,探究白藜芦醇对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制作用的机制。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株A7r5为研究对象,采用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测VSMC细胞周期进程;采用Western blot技术检测SIRT1、NOX-p47蛋白的表达。结果高浓度葡萄糖(25 mmol/L)培养可明显促进VSMC增殖,诱导G0/G1期细胞向S期转化,明显增加NOX-p47蛋白表达,减少SIRT1蛋白表达;白藜芦醇(25、50、100μmol/L)以浓度依赖形式抑制高糖孵育下VSMC增殖活性,阻止其由G0/G1期向S期转变,降低VSMC NOXp47表达,增加SIRT1蛋白表达。结论白藜芦醇可能通过SIRT1/NOX-p47蛋白信号通路干预高糖诱导的VSMC增殖,对2型糖尿病的大血管病变起到防治作用。     

大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养和鉴定

目的探讨大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的原代培养方法,了解生长特性,为血管增生性疾病的治疗研究提供试验材料。方法采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长情况,用免疫组化染色做鉴定,台盼蓝染色进行活力检测。结果85%的组织块接种存活,原代培养后2周左右即可传代,至少可以传8代以上,并且细胞形态、生长特点不发生明显的改变,6代的血管平滑肌细胞纯度达97%以上。台盼蓝染色约有94%以上的细胞为活细胞。镜下培养的血管平滑肌细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论正确地利用组织贴块法可以简单、经济、高效地培养出血管平滑肌细胞,为血管增生性疾病的治疗研究提供了理想的细胞模型。     

转VEGF基因对血管损伤后平滑肌细胞增殖和表型的影响

目的：观察局部转染pAdTrack CMV-VEGF165对动脉粥样硬化兔血管损伤后平滑肌细胞增殖和表型转变的影响。方法：90只新西兰大白兔分为3组,I组（30只）单纯拉伤腹主动脉;Ⅱ组（30只）拉伤后局部转染真核表达质粒pAdTrack CMV;Ⅲ组（30只）拉伤后局部转染pAdTrack CMV-VEGF165;每组按实验终点（术后3d、1周、2周、4周和8周）分为5个亚组,术前1周开始予高脂饮食至实验终点,取拉伤段血管用于^3H-TdR掺入实验、病理学检测和电镜观察平滑肌细胞表型变化。结果：^3H-TdR掺入实验结果显示,I组和Ⅱ组在血管拉伤后3d ^3H-TdR掺入量增加（P＜0．05）,2周时达到高峰（P＜0．01）,以后逐渐下降,8周时恢复至正常,而Ⅲ组血管组织术后3d同样出现^3H-TdR掺入增加（P＜0．05）,术后1周时^3H-TdR掺入值明显低于I组和Ⅱ组（P＜0．01）,术后4周时^3H-TdR掺入量接近正常;透射电镜观察显示I组和Ⅱ组从术后3d开始出现合成型VSMC,2周时达到高峰,80％以上为合成型,至4周时,仍以合成型平滑肌细胞为主（60％）,而Ⅲ组血管组织术后3d时可见少量合成型平滑肌细胞（10％）,1周时合成型VSMC约占30％,术后2周时90％为收缩型平滑肌细胞,4周时已无合成型平滑肌细胞。结论：局部转染VEGF165基因可抑制平滑肌细胞增殖和表型改变,缩短修复时程。     

可罗卡林对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察对大鼠主动脉平滑肌细胞起负调节作用的可罗卡林(cromakalim对同型半胱氨酸(hcy)刺激的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)增殖及c—myc基因表达的影响。方法：在建立hcy诱导的平滑肌细胞增殖模型后，应用流式细胞术观察VSMC增殖周期的变化；并用免疫细胞化学方法观察可罗卡林对VSMC增殖及c—myc基因蛋白表达的影响。结果：可罗卡林使VSMC处于G0／G1期的细胞数显著增多(P＜0．01)，S期G2 M期的细胞数显著减少(P＜0．01．)，能够抑制hcy诱导的VSMC增殖和c—myc基因蛋白表达的增加。结论：可罗卡林对hcy诱导的VSMC增殖有显著的抑制作用，其作用机制与抑制c—myc基因表达有关。     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的探讨平滑肌细胞培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用相差显微镜观察其生长情况,用免疫荧光染色分析其抗原的表达。结果培养3日可见组织块周边有细胞长出,2周达亚融合,传代后细胞“谷峰”生长明显。SM-α-肌动蛋白和Calponin抗体免疫荧光染色呈阳性。结论组织贴块法是简单、经济、高效的平滑肌细胞培养方法,为心血管疾病发病机制的研究提供了理想的细胞模型。     

放射性PDGFR-β反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究32P标记血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）的反义寡核苷酸（AON）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,为抑制血管术后再狭窄的形成提供可能的干预。方法体外进行大鼠VSMC的培养,以510代细胞为实验对象,人工合成PDGFR-βAON,并进行32P标记,按实验目的分组。MTT法分析细胞增殖活力,以流式细胞仪测定细胞周期,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果32P标记PDGFR-βAON作用后,VSMC的增殖强度明显弱于空白对照组（P<0.01）,而处于DNA合成前期（G0/G1）细胞百分比高于空白对照组（P<0.01）;32P标记AON组细胞凋亡率明显高于空白组（P<0.01）。结论32P-PDGFR-βAON可以诱导VSMC凋亡,抑制其增殖。