血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞内游离钙的作用机制

本研究用５７０型粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ－５７０）动态观察了血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对单个平滑肌细胞（ＳＭＣ）内游离钙的影响，探讨了ＡｎｇⅡ调节ＳＭＣ内游离钙的改变的机制。分离兔主动脉中层平滑肌，用含１０％小牛血清的ＤＭＥＭ培养，第３～５代细胞用于实验，并于实验前两天去除血清使细胞处于静止期。结果发现：ＡｎｇⅡ可引起细胞内一个快的、短暂的、剂量依赖性的游离钙升高，ＡｎｇⅡ的拮抗剂沙拉斯（ｓａｒａｌａｓｉｎ）可抑制这种作用，而钙离子通道阻滞剂硝苯地平或维拉帕米则没有影响。提示：ＡｎｇⅡ调节ＳＭＣ内游离钙升高的机制主要是通过促进细胞内贮存钙的释放。     

血管紧张素II促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压ＷＫＹ大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）为对照，探讨血管紧张素ＩＩ（ＡｎｇＩＩ）对培养的ＳＨＲ ＡＳＭＣ促增殖的机制。结果表明：ＡｎｇＩＩ（１０＾－９￣１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）对ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠的ＡＳＭＣ均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强，但对ＳＨＲ ＡＳＭＣ的促增殖效应明显高于ＷＫＹ大鼠。应用碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）单克隆抗体（Ａ－ｂＦＧＦ）和反义ｂＦＧＦｍＲ－Ｎ     

血管紧张素瞬间及持续刺激对乳发鼠培养心肌细胞内游离钙的影响

应用双波长向一荧光检测技术研究血管紧张素瞬间及持续刺激对乳鼠培养心肌细胞内游离钙的影响。结果显示，当加入血管紧张素Ⅱ时，可观察到一个瞬间上升波峰，继而恢复，钙搏动振幅及频率无明显改变     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的调节作用

肾素－血管紧张素系统在调节血压、维持水电解质平衡等方面起重要作用，近来研究表明血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌细胞、成纤维细胞及血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）具有生长激素样作用，可能参与了阻塞性血管疾病如冠心病、血管成形术后再狭窄的发生。随着ＡｎｇⅡ受体分...     

血管紧张素Ⅱ对乳鼠培养心肌细胞自发性收缩及细胞内游离钙的瞬间…

应用倒置显微闭路电视系统及Ｃａ＾２＋敏感的荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ的方法，记录培养心肌细胞的自发性收缩及瞬间变化，结果发现，应用ＡｎｇⅡ（１０－１０００ｎｍｏｌ．Ｌ＾－１）５Ｍｉｎ，心肌细胞收缩频率增加，但细胞边缘运动的度减少。     

血管紧张素Ⅱ对不同培养条件下自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞…

研究血管紧张素Ⅱ在无血清或２％血清培养基条件下，对自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞的促肥大增殖效应以及ＡｎｇⅡ受体拮抗剂Ｓａｒａｌａｓｉｎ能否抑制ＡｎｇⅡ的效应。     

雌激素对血管平滑肌细胞内游离钙的调节作用

目的：动态观察雌二醇（Ｅ２）对单个血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度及血管紧张素Ⅱ引致的细胞内钙离子浓度变化的影响，以探讨雌激素对平滑肌细胞内储存钙释放的调节作用。方法：体外培养健康雌性兔胸主动脉中层平滑肌，细胞接种在５７０型粘附式细胞仪专用的培养皿中，加入１０－５、１０－７、１０－９ｍｏｌ／Ｌ３种不同浓度的Ｅ２处理。另用３种不同浓度的Ｅ２预处理细胞１小时后，加入血管紧张素Ⅱ。实验分单纯血管紧张素Ⅱ处理组和血管紧张素Ⅱ＋不同浓度Ｅ２预处理组，用ｆｕｒａ－３法测定细胞内钙离子浓度。结果：３种浓度Ｅ２对平滑肌细胞内游离钙离子浓度的基础水平无影响，但１０－５、１０－７ｍｏｌ／Ｌ的Ｅ２预处理细胞后血管紧张素Ⅱ未能激发细胞内游离钙离子浓度升高。结论：雌激素可能参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的调节     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞生物学行为的多重影响

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为多重影响的机制。方法　用腺病毒介导基因转染方法使VSMC表达AngⅡ 2型受体 (AT2R)并检测不同时相点AT2R表达率 ;对比AT2R表达前后AngⅡ 1型受体 (AT1R)表达量的变化以及对AngⅡ刺激的反应 ;通过 5 溴尿苷 (BrdU)参入法、改良Boyden′s趋化小室及流式细胞仪分别检测VSMC增殖、迁移及凋亡等生物学行为所受的影响。结果　VSMC的AT2R转染最高表达率在转染后 4 8h(89 5 1% ) ,AT1R最高表达率为 77 94 %。AT2R峰值表达时 ,转染组VSMC的BrdU参入量降低 5 1 6 %(P <0 0 1) ,细胞跨膜迁移数减少 6 2 2 % (P <0 0 5 ) ,细胞凋亡率由 7 6 %± 1 6 %显著地增加至32 1%± 5 5 % (P <0 0 1)。而未转染组以AT1R表达为主 ,AngⅡ作用明显具有促进VSMC增殖、迁移和抑制其凋亡的作用。结论　VSMC转染表达AT2R后 ,可显著地抑制AngⅡ通过AT1R所介导的促进VSMC增殖、迁移以及减少其凋亡的生物学作用。     

血管紧张素Ⅰ抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,取生长良好的第3～5代细胞用于实验。随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7)组、AngⅡ Ang-(1-7) (A-779)组,通过3H胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法测定VSMCs的DNA合成,用结晶染色的方法检测细胞数目,观察VSMCs的增殖情况。结果①与对照组比,AngⅡ(100nmol/L)孵育细胞24h后可明显诱导VSMCs3H-TdR掺入量增加;Ang-(1-7)(1000nmol/L)可减少3H-TdR掺入量。②与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMCs3H-TdR掺入量。加入Ang-(1-7)特异性受体阻断剂A-779后,Ang-(1-7)此作用消失。③结晶染色结果显示,AngⅡ可诱导VSMCs数目明显增加(P<0.05)。Ang-(1-7)可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增加,亦呈浓度依赖性(P<0.05)。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的VSMCs增殖,通过其特异性受体发挥作用。     

血管紧张素转换酶抑制剂对血管紧张素II介导的钙信号传导的…

本研究以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）为对象，探讨了血管紧张素转换酶换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）对血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的直接作用。结果发现：ＡＣＥＩ呈时间依赖性地抑制ＡｎｇⅡ介导的钙内流，而不影响其钙释放。ＡＣＥＩ的这种作用与ＶＳＭＣ的血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性无关，其抑制ＡｎｇⅡ介导的钙内流特点与不同于钙通道阻滞剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。ＡＣＥＩ并不直接抑制钙通道，但激活ＶＳＭＣ的内源性蛋白激酶     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞中钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果与正常对照组比较,血管紧张素Ⅱ组能够明显刺激血管平滑肌细胞增殖,血管紧张素Ⅱ处理的血管平滑肌细胞的钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性及细胞增殖活度均较正常对照组显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪处理后,各组钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性均显著下降(P<0.01)。结论川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其抑制机制可能与其干预钙调神经磷酸酶依赖的信号转导途径有关。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因对血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的探索血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型(AT2)受体基因对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响.方法用同源重组技术构建携带AT2受体基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-AT2R),将VSMC分为对照组及转染组(体外转染培养的大鼠VSMC),用流式细胞术检测其细胞转染率,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测AT2受体、bcl-2和baxmRNA表达,流式细胞术、原位末端标记法检测VSMC凋亡.结果构建的AdCMV-AT2受体体外转染培养的VSMC的表达率为89.51%,VSMC表达AT2受体后,其凋亡发生率较对照组增加4.2倍(P＜0.01),bax表达增加76.3%,bcl-2则无明显变化,原位末端标记法检测结果表明转染组出现大量凋亡细胞.结论转染AT2受体基因可显著增加VSMC的凋亡,这对血管再狭窄的防治是有益的.     

阿司匹林对血管紧张素Ⅱ诱导平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:观察阿司匹林对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法:采用组织贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。①阿司匹林细胞毒性检测:实验分对照组和阿司匹林5 mmol/L组。两组培养24 h后,取上清液,用乳酸脱氢酶活性测定法,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。②阿司匹林抗增殖效果:实验分5组,对照组、AngⅡ组、AngⅡ+阿司匹林0.5 mmol/L组、AngⅡ+阿司匹林1 mmol/L组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养1 d、3 d、5 d后,采用四唑盐比色法测各孔的吸光值。③NO含量检测:实验分4组,对照组、阿司匹林2 mmol/L组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞培养上清液按试剂盒说明书检测NO含量。④细胞周期检测:实验分3组,对照组、AngⅡ组和AngⅡ+阿司匹林2 mmol/L组。以上各组分别培养24 h后,收集细胞,用流式细胞仪检测细胞周期。结果:①与对照组比较,阿司匹林5 mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。②阿司匹林(0.5、1、2 mmol/L)呈剂量依赖性地抑制脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制的最大效果在本实验内显示为2 mmol/L浓度的阿司匹林在培养第5天时,与AngⅡ组比较有极显著性差异(0.27±0.01 vs 0.74±0.03,P<0.01)。③AngⅡ刺激脐动脉平滑肌细胞24 h后,可降低细胞培养上清液中NO的含量,与对照组比较有显著差异[(54.08±5.69)μmol/L vs (70.27±3.99)μmol/L,P<0.05];而加入阿司匹林2 mmol/L干预后,可升高上清液中NO的含量,与AngⅡ组比较有极显著差异[(63.31±5.41)μmol/L vs(54.08±5.69)μmol/L,P<0.01]。④与AngⅡ组比较,阿司匹林(2 mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(G0/G1期)的脐动脉平滑肌细胞所占比例显著升高[(62.05±1.55)%vs(48.72±2.31)%,P<0.05],而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低[(24.77±2.82)%vs(35.77±2.13)%,[<0.05]。结论:阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的脐动脉平滑肌细胞的增殖,抑制细胞在G0/G1期,促进脐动脉平滑肌细胞NO的产生。     

人白细胞介素10对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察重组人白介素10 (rhIL-10) 对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶的影响. 方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES(methoxyphenyl-tetrazolium salt/phenazine ethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.利用p44/p42磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞. 结果 AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(1.311±0.201 对 0.781 ±0.236, P<0.05).rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(0.783±0.170 对 0.781±0.236, P>0.05).在AngⅡ刺激下,1、10、100 ng/ml的rhIL-10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为0.984±0.172、 0.932±0.134、 0.784±0.097对1.311±0.201, P<0.05).AngⅡ对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用(512±78对100,P< 0.01), 此作用可被rhIL-10抑制 (512±78对329±59, P< 0.01). 结论 rhIL-10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达.     

血管紧张素Ⅱ对模拟缺血心室肌细胞内游离钙的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对模拟缺血心室肌细胞内游离钙离子浓度的作用。方法 用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞，经Fluo-3／AM负载染色后，用激光共聚焦扫描，测定荧光强度，反映细胞内游离钙离子浓度；采用低氧、无糖、高乳酸和酸中毒综合方式模拟缺血液灌流，造成细胞的模拟缺血，并在缺血的基础上观察AngⅡ对模拟缺血心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响。结果模拟缺血可缓慢增加心室肌细胞内游离钙浓度；AngⅡ能使模拟缺血细胞内游离钙浓度增高，并呈脉冲式变化。结论 AngⅡ能增加模拟缺血心肌细胞静息钙水平，导致钙超载。     

血管紧张素1型受体自身抗体对大鼠血管平滑肌细胞细胞质游离钙水平的影响

目的:观察难治性高血压患者血清中血管紧张素1型受体(AT1)的自身抗体对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)细胞质游离钙水平的影响。方法:应用AT1的胞外第2环作为抗原,采用ELISA方法检测22例难治性高血压患者血清中AT1自身抗体,提纯难治性高血压患者血清中的AT1自身抗体。用细胞免疫荧光染色方法检测该抗体与AT1的亲和性。培养大鼠主动脉VSMC,应用钙离子的荧光探针Fluo-3/AM负载原代VSMC,应用共聚焦显微镜检测细胞荧光强度变化来反映细胞内游离钙水平的变化。将该患者血清、提纯AT1自身抗体、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)分别作用于VSMC,观察荧光强度变化来检测VSMC细胞质游离钙水平变化。结果:22例难治性高血压患者中有10例(45.5%)患者AT1自身抗体阳性,明显高于非难治高血压组(12.5%,P<0.05)。提纯的AT1自身抗体能够与VSMC膜表面AT1特异性结合。并且该抗体能够刺激VSMC,使得胞内游离钙水平增高。该抗体具有与AngⅡ类似激动效应,并能够被AT1拮抗剂洛沙坦阻断。结论:AT1胞外第2环肽的抗体能够与AT1特异结合并且模拟AngⅡ的激动作用,促进VSMC胞内游离钙水平升高,在难治性高血压患者高血压发病机制中起着重要作用。应用AT1拮抗剂洛沙坦能够有效地阻断该抗体的效应。     

肾上腺髓质素抑制血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增生作用

目的　观察肾上腺髓质素 (adrenomedullinADM)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激血管平滑肌细胞增生作用的影响。方法　测定ADM、AngⅡ对细胞3H leu掺入及 (MAPK)和 (PKC)活性的作用。结果　AngⅡ促进细胞3H leu掺入及MAPK和PKC活性增加 ;ADM对细胞3H leu掺入及MAPK、PKC活性均无明显影响 ,但呈浓度依赖方式抑制AngⅡ促细胞3H leu掺入及MAPK活性增加。结论　ADM通过抑制AngⅡ对MAPK的激活 ,拮抗其促血管平滑肌细胞增生作用。     

血管紧张素Ⅱ促高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖机制的研究

本工作以培养的正常血压WKY大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMC)为对照,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养的SHR ASMC促增殖的机制.结果表明:AngⅡ(10~(-9)～10~(-6)mol/L)对SHR和WKY大鼠的ASMC均有促增殖作用且随剂量增加其作用加强,但对SHR ASMC的促增殖效应明显高于WKY大鼠.应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(A-bFGF)和反义bFGF mR-NA均可明显抑制AngⅡ促SHR ASMC的增殖效应.此外,基础状态下及AngⅡ(10~(-6)mol/L)刺激8h后,SHR ASMC的bFGF基因表达均明显高于WKY大鼠.提示,AngⅡ的促细胞增殖作用部分是通过先诱发bFGF的产生而引起.