母兔卵巢异体异位移植的实验研究

目的:建立雌兔异体卵巢组织移植模型,探索非血管吻合卵巢组织移植的可行性。方法:以雌兔为实验动物,A组:阳性对照,不做任何处理;B组:阴性对照,切除双侧卵巢;C组:卵巢组织异体异位移植组,分离卵巢组织,切成约1mm×1mm×1mm大的组织块,移植于异体颈部皮下,术后观察阴道脱落细胞涂片变化,同时于移植后第18、25、35、45、55天检测血清E2及P水平,60天处死母兔,对移植物及子宫内膜进行组织学检查。结果:(1)C组3只雌兔阴道呈红色或粉红色、湿润、肿胀,进入发情期;(2)A、C组术后25天血清E2及P水平均高于B组,并逐渐下降,35天达到最低水平,随后又呈上升趋势,至55天已明显高于B组(P<0.05),B组则始终维持在较低水平,未出现升高趋势;(3)A、C组卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡。结论:兔卵巢组织异体异位移植后移植物可存活,并释放内源性激素,对靶器官产生作用。     

大鼠同种异体子宫异位移植模型的建立

目的　评价大鼠同种异体子宫异位移植模型建立的手术学方法及其可行性。方法选择8~10周龄Wistar大鼠60只,分为供体30只和受体30只,行子宫异位移植手术。记录每例手术的时间(前15例手术为预实验组,后15例手术为实验组)。术后7d处死受体大鼠,评估移植子宫的组织形态学变化。结果　共进行同种异体子宫异位移植手术30例,存活率由预实验组的40% (6 /15)上升至实验组的75% (12 /15)。存活的18只受体大鼠中, 15只移植子宫成活,移植子宫成活率为83%。预实验组子宫移植的供体手术时间、受体手术时间、子宫移植时血管吻合时间和总手术时间分别为(68±8)min、(110±20)min、(39±5 )min和( 178±24 )min,实验组分别为( 65±10 )min、( 89±22)min、(36±8)min和(154±23)min,后者与前者比较,各步骤手术时间及总手术时间均缩短,但差异无统计学意义。结论　Wistar大鼠异体子宫异位移植模型的建立是可行的,并将为人类子宫移植提供实验依据。     

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。     

冻存卵巢组织移植的影响因素

冻存卵巢组织移植作为一种保存年轻女性生殖内分泌功能的治疗方法,正日益受到重视,但其影响因素众多,技术程序有待进一步优化.检索综述中英文文献,探索冻存卵巢组织移植的影响因素发现,冻存卵巢组织移植的影响因素包括冷冻保存过程、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、激素、机械因素、临床因素等.目前卵巢移植还存在许多亟待解决的问题,随着冷冻保存技术、血管吻合技术和辅助生殖技术的发展,冻存卵巢组织移植将成为解决卵巢早衰、保存年轻癌症患者生殖内分泌功能的有效途径.     

亮丙瑞林对顺铂所致大鼠卵巢毒性保护的实验研究

目的:探讨亮丙瑞林(GnRH-a)对大鼠顺铂所致卵巢功能损伤的保护作用。方法:选择SPF级别12周龄SD雌鼠96只,随机分为4组,每组24只。A组为正常对照组,腹腔注射生理盐水2ml/d。B组为顺铂组,C组为亮丙瑞林(GnRHa)+顺铂组,D组为单用亮丙瑞林组。于间情期C、D组皮下注射亮丙瑞林0.25mg/只(单次给药)。B、C组腹腔注射顺铂2mg/(kg.d),连续用药10天。用药结束后及结束后30天分别每组处死8只;每组剩余的雌鼠按2:1与雄鼠交配,产仔后处死。称体重、卵巢及子宫重量,统计卵泡数量和各级卵泡直径,观察卵巢和子宫病理学变化。测雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)。观察孕鼠产仔数量及外观。结果:用药结束后B、C组大鼠精神及饮食状况差,体重及子宫重量下降(P<0.05),以B组最为明显(P<0.05)。用药结束后30天4组大鼠体重增加,B组体重恢复得最慢(P<0.05)。用药结束后B、D组子宫黏膜层变薄,纤维成分多,子宫腺体少。C组子宫黏膜层变薄,但腺上皮细胞比B组清晰,有顶浆分泌现象。C、D组原始卵泡较多,生长卵泡、成熟卵泡数减少,各级卵泡的粒细胞层明显减少(P<0.05)。B组成熟卵泡减少明显(P<0.05)。用药结束后30天,B、C、D组子宫内膜厚度及腺体量均有所改善。B组成熟卵泡数减少(P<0.05)。C组和D组成熟卵泡数增多(P<0.05)。用药结束后B、C、D组FSH升高,E2下降(P<0.05),B组与C、D组相比,FSH升高,E2下降更明显(P<0.05)。用药结束后30天,C、D组FSH降低,E2升高(P<0.05)。4组鼠仔未见畸形,B组产仔数减少。结论:顺铂对大鼠卵巢有毒性作用。亮丙瑞林可使原始卵泡数增多,卵泡处于静止期,降低顺铂对卵巢的毒性作用。     

卵巢组织冻存与移植的发展现状

卵巢组织冻存(OTC)与移植目前主要用于青春期前或需尽快接受抗癌治疗的年轻肿瘤患者生育力保存,至今已有二十余年的历史,通过冻存卵巢组织再移植获得的活产已有超过200例的报道,近年来OTC与移植得到了快速发展,但仍存在许多亟待解决的问题。有效性方面,大部分患者自体冻存卵巢组织再移植后,卵巢内分泌功能可恢复至正常,活产率高达40%,然而冻存卵巢组织的回输利用率仍处于较低水平。安全性方面,通过卵母细胞体外成熟、人工卵巢等新兴技术减少肿瘤细胞在卵巢组织移植中转移、复发的风险是近年来众多研究者关注的方向。如何最大限度地保证OTC与移植过程中卵泡的存活也一直是研究的重点,目前有添加生长因子、激素、抗凋亡药物、干细胞等多种方法防治卵泡的凋亡和丢失。然而这些新兴技术大多尚处于实验室阶段,未来期待更多基础和临床研究来为OTC与移植这项生育力保存技术提供更多的有效性和安全性保障。     

冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取

目的:探求冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取。方法:取手术切除的5例患者卵巢皮质,放入1.5 mol/L的二甲基亚砜+10％血清中,应用可控程序冷冻仪逐渐降温,移入液氮中冻存。三个月后,将融解的卵巢皮质移植入89只裸鼠皮下,注射hFSH 12周,刺激卵泡生长。注射hCG 36 h后,用18号针头穿刺提取卵细胞。结果:卵泡直径为3～9 mm,穿刺获19个卵细胞,放入TC-199培养基,加20％胎牛血清,25 mmol/L丙酮酸,75 mIU/mL FSH和LH培养,获15个分裂中期的次级卵母细胞。结论:人卵巢组织冻融后可异体移植生长,且其卵细胞可在体外发育成熟。     

同种异体同基因组和异基因组大鼠子宫原位移植模型建立及移植子宫生殖功能评价

目的:建立同种同基因和异基因大鼠子宫原位移植模型,评价移植子宫的生殖功能。方法:同基因组以雌性Wistar大鼠分别作为供体和受体,行子宫原位移植术。异基因组以雌性SD大鼠作供体,雌性Wistar大鼠作受体,行子宫原位移植术,受体大鼠术后第1天起使用环孢素,每天每公斤体重肌肉注射10mg。对照组雌性Wistar大鼠10只,切除左侧宫角。术后3组大鼠分别与同周龄雄性Wistar大鼠合笼12周,自然交配,观察受孕及分娩情况。子代大鼠自出生起每周称量体重至第8周,绘生长曲线,并各自分别交配。结果:10例同基因大鼠,10例异基因大鼠分别行子宫原位移植手术,10例对照手术。受体大鼠存活率同基因组80%(8/10),异基因组90%(9/10),对照组大鼠存活率90%(9/10)。同基因组8例存活的大鼠中4例受孕,受孕率50%,顺产分娩子代大鼠15只;异基因组9例存活大鼠中2例受孕,受孕率22.2%,但2例均胎死宫内;对照组9例存活大鼠中6例受孕,受孕率66.7%,顺产分娩子代大鼠19只。同基因组和对照组分娩的子代大鼠外观均无畸形,两组子代生长曲线基本相似,并有正常生殖功能。结论:同基因大鼠子宫原位移植后移植子宫可恢复正常生殖功能;异基因大鼠子宫原位移植后应用环孢素可使移植子宫长期存活,但生殖功能可能受影响。     

融合期胚胎和囊胚移植的探讨

目的：探讨融合期胚胎和囊胚单胚胎移植的可行性.方法：选取苏北人民医院生殖医学中心冷冻胚胎解冻移植231个周期的患者为研究对象,比较卵裂期胚胎移植组、融合期胚胎移植组和囊胚移植组的胚胎种植率、临床妊娠率以及多胎的发生率.结果：融合期胚胎移植组平均移植胚胎数低于卵裂期胚胎移植组,差异有统计学意义[（1.35±0.50） 个vs.（1.73±0.59） 个,t=-4.902,P＜0.001],但其胚胎种植率和临床妊娠率高于卵裂期胚胎移植组,差异均有统计学意义（49.58% vs.23.00%,χ2=24.567,P＜0.001;53.41% vs.34.15%,χ2=7.805,P=0.005）;囊胚移植组胚胎种植率高于卵裂期胚胎移植组,差异有统计学意义（46.88% vs.23.00%,χ2=8.214,P=0.004）;3组间多胎发生率差异无统计学意义（χ2=2.231,P=0.328）.结论：进行融合期胚胎或囊胚移植可获得较高的胚胎种植率和周期移植妊娠率,降低多胎率,尤其应用于单胚胎移植有重要意义.     

卵巢组织冻存移植保护女性生育力的临床应用

近年来,随着癌症诊断、治疗技术的进步和患者生存率的提高,以及国家三孩政策的放开,女性生育力保护和保存已成为国际和国内的热点。卵巢组织冻存移植技术是儿童及抗癌治疗无法延迟的育龄女性生育力保护的惟一方法。文章主要聚焦于卵巢组织冻存移植生育力保护技术的临床应用。     

达英-35预防环磷酰胺对大鼠卵巢功能损伤的实验研究

目的:研究口服避孕药达英-35在雌性大鼠中减轻环磷酰胺(CTX)诱导的性腺毒性的效果。方法:随机将75只雌性Wistar大鼠分为5组:空白对照组、CTX组、达英-35组、联合治疗Ⅰ组和联合治疗Ⅱ组。用放射免疫法测定各组雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)水平,并于停药当天、第15天、30天,处死各组1/3的大鼠,比较卵巢重量、卵泡数量变化。结果:停药第30天,CTX组大鼠E2为(21.88±2.10)pg/ml,明显低于两个联合治疗组,FSH为(7.05±0.18)mIU/ml,明显高于两个联合治疗组,差异均有统计学意义(P0.05);CTX组卵巢重量和卵泡总数分别为(32.40±5.55)mg和308±32个,明显低于两个联合治疗组,差异有统计学意义(P0.05);联合治疗Ⅰ、Ⅱ组的E2、FSH、卵巢重量、卵泡数量分别比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:达英-35降低了CTX对大鼠卵巢功能的损伤,对卵巢功能的保护和恢复起到了一定的作用。     

瘦素长受体缺失小鼠生殖功能障碍的分子机制研究

目的：探讨引起瘦素长受体缺失（LR-）小鼠（db/db小鼠）生殖功能障碍的原因,阐明瘦素与生殖功能障碍的直接关系。方法：将LR-的雌性db/db小鼠和其同窝出生的有完整LR（LR+）的雌性野生型 C57BL/6J小鼠进行异体卵巢原位移植,构建实验小鼠的LR基因型组合。分别为躯体LR-、卵巢LR+（KO组）和躯体LR+、卵巢LR+（WT组）,每组各7只动物。移植后恢复2周然后监测卵巢的周期变化,连续2个周期。于小鼠动情间期取血检测血清性激素水平和糖脂代谢指标;用RT-PCR法检测卵巢组织STAR,CYP17,CYP19,OB-RB,JAK2,STAT3,PIAS3和SOCS3的mRNA表达水平。结果：①卵巢移植术后KO组小鼠无动情周期,WT组小鼠动情周期正常,2组间卵巢、子宫质量、雌二醇、促卵泡生成素水平、体质量、脂肪垫、葡萄糖、胰岛素、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇差异均有统计学意义（P＜0.01）。② KO组卵巢中甾体激素STAR,CYP17和CYP19的mRNA的表达量均低于WT组。2组卵巢中均有OB-RB mRNA表达,且KO组OB-RB,STAT3,PIAS3和SOCS3的mRNA表达强于WT组。结论： ①db/db小鼠机体内分泌环境异常（高血糖高血脂内分泌环境、低促性腺激素）下调卵巢甾体激素合成酶基因的表达,引起卵巢功能减退。②卵巢作为一个较小的内分泌器官并不能影响全身的糖脂代谢。     

Legal termination of a pregnancy resulting from transplanted cryopreserved ovarian tissue due to cancer recurrence

Purpose

To report on a woman who conceived naturally and had a normal intrauterine pregnancy following transplantation of frozen/thawed ovarian tissue but decided to have an early abortion due to recurrence of breast cancer.

Methods

The patient was diagnosed breast cancer and received antineoplastic treatment that forced her into premature ovarian insufficiency and infertility. Ovarian tissue cryopreserved prior to chemotherapy was transplanted following cancer treatment restoring fertility and regular menstrual cycles.

Results

The patient conceived 6 month after transplantation. However, she experienced recurrence of breast cancer and decided on legal termination of the pregnancy in the first trimester.

Discussion

The obtained pregnancy only 6 month following transplantation underlines the ability of the procedure. The recurrence occurred near the original site of the tumor and was most unlikely related to the transplantation. The activity of the transplanted tissue is likely to be destroyed by the renewed antineoplastic treatment she will receive. However, she still has the majority of one ovary cryostored and may later want to undergo additional transplantation to regain fertility or to have menstrual cycles back.     

Carcinosarcoma of the ovary: a case-control study

Introduction

Carcinosarcoma of the ovary is a rare tumor with a grim prognosis. Chemotherapy for these tumors is chosen according to guidelines established for epithelial ovarian cancer (EOC). The purpose of this study is to compare response to chemotherapy and survival in patients with advanced stage carcinosarcoma of the ovary.

Methods

We identified women with advanced carcinosarcoma of the ovary who underwent first-line platinum and taxane-based chemotherapy. Each case was matched to two women with serous EOC. Cases and controls were matched by age, stage, and year of diagnosis. The Kaplan-Meier method was used to generate overall survival (OS) data. Factors predictive of outcome were compared using the log-rank test and Cox proportional hazards model.

Results

Fifty women treated with first line platinum and taxane-based chemotherapy had advanced carcinosarcoma of the ovary and were selected as cases. The response rates to chemotherapy for cases and controls were 62% and 83% (P = 0.03), respectively. Median progression-free survival was 11 months (95% CI, 8 to 14 months) versus 16 months (95% CI, 12 to 21 months; P = 0.02) and median overall survival was 24 months (95% CI, 18 to 29 months) versus 41 months (95% CI, 33 to 49 months; P = 0.002) for cases and controls, respectively.

Conclusion

Patients with advanced carcinosarcoma of the ovary have a poorer response to platinum and taxane-based first-line chemotherapy and worse survival, compared to patients with serous EOC. Aggressive surgical treatment may play an important role. However, other alternative systemic therapeutic approaches should be sought for patients with carcinosarcoma of the ovary.     

Effects of metformin in adolescents with polycystic ovary syndrome undertaking lifestyle therapy: a pilot randomized double-blind study

Our small study does not support the addition of metformin to the lifestyle of adolescents. Although there are favorable trends toward hyperandrogenism with metformin, these must be balanced against the increased rate of gastrointestinal side effects. However, other treatments were associated with an improved quality of life.     

环孢素对同种异基因大鼠子宫移植急性排斥反应的影响

目的:探讨免疫抑制剂环孢素对同种异基因大鼠子宫移植排斥反应的影响及其机制。方法:以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,建立同种异基因大鼠子宫移植排斥模型。移植后第一天起使用环孢素,每天每公斤体重10mg肌肉注射;对照组以等量生理盐水替代。根据受体大鼠应用环孢素的时间,分为3组,即移植后7天(POD-7)、14天(POD-14)及28天(POD-28),每组10对。对照组仅移植后7天组10对。观察移植子宫的排斥反应,应用Real-time PCR方法检测移植物内细胞因子IL-2,IFN-γ,TGF-β1,IL-10在各组的动态变化,并用免疫组化方法检测移植子宫雌激素受体的表达。结果:(1)实验组移植子宫在观察期内未见明显排斥反应,对照组则在7天时出现严重的排斥反应,移植子宫明显坏死;(2)实验组移植物内IL-2,IFN-γ表达量明显少于对照组(P<0.05),TGF-β1表达亦下调(P<0.05),而POD-14组与POD-28组IL-10表达上调(P<0.05);(3)对照组ER表达缺失,而实验组ER表达强度与用药时间呈负相关(P<0.01)。结论:环孢素能有效地抑制子宫移植的急性排斥反应。主要通过调节移植子宫的Th1/Th2细胞因子平衡向Th2漂移起作用。长期应用环孢素对大鼠移植子宫的内分泌功能有一定的影响。