内皮细胞生长因子表达质粒的构建及其促进烫伤愈合的研究

目的　构建血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达质粒 ,并观察其表达产物对小型猪深度烫伤创面影响。方法　应用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)技术克隆VEGF基因的cDNA序列 ,并将其正向连接到表达载体pQE 40上 ,通过十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和蛋白质印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。猪小面积深Ⅱ度烫伤后 ,立即将含有 1 μg/ g的VEGF膏剂均匀涂于创面 ,每个创面 2 0 0mg膏剂 ,隔日换药 1次 ,至伤后 1 1d。用透明膜描记称量法记录创面面积 ,并取创面组织作组织学检测。结果　克隆出的VEGF基因cDNA片段由 380bp组成 ,包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分。重组表达质粒 pQE VEGF在M1 5细菌体内能够表达 ,VEGF主要存在于细菌包涵体内。小型猪烫伤后 7d,VEGF处理的伤口处肉芽组织增生明显 ,毛细血管数量增多。烫伤 1 1d后 ,VEGF组的创面可见连续的上皮覆盖 ,而M1 5组的创面面积为 (0 .71± 0 .2 3)cm2 ,伤口仍未愈合 ,两者差异有非常显著性 (P <0 .0 1 )。结论　构建的VEGF表达载体可以编码VEGF1 2 1蛋白 ,其表达产物能够诱导肉芽组织生长 ,加速新生血管形成 ,促进创面愈合     

人血管内皮细胞生长因子融合表达质粒的构建

目的:利用真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)构建人血管内皮细胞生长因子融合表达质粒pcDNA3-VEGF.方法:采用PCR技术和DNA重组技术.结果:将编码人VEGF基因的cDNA序列克隆至表达载体pcDNA3.1(+)上,DNA测序实验结果证明cDNA序列正确,cDNA序列是由Kozak序列,翻译起始密码ATG,信号序列,编码序列和终止密码子等部分组成.结论:通过研究获得了VEGF细胞因子的融合表达质粒pcDNA3-VEGF,为进一步研究VEGF表达载体进行转基因治疗奠定基础.     

骨折愈合过程中血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的 观察骨折愈合过程中骨痂组织内血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达,进一步探讨ＶＥＧＦ对骨折愈合的影响。方法 采用免疫组织化学方法愈合的不同阶段,骨痂组织内表达ＶＥＧＦ的细胞来源不同,同时表达程度也存在差异。结论 骨折愈合的不同时期,骨痂组织内间充质细胞、软骨细胞、成骨细胞等出现程度不同的ＶＥＧＦ表达,表明ＶＥＧＦ参与调节     

人血管内皮细胞生长因子腺病毒表达系统的构建及体外表达

目的　构建人VEGF12 1腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性。　方法　采用分子克隆技术 ,从pCDI/VEGF12 1质粒获得hVEGF12 1cDNA ,经穿梭质粒pShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF12 1腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF12 1腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用病毒感染小鼠骨髓基质细胞 ,用逆转录PCR方法检测VEGF12 1基因在骨髓基质细胞中的转录 ,用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。　结果　经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功 ,电镜显示包装细胞中有病毒存在 ,包装的病毒滴度为 8× 10 10 pfu/ml,RT PCR证实有VEGF12 1mRNA的转录 ,免疫印迹及免疫组化检测有VEGF12 1蛋白的表达 ,而对照未见VEGF12 1转录和表达。　结论　构建的VEGF12 1腺病毒表达载体可在体外表达 ,VEGF基因治疗有可能用于骨科缺血性疾患     

肌腱愈合早期血管内皮生长因子及其受体的表达

目的 :探讨血管内皮生长因子在肌腱愈合早期的表达规律及其受体在修复区血管内皮细胞内的表达类型。方法 :新西兰白兔 12只 ,制作肌腱损伤粘连模型 ,术后随机分为 4、 7、 10、 14d四个时相组 ,每组 3只 ,,按分组于相应时相点取肌腱标本固定 ,利用免疫组织化学技术分别检测VEGF及其受体在修复区的表达情况。结果 :术后4～ 14d的肌腱修复区 ,多种组织细胞参与表达VEGF ,7～ 10d为表达的高峰期 ;在术后 4～ 14d的修复区血管内皮细胞内检测到VEGF受体flt 1和flk 1的表达 ,但两者表达的高峰不一致。结论 :VEGF及其受体flt 1和flk 1在肌腱损伤后的早期表达增高 ,VEGF通过与其受体的特异性结合后可能在肌腱的外源性愈合中发挥重要的调节作用     

血管内皮细胞生长因子在骨折愈合中的作用研究进展

血管内皮细胞生长因子是一种特异性促血管内皮细胞有丝分裂因子，骨折后局部血管断裂和血肿形成，可加速它的分泌，它促进骨折端及周围软组织血管的生成，加快软组织的愈合，参与骨折愈合过程并发挥重要作用。     

血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达

目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)和Fas配体(FasL)共表达质粒，并鉴定其在细胞中的表达情况。方法 根据入VEGFl65和FasL的cDNA序列分别设计、合成引物，经扩增、连接、酶切、插入等得到重组表达质粒pCI-VEGFl65和pCI-FasL。再以此为基础构建得到编码FasL和VEGFl65的共表达质粒pCI-FasL-IRES-VEGFl65(简称pCI-FIV)。用脂质体将各表达质粒(2μg)转染NIH3T3细胞，用流式细胞术、ELISA和Western-blot检测其FasL和VEGFl65表达情况。结果 细胞裂解液的Western-blot检测表明，重组质粒pCI-VEGFl65和pCI-FIV能表达VEGFl65。分子量与预期kD一致。细胞培养上清的ELISA检测表明，pCl-VEGFl65和pCI-FIV均能分泌性表达vEGFl65。流式细胞仪检测表明，质粒pCI-FasL、pCI-FIV稳定转染的NIH3T3细胞表面的绿色荧光阳性率分别为98．0％和96．5％，而空载体转染细胞的阳性率为3．2％。ELISA检测结果显示，pCI-FasL、pCI-FIV转染NIH3T3细胞培养上清中均存在可溶性FasL。结论 成功构建的FasL和VEGFl65共表达质粒可成功转染细胞并能分泌性表达VEGFl65，同时可表达膜结合形式的FasL和可溶性FasL，为将来血管内膜增生的基因治疗奠定了基础。     

人脑膜瘤血管内皮细胞生长因子表达的临床意义

目的　探讨脑膜瘤血管内皮生长因子 (VEGF)基因表达与血管生成和脑水肿的关系。方法　应用免疫组织化学方法检测 3 5例脑膜瘤组织中VEGF基因表达 ;Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体组织化学染色显示微血管 ,用微血管记数 (MVC)测定血管生成 ;从脑水肿与肿瘤本身的体积之比估计脑水肿程度。结果　 3 5例脑膜瘤VEGF表达率 77% (2 7/3 5 ) ,4例可疑染色 ,其中恶性脑膜瘤和血管母细胞型脑膜瘤呈现高表达 (10 0 % ) ;VEGF表达与脑膜瘤血管生成 ,瘤周脑水肿呈显著正相关 (r =0 .682 3 ,P <0 .0 1;r =0 .765 3 ,P <0 .0 1)。结论　VEGF存在于脑膜瘤组织中 ,在脑膜瘤血管生成和瘤周水肿中发挥重要作用。     

膀胱癌的血管内皮细胞生长因子表达、微血管计数及其临床意义

目的寻求与膀胱移行细胞癌预告后相关的新诊断方法。方法以SABC免疫组化及亲和组化法研究83例膀胱移行细胞癌的血管内`皮细胞生长因子（VEGF）表达、微血管计数及其与病理分级。预后的关系。结果BEGF表达强度、微血管计数在Ⅲ与Ⅰ级癌间、在有复发、转移及5年死亡组与无复发、转移组间有极显著性差异（P＜0.01）VEGF表达、微血管计数在Ⅲ级癌组、在有复发、转移及5年死亡组有相关性。结论VEGF是血管形成的重要因子。VEGF高级表达.微血管计数高是辅助预测膀胱癌患者预后不佳的新指标     

内皮细胞生长因子促进创伤愈合研究

牛神经组织来源的内皮细胞生长因子在组织培养体系中能有效地促进血管内皮细胞和成纤维细胞增殖。动物实验结果表明，该因子使肉芽组织内蛋白质含量７．１±４．３ｇ校对照组２．８±１．９ｇ增加２．５倍（Ｐ＜０．０１）；创面愈合时间提早了３天左右。在一组由２４例开放性创伤患者组成的临床实验中，使用生长因子的实验组１２例，创口愈合时间为１２±４．２１天，对照组１２例，为２２．８３±７．５６天（Ｐ＜０．０１）。本研究初步证实：内皮细胞生长因子在促进内皮细胞和成纤维细胞生长的基本上，能加速伤口愈合。     

血管内皮细胞生长因子在胃肠道平滑肌肿瘤中的表达及其意义

本研究应用免疫组织化学法检测胃肠道平滑肌肿瘤(ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｔｕｍｏｒｓ,ＧＩＳＭＴ)中血管内皮细胞生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)的表达情况 ,并探讨其临床病理及预后价值。资料与方法1.临床资料 :从我院 1977～ 1996年手术切除的ＧＩＳＭＴ病例中选择诊断明确、病历完整者 86例。男 49例 ,女 37例。年龄 1～ 77岁 ,平均 48 6岁。肿瘤发生于食管 11例、胃 30例、小肠 2 7例、结直肠 18例。平滑肌瘤 (ｌｅｉｏｍｙｏｍａ ,ＬＭ)与平…     

脱蛋白骨复合血管内皮细胞生长因子质粒促进兔股骨头早期缺血性坏死的修复

目的探索一种治疗股骨头早期缺血性坏死(avascu lar necros is of fem ora l head,AVNFH)的新方法。方法69只AVNFH造模成功后的新西兰大白兔,随机分成3组。A组,脱蛋白骨(deprote in ized bone,DPB)复合pcDNA 3.1/血管内皮细胞生长因子165(vascu lar endothe lia l grow th factor 165,VEGF 165)质粒植入坏死的股骨头内;B组植入DPB;C组仅在股骨头内钻一隧道。术后3 d,1、2、4、8和16周切取股骨头标本。用RT-PCR检测VEGF 165mRNA的表达;W estern b lot和免疫组织化学技术检测VEGF 165蛋白的表达;X线片观察成骨情况;组织形态学分析血管发生和新骨形成情况。结果A组术后3 d即有VEGF 165 mRNA的表达,术后1周达高峰,表达时间超过3周;术后2、4和8周Ⅰ型胶原的面积积分光密度值分别为0.29±0.11、0.55±0.13和0.67±0.10 IOD/μm2,与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.01);X线片示A组骨痂形成早且多,B组术后4、8周骨痂少于A组,C组骨痂生成不明显;术后2周和4周A组血管面积积分光密度值分别为0.33±0.10和0.57±0.16 IOD/μm2,与B、C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论VEGF 165基因转染可促进局部血管的早期形成,DPB-VEGF 165复合物可增加骨形成。DPB联合VEGF 165基因治疗为骨坏死的修复提供了理论基础。     

血管内皮生长因子基因转染促进骨折愈合的实验研究

目的:(1)寻找外源性血管内皮生长因子(VEGF)体内转染的有效途径;(2)了解外源性VEGF基因表达对于骨折愈合的促进作用.方法:建立大鼠股骨干骨折模型,将Lipofectamine、pBLAST49-mVEGF质粒混合物局部注射于骨折断端的骨膜下,在术后不同时间点观察大体标本,X线摄片和HE染色比较,观察外源性VEGF基因在体内表达对于骨折愈合的影响.结果:大鼠股骨骨折术后,pBLAST49-mVEGF基因转染组骨折愈合及重新塑形时间较对照组缩短2周.结论:(1)局部注射阳离子脂质体Lipofectamine、质粒混合物是一种有效的体内转染途径;(2)pBLAST49-VEGF基因转染能有效促进骨折的愈合.     

血管内皮生长因子基因转染促进伤口愈合的实验研究

目的 探讨用血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染治疗大面积软组织缺损和骨质外露的方法。方法 将重组质粒 pCD－ hVEGF165 200μ g吸附于明胶海绵内,贴于兔耳伤口上,同时进行自身对照及异体对照。结果 术后第 7、 14 d实验组所取肉芽组织的血管面积比及肉芽组织厚度与对照组相比差异均有非常显著性意义 (P0.05)。结论 伤口局部应用 VEGF基因治疗后,局部组织能有效、持久地表达 VEGF,促进血管增生及伤口愈合。     

重组血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达

目的:使重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大肠杆菌中得到高效表达.方法:通过构建表达重组VEGF的质粒PRL621/VEGF,并在大肠杆菌中高效表达.结果:表达量约占菌体总蛋白的40%.对形成包含体的表达产物进行变性,初步复性处理,得到重组人VEGF粗提液,鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生长活性,N-端15个氨基酸序列分析结果,与天然VEGF蛋白质相应序列一致.     

血管内皮细胞生长因子及其受体在脊柱转移癌中定量表达的研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子及其受体在脊柱转移癌中的定量表达,及其与新生血管形成之间的关系。方法应用免疫组化及图像分析技术,检测77例人脊柱转移癌组织VEGF、FLT、FLK-1表达和微血管密度计数(MicrovesselscountMVC)。结果VEGF、FLT、FLK-1主要表达于转移癌细胞。VEGF表达以肺癌转移组最高为3.16±0.23(P<0.01),FLK-1表达以乳腺癌组为最高2.98±0.18(P<0.01)。新生血管形成多位于转移癌的侵袭性边缘。平均MVC计数20.93±11.82个(8.8~67.3)。FLK-1、FLT、VEGF表达和MVC计数之间均呈显著相关(P<0.01)。结论血管内皮细胞生长因子及其受体的表达在脊柱转移癌新生血管形成的过程中具有重要作用。     

端粒酶逆转录酶与血管内皮细胞生长因子在前列腺癌中的表达及其相关性的研究

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TRT)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)在前列腺癌(PCa)中的表达及两者的相关性。方法:应用免疫组化染色(SP)法结合计算机辅助图像分析方法,对30例病理证实为PCa和30例良性前列腺增生(BPH)穿刺标本中的TRT、VEGF的表达进行半定量分析。结果:30例PCa标本中,TRT、VEGF阳性表达率分别是63.3%(19/30)和76.7%(23/30);30例BPH标本中,TRT、VEGF阳性表达率分别是16.7%(5/30)和46.7%(14/30),组间差异均有显著性意义(P<0.05)。TRT与VEGF的表达显著相关(r=0.833 3,P<0.05)。结论:TRT、VEGF的表达可能是PCa的恶性表型,两者的表达具有显著相关性,但其确切机制还需深入研究。     

血管内皮细胞生长因子促进激素性股骨头坏死修复

[目的]探讨应用血管内皮细胞生长因子治疗激素性股骨头坏死的方法。[方法]新西兰兔30只，22只兔耳缘静脉注射马血清，臀肌注射醋酸泼尼松龙，制造激素性股骨头坏死动物模型。动物随机分为3组：A组：VEGF治疗组，B组：对照组，C组：正常对照组。治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体至股骨头。于治疗后5周，采用影像学方法观察股骨头结构变化，病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化。[结果]VEGF治疗组，X线及CT检查显示：模型股骨头结构变清晰，骨质破坏明显修复；HE染色结果：VEGF治疗组可见软骨细胞修复性增生，骨髓腔造血组织出现增生，栓塞的血管旁边出现新生的血管。[结论]VEGF治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复。     

血管内皮细胞生长因子在食管癌中的表达及意义

目的 探讨食管癌血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达及其与肿瘤血管新生和病理学特点的关系。方法 对40例手术切除的原发性食管癌标本进行免疫组织化学染色,确定其VEGF的表达及微血管密度。结果 40例食管癌患者中27例VEGF蛋白表达阳性,阳性率为67．5％,微血管密度在食管癌VEGF表达阴性、弱阳性和强阳性者间比较差别具有显著性意义（P＜0．05）,有淋巴结转移者VEGF表达阳性率较无淋巴结转移者明显增高（P＜0．01）。结论 食管癌VEGF表达水平与肿瘤血管新生强度、淋巴结转移有密切关系。