PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTEKT反义核酸的载体，促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP—N1表达质粒DNA转染细胞；观测不同转染方法的转染率，TRAP—ELISA法检测端粒酶活性；噻唑蓝（MTT）法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制；过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高，分别为18％和24％；脂质体的转染效率为42％，纳米粒的转染效率最高，达61％；以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞，其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降（P〈0．05），两种载体之间的差异也非常显著（P〈0．05）；处理72h后，纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组，分别为23．1％和16．4％。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。     

白蛋白纳米载体介导的反义核酸对肝癌细胞端粒酶活性的抑制

目的 利用纳米载体增强端粒酶反义寡核苷酸时肝脏肿瘤细胞端粒酶活性的抑制作用.方法 实验设6组:空白对照组、纯纳米粒组、游离正义寡核苷酸组、游离反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸-纳米粒组和反义寡核苷酸-纳米粒组.用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义寡核苷酸对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用.结果 ①纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸组和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒处理组的端粒酶活性与空白对照组差异无显著性(P>0.05).②游离端粒酶反义核苷酸和端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒处理的肿瘤细胞的端粒酶活性与空白对照相比明显下降(P<0.05),且两者之间差异存在显著性(P<0.05).③纯纳米粒组、游离端粒酶正义核苷酸和端粒酶正义核苷酸-白蛋白纳米粒对肿瘤细胞的抑制作用很小.游离端粒酶反义核苷酸的抑制作用明显,端粒酶反义核苷酸-白蛋白纳米粒的抑制作用最强,两者之间差异有显著性(P<0.05).结论 白蛋白纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体,增强端粒酶反义核苷酸的抑制作用.     

PEG化壳聚糖纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对HepG2细胞的抑制作用

目的以PEG化壳聚糖(PEG-Chitoson)纳米粒作为端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸的载体转染HepG2细胞,研究其对HepG2细胞的增殖影响;方法采用MTT法检测PEG-CSNPs的细胞毒性和细胞增殖情况;以脂质体转染试剂作为对照,倒置荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测FITC标记的ASODN转染细胞后胞内荧光强度,转染效率和ASODN各组转染细胞后细胞周期的变化。结果NPs质量浓度超过3.0μg/mL时细胞毒性较大。转染24h后,ASODN纳米粒组和ASODN脂质体组细胞内荧光明显增强,且ASODN纳米粒组的转染效率要高于ASODN脂质体组。与空白对照组相比,ASODN处理后HepG2细胞生长受到明显抑制(P<0.01),且抑制率随时间延长而增高,72h时达到最高值;细胞周期改变,细胞被阻滞于G1期,S期细胞明显减少(P<0.01);结论PEG-CSNPs介导的hTERT ASODN能有效抑制HepG2细胞增殖、改变细胞周期,对该细胞生长有明显抑制作用。     

PLGA纳米载体介导的端粒酶hTERT反义核酸对裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体，促进反义核酸对肝癌瘸组织的抑制。方法以HepG-2肝癌细胞和裸鼠建立肝癌移植瘤实验模型；观测瘸重和成瘤率；流式细胞仪检侧肿瘤细胞凋亡及细胞周期的特点。结果与对照组相比，治疗组肿瘤细胞凋亡数明显增加，细胞增殖受到抑制，肿瘤生长缓慢，出瘤时间推迟。结论以PLGA纳米粒作为端粒酶反义核酸的栽体，能显著延缓裸鼠肝癌移植瘤的发展，产生明显的疗效。     

壳聚糖纳米微球作为化疗药物载体的研究进展

随着肿瘤发病率的不断上升,恶性肿瘤已成为威胁人类生命的第一杀手.目前治疗肿瘤的主要方法有手术、放疗、化疗.化疗是唯一的全身性整体治疗方法,但是传统的化疗药物对正常细胞和肿瘤细胞缺乏选择性,在杀伤肿瘤细胞的同时往往也会损伤人体的正常细胞.     

端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸及其联合顺铂对胃癌细胞的影响。方法利用脂质体将端粒酶反义寡核苷酸导入SGC7901胃癌细胞。TRAP—ELISA法检测端粒酶活性，噻唑蓝（MTT）法测定端粒酶反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901的抑制；过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测癌细胞凋亡指数。结果经端粒酶反义寡核苷酸处理的胃癌细胞端粒酶活性显著下降，端粒酶反义寡核苷酸明显抑制胃癌细胞的生长和诱导胃癌细胞的凋亡，端粒酶反义寡核苷酸联合顺铂，能增强对胃癌细胞生长的抑制和诱导胃癌细胞的凋亡。结论端粒酶反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞生长，与顺铂协同作用，效果更为明显。     

I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子的制备及对结核杆菌生长的抑制作用

目的 探讨应用纳米技术抑制分枝结核杆菌生长的可行性.方法 用复凝聚法制备1-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子.在分枝结核杆菌菌株中分别加入不同量的自由ODN和壳聚糖-ODN纳米粒子,共同培养6周后观测细菌的生长情况.结果 制得的纳米粒子由(35.6±0.9)%的ODN和(64.4±0.9)%的壳聚糖组成.壳聚糖-ODN纳米粒子浓度为4μmol/L时.其对分枝结核杆菌的抑制作用为(2.8±0.1)CFU/ml.而自由ODN在浓度低于10μmol/L时,不能有效抑制分枝结核杆菌的生长.结论 壳聚糖-ODN纳米粒子比自由ODN对分枝结核杆菌的生长具有更强的抑制作用.     

血管内皮生长因子反义核苷酸对口腔鳞癌细胞的影响

目的探讨VEGF反义核酸对口腔鳞癌细胞的影响。方法利用脂质体将VEGF反义核酸导入口腔鳞癌KB细胞，采用ELISA法检测其培养上清液中的VEGF表达水平，用MTT检测肿瘤细胞生长状况，过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果经VEGF反义核酸处理后，肿瘤细胞的VEGF蛋白表达水平和细胞生长受到明显抑制，肿瘤细胞凋亡率显著增加。结论VEGF反义核酸通过阻止VEGF蛋白表达和促进细胞凋亡，对口腔鳞癌细胞有明显的抑制作用。     

端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨端粒酶逆转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌(TC)细胞凋亡的影响.方法:体外培养TC细胞,TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的TC细胞,采用透射电镜,Hoechest荧光染色,流式细胞仪等方法分析ASODN TERT对TC细胞凋亡的影响.结果:透射电镜示ASODN可诱导TC出现典型的细胞凋亡形态,Hoechest荧光染色显示ASODN可使TC凋亡数目增多从52±16上升到178±32,流式细胞仪证实5 μmol/L ASODN处理组,SODN处理组及空白对照组的细胞凋亡率分别为10.4%,1.6%和无凋亡(P＜0.05).结论:TERT ASODN能增强TC细胞凋亡.     

Apoptosis of drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP induced by survivin antisense oligonucleotides

Currently, surgery-oriented treatment plays a major role in the treatment of ovarian cancer patients. But 5-year survival rate of patients is still around 30%. One of the main reasons for the Iow survival rate is the drug resistance of tumor cells against chemotherapy.1,2 The function of antiapoptosis in the course of initiation and progress of cancer has a close relationship with drug resistance of tumor cells. Survivin is a new discovered anti-apoptosis gene, its expression levels correlating with more aggressive disease and poor clinical outcome in many of these tumors. It has been reported that survivin is expressed during fetal development and in cancer tissues.3 Furthermore,survivin overexpression, by disrupting the balance between cell proliferation/differentiation and apoptosis, may relate with the resistance to a variety of apoptotic stimuli, including chemotherapy.4,5 We designed antisense oligonucleotides of survivin to treat the drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP, and studied its effects on inducing COC1/DDP apoptosis. The purpose of this study was to find a novel approach to improve the sensitivity of ovarian carcinoma chemotherapy.     

特异性反义寡核苷酸对含HPV16的SiHa细胞的作用

研究特异性反义寡核甘酸对含ＨＰＶ１６的Ｓｉ－Ｈａ细胞的抑制作用。方法人工合成２条分别与ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７基因起始码互补的反义硫代磷酸化核甘酸及１条随机序列，用此３种反义寡核甘酸处理ＳｉＨａ细胞，观察其细胞成活率和细胞蛋白总量的改变。结论此ＡｎｔｉＥ６，ＡｎｔｉＥ７能有效地抑制含ＨＰＶ１６的ＳｉＨａ细胞的生长。     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

反义寡核苷酸对视网膜色素上皮细胞中端粒酶逆转录酶表达及细胞增殖的作用

目的:研究视网膜色素上皮(RPE)细胞中端粒酶逆转录酶(TERT)的表达及其反义寡核苷酸(ASODN)对其表达和细胞增生的抑制作用,为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)探索基因治疗新途径. 方法:体外培养兔眼RPE细胞,在不同时间采用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学法检测TERT的表达;不同浓度的TERT ASODN和正义寡核苷酸(SODN)分别作用于体外培养的RPE细胞,采用免疫组织化学方法检测TERT的表达;四唑盐比色法(MTT)检测在不同浓度的TERT ASODN和SODN作用下RPE细胞生长活性及其生长抑制率. 结果:体外培养兔眼RPE细胞可表达TERT,在5,10 μmol/L ASODN作用下,TERT的表达明显受抑制;TERT ASODN能明显抑制RPE细胞增生活性,并呈剂量依赖性. 结论:一定浓度TERT ASODN能序列特异性地抑制RPE细胞TERT表达和增生活性,有望进一步用于PVR的治疗实验研究.     

Inhibition of PCNA Antisense Oligonucleotides Mediated by Liposome on mRNA Expression and Proliferation of h-RPE Cells

Pro1iferative vitreoretinopathy (PVR), as a blind- ness-causing condition, is a common complication of retina detachment and the main reason that leads to the failure of recovery operation of retina detachment. PVR is essentially an intraocular reactive course of wound healing and principally relevant to pathological prolifera- tion of retina pigment epithelia (RPE). Proliferating cell nuclear antigen (PCNA), expressed in many proliferative tissues, play an important role in the cell cycle…     

PCNA反义寡核苷酸抑制大鼠胶质瘤生长的实验研究

目的探讨增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡核苷酸对大鼠胶质瘤生长的抑制作用。方法所有大鼠均在立体定向导引下右尾状核区接种1．0×10^6胶质瘤细胞。治疗组接种C6胶质瘤细胞后24h内用PCNA反义寡核苷酸原位穿刺注射进行治疗，对照组只注射Hank’s液，每周1次，连续4周；观察两组大鼠肿瘤的一般情况与生存期。4周后断颈处死大鼠，完整地取下肿瘤，测量肿瘤体积，计算其抑瘤率。结果PCNA—ASODN治疗组大鼠胶质瘤的生长明显受到抑制，抑瘤率为64．5％。结论PCNA反义寡核苷酸对胶质瘤的生长具有抑制作用，通过反义技术可抑制靶基因的表达，从而抑制胶质瘤细胞的增殖。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸治疗肺癌的实验研究

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸对C57BL 6小鼠肺癌的抑制作用。方法　制作C57BL 6小鼠皮下肺癌模型 30只 ,分为VEGF反义寡核苷酸 (ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸 (SODN)治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后 2 4h内 ,用ASODN及SODN皮下注射治疗 ,对照组只注射生理盐水 ,观察小鼠肿瘤的生长情况以及组织形态学改变。标本常规石蜡切片 ,HE染色。结果　对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤重分别为 (7.83± 0 .78)g、(4 .4 9± 0 .4 3)g和 (7.73± 0 .6 9)g。VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为 4 2 .7%、5 .9%。结论　原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

Bcl-2反义寡核苷酸对肾癌细胞株的生长抑制作用

目的：研究bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞的生长抑制作用及剂量一效应关系。方法：设计、合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1翻译起始端，AS2编码区)，以阳离子脂质体Lipofectin转染不同的肾癌细胞株，MTS比色实验测定细胞活率。结果：单纯Lipofectin、反义寡核苷酸及正义寡核苷酸处理，对肾癌细胞ACHN生长无抑制作用，而转染入细胞内的反义寡核苷酸可抑制多种肾癌细胞的生长(ACHN、RCW和OSRC-2)，且抑制作用与剂量呈正相关。结论：bcl-2反义寡核苷酸可剂量依赖性抑制多种肾癌细胞的生长。