重组分泌型内皮抑素抑制兔角膜新生血管形成的实验研究

目的:研究重组分泌型内皮抑素(endostatin)对兔角膜新生血管的抑制作用。方法:利用角膜缝线法诱导兔角膜新生血管形成。在缝线后第1天,将重组内皮抑素和生理盐水分别注射于兔球结膜下,观察角膜新生血管生长状况及组织病理学改变。结果:重组内皮抑素治疗组新生血管长度及生长面积明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下,治疗组与对照组比较,基质层新生血管少,管腔小,浆细胞及成纤维细胞少。结论:球结膜下注射重组内皮抑素可有效抑制兔角膜新生血管的形成,为临床上角膜新生血管的防治提供新的方法。     

重组内皮抑素抑制兔角膜新生血管的实验研究

目的:探讨重组内皮抑素(Endostatin)对碱烧伤诱导的兔角膜新生血管(corneal neovasculariza-tion,CNV)的抑制作用。方法:选取新西兰大白兔18只,采用碱烧伤法制备兔CNV模型,随机分为3组,每组6只12眼。2个实验组分别以10μg/ml和50μg/ml重组内皮抑素点眼,对照组用生理盐水点眼。定期摄相,采用计算机图像分析系统比较CNV生长面积。结果:与对照组相比,2个实验组自第7 d开始CNV平均生长面积明显减少(P<0.05),经角膜组织病理学检查,新生血管明显稀少,但炎性细胞成分及浸润程度与对照组相似。结论:10、50μg/ml重组内皮抑素具有明显抑制角膜新生血管生长的作用,无毒副作用,为临床防治CNV提供了一种新的途径。     

血管抑素抑制角膜新生血管

血管抑素（angiostatin，AS）是迄今发现的强的内源性血管生成抑制因子之一，它能特异性抑制内皮细胞的增殖和迁移，诱导细胞凋亡，从而抑制新生血管的形成。其在肿瘤血管治疗方面已取得较好实验结论。由于角膜新生血管形成和肿瘤诱导的新生血管形成由相同的生长因子所驱动，正因为此可将其用于角膜新生血管的治疗。本文就血管抑素的分子结构、功能及其抑制角膜新生血管的机制进行综述。     

重组人血管内皮抑素对多发性骨髓瘤血管新生的影响

目的观察重组人血管内皮抑素注射液对人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）和多发性骨髓瘤细胞株KM3增殖、凋亡及共培养体系中血管生成的影响。方法观察不同浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的增殖抑制作用;检测有效浓度的内皮抑素对HUVEC和KM3细胞株的凋亡作用;建立HUVEC和KM3的隔离共培养和混合共培养体系,检测共培养体系中不同浓度的内皮抑素作用后对于HUVEC血管生成的影响;检测经内皮抑素作用后对混合共培养、隔离共培养上清中VEGF浓度的影响。结果不同浓度的内皮抑素持续作用72 h,对HUVEC具有抑制增殖作用,且在50-200 ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系,而对KM3细胞未见明显作用;有效浓度的内皮抑素（100、200 ng/ml）可诱导HUVEC凋亡,而对KM3未见明显作用;共培养体系中,内皮抑素可抑制HUVEC的管状结构形成;经不同浓度内皮抑素作用后,细胞培养上清中VEGF的分泌量减少。结论内皮抑素能抑制HU-VEC的增殖;诱导HUVEC的凋亡;通过血管内皮抑制骨髓瘤细胞的促血管新生作用;抑制VEGF的分泌可能是其作用机制之一。     

重组内皮抑素对碱烧伤诱导角膜新生血管抑制作用

目的 探讨重组内皮抑素对碱烧伤诱导兔角膜新生血管(CNV)的抑制作用.方法 新西兰大白兔20 只,随机分为两组,每组10只.采用碱烧伤法制备兔CNV 模型后,实验组球结膜下注射重组人内皮抑素0.05 mL,对照组球结膜下注射生理盐水0.05 mL,均隔日1 次,共注射19 d.每日裂隙灯显微镜下观察并测量自角膜缘长出的CNV长度和数量,并摄影,输入计算机经图像分析系统计算CNV面积.术后19 d处死动物,取角膜, CD34染色,显微镜下检测微血管密度(MVD).结果 实验组第7、14、19天CNV面积及MVD明显少于对照组,差异有显著性(t=4.191～8.003,P<0.01).结论 重组内皮抑素可有效抑制CNV生长,为临床防治CNV 提供了一种新的方法.     

重组内皮抑素对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的:研究重组内皮抑素对碱烧伤诱导角膜新生血管(CNV)的抑制作用。方法:采用碱烧伤法诱导兔CNV形成。在碱烧伤后的第1天,分别在球结膜下注射50μg/ml重组内皮抑素和生理盐水各0.2ml,隔日1次,共8次,动态观察CNV的生长状况。利用免疫组化的方法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并在显微镜下进行微血管计数。结果:重组内皮抑素治疗组CNV的长度和面积、VEGF的表达及微血管数量均明显少于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:重组内皮抑素可有效抑制CNV的生长,为临床上碱烧伤引起CNV的预防和治疗提供了新的方法。     

重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌抑制作用的实验研究

[目的]研究重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用。[方法]采用MTT法检测不同剂量不同时间重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的影响;建立Lewis肺癌自发转移模型,将40只荷瘤小鼠随机分为重组人血管内皮抑素小、中、大剂量组(5、15、30 mg.kg-1.d-1)及对照组各10只,连续给药14 d,停药1周后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑瘤率;利用光镜和透射电镜技术,观察重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞以及对荷瘤小鼠血管内皮细胞和肿瘤细胞的形态学改变。[结果]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,400 ng处理72 h后的抑制率为(68.4±1.5)%,与处理24 h后的抑制率(21.9±2.1)%比较,差异有显著性意义(P<0.05)。各给药组肿瘤生长均较对照组缓慢,小、中、大剂量组的抑瘤率分别为28.2%、49.7%、52.8%。各给药组小鼠瘤组织内均有大面积坏死,血管内皮细胞和肿瘤细胞均发生早期凋亡的改变,且具有剂量依赖性。[结论]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用可能表现为对肿瘤细胞和毛细血管内皮细胞的双重抑制作用。     

重组人血管内皮抑素腹腔内不同给药方式治疗恶性腹腔积液的临床观察

目的观察重组人血管内皮抑素(恩度)注射液治疗恶性腹腔积液的有效性和安全性,初步探讨不同治疗模式对血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法 2010年7月—2012年12月收治恶性腹腔积液患者36例,均采用腹腔内局部治疗,随机分为4组:恩度单药间断用药组(A组:60 mg/次,第1、4、7天);恩度单药连续用药组(B组:30 mg/次,第1～6天);恩度间断应用联合化疗组(C组:恩度60 mg/次,第1、4、7天;顺铂40 mg/次,第2、5、8天);恩度连续应用联合化疗组(D组:恩度30 mg/次,第1～6天;顺铂40 mg/次,第2、5、8天)。各组完成上述治疗1～2个周期。按照WHO癌性积液疗效评价标准和NCI CTC AE 3.0版分级标准分别评估疗效和不良反应;并采用ELISA法测定各组腹腔积液治疗前后腹水VEGF浓度的变化。结果 A、B、C、D组的有效率分别为33.3%、44.4%、44.4%、66.7%,组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,治疗后各组腹水VEGF浓度均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);治疗后组间两两比较,差异亦有统计学意义(P<0.01)。3～4级不良反应主要为白细胞减少、血小板减少、恶心呕吐及乏力,发生率分别为13.9%(5/36)、11.1%(4/36)、16.7%(6/36)及22.2%(8/36),无治疗相关死亡发生。结论恩度单药腹腔内治疗恶性腹腔积液有效,联合顺铂腹腔内化疗疗效更佳;恩度连续用药的疗效优于间断用药,且安全性较好。     

重组人血管内皮抑制素抑制角膜新生血管的实验研究

探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)对于缝线诱导兔角膜新生血管的抑制作用。方法新西兰大白兔24只,按随机数字表法分为3组(A组、B组、C组、每组8只),采用缝线诱导法制备兔角膜新生血管。A组采用球结膜下注射生理盐水0.1mL,隔日1次;B组采用球结膜下注射恩度0.1mL,隔日1次;C组采用球结膜下注射地塞米松0.1mL(0.5mg),隔日1次。每日裂隙灯下观察并测量角膜长出的角膜新生血管的长度,计算出新生血管的面积,共3周时间。结果 B组和C组各时间点新生血管的长度和面积均小于A组,差异有统计学意义(P<0.001)。B组在第13天和第18天新生血管的长度和面积均小于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论动物实验表明恩度可以有效地抑制角膜新生血管的生长。     

重组人血管内皮抑素时间窗研究进展

【摘要】抗血管生成治疗是目前肿瘤治疗领域的研究热点, 通过抑制肿瘤内部新生血管形成达到“饿死肿瘤”的目的。随着对肿瘤抗血管生成研究的深入, 有学者指出在抗血管生成药物作用下, 肿瘤内部微血管的结构和功能可能有一段趋于正常化的时间, 即正常化时间窗。研究表明在该时间窗内联合化、放疗将提高抗瘤疗效。重组人血管内皮抑素恩度是我国具有完全自主知识产权的新型抗血管生成药物, 确定恩度的时间窗对指导恩度的抗肿瘤治疗具有重要意义。本文就恩度时间窗的研究进展作一综述。     

Experimental inhibition of corneal neovascularization by endostatin gene transfection in vivo

Objective To investigate endostatin gene therapy of rat corneal neovascularization induced by acid cauterization. Methods pBlast-hEndostatin and pBlast-Mcs were identified by digestion with Nhe Ⅰand Sal Ⅰ, by PCR reaction, by sequence, and then by alignment of PCR products with the geneBank using NCBIBLAST software. They were then purified with QIAGEN Endofree plasmid maxi kit. Rat corneal neovascularization models were made with 75% AgNO3 and 25% KNO3 cauterization. The treatment method was subconjunctive injection of the pBlast-hEndostatin with the control of pBlast-Mcs. Results pBlast-hEndostatin was found to contain the human endostatin gene. The rat corneal neovascularization induced by acid cauterization was significantly suppressed after subconjunctive injection of the pBlast-hEndostatin with inhibition rates of 37%, 40.2%, and 42.8% respectively on the sixth, tenth, and fifteenth day. The inhibition rate for the density of corneal neovascularization was 40%. However, no inhibition effect on the length of the neovascularization and corneal inflammatory cells was observed. Corneal neovascularization areas were positively correlated with edema and corneal opacity.Conclusions The plasmid of pBlast-hEndostatin contained the human endostatin gene. The rat corneal neovascularization induced by acid cauterization can be partially inhibited by subconjunctive injection of the pBlast-hEndostatin mediated by liposomes. Endostatin produced by transfected fibroblast cells directly inhibits corneal neovascularization. This is not caused by inflammatory reaction inhibition.     

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞,设立对照组与重组人血管内皮抑制素实验组（终浓度分别为50、100、150 ng/ml）,采用MTT法来判定该抑制因子对人脑胶质瘤细胞有无抑制作用。结果对照组OD值为0.302±0.012,实验组的OD值分别为0.284±0.006,0.218±0.014,0.175±0.012,P值均〈0.05。结论重组人血管内皮抑制素能够抑制人脑胶质瘤细胞的增殖且呈剂量依赖性。     

角膜新生血管治疗的研究进展

角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)可能是角膜对各种刺激的生理性反应,也可发展成病理性新生血管,是潜在的致盲因素。本综述简要回顾角膜新生血管的危险因素和发病机制,重点对新生血管的治疗进行综述。在内科治疗方面,概述了激素、非甾体抗炎药、血管内皮生长因子抑制剂、环孢霉素、维生素C、细胞凋亡诱导因子、纤维蛋白溶酶原、过氧化物酶-6和基因治疗。在外科治疗方面,概述了激光治疗、光动力治疗、浅表角膜切除术和细针透热疗法。     

内皮抑素对小鼠脉络膜新生血管抑制作用的信号通路分析

目的探讨内皮抑素对C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管抑制作用的基因表达及作用机制。方法应用532 nm固体激光机,制造C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管模型,分为空白组、对照组和实验组。其中空白组不做任何处理,对照组玻璃体腔内注射生理盐水2μL;实验组玻璃体腔内注射内皮抑素2μL(0.01 mg)。将对照组和实验组小鼠组织选取4个样本进行杂交及基因芯片检测。比较实验组和对照组基因表达的差异,选取其中表达差异大于1.5倍且P≤0.05的基因。结果免疫组织化学染色可见实验组新生血管表达明显低于对照组。实验组与对照组相比上调的基因有116个,下调的基因有106个。通过KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对上述差异基因经行分析后发现,实验组与对照组相比下调处于前10位的通道有:细胞骨架激动蛋白的校准、白细胞穿越内皮细胞层、金黄色葡萄球菌感染、Fc epsilon RI信号通路、Fc gamma R信号调理吞噬作用、Toll样受体信号通路、2型糖尿病、子宫内膜癌、吞噬体、非小细胞肺癌;处于上调前几位的通道有:细胞外基质受体相互作用、叶酸的一碳单位、肥厚性心肌病、扩张型心肌病、组氨酸新陈代谢、黏着斑、心肌细胞收缩。结论由通道功能分析可以推测,内皮抑素可能通过抑制内皮细胞的活性及移行并协同抑制免疫系统,进而抑制新生血管的生成。     

实验性碱烧伤角膜新生血管的观察研究

目的利用碱烧伤诱导实验性角膜新生血管(CRNV)的发生,探讨定量分析CRNV和观察CRNV通透性的方法。方法取36只C57BL/6小鼠,随机分为:实验组(n=30):采用浸润l mol/L NaOH的滤纸片接触角膜5 s,诱导碱烧伤CRNV;对照组(n=6):不进行任何处理。于碱烧伤后第4、7、10、14天测量CRNV面积;第3、7、10、16、28天取眼球做切片的HE染色行组织学检查;第10天使用CD31抗体标记CRNV并计数,行荧光血管造影观察CRNV的通透性;每日观察角膜溃疡和前房积血等情况。结果实验性碱烧伤CRNV存在生长和消退的过程。无菌性角膜溃疡和前房积血较为常见,发生率分别为6.7%和10.0%。眼球切片的HE染色可观察到不同时间角膜组织的病理变化。碱烧伤后第10天,CD31抗体免疫组化标记并记数CRNV,荧光血管造影可观察到显著的CRNV渗漏。结论CD31抗体免疫组化标记、记数CRNV及联合CRNV面积测量,是CRNV定量分析较为客观的方法;荧光造影是观察和记录CRNV通透性可行的方法。     

贝伐单抗对兔角膜新生血管作用的影响

目的研究贝伐单抗(Bevacizumab)在治疗兔角膜新生血管中的作用及药物浓度与作用的相关性。方法通过碱烧伤建立角膜新生血管模型,将48只健康大耳白兔随机分成A、B两组:A组为生理盐水对照组,B组为不同浓度贝伐单抗处理组(1.25、3.75、6.25、12.5、25.0 mg/ml),在裂隙灯下动态观察兔角膜新生血管生长情况,免疫组化定性观察血管内皮生长因子(vasocular endothelial growth factor,VEGF)的表达,RT-PCR基因水平下观察VEGF mRNA的表达。结果贝伐单抗对兔角膜新生血管(CNV)有抑制作用,CNV面积6.25、1.25、25.0 mg/ml贝伐单抗组与对照组、1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),但此三组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化和Real-time PCR结果显示,1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);6.25 mg/ml及以上浓度贝伐单抗组与对照组、1.25、3.75 mg/ml贝伐单抗组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),但6.25 mg/ml以上浓度贝伐单抗组之间相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论贝伐单抗(Bevacizumab)对兔角膜新生血管有抑制作用,且随着药物浓度增加抑制作用逐渐增强,达到一定浓度后作用趋于稳定。     

抑制血管内皮生长因子活性治疗角膜新生血管形成

角膜新生血管常继发于各类眼表疾病,引起角膜瘢痕和角膜移植术后排异反应,并可严重影响视力.近年研究发现,血管内皮生长因子(VEGF)在角膜新生血管化过程中起重要作用,而大量新型抗VEGF技术的问世为治疗角膜新生血管带来了希望.文章阐述了各种抑制VEGF的方法在治疗角膜新生血管方面的研究进展.     

抑制血管内皮生长因子活性治疗角膜新生血管形成

角膜新生血管常继发于各类眼表疾病,引起角膜瘢痕和角膜移植术后排异反应,并可严重影响视力。近年研究发现,血管内皮生长因子（VEGF）在角膜新生血管化过程中起重要作用,而大量新型抗VEGF技术的问世为治疗角膜新生血管带来了希望。文章阐述了各种抑制VEGF的方法在治疗角膜新生血管方面的研究进展。     

The Active Metabolite of Leflunomide A771726 Inhibits Corneal Neovascularization

The effects of A771726, the active metabolite of leflunomide, on experimental rat corneal neovascularization （NV） in vivo and on cultured human umbilical vein endothelial cells in vitro were studied. The corneal NV was induced by alkali burn in 40 SD rats. The rats were randomly divided into 4 groups with 10 rats in each group. Group A was treated with 0.9% sodium chloride （control group）, and group B, group C and group D were given different concentrations of A771726 eye drops （0.5%, 1.0%, 2.0% respectively） 4 times daily during days 0--28. The occurrence and development of corneal NV were observed at 4, 7, 14, 21 and 28 day after alkali burn by a slit lamp microscope. The cultured human umbilical vein endothelial cells （ECV-304） were incubated with A771726 solution at different concentrations （20, 40, 80, 160, 320 μmol/L） for 36 h. The proliferation of cells was assessed by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT）, and the expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in cells was detected by using immunofluorescence under the laser confocal microscope. The rat model showed that the onset of corneal NV was delayed and progression of corneal NV was inhibited in the groups C and D. The corneal NV areas in groups C and D were significantly smaller than in groups A and B （P〈0.01）. No significant difference was found in corneal NV areas between groups C and group D （P〉0.05）. A771726 solution （940 μmol/L） could inhibit proliferation of human umbilical vein endothelial cells and decrease the expression of PCNA in cells significantly, A771726, as the active metabolite of leflunomide, strongly prevented corneal NV induced by alkali burn in the in vivo model, and inhibited proliferation of human umbilical vein endothelial cells in the in vitro model. Therefore, A771726 may serve as an angiogenic inhibitor in the treatment of corneal NV.