雷公藤甲素对大鼠平滑肌细胞增殖和分泌细胞因子的影响

目的：观察雷公藤甲素（T10）对平滑肌细胞（SMCs)在肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素6（IL－6）和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)作用下增殖和分泌的影响。方法：体外主动脉SMCs培养，结晶紫染色法测定细胞数，细胞毒法测定TNF，依赖细胞株MTT比色测定IL－6。结果：T10浓度依赖性抑制TNF、IL－6和ox-LDL促SMCs增殖作用，对指数增殖期SMCs自分泌及在脂多糖（LPS）、ox-LDL刺激下分泌TNF、IL－6，TNF和IL－6的相互诱生亦有明显抑制（P＜0．01）。结论：T10可以抑制SMCs增殖和分泌TNF、IL－6。     

脂多糖诱导滑膜细胞产生一氧化氮及木黄酮对其的抑制作用

目的：研究脂多糖（LPS）诱导滑膜细胞产生一氧化氮（NO）及酪氨酸激酶（PTK）抑制剂木黄酮对其的抑制作用。方法：LPS或LPS＋木黄酮体外刺激滑膜细胞，用Griess方法检测上清中NO的含量。结果：LPS能诱导滑膜细胞产生NO，此作用具有时间（0－72h)和剂量依赖性（0．01－100μg/ml）；木黄酮（6．25－50μmol/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO，50μmol/L木黄酮抑制率达到50．22％。结论：木黄酮能剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO。     

商陆皂苷甲对 IL －1β诱导的肾小球系膜细胞ERK 通路活化的影响

目的：观察商陆皂苷甲（ EsA）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（ rGMC）增殖及其对IL－1β诱导rGMC的ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达的影响,探讨EsA治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5％羧甲基纤维素钠灌胃）,EsA（5 mg／kg）组,EsA （10 mg／kg）组,EsA （20 mg／kg）组,EsA （40 mg／kg）组,药物灌胃后,获取含药血清;取6代rGMC随机分成对照血清组,EsA （5 mg／kg）血清组, EsA （10 mg／kg）血清组,EsA（20 mg／kg）血清组,EsA（40 mg／kg）血清组,MTT法检测各组对rGMC增殖的影响;将rGMC分为对照组,IL－1β组,IL－1β＋EsA组,IL－1β＋U016组,IL－1β＋U0126＋EsA组,同步化后培养48 h, RT－PCR法检测各组ERK1／2 mRNA的相对表达量,Western blot法检测p－ERK1／2的表达并成像分析。结果EsA （5～10 mg／kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（ P＜0.05,P＜0.01）;IL－1β组促进了rGMC的ERK1／2 mR-NA、p－ERK1／2表达（P＜0.05）,IL－1β＋EsA组、IL－1β＋U0126组,IL－1β＋U0126＋EsA组作用rGMC后,其ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达均降低（P＜0.05）。结论 EsA含药血清（5～10 mg／kg灌胃）可显著抑制rGMC的増殖,EsA（10 mg／kg）血清组作用48 h效果最佳;EsA通过下调p－ERK1／2表达,抑制了IL－1β诱导的rGMC增殖,ERK1／2通路是EsA抑制rGMC增殖通路之一。     

葛根提取物体外对TNF,IL—1及IL—2产生的影响

体外用LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞（PMψ）分泌TNF及IL-1，用PHA刺激小鼠脾细胞分泌IL－2的方法来观察葛根提取物对这些细胞因子分泌的影响。结果表明葛根提取物在0．08～2μg／mL浓度时，对LPS刺激PMψTNF的分泌无影响，而对LPS刺激PMψ分泌IL-1，PHA刺激脾细胞分泌IL－2有抑制作用。在10μg／mL时，对TNF、IL－1及IL－2的分泌均呈抑制作用。     

在慢性阻塞性肺病中肺泡巨噬细胞转录因子的活化与细胞因子释放

目的 初步慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺泡巨噬细胞转录因子的活化及细胞因子释放变化及其意义。方法 COPD和慢性支气管炎患者各8例,均为稳定期患者,另有健康者8例作为对照,经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,进行培养,采用酶联免疫吸附方法（ELISA）测定大肠杆菌内毒素（LPS）刺激后上清液中白细胞介素（IL)-8,IL-1β、IL－6和TNFα的浓度。同时采用电泳迁移率变动分析方法分别检测肺泡巨噬细胞核因子kB(NFkB)、激活蛋白（AP）－1、AP－2及AP－3的活化。结果与健康对照组相比,COPD稳定期患者的肺泡巨噬细胞在LPS刺激前后IL－8释放的量均显著增加（F＝4．34,P＜0．05及F＝3．56,P＜0．05）。在LPS刺激后COPD患者肺泡巨噬细胞可释放更多的IL－1β及TNFα但与健康对照组相比无统计学差异。肺泡巨噬细胞转录因子AP－1基础活性及LPS诱发的NFkB的活性,较健康对照组明显增强。结论 COPD缓解期患者肺泡巨噬细胞可释放过量的IL－8,同时LPS可刺激肺泡巨噬细胞释放IL－1β及TNFα,而转录因子NFkB和AP－1的活性增强,可能促进了IL－8,IL－1β及TNFα的释放。     

大黄对体外内毒素诱生的肺泡巨噬细胞分泌功能的影响

采用细胞分离及培养技术观察了中药大黄对内毒素（LPS）体外诱生的肺泡巨噬细胞分泌细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF－α），白细胞介素-1（IL－1）和白细胞介素-6（IL－6）的作用。结果表明，大黄能够明显抑制LPS诱生的肺泡巨噬细胞分泌TNF－α、IL－1和IL－6，与对照相比P＜0．01。从而减轻由于TNF－α、IL－1、IL－6过度分泌所致的肺脏损害，这可能是大黄对肺脏具有保护作用的分子机制。     

切痂植皮对创面脓毒症大鼠炎症介质的影响

目的：观察烫伤大鼠血清内脂多糖（ LPS）、肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）、白细胞介素（ IL）－1、IL－6水平变化,判定切痂植皮对创面脓毒症的治疗效果并探讨其机制。方法以30％总体表面积烧伤大鼠创面涂铜绿假单胞菌制作创面脓毒症模型,于感染后3d切除感染焦痂,对比未处理、抗生素治疗及切痂＋抗生素治疗的3组大鼠血清内LPS、TNF－α、IL－1和IL－6水平的变化。结果切痂植皮治疗可缓解脓毒症大鼠血清内LPS、TNF－α、IL－1和IL－6指标的变化。结论针对创面脓毒症病因大鼠行切痂植皮治疗可获得满意疗效。     

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264．7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究LPS诱导的TNF－α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW264．7细胞可引起细胞外信号调节激酶1（ERK1）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和p38MAPK的一过性激活,用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264．7均可不同程度地诱导TNF－α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF－α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MPAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF－α启动子转录激活的抑制效应;RT－PCR的结果证实,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF－αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF－α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF－α基因表达的调控。     

复方丹参注射液对CIA大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA表达的影响

目的：研究复方丹参注射液对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节炎模型（CIA）滑膜细胞IL－1βmRNA表达的影响。方法：用Ⅱ型胶原蛋白诱导大鼠关节炎模型,以逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）半定量法测定模型大鼠滑膜细胞IL－1βmRNA的表达。结果：复方丹参大剂量可以明显下调CIA大鼠滑膜细胞IL－1βmRNA的表达水平。结论：复方丹参治疗类风湿性关节炎的机制可能与下调滑膜细胞IL－1βmRNA表达的水平有关。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

内毒素介导Kupffer细胞脂多糖受体CD14的表达

目的　观察内毒素刺激下肝Kupffer细胞 (KCs)膜上脂多糖 (LPS)受体CD14的表达及其在细胞因子分泌中的作用。方法　从Wistar大鼠肝组织中分离出KCs ,培养 12h并调整细胞浓度为 1× 10 6/ml/孔 ,将细胞分为 2组。①LPS组 :每孔加入不同浓度LPS(0、10 0ng/ml ,1、10 0 μg/ml) ;②PI PLC组 :每孔先加入 1U磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI PLC)后再加入不同浓度LPS。用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素 (FITC)标记的羊抗兔IgG对KCs进行免疫染色 ,流式细胞仪 (FCM)测定FITC阳性KCs数及其荧光强度(FI) ,并用酶联免疫法或放免法测定培养液中TNFα和IL 6的含量变化。结果　随着LPS浓度增加 ,LPS组FITC阳性细胞数显著增多 ,其FI逐渐增强 ,培养液中TNFα和IL 6的含量也逐渐增高 (P <0 .0 1) ;PI PLC组FITC阳性细胞数及FI较LPS组明显减少和减弱 ,培养液中TNFα和IL 6的含量在低浓度LPS刺激时差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,在高浓度LPS时刺激时才明显增加 (P <0 .0 5 )。结论　LPS能上调KCsCD14表达 ,同时伴有多种细胞因子分泌 ;PI PLC对内毒素介导KCs分泌细胞因子有一定抑制作用     

Characterization of a Small Molecule Inhibitor of Tumor Necrosis Factor-Alpha Production

Numerous studies have shown that reducing the levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF) through the use of anti-TNF antibodies or soluble TNF receptor is a safe and efficacious treatment for inflammatory disease such as rheumatoid arthritis. There for, novel approaches to achieve this outcome are desired. We report here the characterization of a small molecule inhabitor, Y316, that blocks TNF production by LPS-stimulated monocytes. Y316 inhibits the upregulation of TNF mRNA levels in response to LPS and also prevent production of IL-1 and IL-6. In contrast, Y316 augments the production of IL-10 in LPS-stimulated monocytes. Y316 also fails to prevent the production of IL-2 and TNF in antigen-stimulated T cells , suggesting that its effects may be cell-type specific. Y316 prevent the phosphorylation and activation of the MAP kinase, ERK, and therefore maybe mediate its effects on TNF by acting at an early point in the signaling cascade induced in response to LPS.     

Characterization of a small molecule inhibitor of tumor necrosis factor-alpha production

Background Numerous studies have shown that reducing the level of tumor necrosis factor-alpha （TNFα） through the use of anti-TNF antibodies or soluble TNF receptor is a safe and efficacious treatment to inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Therefore, novel approaches to achieve this outcome are desired. The aim of this study was to investigate the characterization of a small molecule inhibitor, Y316, which blocks TNF mRNA upregulation and TNF production by lipopolysaccharides （LPS） stimulated monocytes. Methods Peripheral blood mononuclear cells （PBMC） from healthy volunteers were plated in 24-well plates and stimulated with LPS （1 pg/ml）, phorbol-12-myristate-13-acetate （PMA） （100 ng/ml）, zymosan （10 IJg/ml） and Tsst （100 ng/ml）. Supernatants were collected after 4-hour culture at 37℃, and quantitative determination of TNFα, interleukin-113 （IL-1β）, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-2 production in the supernatants was performed by colorimetric enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Total RNA of PBMC was isolated and cytokine mRNA quantitation was performed by using a RNA level measuring kit （R ＆ D Systems）. PBMC were pretreated with Y316 （10 μmol/L, 1 μmol/L, 0.1 μmol/L, 0.01 μmol/L and 0.001 μmOl/L） or dimethyl sulfoxide at 37℃ for 10 minutes, and then stimulated with LPS or PMA, protein concentrations of p44.42, IKBa, P38 and Jun NH2-terminat kinase were determined by Western blotting. Cyclic adenosine-3＇,5＇-monophosphate （cAMP） of PBMC was measured by enzyme immunoassay kit （Amersham Pharmacia Biotech）. Results Y316 blocked TNF production and inhibited the upregulation of TNF mRNA levels in response to LPS, and also prevented the production of IL-1 and IL-6. In contrast, Y316 augmented the production of IL-10 in LPS-stimulated monocytes. Y316 failed to prevent the production of IL-2 and TNF in antigen-stimulated T cells, suggesting that its effects may be cell-type specific. Y316 prevented the phosphorylation and activation of the MAPK, ERK, and therefore appeared to mediate its effects on TNF by acting at an early point in the signaling cascade induced in response to LPS. There was no effect of Y316 on cAMP levels either alone or in the presence of LPS. Conclusions Y316 appears to be a small molecule inhibiting TNF production, which may act via a novel mechanism. Identification of the target of Y316 may lead to the development of alternative strategies for achieving selective cytokine inhibition.     

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

健康高龄者外周血NK细胞活性及肿瘤坏死因子分泌的研究

目的 为探讨健康高龄者外周血自然杀伤细胞的活性及经诱导活化后肿瘤坏死因子（tumor necrotic fac-tor,TNF）的分泌。方法 采用乳酸脱氢酶释放法,以K562细胞和SGC-7901细胞为靶细胞测定外周血NK细胞的活性;白介素2（IL-2）与脂多糖诱导活化后的TNF的分泌活性测定以L-929细胞作为靶细胞,用MTT法测定其存活率表示。结果 与健康中青年组比较,高龄组人群的NK细胞对K562和SGC-7901细胞的杀伤活性均降低,但差异无统计学意义（P〉0.05）,经IL-2与LPS诱导的外周血淋巴细胞分泌的TNF活性均增高,差别有显著性（P〈0.01和P〈0.05）。结论 高龄组人群的外周血淋巴细胞经诱导分泌的TNF活力增高可能补偿了部份免疫功能的下降。     

商陆皂苷甲对白细胞介素1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3的影响

目的观察商陆皂苷甲（EsA）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（rGMC）增殖及Caspase-3表达的影响,探讨EsA治疗狼疮性肾炎等系膜细胞增殖性肾小球肾炎的可能机制。方法MTT法检测不同浓度的EsA对rGMC增殖的影响;蛋白质印迹法检测Caspase-3的表达,并成像分析。结果观察剂量中EsA对rGMC没有明显的细胞毒作用,EsA作用rGMC48h后抑制细胞增殖的有效浓度为2．5～5．0mg／L（P〈0.05或P〈0．01）;IL-1β促进了rGMC的Caspase-3的表达（P〈0．01）,与IL-1β组比较,EsA＋IL-1β组对rGMCC的Caspase-3的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在体外EsA（2．5～5mg／L）可显著抑制rGMC的增殖,GMC可能是EsA的作用靶细胞;但其促凋亡作用不明显。     

Therapeutic Mechanism of Santeng Dingtong Recipe (三藤定痛方) on Monosodium Urate Crystal-Induced Rabbit Arthritis

Objective: To study the therapeutic mechanism of Santeng Dingtong recipe (STDT) on monosodium urate crystal (MSU) induced rabbit arthritis Methods: Forty-two rabbits were randomly divided into six groups, 7 in each group. Group 1 received 0.9% saline 2. 5 ml/kg per day by gastrogavage (ig) for 10 days; Group 2, 3 and 4 received STDT 0.125 g/kg, 1.0 g/kg and 8.0 g/kg per day respectively by ig for 10 days; Group 5 received colchicine 4. 5 mg/kg per day by ig for 4 days; and Group 6 was untreated. MSU crystals 10 mg /500ul containing polymyxin B 10 u/ml was injected into the knee joints of Group 1-5 to make rabbit arthritis models. Leukocytes in synovial lavage fluids was then counted and differentiated; pathological injury of synovial membranes was observed under HE staining; interleukin-1 beta (IL-1B), tumor necrosis factor alpha (TNFa) and leukotriene B4 (LTB4) content in synovial lavage fluids were determined by ELISA. Results: MSU caused a rapid leukocyte infiltration and increased production of IL-1     

地塞米松及酪氨酸蛋白激酶抑制剂对胃上皮细胞白介素-8分泌抑制作用的实验研究

目的 :探讨慢性胃肠道炎症机制及其防治 ,本文对肿瘤坏死因子和白细胞介素 (白介素 ) 1β诱导的胃上皮细胞白介素 8分泌作用使用地塞米松及酪氨酸蛋白激酶抑制剂进行了体外实验研究。方法 :胃上皮细胞经体外培养后由肿瘤坏死因子和白介素 1β刺激 ,由酶联免疫法检验其白细胞介素 8的分泌 ,并与地塞米松和蛋白激酶抑制剂组相比较。结果 :地塞米松在 10 -8,10 -7,10 -6,10 -5mol/L可抑制肿瘤坏死因子和白介素 1β诱导的胃上皮细胞白介素 8分泌。酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素和核比霉素A具有类似效应 ,但蛋白激酶C和A抑制剂却无抑制效应。结论 :本文结果提示细胞介素诱导的胃上皮细胞白细胞介素 8的分泌可能是促进胃部炎症性疾病的原因之一 ,抑制白细胞介素 8的产生可为胃肠道炎症的防治机制提供理论依据