反义寡核苷酸抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究反义寡脱氧核苷酸（ASODN）抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为：对照组、Survivin ASODN 50、200μg组、正义对照组、Lipofectin＋pluronic等五个组，施加不同的处理因素，在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的mRNA表达，Westem blot检测Survivin基因的蛋白产物表达，免疫组织化学方法检测Survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，脱氧核苷酸转移酶末端标记法（TUNEL）检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的变化。结果移植后1、2周内膜增生明显，局部转染50μg Survivin ASODN组内膜增生明显受抑制（P〈0．05），200μg组受抑制程度更为明显（P〈0．05）；与对照组相比，Survivln ASODN组Survivin的mRNA及蛋白产物表达显著减少（P〈0．05），PCNA阳性表达同时减少，而TUNEL阳性细胞却明显增加。结论Survivin ASODN可显著抑制移植静脉的内膜增生，其作用可能是通过抑制Survivin基因及其蛋白产物表达，从而抑制VSMC增殖、促进其凋亡而实现的。     

反义c-myc寡核苷酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的 研究反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法 移植静脉外周涂以加有反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸的Ｆ１２７凝胶,于术后１、２周测量静脉内膜平均厚度及观察血管内膜内ｃ－ｍｙｃ蛋白表达情况。结果 手术后１、２周,移植静脉内膜的平均厚度、内膜中ｃ－ｍｙｃ蛋白表达在反义ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸组均减少,并存在量效关系（Ｐ〈０．０１）。而只用Ｆ１２７胶组及正义寡聚脱氧     

早期生长反应基因-1在自体移植静脉中的表达研究

目的研究自体静脉移植后早期生长反应基因-1(Egr-1)表达的动态变化,探讨其在内膜增生(IH)中的作用。方法 Wistar大鼠90只,建立自体静脉移植模型。术后分为1、2、6、24 h,3、 7、14、28、42 d组,取正常静脉作为对照。应用原位杂交和RT-PCR方法检测Egr-1 mRNA的表达,联合应用Western blot蛋白印迹和免疫组织化学方法检测Egr-1的蛋白表达。结果自体静脉移植后, Egr-1 mRNA和Egr-1蛋白的表达具有双相变化。移植后1 h,Egr-1 mRNA基因表达值为2．21±0．85。 6-24 h时下降,7 d时重新升高,28 d达高峰为3．16±1．14。移植早期2 h:Egr-1蛋白的表达阳性率为 31％±6％,24 h至3 d下降,28 d达高峰为41％±8％。免疫组化显示:移植早期Egr-1蛋白阳性表达主要位于中膜血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞／巨噬细胞;移植后期Egr-1蛋白阳性表达主要位于新生内膜和中膜的VSMCs,同时部分内皮细胞也有表达。结论移植静脉内膜增生与Egr-1的激活及表达关系密切,因而与移植静脉内膜增生及狭窄有关。     

核转录因子κB decoy寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响

目的 研究核转录因子κB(NFKB)decoy寡核苷酸(decoy ODNs)对移植静脉内膜增生的抑制作用,探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠72只,建立自体静脉移植模型,术后随机分为：对照组,NFκB decoyODNs 50μg、200μg组,杂码decoyODNs 50μg、200μg组,lipofectin pluronic组等6个组,施加不同的处理方法,在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度,半定量RT-PCR方法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1的mRNA表达,Western blot和免疫组化方法检测p65、ICAM-1的蛋白产物表达。结果 移植后1、2周内膜增生明显,局部应用50μg NFκB decoyODNs明显抑制内膜增生,抑制率为22％-31％;200μg组受抑制程度更为明显,抑制率达41％～53％,其他组内膜增生无明显变化。NFκB decoyODNs能够抑制：ICAM-1mRNA表达,p65和：ICAM-1的蛋白表达均显著低于各对照组,抑制率为30％-57％。结论 NFκB decoyODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生,其作用可能是通过减少黏附分子的基因转录及蛋白产物表达而实现的。     

反义寡脱氧核苷酸抑制survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的探讨生存素（survivin）的反义寡脱氧核苷酸（ASODNs）抑制survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，然后随机均分为对照组、survivin ASODNS 50μg和200μg组、正义寡脱氧核苷酸组（ODNs组）及Lipofectin＋pluronic组共5组，施加不同的处理因素，分别在静脉移植术后7和14d取材。组织形态学方法比较移植静脉内膜增生程度，半定量RT—PCR法检测survivin基因mRNA的表达，Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达，免疫组化法检测survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的变化。结果对照组、ODNs组和Lipofectin＋pluronic组移植术后7d、14d移植静脉内膜增生明显，但3组间差异无统计学意义（P〉0．05），局部转染50μg survivin ASODNs能明显抑制其内膜增生（P〈0．05），200μg组受抑制程度更明显（P〈0．05）。对照组survivin mRNA及蛋白产物表达显著增加，而survivin ASODNs组却显著减少（P〈0．05），VSMC中PCNA表达也同时减少（P〈0．05），而VSMC凋亡明显增加（P〈0．05）。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉内膜增生，其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达，从而减轻VSMC增殖，促进其凋亡而实现的。     

Ets-1反义寡核苷酸抑制裸鼠胃癌生长的实验研究

目的 研究Ets-1反义寡核苷酸对裸鼠胃癌生长的影响及其机制。方法 建立裸鼠胃癌皮下种植模型,分别应用Ets-1反义、正义寡核苷酸与PBS行瘤内注射,观察种植瘤生长的变化;应用逆转录聚合酶链式反应检测瘤组织Ets-1 mRNA的变化,并应用免役组织化学检测瘤组织微血管密度的差异。结果 经Ets-1反义寡核苷酸治疗后,反义Ets-1组较正义组及PBS组裸鼠胃癌生长明显受到抑制[(0.60±0.11)g vs(1.18±0.11)g vs(1.28±0.13)g,P<0.01];瘤组织Ets-1 mR-NA表达降低,微血管密度显著低于正义组与PBS组[(10.4±3.1)vs(24.5±8.4)vs(20.6±7.5),P<0.01]。结论 Ets-1反义寡核苷酸能够抑制裸鼠胃癌的生长,其机制可能与减少微血管形成有关。     

反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:利用反义核酸技术和显微外科技术,探讨反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响.方法:选择20只新西兰家免,等分为实验组和对照组,均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-fos核酸凝胶涂布;对照组仅行凝胶涂布.术后2周取出移植血管,分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度,内膜平滑肌细胞数及PCNA阳性表达情况.结果:实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度及VSMC数均较对照组减少,PCNA阳性表达情况亦较对照组明显减少.结论:反义c-fos核酸可有效的抑制移植静脉内膜的增生,是一种比较有发展前途的防治移植静脉内膜增生的基因疗法.     

针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2作用的研究

目的探讨针对于胰腺癌K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2的作用。方法用脂质体将针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC-2（反义组）,转染正义寡脱氧核苷酸（正义组）和生理盐水（对照组）,免疫组化和原位杂交检测靶基因表达,人工计数、噻唑蓝（MTT）和集落形成实验检测细胞增殖情况。结果转染48h后,反义组ras蛋白和K-ras基因mRNA的表达强度较正义组和对照组均明显降低（P〈0．05）。人工计数、MTT检测和集落实验均证实反义组细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05）。结论针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的胰腺癌细胞,对靶基因表达和细胞增殖有明显的抑制作用。     

同源盒基因B2反义寡核苷酸对内皮细胞的影响

目的：探讨同源盒基因B2（HOXB2）反义硫代寡核苷酸对脐静脉内皮细胞增殖,表达的影响。方法：以脂质代介导将硫代磷酸修饰的同源盒基因HOXB2反义寡核苷酸转染入脐静脉内皮细胞,采用MTT和RT－PCR观察不同浓度反义寡核苷酸对内皮细胞增殖及HOXB2 mRNA表达水平的影响,结果：经质体介导的HOXB2反义寡核苷酸转染,内皮细胞增殖受到抑制并呈剂量依赖效应,同时HOXB2 mRNA表达水平显著下降。结论：HOB2在内皮细胞的增殖中起重要作用,提示对HOXB2的研究有可能为创面修复提供新的思路。     

脂质体与腺病毒转染EDRz抑制自体移植静脉内膜增生的比较研究

目的探讨以脂质体和腺病毒为载体,早期生长反应基因-1 DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)局部外用对自体移植静脉血管平滑肌(VSMC)增殖和内膜增生的抑制作用。方法大鼠建立自体静脉移植模型后随机分为脂质体组、腺病毒组和对照组,两实验组分别用脂质体-EDRz和腺病毒-EDRz涂抹移植静脉行在体转染。于术后1,2,6,24 h及3,7,14,28 d取材,荧光显微镜检测移植静脉的转染情况;采用原位杂交方法检测Egr-1 mRNA的表达;用免疫组织化学方法检测Egr-1蛋白表达,同时进行组织形态学观察。结果术后1 h,EDRz主要位于移植静脉的外膜、中膜和部分内皮细胞。脂质体组荧光灰度值为70.3±13.5,腺病毒组荧光灰度值为60.5±11.2。术后2～24 h,EDRz主要位于移植静脉的中膜;移植7 d,EDRz主要位于移植静脉的内膜。移植早期Egr-1蛋白表达主要位于中膜的血管平滑肌细胞(VSMC)和部分单核细胞、内皮细胞;移植后期未检测到Egr-1 DNA酶的表达。移植后期在中膜和新生内膜的VSMC均未检测到Egr-1蛋白的表达。移植2 h阳性表达率,脂质体组为(15.3±4.2)%,腺病...     

纳米粒子载体携带反义转化生长因子-β1基因的局部定位转染对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的探讨纳米粒子携带反义转化生长因子(TGF-)β1局部定位转染对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法45只大鼠制成自体静脉移植模型后,分成纳米粒子DNA组、纳米粒子空载体组和生理盐水对照组,进行局部定位转染,2周后观察移植静脉内膜的变化,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Westernblot以及免疫组织化学等方法检测反义基因对内源性TG-Fβ1表达的影响。结果基因转染后两周,内膜厚度为(20.5±4.7)μm,明显小于两个对照组(P<0.01)。RTPCR和Westernblot结果表明,基因转染组的TGF-β1mRNA和蛋白的表达明显低于空载体组及生理盐水对照组。结论纳米粒子可有效地作为基因的转移载体;纳米粒子携带反义TGF-β1可以减少内源性TGF-β1基因的表达,抑制细胞外基质(ECM)的合成,从而达到抑制内膜增生的目的。     

Effect of AP-1 decoy using hemagglutinating virus of Japan-liposome on the intimal hyperplasia of the autogenous vein graft in mongrel dogs

Intimal hyperplasia is the leading cause of late vein graft failure. Smooth muscle cell proliferation and migration is the underlying mechanism. Pharmacological approaches to prolong vein graft patency have produced limited results. AP-1 proteins play a role in the expression of many genes involved in cellular proliferation and cell cycle progression. Previously we reported inhibition of vascular smooth muscle cell migration, proliferation, and intimal hyperplasia in the balloon-injured rat carotid artery using an AP-1 decoy with HVJ-liposomes. In this report, we evaluated the effect of the AP-1 decoy on intimal hyperplasia in a large animal model. The jugular vein was transfected with hemagglutinating virus of Japan-liposomes containing the AP-1 decoy or scrambled oligonucleotides. An interposition graft was performed with the pretreated jugular vein between the transected femoral arteries. The graft was harvested at 16 weeks after the procedure. The intimal area was compared: the intimal area of the AP-1 decoy-treated versus control group was 47.3 +/- 15.2 versus 102.3 +/- 15.9 (P < .05), respectively. In conclusion, AP-1 decoy using HVJ-liposomes effectively prevented intimal hyperplasia of an autogenous vein graft in mongrel dogs.     

糖尿病对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨AGE-RAGE系统对糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生的作用。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为糖尿病组及正常对照组。两组均建立自体静脉移植模型，制模后的7 d和14 d测定血清AGE含量，取自体静脉移植标本行组织形态学观察，半定量RT-PCR检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA的表达，Western蛋白印迹和免疫组化方法检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1蛋白表达,并用免疫组化方法检测PCNA的表达。结果:术后7 d及14 d，与对照组比较，糖尿病组自体移植静脉内膜增生明显为重，PCNA，RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA和蛋白表达均增强，血清AGE含量增加，差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论:AGE-RAGE系统激活NF-κB，增强黏附分子的表达，可能是糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生加重的原因。     

肝素对自体移植静脉内膜增殖的影响

目的 探讨肝素对移植静脉内膜增殖的影响。方法 建立大鼠自体静脉移植模型;将颈静脉内侧支移植于髂总动脉,应用肝素,每日２次,皮下注射５天。移植后２８天,应用病理形态学及ＰＣＮＡ免疫组织化学,通过计算机图像定量分析,观察其对移植静脉内膜平滑肌细胞增殖的影响。结果 肝素治疗组和空白对照组移植静脉段内膜增厚程度,ＰＣＮＡ阳性细胞数无差异。结论 肝素对移植静脉内膜增殖无作用,对受损的动脉内膜平滑肌细胞增殖有     

Cod-liver oil in the prevention of intimal hyperplasia in autogenous vein grafts used for arterial bypass

Cod-liver oil, rich in eicosapentaenoic acid, an unsaturated fatty acid, was administered to 14 mongrel dogs to determine if this acid would prevent platelet-mediated intimal hyperplasia. Twenty-eight 1 cm segments of undistended jugular vein were interposed between bilaterally divided femoral arteries. Seven control animals were fed a 2% cholesterol diet 1 week before and for 6 weeks after the operation. A further seven animals received cod-liver oil capsules containing 1.8 gm of eicosapentaenoic acid daily 1 week before and for 6 weeks after autogenous vein implantation, in addition to the lipid-supplemented diet. Baseline serum cholesterol was 4.6 +/- 0.4 mmol/L. The rise in serum cholesterol was similar in the two groups and increased to 7.4 +/- 0.6 mmol/L (control group) and to 6.8 +/- 0.2 mmol/L (eicosapentaenoic acid group) (p less than 0.001). Prothrombin time, partial thromboplastin time, bleeding time, and platelet counts were unchanged in the two groups. Vein grafts, harvested at 6 weeks, were fixed in formaldehyde. Mean intimal thickness was measured from multiple vein graft cross sections with a Zeiss computerized interactive image analyzing system. A mean of 140 +/- 11 measurements were computed from each graft. Marked intimal hyperplasia occurred in the control group and increased from 4.3 +/- 0.3 to 86.4 +/- 14 micron. In contrast, a high eicosapentaenoic acid diet inhibited intimal hyperplasia, with intimal thickness only increasing from 4.0 +/- 0.4 to 24.8 +/- 2.7 micron (p less than 0.001). These data indicate that eicosapentaenoic acid inhibits platelet-mediated intimal hyperplasia and suggest that cod-liver oil could be used to prevent intimal hyperplasia in vein grafts used for myocardial revascularization.