血管平滑肌细胞增殖的相关机制研究进展

血管平滑肌细胞( VSMC)的增殖对冠心病的发生、发展以及冠状动脉内再狭窄的形成具有重要意义.本文就VSMC增殖的病理作用、信号转导通路VSMC以及增殖的相关调控机制等方面的进展作一综述,以进一步认识VSMC增殖在冠状动脉粥样硬化及经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)后再狭窄的发生机制,从而为冠心病的防治提供新的思路.     

大黄素通过自噬抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移

目的研究大黄素对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移的调控作用,并探讨其是否通过自噬激活实现。方法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,采用CCK8法、免疫印迹法和划痕实验法分别检测大黄素对VSMC增殖和迁移的抑制作用;免疫印迹法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达水平。结果大黄素质量浓度依赖性地抑制VSMC的增殖迁移,同时上调细胞自噬。抑制细胞自噬后,大黄素对VSMC增殖迁移抑制作用减弱。结论大黄素通过细胞自噬抑制VSMC的增殖迁移。     

宽叶缬草对兔血管平滑肌细胞增殖及迁移抑制作用的实验研究

血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖及迁移是造成冠状动脉狭窄的一个重要机制 ,实验探讨了宽叶缬草在这方面的作用。结果显示 ,用药组中血管平滑肌细胞数量、3H-TOR掺入试验中 CPM值及细胞迁移距离均小于对照组 (P<0 .0 1) ,具有明显抗 VSMC增殖及迁移的作用     

马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：研究马齿苋总黄酮（Portulaca totalflavone,PTF）对血小板源性生长因子-BB型（PDGF-BB）致血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmuscle cell,VSMC）增殖的影响并探讨其机制。方法：采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF（8、24、72mg/L）对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内[Ca2＋]i。结果：PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少（P〈0.01）;能抑制高K＋诱导的VSMC内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca2＋]i有关。     

丹参酮ⅡA对血管紧张肽Ⅱ诱导增殖的 大鼠血管平滑肌细胞中c-fos与c-myc的影响

［摘要］目的探讨丹参酮ⅡA对血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。方法分离大鼠胸主动脉中层平滑肌，贴壁法培养平滑肌细胞，建立AngⅡ诱导的VSMC增殖模型；以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察丹参酮ⅡA对VSMC增殖的影响；流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响；应用免疫细胞化学方法观察原癌基因c fos和c myc表达水平的变化。结果成功建立AngⅡ诱导的VSMC增殖模型；随着丹参酮ⅡA浓度增加，VSMC增殖活性呈明显下降趋势（P＜0.05）；流式细胞术结果显示丹参酮ⅡA使VSMC G0/G1期比例升高（P＜0.01），S期比例下降（P＜0.01）;丹参酮ⅡA各组随着浓度的增加，VSMC中c fos和c myc表达水平显著下降（P＜0.05）。结论丹参酮ⅡA具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，并呈浓度依赖性。其机制可能与丹参酮ⅡA下调VSMC中c fos及c myc表达水平有关。     

前列腺素E1抑制血管平滑肌细胞增殖的作用

目的从细胞周期蛋白和凋亡相关基因探讨前列腺素E1(PGE1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控作用.方法采用培养的新生牛主动脉VSMC,以胎牛血清及白介素1(IL-1)分别作为促增殖剂,测定不同浓度PGE1对VSMC增殖、细胞内周期蛋白d1 mRNA表达、p53及Bcl-2基因表达和培养液内NO含量的影响.结果 PGE1浓度依赖性抑制胎牛血清促VSMC增殖作用;显著减少细胞周期蛋白d1 mRNA含量;浓度依赖性诱导IL-1孵育下VSMC产生大量NO, 同时抑制VSMC增殖;并促进p53基因表达,下调bcl-2基因,诱导细胞凋亡.结论 PGE1具有抑制VSMC增殖的作用,其机制可能与其阻滞VSMC生长有关;在炎性因子存在情况下,PGE1可诱导VSMC内大量产生NO,抑制VSMC增殖,并加速VSMC凋亡.     

氯沙坦逆转高血压血管重塑作用的分子机制

目的：探讨血管紧张素受体阻断剂氯沙坦治疗高血压病、动脉粥样硬化等心血管病的分子作用机制。方法：①运用快速自动微量MTT比色法，定量观察氯沙坦作用下的血管平滑肌细胞（VSMC）的MTT比色吸光度,了解VSMC增殖的变化。②运用免疫荧光组织化学法和激光共聚焦显微镜，定量分析氯沙坦作用下的VSMC中与细胞增殖和凋亡密切相关的bcl-2，bax,fas基因表达的变化。结果：氯沙坦组VSMC的MTT吸光度值低于对照组，有统计学差异。bcl-2基因的平均荧光值低于对照组，但无统计学差异。而bax,fas基因的平均荧光值则高于对照组，统计学上均有差异。结论：氯沙坦抑制VSMC的增殖，该作用机制是通过调控与细胞增殖和凋亡密切相关的bcl-2,bax,fas基因的表达而实现的，是氯沙坦治疗高血压等心血管疾病、逆转血管重塑作用的重要分子机制。     

栉孔扇贝裙边糖胺聚糖对血管平滑肌增殖及TNFαmRNA表达的影响

目的观察栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用及对肿瘤坏死因子(TNF)mRNA表达的影响,并探讨SS-GAG对抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的平滑肌细胞增殖模型,分别用MTT法和原位杂交方法观察SS-GAG对血管平滑肌增殖活性及对(bFGF)诱导增殖的VSMC内(TNF)mRNA表达的影响。结果不同浓度的SS-GAG组细胞增殖活性明显低于模型组细胞,差别有统计学意义(P<0.05,P<0.01);低、高剂量SS-GAG组TNFmRNA基因表达明显低于模型组(P<0.01),表达强度和阳性细胞数量均减少。结论SS-GAG对VSMC增殖和由bFGF诱导增殖的VSMC内TNFmRNA表达均有抑制作用,且随着SS-GAG浓度的升高抑制作用增强。     

Atglistatin对棕榈酸诱导的血管平滑肌细胞增殖及ATGL表达的影响

目的:通过构建棕榈酸(PA)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖模型，初步探讨脂肪代谢关键酶脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)对于VSMC表型转化的影响。方法:在给予不同浓度的PA(分别为50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)诱导的VSMC的增殖模型中加入40μmol/L Atglistatin,然后通过CCK-8、EDU检测细胞活力及细胞的增殖情况；通过划痕实验检测细胞的迁移能力；通过油红染色检测VSMC中的脂滴的累积情况；通过Western blot检测ATGL以及平滑肌收缩表型蛋白的影响。结果:100μmol/L浓度的PA可以明显诱导VSMC的增殖，促进VSMC的吞脂，使VSMC的脂滴堆积增加；同时，Atglistatin可以加剧PA导致的VSMC的增殖迁移，并增加VSMC的脂滴堆积。结论:Atglistatin可以加剧PA诱导的VSMC的增殖，增加VSMC的脂滴堆积，并加剧VSMC的增殖表型的转变。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的　研究海洋硫酸多糖(DPS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其作用机制。方法　建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白介素-1(IL-1)所诱导的VSMC增殖模型,以MTT法观察DPS对VSMC增殖的影响,分别用Griess重氮化反应法和放免法测定VSMC上清液中一氧化氮(NO)、血管紧张素II(AngII)和内皮素-1(ET-1)的含量。结果　DPS在0.01-10μg·mL^-1浓度下,对bFGF或IL-1所致的VSMC增殖均有明显抑制作用。DPS呈剂量依赖性增加NO合成及降低AngII和ET-1的生成或释放。结论　DPS对VSMC增殖有抑制作用,其机制可能与增加一氧化氮合成及降低血管紧张素II和内皮素-1的生成或释放有关。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的　研究海洋硫酸多糖 (DPS)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及其作用机制。方法　建立碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和白介素 1(IL 1)所诱导的VSMC增殖模型 ,以MTT法观察DPS对VSMC增殖的影响 ,分别用Griess重氮化反应法和放免法测定VSMC上清液中一氧化氮 (NO)、血管紧张素II(AngII)和内皮素 1(ET 1)的含量。结果　DPS在 0 0 1- 10 μg·mL-1浓度下 ,对bFGF或IL 1所致的VSMC增殖均有明显抑制作用。DPS呈剂量依赖性增加NO合成及降低AngII和ET 1的生成或释放。 结论　DPS对VSMC增殖有抑制作用 ,其机制可能与增加一氧化氮合成及降低血管紧张素II和内皮素 1的生成或释放有关。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[3H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。     

Apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用研究

目的研究G蛋白偶联受体APJ的内源性配体Ape-lin-13对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)生长增殖影响及其与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的关系,发现Apelin-APJ新功能。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,噻唑蓝比色法(MTT)观察VSMC增殖;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测cyclinD1的表达。结果Apelin-13能促进血管平滑肌细胞增殖,降低G0/G1期细胞百分比,升高S+G2+M期细胞百分比,并可剂量依赖性刺激细胞cyclin D1的表达增加。结论Apelin-13能通过推动细胞周期由G0/G1期进入S期而促进血管平滑肌细胞增殖,其作用机制与促进cyclin D1表达增高有关。     

1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及对PDGF-B,bFGF,c-sis,c-myc的影响

用氚 胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法,电镜,免疫组化,原位杂交方法,在自发性高血压大鼠(SHR)观察了1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐(DDPH)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及对生长因子PDGF-B,bFGF及其相关癌基因c-sis与c-myc表达的影响。结果发现:DDPH在降低SHR血压同时,能减少肾动脉VSMC的线粒体,粗面内质网和³H-TdR掺入量,并能逆转VSMC增殖时PDGF-B,bFGF抗原及c-sis与c-mycmRNA的表达增强。提示:DDPH能抑制SHR的VSMC增殖,与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

银杏总黄酮和银杏内酯对血管平滑肌细胞增殖的差异抑制作用及机制初探

目的研究银杏叶提取物中主要有效成分,银杏总黄酮和银杏内酯对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法 (1)分离和培养原代胸主动脉平滑肌细胞作为实验材料。(2)PDGF-BB处理造模,分别采用不同浓度的银杏黄酮或银杏内酯与PDGF-BB共孵育,高内涵成像系统定量统计VSMC细胞增殖情况。(3)以流式细胞术从细胞周期方面探讨银杏叶提取物抑制细胞增殖的可能机制。结果 (1)培养出活性好、纯度高的原代VSMC。(2)与模型组比较,银杏黄酮能够显著抑制VSMC增殖,且呈一定的时间浓度依赖性。银杏内酯与模型组相比差异无统计学意义。(3)流式结果表明银杏黄酮通过阻滞细胞周期抑制VSMC增殖。结论银杏黄酮和银杏内酯差异性抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖,且这种抑制作用与阻滞细胞周期相关,选择性使用银杏叶提取物中的银杏黄酮可能对心血管和脑血管疾病的治疗提供更好的指导作用。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ抗AngⅡ诱导SHR血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张Ⅱ(AngⅡ)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并初探其作用机制。方法以组织块贴壁法培养SHR VSMC,应用MTT比色法、3[H]-TdR参入法、流式细胞技术、电镜技术和real time RT-PCR分别观察VSMC在AngⅡ刺激下的细胞增殖、DNA合成、细胞周期、细胞超微结构和Agt、c-myc基因表达的变化,及观察YMⅢ对上述指标的影响。结果 AngⅡ1μmol.L-1明显促进VSMC增殖和DNA合成;而YMⅢ0.01、0.05、0.10μmol.L-1可呈浓度依赖性地抑制AngⅡ所致VSMC增殖活性、DNA合成、细胞周期增殖指数的升高,改善细胞超微结构,并使AngⅡ升高的Agt、c-myc mRNA表达下调。结论 YMⅢ可明显抑制AngⅡ诱导的SHR VSMC增殖,作用机制可能与其抑制Agt、c-myc mRNA表达,从而抑制细胞DNA合成和细胞周期的进展有关。     

3,3’双吲哚甲烷对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究3,3’双吲哚甲烷(3,3’Diindolylmethane,DIM)在体外对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及可能的分子机制。方法 WST-1方法检测VSMC增殖,5-溴-2’-脱氧尿苷(Brdu)掺入法检测细胞DNA合成,western blot检测p-Akt,p-GSK(糖原合酶激酶)-3β表达。结果凝血酶显著促进VSMC增殖和细胞DNA合成,而DIM呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的VSMC增殖和DNA合成。对分子机制的研究发现DIM抑制Akt/GSK-3β磷酸化。结论 DIM抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这个作用可能与其抑制Akt/GSK-3β信号通路有关。     

选择性钠-氢交换抑制剂HOE642抑制血管平滑肌细胞增殖

采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 (VSMC) .用 15 %小牛血清刺激VSMC增殖 .运用双盲法细胞计数和 [3H]TdR参入法检测平滑肌细胞的增殖 ,观察选择性钠 氢交换蛋白 (NHE 1)抑制剂HOE 6 4 2 (3 甲磺酰基苯甲酰胍 4 甲磺酸异丙酯 )对VSMC增殖作用的影响 .结果显示 ,选择性钠 氢交换抑制剂HOE 6 4 2能显著抑制 15 %小牛血清刺激的VSMC的增殖 ,2 0 μmol·L- 1HOE 6 4 2抑制VSMC增殖程度达 6 0 % .其抑制作用呈剂量依赖性     

姜黄素烟酸酯对血管平滑肌细胞增殖及ERK1/2信号通路的影响

目的探讨姜黄素烟酸酯(curcumin trinicotinate,Cur Tn)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及其可能机制。方法体外培养VSMC,体积分数为0.1的FBS刺激VSMC生长。MTT法观察CurT n对VSMC活力的影响;流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测PCNA、p-ERK1/2、CyclinD 1蛋白的表达。结果 CurT n抑制VSMC增殖并呈现一定量效、时效关系,并且使G1期的细胞比例增加,S期细胞比例下降,PCNA蛋白表达下调。同时发现CurT n能明显抑制p-ERK1/2、CyclinD 1蛋白表达。结论 CurT n能明显抑制VSMC增殖,其作用机制可能与p-ERK1/2、CyclinD 1蛋白表达下调有关。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[³H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G₀/G₁期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[³H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。