巴弗洛霉素A1对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及自噬的抑制作用

目的 探讨巴弗洛霉素A1（Baf-A1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法 采用终浓度为0.1、0.5 μmol／L的Baf-A1处理Tca8113细胞,并设不加药的对照组。MTT比色法测定对照组及不同浓度Baf-A1处理0、24、48、72 h细胞的增殖情况,流式细胞仪检测0.5 μmol／L Baf-A1处理72 h的细胞周期,Western blotting、细胞免疫荧光检测自噬标记蛋白LC3B的表达,电子透射显微镜观察细胞自噬体形成情况。结果 Baf-A1呈剂量依赖性抑制Tca8113细胞增殖,05 μmol/L Baf-A1处理72 h时细胞增殖抑制作用最明显。流式细胞仪检测显示,与对照组比较,Baf-A1组sub-G1期、G1期细胞增多（P＜0.05）,S期和G2/M期细胞减少（P＜0.05）。Baf-A1组LC3B-II蛋白的相对表达量为1.83±0.23,高于对照组的0.79±0.18（P＜0.01）;细胞免疫荧光检测显示,对照组中可见少量LC3B表达,而Baf-A1组72 h后可见大量LC3B点状聚集物;电镜观察显示,与对照组比较,0.5 μmol／L Baf-A1处理后可见大量自噬体形成,自噬溶酶体形成增加。结论 Baf-A1对舌鳞癌Tca8113细胞有增殖抑制作用,可能与其阻滞细胞周期和抑制细胞自噬有关。     

神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究外源性神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和VEGF表达的影响.方法 不同浓度GM3干预HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞学技术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术检测细胞VEGF mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞VEGF蛋白水平.结果 (1) GM3浓度分别为2、10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞生长抑制率分别为9.8％、32.9％、50.7％和78.6％,半数抑制浓度(IC50)为49.8 μmol/L.(2) GM3浓度分别为10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞凋亡率分别为(4.9±0.4)％、(15.1±0.3)％、(24.4±0.7)％.(3)当GM3浓度高于10 μmol/L时,HeLa细胞VEGF mRNA表达水平以及VEGF蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05).结论 外源性神经节苷脂GM3能呈浓度依赖性抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡,下调HeLa VEGF mRNA水平和蛋白水平,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.     

苦参碱联合高三尖杉酯碱抑制急性髓系白血病HL-60细胞增殖的研究

目的 探讨苦参碱(MAT)联合高三尖杉酯碱(HHT)对人急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖的抑制作用,寻找经济有效的抗白血病中药.方法 应用CCK8法检测HHT、MAT单药对HL-60细胞的增殖抑制情况,以低于50％抑制浓度(IC50)的HHT与低于10％抑制浓度(IC10)的MAT联合用药,检测联合用药对HL-60细胞的增殖抑制情况.结果 HHT、MAT单独用药时,随着药物浓度增加,对HL-60细胞增殖抑制作用逐渐增强,与剂量呈依赖关系,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).HHT、MAT对HL-60细胞IC50分别为0.042、780 mg/L.MAT对HL-60细胞IC10是32 mg/L,与各相应浓度HHT单独用药比较,不同浓度(0.002 5、0.005 0、0.010 0、0.020 0、0.040 0 mg/L)HHT与MAT(25 mg/L)分别联合用药对HL-60细胞增殖的抑制率均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 中药提取物HHT、MAT有抑制HL-60细胞增殖作用,联合用药能增强抑制作用.     

EBSS饥饿人鼻咽癌CNE-2细胞株诱导自噬的机制研究

目的:观察饥饿状态下永生化正常鼻咽上皮NP69细胞、鼻咽癌CNE-2细胞的自噬变化及自噬与凋亡的相互作用,为Baf-A1在鼻咽癌中的应用前景提供证据。方法:EBSS溶液替代DMEM溶液在NP69和CNE-2细胞中制造体外饥饿环境,Baf-A1抑制细胞自噬。应用Western blot及透射电镜检测细胞自噬,MTT检测细胞存活率,qRT-PCR检测mRNA表达。结果:与NP69细胞相比,EBSS制造的饥饿环境显著促进CNE-2细胞发生自噬,处理24时后出现大量细胞凋亡,100 nmol/L Baf-A1抑制细胞自噬可延缓饥饿诱导的细胞凋亡。qRT-PCR检测结果:EBSS作用下,LKB1、AMPK、ULK1、Beclin1、ATG5 mRNA水平均显著上升(P<0.05)。结论:EBSS通过LKB1/AMPK/mTOR通路显著诱导CNE-2细胞自噬的发生。     

紫杉醇同步放化疗对子宫内膜癌HEC-1A细胞系的抑制作用及其机理的初步研究

目的 探讨紫杉醇与放射线对子宫内膜癌HEC-1A细胞系的同步体外杀伤作用及其机理。方法采用MTT比色法,找到紫杉醇对HEC—1A细胞系作用24h的10％药物致死剂量（24hIC10）及50％药物致死剂量（24hIC50）,将紫杉醇与放射线同步作用于子宫内膜癌HEC-1A细胞系,通过倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT比色法,检测紫杉醇及放射线对细胞生长的抑制情况;流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡情况。结果①紫杉醇IC10浓度＋放疗组24h、48h、72h、96h的抑制率与单纯放疗组比较均有统计学意义（P〈0．01）;紫杉醇IC50浓度＋放疗组24、48、72、96的抑制率与单纯放疗组比较均有统计学意义（P〈0．01）。②经流式细胞仪检测分析,对照组、紫杉醇IC10浓度组、紫杉醇IC50浓度组、单纯放疗组、紫杉醇IC10浓度＋放疗组、紫杉醇IC50浓度＋放疗组48hS期和G2期细胞比例分别为20．5％和15．9％、11．7％和28．9％、10．8％和36．2％、18．8％和13．2％、16．6％和31．4％、10．5％和38．4％;48h凋亡细胞比例分别为0、3．2％、11．8％、16．3％、13．4％和17．4％。结论小剂量（24hIC10浓度）紫杉醇能够增强放疗对子宫内膜癌HEC-1A细胞系的抑制作用;大剂量（24hIC50浓度）紫杉醇联合放疗对子宫内膜癌HEC-1A细胞系有更强的抑制作用。小剂量（24hIC10浓度）或大剂量（24hIC50浓度）紫杉醇能够增强放疗对子宫内膜癌HEC-1A细胞系的抑制作用机制,可能与紫杉醇能够使细胞周期停滞于G2期,使细胞对放射线的敏感性增加有关。     

紫杉醇增强肺癌细胞NKG2D配体表达和CIK细胞杀伤活性

目的研究不同浓度紫杉醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后NKG2D配体表达的改变及CIK细胞杀伤活性的变化。方法 采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞24小时的50%抑制率(IC50);流式细胞术检测IC50、1/2 IC50、1/4 IC50浓度紫杉醇作用A549细胞48小时后A549细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的变化;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的紫杉醇作用前及作用48小时后A549细胞的杀伤活性。结果 不同浓度紫杉醇作用48小时后A549细胞表面MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达显著升高,ULBP1表达降低(P<0.05)。效靶比10∶1、20∶1、30∶1时,CIK细胞对A549细胞的杀伤活性分别为(11.08±1.22)%、(36.22±0.91)%、(45.73±2.00)%;CIK细胞对IC50浓度紫杉醇作用48小时后的A549细胞杀伤活性分别为(20.79±3.33)%,(53.47±1.62)%、(66.39±0.77)%,与作用前比较均明显增强(P<0.05)。结论 紫杉醇作用后能提高A549细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP2、ULBP3)的表达,从而增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。     

顺铂与CIK细胞对A549细胞杀伤协同作用机制的初步研究

目的:探讨不同浓度顺铂作用人肺腺癌A549细胞24h后,NKG2D配体表达的改变及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的变化。方法:MTT法测定顺铂作用A549细胞24h的50%抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测IC50、1/2IC50和1/4IC50浓度顺铂分别作用A549细胞24h后,A549细胞表面NKG2D配体表达的变化,配体包括MHC-I类链相关分子MICA和MICB以及人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白ULBP1、ULBP2和ULBP3;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的顺铂作用前及作用24h后A549细胞的杀伤活性。结果:不同浓度顺铂作用24h后,A549细胞表面MICA(F=12.490,P=0.002)、MICB(F=41.492,P<0.001)、ULBP2(F=375.773,P<0.001)和ULBP3(F=59.594,P<0.001)表达均显著升高;ULBP1表达降低,F=55.693,P<0.001。效靶比10∶1时,IC50浓度顺铂作用24h前、后的A549细胞的杀伤活性分别为(11.88±1.57)%和(17.64±1.44)%,F=21.770,P=0.010;20∶1时分别为(35.56±1.98)%和(46.39±3.51)%,F=21.653,P=0.010;30∶1时分别为(45.03±1.74)%和(73.81±1.62)%,F=439.578,P<0.001。结论:顺铂提高A549细胞NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2和ULBP3的表达,增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。     

重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞系放射增敏作用研究

[目的]探讨重楼皂苷Ⅰ对肺腺癌A549细胞的体外放射增敏作用及其可能机制.[方法]以肺腺癌A549细胞系为研究对象,MTT法检测重楼皂苷Ⅰ对A549细胞的抑制率,得到重楼皂苷Ⅰ对A549细胞的半数抑制浓度(IC50)及IC20、IC30,取IC20-30之间的重楼皂苷Ⅰ浓度用于放射增敏,随机分为对照组、单纯照射组、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅰ+照射组,描绘细胞生长曲线、计算克隆形成率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,Western Blot法检测survivin及p21waf/cip1蛋白表达.[结果]A549细胞在经重楼皂苷Ⅰ处理和照射后重楼皂苷Ⅰ+照射组A549细胞的增殖能力明显受抑(P＜0.01),克隆形成率明显下降(3.3％,P＜0.01),流式细胞术分析显示在重楼皂苷Ⅰ+照射组G2/M期阻滞(37.56％±1.99％,P＜0.01),凋亡率明显升高(9.34％±0.84％,P＜0.01).Western Blot检测survivin蛋白表达降低,而p21waf1/cip1蛋白表达增加.[结论]重楼皂苷Ⅰ具有较好的放射增敏作用,可能通过诱导细胞凋亡,细胞G2/M期阻滞,降低survivin蛋白表达,增加p21蛋白表达,从而产生放射增敏作用.     

岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

目的:研究岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞形态改变的影响。方法:用不同浓度的岗松总黄酮对宫颈癌SiHa细胞进行处理,采用CCK8法检测SiHa细胞体外增殖情况和半抑制浓度(IC 50)。设置不做药物处理的对照组与药物浓度为IC 50值处理的实验组。Transwell小室...     

绿原酸通过抑制PI3K-Akt信号通路诱导肺癌A549细胞线粒体功能障碍

目的探讨绿原酸能否通过作用于PI3K-Akt信号通路造成线粒体功能障碍, 从而抑制肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和促进其凋亡。方法采用梯度浓度(0、25、50、100、150、200 μg/ml)的绿原酸干预A549细胞48 h, CCK-8实验检测细胞增殖率并计算半抑制浓度(IC50)。将A549细胞分成空白组、绿原酸组(IC50)和绿原酸+740YP组(IC50绿原酸+50 μg/ml 740YP), 干预48 h后使用细胞划痕实验检测细胞迁移距离, 细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力, 流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡水平与线粒体膜电位变化情况, 酶联免疫吸附试验检测细胞上清丙二醛(MDA)含量, 蛋白质印迹法检测细胞中p-PI3K、p-Akt和Caspase3蛋白表达情况。结果绿原酸对A549细胞的IC50为57.45 μg/ml。细胞划痕实验结果显示, 空白组、绿原酸组和绿原酸+740YP组细胞48 h迁移距离分别为(424.80±14.43)、(289.67±18.93)和(402.22±17.99)μm, 细胞侵袭实验结果显示, 3组细胞48 h侵袭细胞数量分别为(96.00...     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对乏氧宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对乏氧状态下人宫颈癌HeLa细胞放射敏感度的影响。方法:应用不同浓度TSA作用经乏氧预处理的人宫颈癌HeLa细胞12、24、48和72 h,MTT法检测HeLa细胞的增殖率,计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和IC10值;克隆形成实验检测TSA(IC10)作用24 h对乏氧HeLa细胞的放射增敏效应;免疫细胞化学法检测TSA(IC10)对HeLa细胞中乏氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响。结果:TSA对乏氧宫颈癌HeLa细胞的增殖率有明显的抑制作用,且随着TSA浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强。与乏氧照射组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h,可增加细胞的放射敏感度(P<0.05)。乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显高于常氧组细胞;与乏氧组比较,TSA(IC10)作用乏氧HeLa细胞24 h后,细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达下调。结论:TSA可能通过抑制乏氧HeLa细胞中HIF-1α和VEGF蛋白的表达而发挥放射增敏效应。     

β-榄香烯联合照射对肺腺癌A549细胞凋亡及Livin基因表达的影响

目的:检测β-榄香烯乳对肺腺癌A549细胞株放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测β-榄香烯乳对A549细胞增殖的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组(C)、照射组(R)、β-榄香烯乳组(0.1×IC50、0.2×IC50)及β-榄香烯乳联合照射组(0.1×IC50+R、0.2×IC50+R),用不同浓度的β-榄香烯乳处理细胞24h后照射,流式细胞仪检测细胞凋亡率。实时定量PCR技术(real-time PCR)检测细胞Livin基因mRNA表达量。结果:MTT法测得β-榄香烯乳对A549细胞增殖的IC50值为115μg/ml;流式细胞仪检测β-榄香烯乳联合照射组细胞凋亡率明显高于单纯照射组及β-榄香烯乳组(P<0.05);β-榄香烯乳联合照射组细胞Livin基因mRNA表达量较照射组明显下降(P<0.01)。结论:β-榄香烯乳可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡和抑制Livin基因mRNA表达,其放射增敏机制可能与这些作用有关。     

顺铂和紫杉醇对CIK 细胞杀伤食管癌细胞活性的影响及其分子机制研究*

目的:研究紫杉醇、顺铂对人食管癌EC9706细胞NKG 2D 配体表达及CIK 细胞杀伤活性的影响,探讨相关分子机制。方法:MTT 法测定紫杉醇、顺铂对EC9706细胞的24h 半数抑制浓度（IC 50）。 流式细胞仪检测1/ 2 IC 50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞NKG 2D 配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测效靶比2 0 :1、3 0 :1 时,CIK 细胞对1/ 2 IC 50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞的杀伤活性。荧光定量PCR 法检测1/ 2 IC 50浓度紫杉醇、顺铂作用EC9706细胞24h 前、后DNA 损伤修复基因（ATM 、ATR 、CHK 1、CHK 2、P 53）表达的变化。结果:紫杉醇、顺铂的24h 半数抑制浓度分别为10、5 μ g/mL 。1/ 2 IC 50浓度紫杉醇作用24h后,EC9706细胞MICB、ULBP2、ULBP3 表达均明显增强（P < 0.05）,MICA、ULBP1 表达无显著性变化（P > 0.05）;1/ 2 IC 50浓度顺铂作用24h 后,EC9706细胞 MICA、MICB、ULBP2、ULBP3 表达均明显增强（P < 0.05）,ULBP1 表达无显著性变化（P > 0.05）。效靶比 20 :1、30 :1 时,CIK 细胞对 1/ 2 IC 50浓度紫杉醇、顺铂作用后的 EC9706细胞的杀伤活性均明显增强（P < 0.05）。1/ 2 IC 50浓度紫杉醇作用 24h后,DNA 损伤修复基因表达均无显著性变化（P > 0.05）;1/ 2 IC 50浓度顺铂作用24h 后,ATM 、ATR 、CHK 1、CHK 2 基因表达均明显增加（P < 0.05）,P 53基因表达无显著性变化（P > 0.05）。 结论:顺铂、紫杉醇均可增强CIK 细胞的杀伤活性,其分子机制可能与激活DNA 损伤修复基因,进而增加NKG 2D 配体表达有关。      

WISP1在食管鳞癌组织和细胞中的表达及对细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP1)在食管鳞癌(ESCC)组织和细胞中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭迁移的影响.方法 应用基因芯片技术筛选ESCC的差异表达基因,免疫组化检测43例ESCC组织的WISP1蛋白水平,实时定量PCR(qPCR)检测78例ESCC组织及人食管上皮细胞HET-1A和ESCC细胞...     

曲美替尼对BRAFV600E甲状腺乳头状癌维莫非尼药物抵抗的逆转作用机制

目的 探讨曲美替尼(Trametinib)对维莫非尼(Vemurafenib)治疗BRAFV600E突变型甲状腺乳头状癌抵抗的逆转作用和机制.方法 应用CCK-8实验检测Vemurafenib及Trametinib在人甲状腺癌K-1、BCPAP细胞中的半数抑制浓度(IC50)及两药联合指数(CI).蛋白质印迹法检测Ve...     

靶向干扰Spy1表达增强食管癌化疗敏感性的研究

[目的]探讨抑制Spy1表达后食管癌细胞对化疗药物顺铂敏感性的变化。[方法]在食管癌Eca-109细胞中转染靶向Spy1的si RNA,采用RT-PCR和Western Blot检测Spy1的表达情况;MTT法检测抑制Spy1表达后对Eca-109细胞生长和对顺铂化疗敏感性的影响;流式细胞术检测干扰Spy1对细胞周期的影响。[结果]转染Spy1 si RNA后,食管癌Eca-109细胞中Spy1的m RNA和蛋白水平明显下降;MTT结果显示顺铂对Eca-109细胞的半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)由4.56±1.23μg/ml降至1.12±0.09μg/ml;转染Spy1 si RNA联合顺铂IC50处理使细胞存活率由(64.7±3.8)%降至(46.8±4.2)%;细胞周期更多阻滞于G0/G1期(P<0.05)。[结论]靶向干扰Spy1表达可抑制食管癌细胞的生长,增强顺铂对肿瘤细胞的杀伤作用,其机制与细胞阻滞于G0/G1期有关。     

半乳糖凝集素-9在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨半乳糖凝集素-9(galectin-9)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)组织及癌旁组织中的表达及对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:收集山东大学附属济南市中心医院胸外科于2012年1月至2013年1月期间手术切除的ESCC患者组织标本89例及距癌组织边缘5 cm以上的癌旁组织标本20例,采用免疫组化法检测ES-CC及癌旁组织中galectin-9蛋白的表达,并分析其与患者性别、年龄、浸润深度、肿瘤大小、分化程度、病理分期(pTNM)及淋巴结转移等临床病理特征之间的关系.采用脂质体介导法将pcDNA3.1-galectin-9转染食管癌EC9706细胞系,运用细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验,检测galectin-9表达上调对食管癌EC9706细胞迁移、侵袭能力的影响.结果:ESCC组织中galectin-9蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织[25.8％ (23/89) vs 50％ (10/20),P＜0.05],galectin-9蛋白的表达与ESCC患者肿瘤分化程度及淋巴结转移相关(均P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及病理分期无关(均P＞0.05).在食管癌EC9706细胞中过表达galectin-9后,与阴性对照组相比,肿瘤细胞的侵袭[(45.0±8.0) vs (160.0±12.0),P＜0.01]和迁移能力[(20.6±2.1) vs(87.6±4.9),P＜0.05]明显下降.结论:galectin-9的表达缺失参与了食管癌的发生、发展,ga-lectin-9可以抑制ESCC细胞的侵袭及迁移.     

顺铂水针剂与粉针剂体外细胞毒作用的差异性研究

目的:比较两种不同剂型顺铂针剂的细胞毒效应.方法:用含不同终浓度顺铂水针剂与粉针剂的培养液培养Hela细胞系,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率并计算顺铂的50%抑制浓度(IC50),分析比较两种不同顺铂剂型针剂在体外的细胞毒效应.结果:相对于顺铂粉针剂,相同终浓度顺铂水针剂作用的Hela细胞存活率较低,其IC50值分别为(14.0±0.07)μg·ml-1及(15.03±0.26)μg·ml-1(P=0.003).其中在(0.1、1、10)μg·ml-1组中细胞存活率存在差异.结论:顺铂水针剂较粉针剂体外细胞毒效应强.     

Gefitinib抑制人胶质瘤U251细胞生长分子机制研究

目的:研究Gefitinib对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度Gefitinib对U251细胞增殖活性的效应.流式细胞术(FCM)分析Gefitinib对U251细胞周期以及凋亡的影响,蛋白质印迹法检测周期、凋亡相关蛋白表达量的变化.罗丹明123/PI双染流式细胞术与吖啶橙(AO)染色荧光显微镜分析凋亡.结果:Gefitinib能显著抑制U251细胞的增殖,并呈剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)为18.01 μmol/L.通过流式、荧光染色以及蛋白质印迹检测分析发现,随着浓度的增加,Gefitinib能明显阻滞U251细胞于G0/G1期,主要通过降低线粒体膜电位诱导细胞凋亡,0、10、20和40 μmol/L浓度处理后细胞凋亡率分别为1.28％、4.48％、77.97％和90.59％.Gefitinib对U251细胞的周期阻止与诱导凋亡主要是下调细胞周期依赖蛋白激酶CDK2、CDK4和CDK6的表达,同时上调p27Kip1的表达,引起细胞周期阻滞.上调、活化凋亡相关蛋白Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致线粒体膜电位降低,活化Caspase-9,诱导细胞凋亡.结论:Gefitinib在15～60 μmol/L浓度范围内,能明显抑制U251细胞的增殖并能通过周期阻滞诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖关系.主要通过下调周期依赖蛋白激酶的表达阻滞U251细胞于G0/G1期,降低线粒体膜电位,活化Caspase途径诱导U251细胞凋亡.     

洛铂对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡作用的实验研究

目的 探讨洛铂（LBP）对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期HepG2细胞,分别采用不同浓度LBP（0、2.5、5、10、20 μmol／L）处理48 h。普通光镜观察细胞形态学改变;MTS法检测细胞增殖,并计算半数抑制浓度（IC50）;Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测Bax、Bak、Bcl-2、Bid、Bcl-XL、Survivin及PARP-1蛋白表达。结果 随着LBP浓度的升高HepG2细胞密度减少,离巢死亡细胞数目增多;光镜下可见典型核固缩、碎裂的凋亡细胞。LBP能显著抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）;2.5、5、10、20 μmol／L的LBP作用HepG2细胞48 h后的增殖率分别为（92.11±1.79）％、（65.87±1.78）％、（51.57±0.81）％及（33.11±1.47）％; LBP作用HepG2细胞48 h的IC50为13.28 μmol／L。2.5、5、10、20 μmol／L LBP作用48 h HepG2细胞的凋亡率分别为（11.64±0.85）％、（20.99±2.21）％、（33.02±2.30）％和（40.77±1.58）％,与LBP 0 μmol／L 的（3.29±0.43）％比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5、5、10、20 μmol／L LBP能够下调HepG2细胞中的Bcl-2、Mcl-1蛋白表达,上调Bax、Bid、PARP-1蛋白表达, 对Bcl-XL、Bak及Survivin蛋白表达无影响。结论 LBP能够诱导HepG2细胞凋亡、抑制细胞增殖,其可能机制与上调Bax、Bid和PARP-1蛋白以及下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达有关。