粒单系白血病原始细胞表达血小板特异性抗原与周期 …

目的：探讨急性单核细胞白血病原始细胞表达血小板特异性抗原的机制。方法：分离外周血或骨髓单个核细胞,采用常规染色和普通细胞化学染色观察其开矿学特性,采用流式细胞仪双荧光分析免疫表型,单荧光胞浆蛋白标记分析周期蛋白表达和免疫印迹进一步证实周期蛋白表达和免疫印变进一步证实周期蛋白 表达情况。采用周期蛋白手ＤＮＡ双标记分析周期蛋白Ｄ３表达与细胞周期的关系。结果：白血病原始细胞中ＣＤ１３＾＋＋ＨＬＡ－ＤＲ＾     

三色流式细胞术在检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型中的应用

目的:探讨三色荧光标记流式细胞术CD45辅助设门检测儿童急性淋巴细胞白血病(CALL)免疫表型的临床应用及意义。方法:采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测25例FAB分型为ALL的儿童骨髓或外周血免疫表型。结果:25例ALL儿童中,B型淋巴细胞白血病14例,T型淋巴细胞白血病6例,双标记5例,在T-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD7>CD3>CD5,在B-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD19>CD10>CD22>CD20,在T-ALL、B-ALL及双标记中还可同时表达髓系抗原(CD13、CD14、CD15、CD33),且髓系标记抗原在T-ALL与B-ALL中出现的频率相同。结论:三色荧光标记流式细胞术CD45/SSC设门技术检测儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型,可准确将幼稚细胞从正常细胞群中分离出来并专门对异常细胞群进行免疫表型分析,将淋巴细胞白血病分为B型和T型白血病及双标记,并能反映髓系抗原阳性的ALL(M y+ALL),对指导临床治疗有重要价值。     

5例儿童急性巨核细胞白血病的实验室检测

目的分析急性巨核细胞白血病(AMKL)患儿的诊断过程,探讨儿童AMKL的实验室诊断方法。方法骨髓细胞形态学依据急性白血病FAB标准诊断分型;应用流式细胞术单克隆抗体直接标记检测白血病细胞表面相关抗原表达;透射电子显微镜(电镜)检测分析AMKL患儿巨核细胞血小板过氧化物酶(PPO)阳性反应;24 h培养法G显带技术显带并分析染色体核型;荧光RT-PCR(FQ-RT-PCR)方法筛选白血病42种融合基因。结果所有5例AMKL患儿的骨髓原始巨核细胞异常增生比例≥30%;糖原(PAS)、NAE反应阳性;免疫分型均表达CD41a、CD42b和CD61;1例患儿骨髓巨核细胞以Ⅰ期原始巨核细胞为主,PPO染色呈阳性反应;1例患儿+21染色体核型异常,1例患儿MLL-AF9融合基因阳性。结论需依靠骨髓细胞形态学、细胞化学染色、流式细胞术白血病免疫分型检测、电镜检查、染色体核型分析和分子生物学综合分析确定儿童AMKL的诊断,以利于该病的治疗与预后。     

102例急性白血病流式细胞仪免疫分型结果分析

为了探讨急性白血病的免疫表型特征与诊断价值,各系相关抗体的敏感性和特异性,利用流式细胞仪进行三色免疫荧光标记技术检测白血病患者,根据抗体体积分系统进行分型.结果显示,三染色标记检测急性白血病患者中,急性淋巴细胞白血病（ALL）患者除均表达淋系抗原外,同时伴髓系抗原（CD13、CD33）的表达,其中cCD79a敏感性和特异性均较高.急性髓细胞性白血病（AML）患者除表达髓系抗原外,同时伴淋系抗原（CD19、CD7）表达,其MPO、CD117中特异性较高.结论：流式细胞仪三色免疫荧光直接标记法进行白血病免疫分型能够确诊一些特殊类型的白血病,对于急性白血病的诊断治疗和预后判断均有帮助.     

113例急性髓细胞白血病细胞形态学及免疫表型分析

目的:探讨细胞形态学(包括细胞化学)、免疫表型及二者联合分析对初诊急性髓细胞白血病(Acute myeloid leukemia,AML)的诊断价值,以指导流式细胞术对AML的诊断工作,提高诊断分型准确率.方法:回顾性分析已确诊的113例AML患者的细胞形态学与免疫表型结果.免疫表型采用流式细胞术,用23种荧光标记单克隆抗体(McAb)测定白血病细胞的抗原表达.结果:①形态学分型与最终诊断符合率为79.4%,免疫表型分型与最终诊断符合率为85.3%,二者联合分析与最终诊断符合率为96.5%.②髓系抗原CD117、CD13、CD33可在各型中高表达,无特异性;eMPO可在除M0的各型中高表达;CD14、CD64在M4、M5中高表达;CD34及HLADR在M,中低表达;各型AML均可见淋系抗原表达,主要是CD4、CD7、CD9、CD10、CD19、CD56.结论:AML患者细胞抗原表达复杂,异质性强,多个抗原综合分析及SSC/CD45散点图上的细胞分布特征,有助于判断白血病细胞的来源、种类与阶段;流式细胞仪对白血病细胞的计数受多种因素影响,其百分比例不如形态学准确;联合应用细胞形态学与免疫表型分析,可以相互弥补,大大提高诊断与分型的准确率.     

三色流式细胞术对儿童急性白血病免疫表型的分析

目的 探讨三色荧光标记流式细胞术CD45辅助设门检测儿童急性白血病免疫表型的临床应用及意义.方法 采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测34例FAB分型为ALL与AML的儿童骨髓或外周血免疫表型.结果 25例ALL儿童中,B型淋巴细胞白血病14例,T型淋巴细胞白血病6例,双标记5例,在T-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD7＞CD3＞CD5,在B-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD19＞CD10＞CD22＞CD20,在T-ALL、B-ALL及双标记中还可同时表达髓系抗原（CD13、CD14、CD15、CD33）.9例AML儿童中,同时或分别表达髓系标志抗原CD15、CD33、CD13、CD14,其阳性表达率为89%、89%、79%、11%,9例中有3例还不同程度表达淋系抗原CD3、CD7、CD19.结论 三色流式细胞术,可准确将白血病分为淋系与髓系白血病,并能将淋系白血病分为B型和T型及双标记,同时能反映髓系抗原阳性的ALL（My＋ALL）与淋系抗原阳性的AML（AL＋AML）,对指导临床治疗有重要价值.     

急性淋巴细胞白血病免疫表型的特点及抗体表达水平分析

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫表型特征、各种抗体的表达水平与诊断价值,为微小残留病(MRD)检测提供依据。方法采用CD45设门三色流式细胞术检测白血病患者骨髓标本,根据抗体积分系统进行分型。结果三染色标记法检测24例B细胞系列急性淋巴细胞白血病(B-ALL)高水平表达(>50%SSC/CD45原始细胞门细胞)抗原依次为CD19、CD10、cyCD79a、CD34、HLA-DR、CD13、CD33;7例T细胞系列急性淋巴细胞白血病(T-ALL)高水平表达抗原分别为CD7和cyCD3;CD10、CD34、HLA-DR等非系列相关性早期分化抗原在B-ALL均有较高的表达频率,呈高水平表达;在T-ALL表达频率很低,2例CD10阳性,呈高水平表达,CD34无阳性表达;31例ALL中,除均表达淋系抗原外,同时有58.06%(18/31例)伴髓系抗原(CD13,CD33)的表达,B-ALL为72.50%,T-ALL跨系表达为42.86%。结论T-ALL、B-ALL具有不同的免疫表型特征;各种抗体的表达水平为微小残留病检测提供了依据。     

36例急性白血病免疫分型特点与临床意义

目的:探讨急性白血病(AL)三色流式细胞术免疫分型的特点及临床意义.方法:采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析.结果:25例急性髓细胞性白血病(AML)主要表达CD13(96.00%)、CD33(92.00%)、MPO(80%)、CD34(68.00%)、HLADR(72.00%).20%的AML患者伴有淋系抗原表达变异型(Ly AML),最常见为CD7.B细胞急性淋巴细胞性白血病(ALL)4例(36.36%),主要表达CD19(100.00%)、HLA-DR(100.00%)、CD22(75.00%)、CD10(50.00%)、CD34(50.00%);T细胞急性淋巴细胞性白血病(ALL)7例(63.64%),主要表达CD7(100.00%)、CD2(71.43%).结论:流式细胞仪三色荧光标记法进行AL免疫分型,对白血病的准确诊断和分型,治疗方案的选择具有重要意义.     

CD80-IgG融合蛋白的表达、纯化与鉴定

目的构建CD80-IgG融合基因表达载体，表达并纯化该融合蛋白，初步探讨其增强抗肿瘤免疫的作用。方法将小鼠CD80分子胞外段和IgG Fc段cDNA串联起来，定向克隆入质粒pcDNA3．0中，使其在哺乳动物细胞中表达。采用免疫亲和层析法纯化，免疫印迹和斑点ELISA鉴定表达的融合蛋白，流式细胞术、MTT法检测其增强白血病细胞CD80分子表达及促进T细胞增殖的功能。结果DNA测序证明两段基因正确插入质粒载体；亲和层析纯化得到浓度为0．1mg／ml，纯度为95％的蛋白质溶液；免疫印迹、ELISA表明该蛋白质即为CD80-IgG融合蛋白；流式细胞术证明其能够提高白血病细胞表面CD80分子的表达。结论成功构建融合基因表达载体，表达并纯化出融合蛋白，该蛋白可增强CD80分子的表达。     

EGFP基因在前列腺癌PC-3M细胞系中的转染与表达

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)在前列腺癌 PC- 3M细胞中表达及对其细胞周期的影响。方法 :制备含绿色荧光蛋白基因的重组 DNA,用阳离子脂质体 Lipofectin Regant转染培养的 PC-3M细胞 ,在倒置荧光显微镜下观察 GFP的表达情况 ,同时经流式细胞仪测定阳性克隆的细胞周期。结果 :转染后有 1 0 %～ 1 5%细胞表达绿色荧光蛋白 ,且阳性克隆细胞与亲本细胞的细胞周期无明显改变。结论 :GFP是研究活细胞生命现象的一种新途径     

急性白血病的抗原表达及其临床意义

目的：探讨成人急性白血病（AL）的抗原表达及其临床意义。方法：采用直接免疫荧光法标记，流式细胞仪检测分析69例AL的免疫表型，结果：（1）29例成人急性淋巴细胞白血病（ALL）髓系抗原阳性表达率为30％，其中CD13为20．7％，CD33为10．3％，T－ALL和B－AL 系抗表达无显著性差异（P＝0．367）；CD34表达阳性的ALL髓系抗原表达率明显高于CD34表达阴性的ALL髓系抗原表达率（77．8％vs13.3%,P=0.036);ALL髓系抗原阳性表达的CR率明显低于髓系抗原阴性表达的CR率（33．3%vs80%,P=0.0203);(2)40例急性髓性白血病（AML）淋系抗原表达率为30％，其中CD7为15％，CD19为12．5％，CD2为2．5％，CD7主要分布在M1，M2亚型中，CD34阳性AML的淋系抗原表达率明显高于CD34阴性AML的淋系抗原表达率（61．1％vs4.5%,P=0.000125);AML淋系抗原阳性表达的CR率低于淋系抗原阴性表达的CR率，但差异无显著性（50％vs 71.4%,P=0.126)，结论：成人AL的抗原错译表达率约为30％，CD34阳性AL的抗原错译表达率明显高于CD34阴性AL的抗原错译表达率，有抗原错译表达的AL的CR率低于无抗原错译表达的AL和CR率。     

成人急性白血病细胞三色流式细胞术的免疫分型

目的:探讨成人急性白血病(AL)细胞三色流式细胞术免疫分型的特点.方法:采用CD45/SSC双参数散点图设门方法、三色流式细胞术对197例急性白血病细胞进行免疫表型分析.结果:急性淋系白血病细胞均表达淋系抗原,46.7%和11.1%的成人ALL细胞表达CD13和CD33;急性髓系白血病细胞均表达髓系抗原,M3中只有1例表达CD34,HLA-DR均无表达;同时AML中有12例表达淋系抗原CD7,21例表达CD10;197例急性白血病中有11例(占5.6%)为杂舍型急性白血病(HAL),其中有6例B/M型.结论:CD45/SSC设门方法能排除骨髓中正常细胞的干扰,免疫表型的检测和研究对急性白血病的分型和明确诊断有帮助.     

急性淋巴细胞性白血病跨系表达方式研究

目的 利用三色流式细胞术对急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型跨系表达进行研究。方法 采用CD45／SSC双参数散点图设门方法对135例ALL（111例B-ALL，24例T-ALL）患者幼稚细胞表面及胞质内分化抗原进行分析。结果 在ALL中，髓系抗原（M）表达64％，T和B亚型中髓系抗原表达差异无显著性意义（P〉0．05），其中CD13表达最为常见（40％），其次是CD33（37％）、CD11b（20％）和CD15（16％），CD13和CD33在CD34^＋病例中的表达均高于CD34^-病例。B-ALL中，T系抗原CD4、CD2和CD7分别在19例、2例和2例中表达，CD4^＋和CD7^＋病例通常共表达CD13和（或）CD33；T-ALL中2例CD19表达者均伴CD13／CD33表达。结论 ALL伴髓系表达的频率较高（B^＋M^＋，T^＋M^＋），偶尔出现B系，T系和髓系共表达的表型（B^＋T^＋M^＋），B系T系共表达但不伴髓系表达的表型（B^＋T^＋M^-）极少，跨系表达多存在各未成熟的阶段，髓系抗原表达与干细胞表面标志CD34有一定的联系。     

细胞周期蛋白A在成人急性白血病中的表达及意义

目的　探讨细胞周期蛋白A(cyclinA)在成人急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法　采用RT PCR法对 10 0例初治及复发的AL患者进行cyclinAmRNA水平的检测 ,对其阳性表达的PCR扩增产物进行DNA测序分析。对其中 75例AL患者 ,用流式细胞术检测cyclinA蛋白表达水平 ,10例正常人作为对照。 结果　 (1)AL患者cyclinA蛋白表达在细胞周期中的分布无异常 ,cyclinA蛋白及mRNA的阳性率 (分别为 6 6 7% ,5 9 0 % )和中位表达水平 (分别为18 5 % ,0 5 39± 0 4 90 )明显高于正常人 ,同一实验条件下未发现在正常人中有cyclinA蛋白及mRNA阳性表达 (P <0 0 1) ;经测序分析发现cyclinA阳性扩增片段序列与基因库中的目标序列完全一致 ;(2 )cyclinA蛋白及mRNA水平与S期、G2 /M期细胞所占的比例呈正相关 (P <0 0 1)。 (3)复发组急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的cyclinA蛋白表达水平 (15 4 % )明显低于初治组(2 9 5 % ) ,差异有统计学意义 (t=14 4 18,P =0 0 2 2 )。 (4 )cyclinA蛋白或mRNA高表达患者的完全缓解率 (分别为 87 9%、85 7% )明显高于低表达患者 (分别为 38 2 %、5 3 3% ) (P <0 0 5 )。结论　cyclinA在AL患者中是一种增殖标志 ,是影响AL患者完全缓解率的因素 ,其高表达可能是AL患者     

106例成人急性白血病流式细胞术免疫分型分析

OBJECTIVE: To study the immunophenotyping of adult patients with acute leukemia and its association with the prognosis. METHODS: Immunophenotyping was performed in 106 adult patients with acute leukemia by three-color flow cytometry analysis using CD34/SSC gating. RESULTS: The antigens expressed in 71 patients with acute myeloid leukemia (AML) were mainly CD13, CD33, HLA-DR, CD34 and CD117. Lymphoid antigen expression was identified in 23.9% adult AML patients and CD56 antigen expression in 15.5% of the AML patients. In 29 patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL), the expressed antigens were mainly HLA-DR, CD10, CD19, CD34 and CD7, and 34.5% of these patients were found to be positive for myeloid antigen expression. Complete remission (CR) rate in AML patients with lymphoid antigen expression after chemotherapy was lower than that in AML patients without lymphoid antigen expression (52.9% vs 77.8%, P<0.05), and no significant impact was noted of myeloid antigen expression in ALL on the CR of the patients (70.0% vs 94.7%, P>0.05). The CR rate in AML with CD56 antigen expression was lower than that in AML without CD56 expression (36.4% vs 78.3%, P<0.025), and the CR rate in CD34+ AML was lower than that in CD34- AML (56.0% vs 80.4%, P<0.05). CONCLUSIONS: Gating of CD45/SSC can eliminate the interference of normal cells to render more reliable immunophenotyping results. The expressions of CD56+, CD34+, lymphoid antigen in adult AML patients, who have lower CR rate, often signify poor prognosis.     

Effects of Serum from Aplastic Anemia patients on the Expression of Cyclin D3 Isoform in Umbilical Cord Blood CD34~ Cells

Aplasticanemia (AA )isabonemarrowfailuresyndrome .Recentstudiesindicatethatimmune me diatedsuppressionofhematopoiesisplaysanimpor tantroleinmostcasesofAA ,namely ,abnormallyactivatedTcellsand/orsomesolublecytokinesinhibitproliferationofhematopoieticstem/p…     

CD7在成人急性髓系白血病的表达及其在微小残留病检测中的应用

目的观察CD7在成人急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)中的表达情况,并探讨CD7在AML微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)检测中的意义。方法用四色流式细胞术(FCM)分析112例初发的成人AML患者的免疫表型,观察CD7在AML患者骨髓细胞上的表达情况,并将CD7抗体与其他多种髓系抗体(如CD13、CD33、CD117等)构成三色或四色组合,用于CD7+AML患者MRD的检测。结果112例AML患者中共检测到34例CD7阳性病例,其FAB(French-American-British)亚型分别为:M11例,M226例,M32例,M4/M55例。所有这些患者的白血病细胞胞质均CD3及CD79a阴性。CD7+组与CD7-组间未见明显的年龄及性别差异。CD7与CD34的阳性表达呈显著相关(P=0.002),91.2%的CD7+AML同时伴有CD34的表达。在CD7+AML的MRD检测中,CD7与其他髓系抗原组合能够在双参数散点图上很好地区分白血病细胞与正常细胞。结论在成人AML中,不同的FAB亚型均可有CD7+病例,其总的阳性率约为30.4%,CD7表达与CD34的表达呈明显的相关性,提示CD7+AML可能起源于一个较早的恶性克隆,CD7抗原阳性也是AML-MRD检测的一个很好指标,为AML-MRD检测率低提供一定的弥补作用。     

P-gp在急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的探讨P-糖蛋白（P-gp）在急性淋巴细胞白血病的表达，评估P-gp与急性淋巴细胞白血病预后的关系。方法用流式细胞仪，采用直接免疫荧光法，检测40例急性淋巴细胞白血病患者抗P-gp单克隆抗体UIC2及CD3、CD5、CD7、CD10、CD19、CD13、CD14、CD33、CD34的表达，被检患者外周血或骨髓中幼稚细胞数≥50％，并设非耐药细胞系K562为阴性对照。结果40例ALL患者中16例P-gp表达阳性，P-gp阳性表达率为40％。髓系抗原表达阳性者P-gp阳性率为33．3％，髓系抗原表达阴性者P-gp阳性率为45．5％，P〉0．05。4例急性T淋巴细胞白血病CD7表达阳性，且P-gp表达皆阳性。P-gp阳性组16例患者中10例治疗有效，P-gp阴性组24例中20例治疗有效，P-gp表达阳性者中3例6个月内复发。结论急性淋巴细胞白血病P-gp阳性表达率为40％；P-gp表达与髓系抗原表达无相关性，与CD7表达有关；P-gp表达阳性与急性淋巴细胞白血病化疗效果有相关性，P-gp表达阳性者易早期复发。     

加味青蒿鳖甲汤对急性白血病患者骨髓细胞CD抗原的影响

观察加味青蒿鳖甲汤对急性髓系白血病缓解期患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达的影响.方法：将25例急性髓系白血病缓解期患者随机分为治疗组和对照组.两组均按常规化疗方案（DA或MA或HA方案）巩固维持治疗,治疗组加服加味青蒿鳖甲汤煎剂.观察治疗前后患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达率.结果：治疗组骨髓细胞CD34表达率及CD13/CD33表达率有所下降.结论：加味青蒿鳖甲汤对急性髓系白血病缓解期患者骨髓细胞CD34、CD13/CD33表达有抑制作用.     

CD117在白血病细胞中的表达及意义

目的 :探讨细胞分化抗原CD117在各型白血病中的表达情况及意义。方法 :采用三色流式细胞术 ,CD45 /SSC双参数散点图设门方法 ,对 15 9例白血病患者骨髓或外周血白血病细胞免疫分型及CD117表达进行分析。结果 :急性髓系白血病患者表达率为 5 4% ,各型急性白血病M0 /M1 ( 75 % )、M4 /M5( 62 % )、M6 ( 10 0 % )、在M3中CD117表达较低为 14 %。慢性髓细胞白血病慢性期CD117为表现性 ,加速期、急变期患者CD117阳性细胞 >10 % ,急淋、慢淋CD117均为阴性 ,在双表型白血病中CD117亦达 5 0 %。结论 :CD117有助于淋巴系和髓系白血病的鉴别 ,同时在AML中CD117的表达与CD3 4呈正相关性