超声联合微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响

目的研究高机械指数诊断超声爆破微泡造影剂对大鼠肾脏微血管通透性的影响。方法实验中以伊文氏蓝(Evans blue,EB)为示踪剂检测超声爆破微泡对正常大鼠肾脏组织微血管通透性的影响。15只健康Sprague Daw-ley大鼠,雌雄不限,随机分为A、B、C三组,每组5只,A组为单纯注射EB组;B组为注射EB后接受超声辐照组;C组为注射EB和微泡后再接受超声辐照组。使用西门子S2000超声诊断仪,4P1探头,辐照方式为连续辐照。三组采用相同的频率(2MHz)、机械指数(1.4)、微泡剂量0.5ml/kg,超声辐照时间1min。15只大鼠均在EB注射30min后灌注、取材,使用Image-Pro Plus 6.0软件测量肾脏表面EB渗出面积百分比;使用激光共聚焦显微镜观察肾脏微血管周围EB外溢情况并进行视觉评分;使用标准曲线和分光光度法测量各组大鼠肾脏组织中EB含量,作为反映血管通透性的指标。结果 A组肾脏表面无EB渗出,B组肾脏表面有微量EB渗出,面积百分比为(0.089±0.013)%,C组肾脏表面有部分EB渗出,渗出面积(17.596±0.243)%明显高于A组和B组(P<0.05);C组激光共聚焦显微镜下可见肾脏微血管周围EB外溢,视觉评分等级为2级,显著高于A组(0级)及B组(0～1级);C组肾脏组织中EB含量为(28.11±0.97)μg/g,比A组(11.48±1.05)μg/g和B组(13.18±1.28)μg/g明显增加(P<0.05)。结论高机械指数超声联合微泡造影剂可使肾脏微血管通透性增加。     

超声造影对心肌毛细血管通透性的影响

目的研究高机械指数、高剂量微泡造影剂条件下超声造影对心肌毛细血管通透性的影响并观察其恢复正常的时间。方法将30只Wistar雄性大鼠随机分为5组。A～D组采用相同的超声造影条件,但各组伊文思蓝(EB)注射时间不同:分别为超声造影前10s、造影结束即刻、造影结束后5min、造影结束后20min给予EB;E组为对照组(假造影组),即5min超声照射结束后即刻再注射造影剂微泡及EB。所有动物均在EB注射后5min处死。测定心脏EB渗出面积百分比及单位心肌内EB含量。结果A、B、C组EB渗出面积明显高于对照组(P<0.05),D组渗出面积与对照组无差异(P>0.05);A、B组心肌EB含量明显高于对照组(P<0.05),C及D组心肌EB含量与对照组无差异(P>0.05)。各组造影前后心率及心律失常数目无差异(P>0.05)。结论高机械指数超声联合高剂量微泡造影剂可使心肌毛细血管通透性增加,其恢复时间在超声造影结束后20min内。     

微泡空化效应对大鼠骨骼肌微循环的影响

目的观察治疗剂量超声介导的微泡造影剂破坏产生的空化效应对大鼠骨骼肌微循环的影响。方法将30只SD大鼠随机均分为对照组、微泡组、超声组(超声能量为1.5W·cm-2)、高能量超声加微泡组(超声能量为1.5W·cm-2)及低能量超声加微泡组(超声能量为0.75W·cm-2),每组6只,按Gray法制备大鼠脊斜肌活体微循环观察标本,分别在处理前、处理后不同时间测量平均动脉压,用红细胞跟踪相关仪和电视测微仪测量微动静脉口径和血流流速,并用电镜观察大鼠脊斜肌组织结构的变化。结果微泡空化效应对大鼠平均动脉血压和微血管口径无显著变化(P>0.05);微血管血流速度减慢,血流量降低(P<0.05)。微循环血流速度和血流量下降和恢复的程度与超声能量有关,低能量组静脉血流速度及血流量15min左右可明显恢复,动脉血流速度及血流量1h左右可明显恢复,而高能量组2h微动静脉血流速度及血流量均未完全恢复。微泡空化效应能使毛细血管内皮细胞破裂,内皮间隙增宽,红细胞溢出于毛细血管外;2h后未发现内皮破口。结论微泡空化效应对局部微循环及微血管产生损伤跟超声的能量有关,能量越小产生损伤越轻,局部微循环修复的速度越快。     

超声微泡联合EPO对于急性心肌梗死后大鼠心肌保护作用的研究

目的 观察超声微泡联合促红细胞生成素(EPO)对大鼠急性心肌梗死后的心肌保护作用.方法 采用结扎冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型.将40只成功制作模型的大鼠随机分为超声+微泡造影剂+ EPO组(A组)、超声+微泡造影剂组(B组)、单纯EPO组(C组)、单纯手术组(D组).术后7 d各组随机选取5只大鼠,尾静脉抽血.采用ELISA法检测TNF-α、IL-6的含量.术后28 d心肌组织Ⅷ 因子免疫组织化学染色并在显微镜下计数心肌内新生血管和凋亡蛋白Bcl-2、Bax免疫组化染色.采用ELISA检测心肌组织内VEGF蛋白表达情况.结果 与其他各组比较,A组 TNF-α、IL-6表达降低,新生毛细血管数量最多,为43±4.7条/每高倍视野, Bcl-2表达上调,Bax表达显著下调, VEGF含量为(6.34±2.14)ng/g,差异有统计学意义(P<0.05).结论 超声微泡联合EPO能增强EPO促进毛细血管形成、抑制梗死周围区炎症反应及减少心肌细胞凋亡,从而达到改善急性心肌梗死后心脏功能的作用.     

高频诊断超声联合微泡对肝血管通透性影响的实验研究

目的探讨高频诊断级超声联合微泡对肝血管通透性的影响。方法选择机械指数(mechanical index,MI)为1.2的高频诊断超声,并经实验大鼠尾静脉注射0.2ml/kg微泡造影剂,超声辐照大鼠肝脏时间分为1、3、5、7min。用伊文氏蓝(Evens Blue,EB)观察超声辐照后肝血管通透性的改变,透射电镜观察肝血管内皮细胞及肝细胞结构改变。结果高频诊断超声联合微泡辐照肝脏后,肝组织EB含量与对照组相比差异有统计学意义,透射电镜证实肝血管内皮细胞肿胀,连接中断明显。结论高频诊断超声联合微泡辐照肝脏时可增加肝脏血管通透性。     

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染血管平滑肌细胞

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的可行性.方法 实验分为A、B、C、D、E5组,分别为空白对照组、单纯质粒浸泡组、质粒+微泡造影剂组、质粒+超声辐照组、质粒+超声辐照+造影剂组.用重组真核表达载体pcDNA3.1- eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导转染体外培养的大鼠VSMCs,辐照条件为超声探头频率为10 MHz,机械指数为1.9,辐照时间为10 min,重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-eNOS 5μg/mL.辐照48 h后,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化检测VSMCs内eNOSmRNA和蛋白的表达.结果 RT -PCR检测E组eNOS mRNA的表达最显著,积分吸光度(IA)比值为(91.11±3.41)％,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(26.10±1.32)％、(31.42±2.43)％、(35.05±2.25)％,与E组相比均P＜0.05.蛋白印迹分析eNOS蛋白表达,A组有极少量表达,B、C、D组也有少量表达,IA比值分别为(22.12±1.33)％、(25.42±2.41)％、(33.11±3.11)％,而E组表达最明显,IA比值为(84.22±9.22)％,与各组相比均P＜0.05.结论 超声辐照结合微泡造影剂能显著提高eNOS基因在VSMCs的转染效率,提高细胞内一氧化氮合成酶的表达.     

超声破坏微泡介导骨髓间充质干细胞移植的实验研究

目的 初步探讨超声破坏微泡介导骨髓间充质干细胞(MSCs)移植的可行性.方法 21只Wister大鼠分为3组:干细胞静脉移植组(MSCs-iv)、超声+干细胞组(US+MSCs-iv)、超声+微泡+干细胞组(US+MB+MSCs-iv).各组分别取1只大鼠的骨骼肌行HE染色观察显微结构.移植后7 d取各组剩余大鼠下肢股薄肌、半膜肌行免疫组化检测,观察MSCs移植数量;另外US+MB+MSCs-iv组同时取重要脏器行免疫组化检测,评估靶向性.结果 US+MB+MSCs-iv组大鼠股薄肌、半膜肌染色可见红细胞外溢到组织间隙,同时免疫组化结果显示股薄肌、半膜肌及脾脏可见较多移植的MSCs.而其他组骨骼肌未观察到阳性细胞.结论 超声靶向破坏微泡有可能成为提高干细胞移植效率的新方法.     

靶向超声介导VEGF165基因治疗左向右分流肺动脉高压兔模型的实验性研究

目的探讨靶向超声介导VEGF165基因治疗左向右分流兔模型肺动脉高压的可行性.方法将30只肺动脉高压兔随机分为实验1组、实验2组和对照组各10只,实验1组采用超声破坏微泡造影剂的方法将VEGF165基因转染兔,实验2组静脉输入同等量携带VEGF165基因的造影剂,对照组静脉输入同等量单纯造影剂,14 d后处死.处死后免疫组织化学检测肺组织中的VEGF蛋白表达及毛细血管记数.结果实验1组中可见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒,而实验2组、照组肺组织中仅有极少量的VEGF阳性反应的颗粒,其差异具有明显统计学意义(P<0.05).实验1组平均毛细血管密度(MDV)为(387.35±12.80)个/高倍视野,组间比较有显著差异.实验1组(WT%)、(WA%)比对照组和实验2组明显减小,其差异有统计学意义(P<0.05).结论超声介导微泡造影剂携带VEGF165基因能提高基因转染率,促进肺内毛细血管再生.     

微泡造影剂结合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染大鼠移植静脉的实验研究

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导基因转染移植静脉桥的可行性.方法 建立SD大鼠颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,选择增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)为报告基因.将大鼠颈外静脉段浸泡入粘附质粒的微泡中,予超声照射,再将静脉段间置植入颈总动脉,7 d后,取出静脉段行快速冰冻切片,荧光显微镜下观察血管平滑肌内荧光表达,同时进行苏木精-伊红染色行病理观察.结果 微泡造影剂结合超声辐照组的荧光强度显著高于质粒浸泡+超声辐照组、质粒+微泡造影剂组及单纯质粒浸泡组(P<0.05).苏木精-伊红染色观察血管组织并无坏死灶出现.结论 微泡造影剂结合超声辐照可以实现基因靶向转染至大鼠移植静脉桥的血管平滑肌中.     

大鼠原位离体肺灌流模型在肺毛细血管通透性研究中的应用

目的 在传统大鼠离体肺灌流模型基础上,建立改良的原位离体肺灌流模型,以研究评价肺毛细血管通透性.方法 建立并利用大鼠原位离体肺灌流模型及内毒素诱导的肺损伤模型,测定伊文思蓝(EB)标记蛋白分子的血管外漏出量,计算肺白蛋白通透性表面积乘积(PS),定量评价肺毛细血管通透性.结果 测定大鼠原位离体肺灌流的正常组、内毒素致肺损伤组中肺组织的PS值分别为5.37±0.94、25.00±8.8×10-2cm3/(min.g),二者间比较有统计学意义(P<0.05).结论 该评价肺微小血管通透性的模型操作简单,定位准确,是一种可行的改良方法.     

The protective effects of baicalin on pertussis bacilli-induced brain edema in rats

OBJECTIVE: To evaluate the inhibitory effect of baicalin on iron-dependent lipid peroxidation (IDLPO) and the protective effect on pertussis bacilli-induced brain edema in rats. METHODS: In vitro, the inhibitory effect of baicalin and deferoxamine (DFX) was studied at different concentrations on IDLPO in brain homogenates of Sprague-Dawley rats. In vivo, the protective effect was studied of baicalin and DFX on brain edema induced by injecting purtussis bacilli into the left internal carotid artery in rats. Forty Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups. Group 1 (NS, n = 10), as control; Group 2 (PB, n = 10), pertussis bacilli control; Group 3 (DFX, n = 10), PB + deferoxamine; and Group 4 (BAI, n = 10), PB + baicalin. RESULTS: The baicalin was possessed of an inhibitory effect on IDLPO in rat brain homogenate, moreover, the inhibitory potency of baicalin was approximately 20 times higher than DFX treated alone. In vivo, the increase in the content of water(CW) and Evans blue (EB) was attenuated in groups DFX and BAI (CW: 79.8 +/- 0.7)% and (79.5 +/- 0.6)%; (EB: 11 +/- 7 micrograms/g and 12 +/- 5 micrograms/g) as compared with the group PB (CW: 80.4 +/- 0.9%, EB: 24 +/- 10 micrograms/g). The content of iron was significantly lower than in the left hemispheres (injected side) in the group DFX and the group BAI (79 +/- 9 micrograms/g and 77 +/- 10 micrograms/g) than in the left hemispheres in the group PB(132 +/- 28 micrograms.d-1.g), P < 0.05. The activation of CuZn-SOD (L155 +/- 36 U/mg pr, R177 +/- 75 U/mg pr) was decreased in the group BP compared with the group NS(L 201 +/- 49 U/mg pr, R 249 +/- 49 U/mg pr), P < 0.05. The activation of CuZn-SOD was significantly higher in the left brain tissues in the groups DFX and BAI (222 +/- 49 U/mg pr and 230 +/- 45 U/mg pr, respectively) than in the left brain tissues of the group of PB (P < 0.05). CONCLUSION: The baicalin and DFX have a protective effects on the pertussis bacilli-induced brain edema in rats, and the protective effects are related to the inhibitory effect on IDLPO, chelating Fe2+, and activated CuZn-SOD.     

灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障通透性的影响

目的：通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）的活性及脑组织中伊文思蓝的含量，探讨灯盏花素对脑缺血再灌注小鼠明胶酶及血脑屏障（BBB）通透性的影响。方法：复制脑缺血再灌注模型，并于术前15min腹腔注射灯盏花素注射液10mg／kg，采用明胶酶谱分析法检测脑组织海马区明胶酶的活性，同时经尾静脉注射2％伊文思蓝，检测脑组织伊文思蓝含量。结果：脑缺血再灌注后明胶酶（A、B）活性增加；灯盏花素组MMP-9活性明显低于脑缺血再灌注组，而灯盏花素对MMP-2作用不显著。脑缺血再灌注后4h起脑组织伊文思蓝渗出逐渐增多，48h达高峰，以后有下降趋势。灯盏花素组于术后伊文思蓝渗出明显低于相应时间的脑缺血再灌注组（P〈0．05）。结论：灯盏花素具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B的活性、降低血脑屏障通透性的作用。     

两种不同开放血脑屏障方法的比较

目的 比较超声波诱导微泡破坏和甘露醇渗透性开放两种方法对大鼠血脑屏障通透性的影响.方法 大鼠分为2个实验组和1个对照组,1个实验组大鼠经股静脉注入微泡造影剂后,采用频率43 kHz、声强1.2 W/cm2的超声波经大鼠颅骨照射3 min;另1个实验组大鼠经颈内动脉注入20%甘露醇.干湿重法测定脑水含量,荧光显微镜观察伊文思蓝的渗出.结果 两种方法都可以可逆开放血脑屏障,利用超声波诱导微泡破坏法开放血脑屏障较甘露醇渗透性开放法局限且持久.结论 超声波诱导微泡造影剂破坏是一种无创和具靶向性开放血脑屏障的新方法.     

区域性灌注化疗时5-FU的血液和肝脏组织药物浓度分布特征

目的 研究经肝动脉和门静脉等不同途径区域灌注化疗时5-FU在大鼠血液和肝脏组织中的浓度分布和消除过程,为临床肝脏肿瘤化疗提供参考.方法 经颈静脉注射5-FU或分别经肝动脉及门静脉插管区域灌注,剂量为20 mg/kg体重.采用高效液相色谱法测定血浆及肝脏组织中5-FU的含量.进一步计算5-FU在肝脏和血浆中的药动学数据和穿透比率及治疗优势度.结果 外周静脉注射时,肝脏组织的药物峰浓度(Cmax)和药物时量曲线下面积(AUC)分别为13.79±4.56μg/g,342.20±108.20μg·min/g;血浆Cmax和AUC分别为36.85±5.96μg/ml,842.00?58.00μg·min/ml.肝动脉灌注5-FU时,肝脏组织药物Cmax和AUC分别为29.58±4.30μg/g,794.60±15.40 μg·min/g;血浆Cmax和AUC分别为24.39±4.63μg/ml,639.70?33.80μg·min/ml.门静脉灌注时,肝脏组织药物Cmax和AUC分别为2821±4.06μg/g,733.60±18.3μg·min/g;血浆Cmax和AUC分别为21.02±406μg/ml,529.80±111.50μg·min/ml.结论 与外周静脉注射全身化疗比较,区域性肝动脉或门静脉灌注化疗可显著提高肝脏组织中的药物浓度,同时减少化疗药物在外周血中的分布,可作为临床肝癌化疗的较好治疗措施.     

脑摄取平衡时异丙酚在犬脑不同区域的分布

目的 研究脑摄取达到平衡状态时异丙酚在犬脑组织的摄取和分布.方法 6只犬各以异丙酚7 mg/kg静脉注射,续以70 mg/kg·h恒速静脉泵注.泵注30 min(T30)、50 min(T50)时分别取颈内动脉和颈内静脉血.T50时处死实验犬,解剖取额叶、顶叶、颞叶、海马、扣带回、丘脑、中脑、桥脑、小脑组织.采用高效液相色谱技术测量异丙酚血浆浓度和脑组织浓度.结果 颈内动脉、静脉血浆异丙酚浓度(μg/ml)在T30时分别为3.107±1.067和3.095±1.085(t=0.671,P=0.532);T50时分别为3.091±1.101和3.117±1.091(t=1.890,P=0.117).T50时,额叶、顶叶、颞叶、海马、扣带回、丘脑、中脑、桥脑、小脑异丙酚浓度(μg/g)分别为3.085±1.123、3.116±1.125、3.073±1.159、3.117±1.090、3.075±1.178、3.073±1.146、3.075±1.151、3.102±1.174、3.072±1.192,各脑组织异丙酚浓度差异无统计学意义(F=0.127,P=0.998).结论 本实验条件下,犬脑对异丙酚的摄取在T50时处于平衡状态;摄取平衡时异丙酚在犬脑组织呈均衡分布.     

超声微泡介导肝细胞生长因子促进大鼠梗死心肌血管新生

目的探讨超声靶向破坏微泡介导肝细胞生长因子(HGF)促进大鼠梗死心肌血管新生的可行性。方法将40只Wistar大鼠制备成心肌梗死模型后随机分为4组:(1)HGF 超声 微泡组(HGF US/MB);(2)HGF 超声组(HGF US);(3)HGF 微泡组(HGF MB);(4)单纯手术组(SA)。于基因转染后14d处死各组大鼠,采用免疫组织化学法(IHC)检测缺血心肌周围CD34表达,并在显微镜下计数心肌内新生微血管密度(MVD)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织内HGF蛋白表达情况,并对心肌内HGF含量与MVD进行相关性分析。结果IHC结果显示,CD34定位于血管内皮细胞胞膜和胞浆,显示为棕黄色或棕褐色颗粒,新生的微血管被染成棕黄色,显微镜下计数每高倍镜视野下的MVD,结果表明在HGF US/MB组心肌中MVD最高,为(266.9±39.8)个/高倍镜视野,与其他各组比较差异均有显著性(P<0.01)。ELISA结果显示HGF在HGF US/MB组心肌中表达最高,为(5.54±0.81)ng/g,且前壁表达高于后壁(P<0.05),与其他各组心肌HGF含量相比差异也均有显著性(P<0.01)。相关分析表明,心肌HGF含量与MVD呈明显正相关。结论超声靶向破坏微泡可介导HGF基因在缺血心肌内的高效转移并促进血管新生,为心肌梗死的基因治疗提供了一个新途径。     

颈总动脉输注异丙酚维持全身麻醉的临床观察

OBJECTIVE: To investigate the efficacy of continuous propofol infusion via the common carotid artery for general anesthesia. METHODS: Forty adult patients scheduled for abdominal surgery were randomly assigned into 2 groups to receive propopol via the common carotid artery (IC group, n=20) or via the median cubital vein (IV group, n=20). Anesthesia was induced with intravenous administration of drugs and maintained with continuous propofol infusion via the common carotid artery or the median cubital vein, with the CSI stabilized at 40-/+5 till the end of the operation. During the anesthesia, intravenous injection of fentanyl (3 microg.kg(-1).h(-1)) and vecuronium (50 microg.kg(-1).h(-1)) were given intermittently to maintain the analgesia and muscular relaxation. The dose of propofol used, hemodynamics and recovery of the patients were observed. RESULTS: The dose of propofol used during the surgery to maintain a CSI of 40-/+5 was significantly lower in group IC and than in group IV (2.57-/+0.67 vs 5.72-/+1.37 mg.kg(-1).h(-1), P<0.01). In group IC, the blood pressure was elevated in more than half of the patients and in some cases, the elevation exceeded one third of baseline value and needed intervention with hypotensive drugs. In the IV group, the patients' blood pressure remained stable and varied within the amplitude of 15% of the baseline level. Recovery of spontaneous breathing and consciousness was more quickly in group IC than in group IV (P<0.05). CONCLUSION: Loss of consciousness and nervous reflex can be achieved with propofol infusion via the common carotid artery, which reduces propofol dose by about 50% in comparison with intravenous infusion and allows more rapid recovery of spontaneous breath and consciousness.     

内毒素致豚鼠血迷路屏障通透性及其超微结构观察

目的研究内毒素(ETX)致豚鼠血迷路屏障的动态变化情况.方法采用听泡内注入内毒素,以伊文思蓝(Evans Blue,EB)为示踪剂,测量EB通过耳蜗血迷路屏障的渗出量,应用透射电镜观察耳蜗外侧壁形态学的变化.结果内毒素使耳蜗血迷路屏障EB渗出量随时间的变化而变化,12 h开始有EB渗出,24 h达高峰,与12、72 h比较,有显著性差异.生理盐水组超微结构无变化,内毒素组血管纹血管内皮细胞呈不同程度的损伤,细胞间的间隙增宽,有炎性细胞浸润.结论内毒素能使血迷路屏障通透性增加,其原因主要是由血管纹微血管内皮细胞连续性中断及细胞间的紧密连接开放所致.