四合一口服治疗呼吸道合胞病毒感染作用机理的实验研究

用呼吸道合胞病毒接种小鼠，复制出感染模型；再以中药灌胃。结果显示，感染ＲＳＶ后，小鼠血清免疫球蛋白显著升高，而脾细胞分泌白细胞介素－Ⅱ活性显著降低；四合一口服液对小鼠血清ＩｇＧ分泌无明显影响，而对脾细胞分泌ＩＬ－２有促进作用。     

金欣口服液不同化学部位对呼吸道合胞病毒感染的影响

目的 观察金欣口服液不同化学部位在体内的抗呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法 小鼠经滴鼻感染RSV建立肺炎模型,随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、金欣口服液组、金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液组及母液组,光镜下观察肺组织的炎症病变情况,计算小鼠肺指数和肺指数抑制率、脾指数、胸腺指数、死亡保护率。结果 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(P<0.01),减轻感染小鼠肺组织炎症病变,同时能增加脾指数和胸腺指数(P<0.01)。金欣口服液正丁醇提取液能降低RSV感染小鼠的死亡率。结论 金欣口服液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取液对RSV具有一定的抑制作用,并且能提高RSV感染小鼠的免疫功能。正丁醇提取液对RSV感染小鼠具有一定的死亡保护作用。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染的肺巨噬细胞及BALB/c小鼠IL-1β表达的调控作用

[目的]探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺巨噬细胞(Raw264.7)及BALB/c小鼠白介素-1β(IL-1β)表达的调控作用。[方法]体外实验:培养Raw264.7细胞,共分4组(n=6),分别是正常细胞组,RSV感染模型组,利巴韦林注射液组,金欣口服液组。进行含药血清干预,收集24h的上清以酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组IL-1β的含量;体内实验:分为A组(感染前高剂量及等效剂量给药)、B组(感染前感染后高剂量及等效剂量给药)、C组(感染后高剂量及等效剂量给药)三大组,观察金欣口服液不同剂量、不同给药时间对RSV感染BALB/c小鼠24h、72h、144h时IL-1β表达的调控作用。[结果]RSV感染Raw264.7细胞后24h上清中未检测到IL-1β的表达。其中RSV感染BALB/c小鼠24h后IL-1β的表达量显著增加,A组中金欣口服液高预防组和等效预防组均能下调其表达且以等效预防组的下调作用明显;RSV感染BALB/c小鼠72h后IL-1β的表达量也显著增加,但较RSV感染24h时的表达量稍有减少,B组中金欣高预防组和治疗组IL-1β的表达均下调;RSV感染BALB/c小鼠144h后IL-1β的表达量显著减少,而C组中的金欣治疗组均能上调其表达。[结论]金欣口服液预防和治疗组在RSV感染BALB/c小鼠早期能显著下调其表达,防止机体因过度免疫而致肺损伤,随着感染时间持续延长IL-1β的表达开始急剧下降,而金欣口服液又能将其恢复到合适的水平,以增强机体的免疫力。     

基于高分辨率质谱的金欣口服液治疗小鼠RSV感染的血清脂质组学研究

目的 基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS高分辨率质谱,观察RSV诱发的肺炎模型小鼠的血清中脂质代谢的变化,分析金欣口服液对RSV肺炎小鼠中脂质代谢紊乱的调节作用,探讨金欣口服液治疗RSV诱发的病毒性肺炎的潜在机制。方法 用RSV诱导小鼠病毒性肺炎,灌胃金欣口服液予以治疗,分别采集对照组、模型组、金欣口服液组小鼠的血清样本,提取脂质成分,采用LC-MS分析,采用主成分分析法（PCA）、聚类分析法（CA）等多元统计方法,对小鼠血清脂质代谢轮廓进行分析,同时进行Kruskal–Wallis test以及fold change法进行统计,寻找差异性脂质。结果 RSV感染导致小鼠肺部炎性细胞浸润及不同程度的肺炎,血清中多种脂质代谢物代谢紊乱,具体表现多数PC、PE出现明显上调,金欣口服液均能改善小鼠肺炎症状且显著恢复血清中异常紊乱的脂质。结论 RSV感染可导致小鼠血清中脂质代谢紊乱,而金欣口服液可一定程度恢复RSV模型中代谢紊乱的脂质,提示金欣口服液可通过调节脂质改善RSV诱发的肺炎。      

小儿双金清热口服液对RSV病毒感染小鼠血清炎症因子的影响

目的 :研究小儿双金清热口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠血清炎症因子的影响,探讨小儿双金清热口服液抗病毒的作用机制。方法:取60只小鼠随机分空白组、病毒组、双黄连组、小儿双金大、中、小剂量组,给予接种RSV病毒,除空白组、病毒组外,其他各组以相应药物及剂量灌胃,连续5 d,分离小鼠血清,采用酶联免疫吸附(ELLSA)检测方法,比较各组小鼠血清中主要促炎因子和炎症抑制因子变化情况。结果:小儿双金组与病毒组比较,小鼠血清中炎症抑制因子IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)含量明显增高(P0.01);炎症促进因子TNF-α显著减少(P0.01)。结论:小儿双金清热口服液可以明显增加抗炎因子IL-2、IFN-γ的含量,降低促炎因子TNF-α含量,提高抗病毒作用和免疫调节作用,减轻病毒对机体的损伤。     

小鼠免疫细胞活性与光滑假丝酵母菌胞外多糖关系的研究

目的:探讨光滑假丝酵母菌胞外多糖对小鼠免疫细胞活性的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测该胞外多糖对小鼠脾细胞增殖的刺激作用和对小鼠脾细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的刺激作用,并观察该胞外多糖对小鼠NK细胞杀伤活性的影响。结果:产自海南红树林的光滑假丝酵母菌胞外多糖在体外能显著刺激小鼠脾细胞增殖;显著增强小鼠脾细胞分泌IL-2和IFN-γ的能力;另外该胞外多糖还具有促进NK细胞杀伤K562细胞的能力。结论:产自海南红树林的光滑假丝酵母菌胞外多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。     

聚肌胞对RSV感染哮喘加重小鼠气道分泌TSLP和炎症的影响

目的探讨聚肌胞(poly I:C)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重小鼠气道分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和气道炎症的影响。方法雌性BALB/c小鼠32只,随机分成4组:分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/polyI:C组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘,聚肌胞1mg/kg肌肉注射;无创肺功能检测各组小鼠气道反应性;ELISA法检测小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)中TSLP含量;BALF行细胞分类计数;病理观察小鼠肺组织炎症反应,免疫组化观察小鼠气道上皮细胞TSLP表达水平。结果无创肺功能检测显示聚肌胞抑制RSV感染哮喘加重小鼠气道反应性的增高,OVA/RSV/polyI:C组小鼠Penh值明显低于OVA/RSV组(P<0.01);OVA/RSV/polyI:C组小鼠血清IL-4、IL-5、IL-13和BALF中TSLP浓度均明显低于OVA/RSV组(P<0.05);OVA/RSV/poly I:C组小鼠BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数及淋巴细胞数明显少于OVA/RSV组(P<0.05);病理观察显示聚肌胞减轻RSV感染哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实聚肌胞抑制RSV感染哮喘小鼠气道上皮细胞TSLP表达。结论聚肌胞前期注射减少RSV感染哮喘加重小鼠气道上皮细胞表达TSLP,抑制哮喘小鼠气道炎症反应。     

呼吸道合胞病毒感染促进哮喘小鼠气道分泌TSLP和Th2炎症反应

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌的影响,以探索RSV对哮喘小鼠Th1/Th2免疫反应的调节作用.方法 雌性BALB/c小鼠32只.随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;无创肺功能检测小鼠气道反应性,ELISA法检测小鼠血清IL-4、IFN-γ、IL-5、IL-13水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)TSLP含量并进行细胞分类计数;小鼠肺组织病理观察炎症反应,免疫组化观察小鼠气管上皮细胞TSLP表达水平.结果 RSV感染促进哮喘小鼠呼吸道分泌TSLP增加,OVA/RSV组小鼠TSLP浓度达(2.13±0.05)ng/ml,高于其他组(P<0.01);同时促进IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子的分泌,并增加IFN-γ分泌;0VA/RSV组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数与其他各组比较均明显增加;无创肺功能检测显示OVA/RSV组小鼠气道反应性明显增高,乙酰甲胆碱浓度达6.25 mg/ml时,Penh值(318.66±50.87)明显增加,与其他各组比较具有统计学意义(P<0.01);病理观察显示RSV感染明显加重哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实RSV/OVA组小鼠气道上皮细胞TSLP表达量较高.结论 RSV感染可以增加小鼠气道上皮细胞表达TSLP,促进Th2细胞因子的表达,加重哮喘小鼠肺部Th2炎症反应.     

清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究

目的研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞的抑制作用。方法用不同剂量的清肺口服液制成含药血清处理呼吸道合胞病毒感染后的Hep-2细胞,用组织细胞培养法,采用细胞病变(CPE)观察和四氮唑盐还原法(MTT法)检测清肺口服液含药血清对RSV感染细胞的增殖抑制作用。结果在Hep-2细胞上,清肺口服液的最大无毒浓度为1∶9。100TCID50RSV攻击后Hep-2细胞的OD值明显降低,加入中高剂量含药血清后OD值升高。结论清肺口服液含药血清对RSV有抑制作用。      

重组人IL-18对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用

目的探讨重组人白细胞介素18(IL-18)对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节功能。方法32只C57小鼠分对照组、单纯辐射组、IL-18 辐射损伤组和辐射损伤 IL-18组进行辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4和血清中IgG的含量,观察IL-18对辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果与对照组比较,重组人IL-18能够提高辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用IL-18组细胞因子的水平高于辐射损伤前应用IL-18组;但对IL-4分泌能力和血清中IgG含量没有调节作用。结论重组人IL-18具有促进辐射损伤小鼠脾细胞因子分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。     

约氏疟红内期细胞颗粒疫苗免疫保护性机制

目的探讨约氏疟红内期细胞疫苗保护性免疫作用的特点.方法分别用Saponin和双蒸水溶血后的约氏疟原虫感染的鬼形红细胞作疫苗、腹腔免疫接种BALB/c小鼠,并设正常小鼠为空白对照,分别以致死性同源虫株攻击后比较各组小鼠的感染率和存活率.采用间接免疫荧光检测法,ELISA法测定血清特异性抗体及其亚类.RT-PCR法比较各组小鼠脾细胞白细胞介素-4(IL-4),γ-干扰素(IFN-γ)表达的差异,用SDS-PAGE及直接免疫荧光染色法分析感染红细胞膜蛋白.结果用Saponin皂化构建的疟疾红内期细胞颗粒疫苗(SPRBC)与水化的红内期细胞颗粒疫苗(DPRBC)及对照组相比,可使免疫鼠获得对致死性攻击的非常显著的免疫保护,表现为低原虫血症、短病程和高存活率(P＜0.01),并呈现有高滴度抗体,其亚类有先以IgG1,后以IgG2a为主的趋势;同时经SPRBC免疫鼠的脾细胞其IL-4,IFN-γ均有高表达;感染红细胞表面呈现有相对分子质量为47 000的小鼠MHC-Ⅰα链分子表达.结论皂化处理的约氏疟红内期细胞颗粒疫苗对同源致死性攻击有显著的免疫保护,其作用与疫苗诱导、对攻击产生的IgG1、IgG2a类抗体以及免疫细胞分泌的IL-4,IFN-γ类细胞因子相关,呈现细胞免疫和体液免疫的共同作用.正常与感染小鼠红细胞表面的MHC class Ⅰ类分子可能有重要的免疫学意义.     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察

目的:动态观察细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的变化.方法:将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,收集血清,用ELISA法测定血清IgG及其亚类和IgE水平;无菌取脾,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平.结果:口服免疫组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8～10周、2～20周、2～20周、4～8周、6～12周和10周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～16周、2～12周、2～6周和4～12周显著升高;鼻腔内接种组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后4～10周、4～20周、2～20周、2～12周、4～12周和10～12周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8周、2～12周、2～8周和6～16周显著升高.结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生1个Th1/Th2混合型免疫应答.口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者.     

ESAT6抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

目的:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗,并观察其在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答.方法:构建结核杆菌ESAT6抗原DNA疫苗pVAX-ESAT6,并将其肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,用ELISA方法检测小鼠的血清抗体(IgG、IgG2a/IgG1)水平,并在体外用特异抗原刺激小鼠脾细胞,检测其分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定小鼠细胞毒性T淋巴细胞反应.结果:pVAX-ESAT6 DNA疫苗诱导了抗原特异的体液免疫应答和细胞免疫应答,抗体亚型检测显示IgG2a与IgG1的比值为(2.28±0.4),脾细胞分泌的细胞因子水平检测显示IFN-γ的水平(360士45 Pg/ml)高于IL-4的水平(124±16 Pg/m).结论:成功地构建了pVAX-ESAT6 DNA疫苗,它能在小鼠中诱导抗原特异的免疫应答,应答类型以Th1型占优势.     

IL-33在呼吸道合胞病毒(RSV)感染致哮喘急性发作中的作用

 目的 研究IL-33在呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染致哮喘急性发作中的作用。方法 将24只3周龄SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为PBS组、RSV组、卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）组和OVA/RSV组,每组6只。首先应用OVA或PBS激发并致敏小鼠,再感染RSV致哮喘急性发作。麻醉后处死小鼠。ELISA法测小鼠血清总IgE水平、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织IL-33蛋白水平;瑞氏/吉姆萨染色后测BALF细胞总数及各细胞分类计数;取肺组织病理切片HE染色;real-time PCR测T辅助细胞2型（T helper 2,Th2）细胞因子、IL-33等mRNA表达。结果 OVA组与PBS组相比,血清IgE水平明显升高（P<0.05）。OVA/RSV组中BALF细胞总数较OVA组显著增加,主要表现为巨噬细胞和中性粒细胞的增加。病理切片HE染色可见OVA/RSV组小气道周围炎性细胞浸润更加明显。以上表明RSV感染OVA诱导哮喘急性发作的小鼠模型成功建立。real-time PCR显示：与OVA组相比,OVA/RSV组IL-13以及IL-33 mRNA表达显著增加（P<0.05）,IL-5和ST2表达有所增加,但差异无统计学意义。ELISA结果显示：与OVA组相比,OVA/RSV组肺组织中IL-33浓度增高更加显著（P<0.05）,BALF中IL-33浓度也有所增加,但差异无统计学意义。结论 IL-33可能通过启动Th2型免疫反应在RSV感染诱导哮喘急性发作小鼠模型中起重要作用。     

清肺口服液减轻RSV感染加重哮喘小鼠气道炎症作用的研究(英文)

清肺口服液是临床治疗儿童呼吸道合胞病毒(RSV)性肺炎的有效经验方.前期研究发现,清肺口服液可以减轻RSV感染加重哮喘小鼠的气道炎症,本研究拟探讨清肺口服液对RSV感染的哮喘小鼠肺组织自噬及凋亡蛋白表达的影响.将50只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、RSV感染+哮喘组、清肺口服液组、利巴韦林组.采用卵清蛋白...     

四物汤对小鼠脾细胞分泌IL-3和IL-2的促进作用

目的:研究四物汤对小鼠脾细胞分泌IL-3和IL-2的促进作用.方法:用3H-TdR掺入法和斑点杂交法,考察四物汤对刀豆球蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-3和IL-2的影响.结果:四物汤可显著促进Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-3和IL-2(P＜0.01,P＜0.05),促进淋巴细胞中IL-3 mRNA的表达.结论:四物汤能增强小鼠的造血功能.     

沙棘总黄酮对小鼠体液免疫的影响

沙棘总黄酮(TFH)是沙棘的有效成分。能增强小鼠特异免疫功能,增加小鼠脾细胞分泌溶血素的能力。提高正常小鼠血清溶血素和血凝素抗体水平,并且能部分对抗免疫抑制导致免疫功能低下,对血清 IgG 及脾指数具有直接增强作用,结果表明沙棘总黄酮对体液免疫有促进作用。     

利巴韦林对呼吸道合胞病毒感染哮喘加重小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素分泌的影响

目的 明确利巴韦林(RIB)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重治疗中的作用.方法 (1)细胞试验:人支气管上皮细胞16HBE随机分为RSV组、RSV/RIB组、RIB组和对照组,每组8瓶.感染细胞用RSV病毒液的感染复数(MOI)为2;RIB浓度为50 μg/ml.蛋白质印迹法检测各组细胞胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)蛋白表达.(2)动物实验:雌性BALB/c小鼠随机分为卵清蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/RIB组和对照组,每组8只.应用OVA腹腔注射致敏、OVA雾化吸入结合RSV病毒液滴鼻激发哮喘,RIB 10 mg/kg肌内注射.动物肺功能分析系统检测各组小鼠气道反应性;酶联免疫吸附试验检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、干扰素γ(IFN-γ)和支气管肺泡灌洗液(BALF)TSLP浓度;取肺组织观察炎症反应和气道上皮细胞TSLP表达水平.结果 细胞试验显示RSV、RSV/RIB、RIB和对照组TSLP蛋白表达量分别为1.97±0.22、1.16±0.19、0.99±0.17和0.89±0.08,RSV/RIB组明显低于RSV组(P＜0.01).动物实验显示OVA/RSV/RIB组小鼠气道反应性明显低于OVA/RSV组(P＜0.01);血清IL-4、IL-5、IFN-γ和BALF中TSLP浓度分别为(109.7±41.9)、(220.8±30.9)、(13.0±3.4)和(1945±82)pg/ml,均明显低于OVA/RSV组[分别为(274.2±103.7)、(293.3±46.1)、(30.1±5.7)、(2127±46)pg/ml,均P＜0.01];气道炎症细胞浸润和气道上皮细胞TSLP表达均明显少于OVA/RSV组.结论 RIB可以抑制RSV感染引起的TSLP分泌增加和哮喘加重.     

闽产木立芦荟多糖对小鼠免疫功能的影响

目的研究闽产木立芦荟多糖(MAP)对小鼠免疫功能的影响。方法用环磷酰胺(CTX)建立免疫功能抑制模型小鼠，放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)、免疫球蛋白G(IgG)含量。称量胸腺、脾脏湿质量，计算胸腺指数和脾指数。结果MAP可提高免疫抑制小鼠脏器指数及TNF-α、IL-2、IgG的水平。结论MAP具有调节小鼠免疫功能的作用。     

刀豆素A、结核特异性转移因子联合应用对结核菌感染小鼠的保护效应

目的 研究刀豆素A(ConA)、结核特异性转移因子(PSm·tb-TF)联用对结核菌感染小鼠的保护效应及作用机制。方法 小鼠感染结核分枝杆菌后1天起,分别给予CbnA和/或Psm·tb-TF治疗,观察各组治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾脏内结核活菌数;检测脾细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)、IL-4及腹腔巨噬细胞(P-Mφ)产生NO水平。结果与感染对照组、ConA单用组、PSm·tb-TF单用组比较,ConA联合PSm·tb-TF组小鼠半数死亡时间明显延长,28天内的死亡率明显降低,脾脏内结核活菌数明显减少。脾细胞分泌IFN-γ水平明显升高;IL-4水平降低。P-Mφ产生NO显著增加。结论 ConA、PSm·tb-TF联合应用对结核菌感染小鼠的保护效应明显好于单用ConA或PSm·tb-TF组。