蛋白芯片联合SELDI-TOF-MS在卵巢癌诊断中的应用

目的用蛋白芯片联合表面增强激光解析离子化/飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析卵巢癌与对照血清中的差异表达蛋白来筛选与卵巢癌早期诊断和预后相关的肿瘤标志物。方法采用联合SELDI-TOF-MS及WXC2蛋白质芯片,对21例卵巢癌患者（实验组）及24例健康妇女（对照组）血清标本进行检测。结果在相对分子质量0~50 000 Da范围内,检测出69个差异蛋白峰。卵巢癌差异表达明显（P〈0.01）的蛋白峰8个,其中高表达的波峰3个,质荷比分别为5 927.6,8 719.3和11 729.8 Da,低表达的波峰5个,质荷比分别为4 073.8,4 158.4,4 186.7,4 290.2和8 162.5 Da。其中11 729.8 Da蛋白峰已经鉴定为血清淀粉样蛋白A1（SAA1）。结论SELDI-TOF-MS联合蛋白质芯片能够直接检测出卵巢癌患者血清中相对特异的蛋白峰,对于卵巢癌的诊断具有一定的临床意义。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肺鳞癌和肺腺癌患者差异蛋白的研究

目的 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选出不同病理类型肺癌患者血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺癌组织中的差异蛋白,并探讨其临床意义.方法 选用WCX-2芯片、SELDI-TOF-MS技术检测20例肺鳞癌、20例肺腺癌和20例肺良性病变患者血清、BALF和肺组织匀浆的蛋白质谱,用Biomarker Pattern软件分析肺鳞癌和肺腺癌的差异蛋白并初步建立诊断模型.结果 ①肺鳞癌组与肺良性病变组:在血清、BALF、肺组织匀浆中发现存在2、9、8个差异蛋白峰(P＜0.05),分别选用其中质荷比为5 124.24、7 967.29联合10 843.45、7914.59联合8709.66的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断肺鳞癌的灵敏度分别为85％、80％、75％,特异度分别为65％、80％、90％,正确率分别为75％、80％、83％,阳性预测值分别为71％、80％、88％,阴性预测值分别为81％、80％、78％,其相对应ROC曲线下面积分别为0.750、0.916、0.930.②肺腺癌组与肺良性病变组:在血清、BALF、肺组织匀浆中发现存在8、9、7个差异蛋白峰(P＜0.05),分别选用其中质荷比为9295.79、7923.01、2452.49的差异蛋白波峰建立分类树模型,其诊断肺腺癌的灵敏度分别为75％、80％、70％,特异度分别为65％、90％、85％,正确率分别为70％、85％、78％,阳性预测值分别为68％、89％,82％,阴性预测值分别为72％、82％、71％,其相对应ROC曲线下面积分别为0.844、0.933、0.825.结论 肺鳞癌和肺腺癌BALF及肺组织匀浆中的差异蛋白较血清多,诊断效率比血清高,肺鳞癌BALF中质荷比为7967.29和10843.45的差异蛋白峰联合、肺组织匀浆中质荷比为7914.59和8709.66的差异蛋白峰联合建模及肺腺癌BALF中质荷比为7923.01的差异蛋白峰建立分类树诊断模型,其诊断的灵敏度、特异度和正确率可达到75％～90％,有可能作为诊断肺鳞癌和肺腺癌的标志蛋白.     

Snail蛋白在喉鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨转录因子（Snail）蛋白在喉鳞状细胞癌（喉鳞癌）发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP法检测60份喉鳞癌组织（喉鳞癌组）、20份癌旁组织（癌旁组）中sn8il蛋白的表达,并分析其与喉鳞癌临床病理参数的关系,应用Kaplan．Meier法分析snail蛋白的表达与喉鳞癌预后的关系。结果喉鳞癌组及癌旁组Snail蛋白阳性率分别为78．3％（47／60）、15．0％（3／20）,P〈0．01;Snail蛋白阳性表达与喉鳞癌病理分级、TNM分期、T分期、甲状软骨累及、淋巴结转移、远处转移有关,而与性别、年龄无关;喉鳞癌组Snail蛋白阳性者5年生存率明显低于阴性者,P〈0．01。结论Snail蛋白与喉鳞癌的发生、发展有关,是评价患者预后的重要生物学标志物。     

宫颈鳞癌细胞蛋白质组的分析

目的分析高同质性宫颈鳞癌细胞与正常宫颈细胞蛋白质的表达差异,以期获取宫颈鳞癌的分子标志物。方法利用激光捕获显微切割（LCM）技术分离获取宫颈鳞癌和正常宫颈组织细胞,双向凝胶电泳和质谱法检测两者表达的差异蛋白。结果双向凝胶电泳得到20个差异蛋白点,质谱鉴定显示,其中ETS1、HSP60、Bcl-2、C-myc、TIF1-β等5种蛋白在宫颈鳞癌细胞中表达明显增高（P均〈0.01）。结论应用LCM技术可以成功获取同质宫颈癌细胞和正常细胞;宫颈鳞癌和正常宫颈细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,该表达差异蛋白可望作为宫颈鳞癌的分子标志物。     

血清肿瘤标志物对老年非小细胞肺癌检测的临床意义

目的探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC-Ag）、糖类抗原125（CA125）、细胞角蛋白19血清片段抗原21-1（CYFRA21-1）与非小细胞肺癌（NSCLC）患者病理分型以及分期的关系。方法2009年8月至2012年12月住院的90例年龄≥65岁NSCLC患者,全部经组织学诊断确认。应用电化学发光方法检测其血清中5种肿瘤标志物水平。结果血清中5种肿瘤标志物在肺癌患者中表达水平明显高于健康人组（P＜0.05）,在不同性别以及不同年龄段患者中的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。CEA,CA199,CA125在腺癌中的水平明显高于鳞癌（P＜0.05）;SCC-Ag和CYFRA21-1在鳞癌中的水平明显高于腺癌（P＜0.05）。CYFRA21-1和CA125在N2和N3患者中表达水平明显高于N0和N1患者（P＜0.05）。CEA在有远处转移的患者明显高于无转移的患者（P＝0.041）。CEA和SCC-Ag转移部位越多,其表达越高（P＜0.05）。CEA在Ⅳb患者中表达明显高于Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ和Ⅳa患者（P＝0.046）。结论 CEA,CA199,CA125对晚期腺癌的诊断价值较高,SCC-Ag和CYFRA21-1是诊断鳞癌有价值的标志物。5种肿瘤标志物表达与性别、年龄无明显相关。CEA与临床分期正相关,高表达预示分期晚,低表达则对分期参考作用小。CEA和SCC-Ag高浓度应高度警惕有无多部位转移。     

子宫腺癌患者血清CA125及内膜p16、survivin蛋白的表达及临床意义

目的探讨血清CA125、组织蛋白p16及survivin在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义。方法检测正常子宫内膜组、子宫内膜不典型增生组及子宫内膜腺癌组各40例患者的血清CA125水平及组织中p16及sureivin蛋白的阳性表达情况。结果子宫内膜腺癌组血清CA125水平在手术前后均明显高于其余两组（P均〈0．05）;p16蛋白在子宫内膜腺癌组的表达明显降低,与其余两组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;survivin蛋白在不典型增生组和子宫内膜腺癌组的阳性表达率及强阳性表达率与正常内膜组相比差异有统计学意义（P均〈0．05）。随着手术病理分期的增高,子宫内膜腺癌患者血清CA125的阳性表达率与survivin的强阳性表达率也明显增高,而p16的阳性表达明显降低。结论血清CA125水平、p16及survivin蛋白对子宫内膜腺癌的手术病理分期及临床预后判断均有重要意义     

不同病理类型肺癌组织中AQP3的表达

目的观察不同病理类型肺癌组织中水通道蛋白（AQP）3的表达变化。方法采用免疫组化法检测不同病理类型肺癌组织中的AQP3。结果在各种类型肺癌组织中均可见AQP3阳性表达。腺癌组织中AQP3阳性表达率明显高于鳞癌、大细胞癌、小细胞癌组织,P均〈0．05。结论不同病理类型肺癌组织中AQP3表达有显著差异。腺癌最高,鳞癌、大细胞癌及小细胞癌相对较低。     

人肺腺癌细胞系A549线粒体差异蛋白质组学研究

目的 研究人肺腺癌细胞系A549与人正常支气管上皮细胞系16HBE线粒体蛋白质组的差异表达.方法 传代培养细胞系A549及16HBE,用线粒体提取试剂盒获取细胞线粒体蛋白质,进行双向凝胶电泳,运用液相色谱串联质谱分析技术筛选出A549和16HBE细胞系线粒体间表达水平显著差异的蛋白,所得结果通过Data Analysis软件标峰,用MASCOT进行结果搜索和数据分析.结果 双向电泳结果显示A549、16HBE细胞系线粒体存在差异的蛋白质点共41个,3倍以上差异的16个,A549细胞系中表达上调的15个,表达下调的26个,其中3倍以上差异表达上调的7个,表达下调的9个.运用液相色谱串联质谱技术鉴定出A549细胞系线粒体表达上调的蛋白质2个:AAA+ ATP酶家族结构域蛋白3B、tRNA鸟嘌呤糖基转移酶,表达下调的蛋白质7个:热休克蛋白75、复合物Ⅲ亚基1、复合物Ⅲ亚基2、鸟氨酸氨基转移酶、异柠檬酸脱氢酶亚基α、SLP-2、抗增殖蛋白.结论 应用亚细胞蛋白质组学方法,鉴定出肺腺癌细胞系线粒体差异表达蛋白,为阐明肺腺癌发生的分子机制、筛选早期诊断标志物提供了有益的线索.     

SELDI技术筛选肺癌患者血清标志蛋白的临床价值

目的探讨表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术筛选肺癌患者血清标志蛋白的临床价值。方法用SELDI-TOF-MS技术、弱阳离子交换蛋白芯片,检测肺癌和肺良性病变患者的血清蛋白质质谱图;用Biomarker Pattern软件分析肺癌差异蛋白并初建其诊断模型,通过盲筛验证诊断模型。结果发现有统计学差异的蛋白峰20个,其中肺癌患者血清高表达蛋白质波峰14个,低表达蛋白质波峰6个;用质荷比2 090.77、2 503.31 Da的差异蛋白峰建立分类树模型,其诊断肺癌的灵敏度88%,特异度95%;盲筛验证灵敏度90%,特异度100%,粗符合率93.33%,Youden指数0.9。结论SELDI-TOF-MS技术筛选的肺癌血清差异性蛋白及分类树模型,诊断肺癌的灵敏度高、特异性好。     

卵巢浆液性囊腺癌组织中Survivin和ki67蛋白的表达及意义

目的探讨Survivin和ki67蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义。方法选择手术切除的卵巢浆液性囊腺癌组织28份（囊腺癌组）,浆液性囊腺瘤10份（囊腺瘤组）,正常卵巢组织5份（正常组）,采用流式细胞术（FCM）检测各组Survivin和ki67蛋白表达水平,并分析两指标间及与卵巢浆液性囊腺癌临床病理特征的关系。结果囊腺癌组Survivin、ki67蛋白表达量明显高于囊腺瘤组及正常组,P均〈0.05;Survivin、ki67蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌临床分期有关,而与组织分化程度、淋巴结转移无关;卵巢浆液性癌中Survivin与ki67蛋白的表达量呈正相关。结论 Survivin、ki67蛋白在卵巢癌的发生、发展中有促进及协同作用,联合检测二者或可作为评价卵巢肿瘤恶性程度的重要参考指标。     

肺鳞癌、腺癌中Survivin表达及其与VEGF和P53表达的相关性研究

目的探讨肺鳞癌、腺癌组织中survivin表达、临床意义及其与VEGF、P53表达的相关性。方法采用免疫组织化学（Envision二步法）检测survivin、VEGF和P53在116例肺鳞癌、腺癌组织及15例肺良性病变组织中的表达情况。结果 survivin、VEGF、P53的阳性率分别为62.1%（72/116）、72.4%（84/116）、55.2%（64/116）,显著高于肺良性病变组织的survivin表达与肺鳞癌、腺癌的低分化（P〈0.05）、淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）,与患者预后负相关（P〈0.05）;VEGF和p53的表达与肺癌组织的分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关（P〈0.05）;并且Survivin表达与VEGF、P53表达呈正相关（P〈0.05）。结论 Survivin的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化、淋巴结转移正相关;过度表达提示预后不良;Survivin有望成为肺癌诊断和基因治疗的新靶点;survivin、VEGF和P53三者的协同表达可能是促进肺癌恶性进展的重要因素。     

子宫内膜、卵巢原发双癌组织中端粒酶及ER、c-myc的表达

目的 探讨宫腔子宫内膜样腺癌和卵巢子宫内膜样腺癌（原发双癌）组织中端粒酶及雌激素受体（ER）、c-myc蛋白的表达.方法 收集16例子宫内膜和卵巢原发双癌患者的癌组织切除标本,临床病理分期均为Ⅰ期.采用免疫组织化学PV-6000二步法分别检测免疫表型端粒酶、ER及c-myc在同一患者子宫内膜癌组织和卵巢癌组织中的表达.结果 子宫内膜和卵巢两部位癌组织端粒酶蛋白表达相同11例（68.75％）,表达不同5例（31.25％）;ER蛋白表达相同10例（62.5％）,表达不同6例（37.5％）;c-myc蛋白表达相同10例（62.5％）,表达不同6例（37.5％）;子宫内膜癌和卵巢癌组织中端粒酶、ER及c-myc表达均差异无统计学意义（P均＞0.05）.子宫内膜和卵巢两部位原发双癌中均有ER、c-myc及端粒酶蛋白表达7例（43.75％）.结论 端粒酶、ER及c-myc在子宫内膜和卵巢两部位原发双癌中的表达可能相同,两部位癌组织可能存在同源性.     

HNPCC大肠腺瘤及癌组织微卫星不稳定与TGFβRII表达的关系

目的观察遗传性非息肉病性大肠癌（HNPCC）和大肠腺瘤癌组织中TGFβRRII、错配修复基因（hMLH1、hMSH2、hMSH6）蛋白表达和微卫星不稳定（MSI）的关系。方法以来源于33个HNPCC家系的大肠腺瘤28例和大肠腺癌14例为观察对象，以32例散发性大肠腺瘤和24例散发性大肠癌作为对照。采用免疫组织化学技术，检测大肠腺瘤及大肠腺癌组织中TGFβRRII、hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白表达。从活检组织中提取DNA，选择BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346、D17S250五个微卫星位点行荧光标记聚合酶链反应（PCR），以GeneMapper软件分析PCR产物。通过与正常黏膜微卫星序列PCR片断长度进行比较，判定腺瘤和癌组织的MSI情况。结果64．29％的HNPCC大肠腺瘤和71．43％的HNPCC大肠癌表现为MSI—H，明显高于散发性大肠腺瘤9．38％和散发性大肠癌12，5％。分别有67．86％的HNPCC大肠腺瘤和71.43％的HNPCC大肠癌表现为MMR蛋白表达缺失。明最高于散发性大肠腺瘤3．13％和散发性大肠癌12．5％。分别有57．14％的HNPCC大肠腺瘤和78.57％的HNPCC大肠癌表现为TGFβRRII低表达，明显高于散发性大肠腺瘤9．38％和散发性大肠癌41．67％。在MSI．H的HNPCC大肠腺瘤中，TGFl3RII低表达者占77．78％，MSI—H的HNPCC大肠癌中90％出现TGFβRRII的低表达。MSI—H的散发性大肠腺瘤中TGFβRRII的低表达率为66．67％，MSI—H的散发性大肠癌TGFβRRII的低表达率为100％。结论大部分HNPCC大肠腺瘤和大肠癌出现MSI—H，大部分MSI-H大肠腺瘤和大肠癌表现为TGFβRRII低表达。MSI、MMR、TGFβRRII的检测对腺瘤癌变风险的估计具有重要意义。     

TTF-1 和 p63 在肺腺癌与鳞癌的鉴别中的意义简

目的 研究TTF-1和p63在肺腺癌及肺鳞癌中的表达及鉴别诊断中的价值.方法 收集肺鳞癌69例,腺癌62例,采用免疫组织化学PV-9000法分别检测TTF-1和p63在肺腺癌及肺鳞癌中的表达情况.结果 TTF-1在肺鳞癌中未见表达（0/69）,在肺腺癌中的阳性表达率为87.10%（54/62）,TTF-1表达在肺鳞癌与肺腺癌中的表达差异有显著统计学意义（P〈0.01）;P63在肺鳞癌中的阳性表达率为97.10%（67/69）,在肺腺癌中的阳性表达为4.84%（3/62）,p63表达在肺鳞癌与肺腺癌中的表达差异有显著统计学意义（P〈0.01）.结论 根据TTF-1和p63在肺癌组织的存在特异性表达,联合检测两者有助于在肺活检标本中对肺鳞癌和肺腺癌的鉴别诊断.     

Cyclin D1、p27在肺癌中表达的研究

目的研究Cyclin D1、p27基因蛋白在肺癌组织中的表达与肺癌临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化S-P法检测109例手术切除肺癌组织标本中两种基因蛋白的表达。结暴：肺癌Cyclin D1基因过度表达的总阳性率为93.6%(102/109)。其中鳞癌为98%（50/51)，腺癌为97.2%（35/36），小细胞癌为77.3%(17/22);p27基因表达的阳性率为33%(36/109），其中麟癌为39.1%(20/51)，腺癌为25%(9/36），小细胞癌31.8%（7/22）。Cyclin D1阳性表达与肺癌的分化程度、TNM分期呈负相关。Cyclin D1和p27蛋白在肺癌组织中的表达呈负相关。结论：Cyclin D1和p27基因蛋白表达与肺癌发生、发展有关。     

Expression of the multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) and the lung resistance-related protein (LRP) in human lung cancer

Fifty lung cancer samples (41 non-small cell lung cancer-NSCLC and 9 small cell lung cancer-SCLC) were immunohistochemically analyzed for lung resistance-related protein (LRP) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) expressions which were then correlated with histopathological subtype of the tumor. To detect these proteins, monoclonal antibodies LRP-56 and MRPm6 were used. NSCLC samples were divided into two groups, adenocarcinomas (17 samples) and squamous cell carcinomas (24 samples). Four categories of LRP and MRP1 quantity were distinguished: +++ = high level--90--100% of positive cells, ++ = lower level--10--90% of positive cells, + = low level--up to 10% of positive cells, - = negative cells--0% of positive cells. Within the NSCLC group the most samples (36/41) had the similar level of LRP and MRP1. Significantly higher expression of both proteins was observed in the adenocarcinomas in comparison with squamous cell carcinomas. The lowest positive staining for LRP and MRP1 proteins has been found in SCLC. It is suggested that our finding can confirm the overall empirical clinical knowledge about much higher chemosensitivity of untreated SCLC comparing to NSCLC.     

糖尿病肾病患者血浆动态蛋白质组学研究

目的探讨糖尿病肾病（DN）患者血浆差异蛋白表达情况,为寻找DN敏感血浆蛋白标志物提供依据。方法 4例确诊的DN患者（DN组）和4例健康人群（对照组）作为研究对象,应用荧光差异双向凝胶电泳分析两组血浆蛋白质组差异表达,以上调或下调1.5倍为截断值筛选出差异表达的蛋白质斑点进行质谱分析。结果成功构建DN患者血浆蛋白差异表达双向凝胶电泳图谱,并分析鉴定出6种差异表达蛋白;通过质谱分析和蛋白质数据库（UniProtKB/Swiss-Prot）比对鉴定出6种蛋白质,分别为补体C3、C4、凝溶胶蛋白前体、纤维蛋白原γ、载脂蛋白E和细胞骨架蛋白16。结论荧光差异双向凝胶电泳可鉴定筛选出DN患者与正常人群差异表达的血浆蛋白质,并为进一步筛选DN血浆蛋白标志物提供依据。