Fas/FasL和Bcl-2在人乳腺癌组织中的表达及其与浸润淋巴细胞的关系

目的通过观察乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas、FasL、Bcl-2的表达及其与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的关系,探讨Fas、FasL、Bcl-2与乳腺癌发生、发展的关系,为乳腺癌的生物治疗提供实验依据。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织。用免疫组织化学方法和图像分析技术对21例乳腺癌标本进行检测。结果乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织(P<0.05),且淋巴细胞浸润性乳腺癌组织中Fas的阳性表达明显低于非浸润性乳腺癌组织(P<0.05);乳腺癌组织中FasL、Bcl-2的阳性表达率明显高于相对正常乳腺组织(P<0.05),且淋巴细胞浸润性乳腺癌组织明显高于非淋巴细胞浸润性乳腺癌组织(P<0.05);乳腺癌组织中Fas阳性淋巴细胞的数量与相对正常乳腺组织相比明显增多(P<0.05);乳腺癌组织Bcl-2阳性淋巴细胞的数量与相对正常乳腺组织相比明显减少(P<0.05)。结论①乳腺癌组织中Fas表达下调和FasL的过度表达,逃避了免疫监视,诱导Fas敏感的TIL凋亡,从而导致肿瘤的生长;②乳腺癌组织中癌基因Bcl-2过度表达及Bcl-2阳性淋巴细胞的低表达,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,肿瘤细胞对Fas/FasL易感性较淋巴细胞相对低,导致TIL死亡,而不是肿瘤细胞死亡。     

蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的影响

目的：研究蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响，为天然药物蛴螬的开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株的抗增殖作用及细胞毒活性；通过倒置显微镜、HE染色、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）荧光染色方法观察肿瘤细胞的形态学改变；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；应用免疫细胞化学技术（S-P法）检测用药前后凋亡通路中Bcl-2、Fas、caspase-9、caspase-3的表达改变，探讨蛴螬提取物对凋亡通路的影响。结果:(1)用MTT法检测结果表明，蛴螬提取物在体外对MCF-7人乳腺癌细胞株有明显的抑制增殖作用，实验组与对照组相比其生长抑制率有显著差异（P<0.01），而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性；(2)倒置显微镜观察表明，实验组可见胞核固缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化；(3)HE染色表明实验组胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色、核染色质浓缩、呈碎块状，有凋亡小体形成；(4)经AO／EB荧光染色观察结果表明，实验组出现凋亡细胞；(5)流式细胞仪结果表明实验组凋亡率明显增加，呈时间依赖性；(6)免疫细胞化学染色结果表明，实验组 Bcl-2表达下调，Fas、caspase-3、caspase-9表达均上调，与对照组比差异显著（P<0.01）。结论:①蛴螬提取物在体外显著抑制MCF-7人乳腺癌细胞株增殖；②蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响机制可能是通过下调Bcl-2，上调Fas、caspase-3 、caspase-9的蛋白表达而起作用，是经由细胞凋亡的线粒体途径和死亡受体途径来完成凋亡的启动和执行。     

白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2表达的影响。方法不同浓度白藜芦醇处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖抑制率,流失细胞技术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1和Caspase-3的表达。结果白藜芦醇25、50、100、200μmol/L处理细胞,增殖抑制率分别为(24.22±1.66)%、(30.79±1.60)%、(45.72±1.25)%和(53.31±1.94)%。白藜芦醇0、50、100、200μmol/L处理细胞,凋亡率分别为(3.53±0.25)%、(28.80±1.34)%、(38.78±1.19)%和(58.96±1.26)%。Western blot结果显示,白藜芦醇处理细胞后,Caspase-3蛋白裂解片段表达增加,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达减低。结论白藜芦醇能诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加,这可能与白藜芦醇激活Caspase-3蛋白同时抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达有关。     

乳腺癌微环境成纤维细胞对乳腺癌细胞表达TIGAR 和Bcl-2 的影响

目的:探索乳腺癌微环境成纤维细胞对乳腺癌细胞表达TIGAR 和Bcl-2 的影响及对乳腺癌生长的作用。方法:体外实验,建立了人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 和人成纤维细胞株CCC-ESF-1 共培养模型,RT-qPCR 和Western blot 检测成纤维细胞对乳腺癌细胞表达TIGAR 和Bcl-2 的影响,Annexin V 流式细胞术和Caspase-3 活性荧光检测乳腺癌细胞的凋亡;体内实验,建立人乳腺癌荷瘤裸鼠模型,测量荷瘤裸鼠肿瘤体积,免疫组化检测移植瘤组织TIGAR 和Bcl-2 的表达。结果:体外实验研究结果显示,共培养的成纤维细胞可上调MDA-MB-231 细胞TIGAR 和Bcl-2 的表达并抑制MDA-MB-231 细胞的凋亡;体内实验研究结果显示,与乳腺癌细胞共植入的成纤维细胞能上调荷瘤裸鼠乳腺癌组织TIGAR 和Bcl-2 的表达,高表达的TIGAR 和Bcl-2 可加速荷瘤裸鼠乳腺癌组织生长。结论:乳腺癌微环境成纤维细胞可上调乳腺癌细胞TIGAR 和Bcl-2 的表达,高表达的TIGAR 和Bcl-2 抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进了乳腺癌的生长。     

环孢菌素A对HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达影响的研究

目的:观察环孢菌素A(CsA)诱导白血病HL-60细胞凋亡时Bcl-2和Fas蛋白表达。方法:CsA15mｇ/L作用HL-60细胞,在0-10ｈ之间不同的时点应用细胞免疫组化及流式细胞术方法观察HL-60细胞Bcl-2和Fas蛋白表达。结果:HL-60细胞有Bcl-2强表达,当CsA15mｇ/L作用HL-60细胞8-10h,见Bcl-2表达明显下调。HL-60细胞有较弱的Fas蛋白表达,CsA15mｇ/L作用HL-60细胞10ｈ,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2有关,使Bcl-2表达量减少。CsA在体外诱导HL-60细胞凋亡过程中,未见Fas蛋白表达的明显改变。     

全反式维甲酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用途径.方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7培养基中加入一定浓度ATRA和PKC-δ的专一抑制剂rottlerin(RO)并分组,通过SubG1assay by FACS、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA ladder来观察ATRA对MCF-7的影响.结果:在浓度为5μM的ATRA作用下,MCF-7的凋亡率显著高于其它各组(P＜0.01),并可观察到明显梯状DNA.结论:ATRA能够诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但受PKC-δ的专一抑制剂RO的抑制.     

赤芍总甙对Bcl-2、c-myc基因表达影响及诱导细胞凋亡机制研究

目的：探讨赤芍总甙（TGC）诱导肿瘤细胞凋亡机制，为TGC的开发应用提供实验依据。方法：采用流式细胞仪测定细胞凋亡，SABC免疫组化法检测Bcl-2蛋白表达，原位杂交法测定c—myc mRNA表达，电镜观察凋亡小体。结果：TGC治疗组出现Ap峰GO-G1期细胞明显减少，S期细胞明显增多，与模型对照组比较有显著差异（P〈0．05）。实验组下调相关基因Bcl-2蛋白和c-myc mRNA表达水平。TGC组电镜可见细胞内膜结构完好，染色质边集，细胞核形成核带和核突，凋亡细胞数目较多，有新月形或花环状（凋亡小体形成）。结论：TGC诱导肿瘤细胞凋亡，其机制可能与下调Bcl-2和c-myc mRNA表达水平密切相关。     

Fas配体对HepG2细胞凋亡的影响

细胞凋亡 (apoptosis)与肿瘤的发生、增殖与转移有着较为密切的关系 ,而Fas Fas配体 (FasLigand ,FasL)被认为是传导细胞凋亡信号的“死亡信号传递分子”。其中FasL主要存在于免疫活性细胞 ,通过与靶细胞膜Fas结合 ,导致靶细胞凋亡。为研究FasL在肝癌细胞凋亡过程中的作用 ,我们首先采用ELISA法对慢性乙型肝炎、肝硬化与肝癌患者血清中Fas及可溶性FasL(sFasL)水平进行了初步检测 ,结果显示肝癌患者血清中sFas明显升高 ,而FasL的浓度又明显低于慢性肝炎及肝硬化者 ,提示在肝癌的发生中 ,FasL及Fas与肝癌细胞凋亡有重要关系。我们…     

流式细胞术检测雄黄对人乳腺癌MCF-7／ADM细胞内Bcl-2表达的影响

目的：多药耐药性(MDR)的产生是肿瘤化疗失败的主要原因，而逆转MDR旨在全部或部分恢复肿瘤细胞对药物的敏感性。研究已经证明中药雄黄可以部分逆转人乳腺癌MCF-7／ADM细胞对阿霉素(ADM)的MDR。为进一步探讨雄黄实现其耐药逆转的可能机制，我们采用流式细胞术检测了雄黄逆转前后，MCF-7／ADM细胞Bcl-2表达的改变情况。     

硒多糖对MCF-7乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 探究硒多糖对MCF-7乳腺癌小鼠脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞转化率及SBP-1表达的影响,分析硒多糖对乳腺癌小鼠的抑瘤效果及作用机制。方法 将40只小鼠随机分为4组,每组10只,其中1组作为正常组,其余3组将MCF-7乳腺癌细胞悬液注射于小鼠左侧膈腧穴处建立乳腺癌模型,证明成瘤后予以给药,模型组（予等剂量的生理盐水）,硒多糖用药组（400 mg/kg硒多糖）、联合用药组（50 mg/kg环磷酰胺＋400 mg/kg硒多糖）,连续给药14 d。脱颈处死小鼠,测胸腺指数、脾指数,无菌条件下取脾脏研磨进行体外淋巴细胞培养,检测PHA诱导下的小鼠脾淋巴细胞转化率并应用免疫组化技术检测肿瘤组织中SBP-1的表达情况。结果 与正常组和模型组相比较硒多糖用药组、联合用药组的胸腺指数、脾指数及淋巴细胞转化率明显提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与硒多糖用药组比较联合用药组的胸腺指数、脾指数及淋巴细胞转化率均有所提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比硒多糖用药组及联合用药组的SBP-1蛋白表达均有所提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与硒多糖用药组相比联合用药组的SBP-1蛋白表达有所增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 硒多糖可以通过改善MCF-7乳腺癌小鼠的免疫功能及增强SBP-1的表达来起到抗肿瘤作用,与环磷酰胺联合用药作用更显著。     

Matrine inhibited proliferation and increased apoptosis in human breast cancer MCF-7 cells via upregulation of Bax and downregulation of Bcl-2

Purpose: The aim of the present study was to investigate the effects of matrine on proliferation and apoptosis in human breast cancer MCF-7 cells and its relevant molecular mechanisms. Methods: Breast carcinoma cell line MCF-7 was cultured with series concentrations of Matrine in vitro. The proliferation and apoptosis of MCF-7 cells were investigated by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, flow cytometry, and Mitochondrial membrane potential (MMP) measurements. The expression levels of Bax and Bcl-2 proteins were detected by Annexin V/propidium iodide coupled staining. The morphological changes of MCF-7 cell were examined. Results: The inhibition rates of MCF-7 cells were 6.01%-37.01%, 7.56%-53.92%, and 10.86%-70.23% for 24, 48, and 72 hours after Matrine treatment, respectively. The proliferation of MCF-7 cells was significantly inhibited by Matrine administration, with a time and dose dependent manner. The rates apoptotic cells was between 4.17±0.25% and 19.63±0.17% in 0.25-2.0 mg/ml Matrine groups, which had significant increased compare with the control groups (1.10±0.08%, P<0.05). Meanwhile, increased Bax expression, but decreased Bcl-2 expression was observed in MCF-7 cell line. MMP were significantly decreased by Matrine treatment. Conclusions: Matrine significantly inhibited the growth and induced apoptosis in breast carcinoma MCF-7 cells, which is related to Bax, Bcl-2 signaling and MMP.     

Fas、Bcl-2在放射损伤小鼠骨髓细胞的表达及意义和川芎嗪对其影响的研究

目的：探讨放射损伤小鼠骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达和骨髓细胞凋亡以及川芎嗪对其影响。方法：健康昆明小鼠经6.0Gy^60Coγ照射后立即喂饲川芎嗪并设对照组和正常组，在放射损伤后第3、7、14、21天检测其骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达和骨髓细胞凋亡率。结果：照射后骨髓细胞Fas表达增强，Bcl-2表达减弱，骨髓细胞凋亡增加，但川芎嗪能够减轻放射损伤后小鼠骨髓细胞凋亡率，与对照组有显著差异。结论：放射损伤后小鼠骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达变化在细胞凋亡过程中起重要作用。川芎嗪具有减轻放射损伤后小鼠骨髓细胞凋亡的作用。     

SLE患者淋巴细胞Fas、Bcl-2、p53与Cmyc基因表达

凋亡基因Fas、抗癌基因p53与癌基因Bcl-2、Cmyc等与细胞凋亡密切相关,与疾病的发生、发展有一定的关系,系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,为了探讨SLE与凋亡基因、癌基因的关系,我们采用简易原位杂交法对正常人与患者淋巴细胞的4种基因成批同时进行检测,并分别设探针对照,dig-AP对照,报道如下.     

凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3在乳腺癌中的表达及意义

目的观察人乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3的表达,探讨Fas和Caspase-3与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织(距癌组织5 cm以上),用免疫组织化学方法对23例乳腺癌标本进行检测。结果在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Fas蛋白的阳性表达率分别为86.9%和47.3%;乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率分别为82.6%和43.5%;乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。乳腺癌组织中caspase-3与Fas的表达率均与淋巴结转移无关。相关性分析表明,乳腺癌癌中的表达caspase-3与Fas表达呈正相关。结论乳腺癌组织中Fas和Caspase-3表达下调,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,可能在乳腺癌的发生和发展过程中起重要作用。     

Fas、Bcl-2在RAS胎盘滋养细胞中表达的相关性研究

目的探讨凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2在胎盘滋养细胞与RAS的相关性。方法选择20例RAS者作为研究组,同期正常妊娠20例作为对照组。采用免疫组织化学方法测定各组胎盘滋养细胞Fas、Bcl-2的表达。根据阳性表达率和表达强度进行量化评分,并进行相关性分析。结果(1)RAS组胎盘滋养细胞Fas、Bcl-2表达的免疫组化积分分别为4.61±0.57,1.69±0.53;对照组分别为1.344±0.61,4.79±0.48。其中Fas在RAS组的表达明显高于对照组(P<0.05),而Bcl-2则明显降低(P<0.05)。(2)Fas与Bcl-2在RAS组胎盘滋养细胞中的表达呈负相关(r=-0.63,P<0.05)。结论(1)胎盘滋养细胞Fas高表达、Bcl-2低表达可能与RAS的发生有关。(2)Fas与Bcl-2在胎盘滋养细胞中的表达失衡可能是RAS发生的原因之一。     

Growth hormone prevents human monocytic cells from Fas-mediated apoptosis by up-regulating Bcl-2 expression

Apoptosis and particularly Fas-mediated apoptosis has been proposed to play a key role in controlling monocyte homeostasis. We and others have documented the regulatory function of human growth hormone (hGH) on monocytic cells, which prompted us to investigate the role of hGH on their response to Fas antigen cross-linking. Using human promonocytic U937 cells constitutively producing hGH upon gene transfer and human primary monocytes cultured in the presence of recombinant hGH, we demonstrated that hGH diminished Fas-mediated cell death by enhancing the expression of the antiapoptotic oncoprotein Bcl-2 as well as the level of bcl-2α mRNA. In parallel, we established that overexpression of Bcl-2 through gene transfer into normal U937 cells also diminished Fas-induced apoptosis. Further, as a result of Bcl-2 overexpression, we found that hGH greatly depressed Fas-induced activation of the cysteine protease caspase-3 (CPP32), which in turn affected the cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase. Altogether, these data provide evidence that hGH mediates its protective effect through a Bcl-2-dependent pathway, clearly a crucial step in enhanced survival of monocytic cells exposed to Fas-induced death.     

沉默KDR基因乳腺癌MCF-7细胞的生物学特征改变

背景：随着基因工程以及肿瘤生物分子学等新兴学科的发展壮大,基因治疗肿瘤成为一种新的治疗模式。 目的：探讨KDR基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力和侵袭能力的影响。 方法：设计针对KDR基因的小分子干扰RNA(siRNA)序列,转染人乳腺癌MCF-7细胞,应用RT-PCR及Western blot法检测沉默KDR基因后MCF-7细胞KDR mRNA及蛋白的表达;应用流式细胞仪、CCK-8 增殖实验、小室侵袭实验检测沉默KDR基因后乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期、增殖能力、侵袭能力的变化。 结果与结论：KDR基因沉默48 h后,乳腺癌MCF-7细胞KDR mRNA及蛋白表达明显降低;乳腺癌MCF-7细胞停滞在G0/G1周期,S期的细胞数目减低,细胞增殖得到显著抑制,穿过滤膜的细胞数量明显减少。上述结果表明沉默KDR基因后乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭能力得到明显抑制,说明KDR基因沉默可能成为新的有效治疗乳腺癌的靶点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程