黄芪对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织Nogo-A蛋白表达的作用及意义

目的探讨Nogo-A蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织中的表达特点及黄芪对其表达的影响方法 7日龄Wistar新生大鼠72只,清洁级,雌雄不限,平均体重10-16g,随机分为假手术组,HIBD组,黄芪治疗组,每组24只。分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2+8%O2氮氧混合气体行缺氧处理2h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。黄芪治疗组于建模成功后立即及3h腹腔注射0.5ml/只,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、12h、24h、72h随机抽取6只,于麻醉下处死取脑组织,HE染色观察脑组织病例变化,免疫组化法检测Nogo-A蛋白表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组术后脑组织Nogo-A蛋白表达增高,但Nogo-A蛋白随各时间点有先上升后下降的趋势,差异有统计学意义(P0.05),与HIBD组相比,黄芪治疗组各时间点Nogo-A蛋白,差异有统计学意义(P0.05)。结论提示黄芪可下调缺氧缺血性损伤大鼠脑组织Nogo-A蛋白的表达,对神经元和神经纤维具有保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤对脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA的影响

目的 通过检测脾淋巴细胞凋亡基因bcl-2/bax/fas/fasL mRNA表达水平,探讨缺氧缺血性肭损伤(hypoxicischemic brain damage,HIBD)脾细胞凋亡基因的变化与缺氧时间的关系,以此提供HIBD对于免疫功能影响的理论基础.方法 建立新生大鼠HIBD模型测定脾bcl-2/bax/fas/fasL mRNA 的相对表达量.结果 bcl-2处理组相对表达量低于对照组(P＜0.01).bax处理组相对表达量高于对照组(P＜0.01).bcl-2/bax处理组比值低于相应对照组(P＜0.05).fas处理纽相对表达量高于对照组(P＜0.01).fasL 1 h和6 h处理组相对表达量高于对照组,12 h之后则对照组远高于处理组.fas/fasL对照组较分散,除6 h组外其余组均小于1,处理组较集中,除24 h外均大于1.结论 HIBD可促进脾细胞促凋亡基因的表达,减少抑凋亡基因表达;HIBD发生6～12 h是促凋亡基因和抑凋亡基因高峰表达期;HIBD加强了fas/fasL的作用.     

头部贴敷式亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织中线粒体能量代谢的影响

目的研究头部贴敷式亚低温状态下,新生鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织内能量代谢(ATP、ADP和AMP)的变化,探讨亚低温对缺氧缺血性脑组织的保护机制。方法将88只Wistar新生鼠随机分为4组,分别为假手术常温对照组(CN)、假手术亚低温对照组(CH)、HIBD模型常温恢复组(IN)、HIBD模型亚低温治疗组(IH),每组21只,组内动物再随机分配分为3小组,分别给予常温或亚低温干预,干预持续时间分别为2、6、12h,每个时间点7只动物。结果亚低温治疗组(IH)脑组织中线粒体内ATP、ADP和AMP含量与常温对照组(IN)相比具有差异性(P<0.05)。结论头部贴敷式亚低温可保护脑组织,改善线粒体能量代谢。     

地塞米松对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织AQP-4表达的研究

目的探讨DEX（地塞米松）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织AQP-4表达的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血脑病提供实验和理论依据,揭示其发病机制,以期指导该病的早期治疗。方法将健康7日龄SD新生大鼠96只,清洁级,雌雄不限,平均体重12-18g,随机分为假手术组,HIBD组,DEX组,各组32只,分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2＋8%O2氮氧混合气体行缺氧处理3h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。DEX治疗组于建模成功后立即腹腔注射10mg/kg,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、24h、48h、72h随机抽取8只,于麻醉下处死取脑组织,通过Western blot方法检测新生大鼠脑组织AQP-4蛋白表达及实时定量PCR检测AQP-4 mRNA的表达。结果 SD鼠在缺氧处理后出现异常行为学改变。AQP-4 mRNA及蛋白的表达在缺氧诱导后显著升高,DEX的治疗则使SD鼠异常行为的表现程度减轻,后趋于正常,且能够降低HIBD导致的AQP-4的升高。结论 DEX对HIBD的治疗具有一定的疗效。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑干听觉诱发电位的动态变化

目的：探讨缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑干听觉诱发电位（BAEP）的动态变化。方法：30只出生13天的新生SD大鼠随机分为对照组和缺氧缺血组,每组15只。将出生后第13天新生大鼠结扎左侧颈总动脉后,置于含氧8％的低氧环境中3h建立缺氧缺血性脑损伤动物模型。出生后第14、20、27、37、47、57、67和77天检测大鼠的BAEP。结果：缺氧缺血组新生大鼠3h缺氧复氧1h后,表现为向左侧旋转,爬行时右侧后肢呈现拖步。出生后第14～47天缺氧缺血组大鼠BAEP波峰潜伏期（PL）和波峰间潜伏期（IPL）较对照组显著延长（P〈0．05或P〈0．01）,这些鼠的BAEP的PL及IPL均随年龄的增加而缩短,并且鼠可发育成熟。结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠BAEP有显著的可逆性异常变化,其PL和IPL是动态监测与客观评价新生期缺氧缺血性脑损伤和听觉障碍的灵敏指标。     

白茅苷对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的影响

目的探究白茅苷(imperatorin,Imp)对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌损伤和免疫反应的影响及作用机制。方法将大鼠随机分为:假手术组(Ctrl组)、模型组(MCAO组)、MCAO+Imp(2.5、5、10 mg)组,MCAO法诱导缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型。检测心肌组织病理学改变,增殖、凋亡相关蛋白表达,心肌损伤和炎症因子含量,及信号通路表达。结果白茅苷能改善MCAO新生大鼠心肌组织病理损伤,上调心肌组织Ki67、PCNA表达(P<0.01),上调Bcl-2、下调Bax、Caspase-3和Caspase-9表达(P<0.01),降低Mb、cTnI和CK-MB血清含量(P<0.01),减少IL-1β、iNOS和IL-6,增加IL-10含量(P<0.01),同时下调TGF-β1、P-P65/P65和TNF-α表达水平(P<0.01)。结论白茅苷能减轻缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠的心肌损伤,并抑制免疫反应,其机制与抑制TGF-β1/NF-κB p65/TNF-α炎症通路活化相关。     

丹红注射液对大鼠缺血缺氧后脑损伤的作用观察

目的:研究丹红注射液对大鼠缺血缺氧后脑损伤有无保护作用。方法:建立大鼠缺血缺氧后脑损伤动物模型,通过观察亚硝酸钠致死时间、脑缺血行为评分明确丹红注射液对大鼠缺血缺氧后脑损伤的作用。结果:丹红注射液10 ml.kg-1、20 ml.kg-1可延长亚硝酸钠致死大鼠的生存时间;改善中动脉栓塞致脑缺血缺氧大鼠的行为障碍。结论:丹红注射液对缺氧缺血导致的脑损伤具有明显的保护作用。     

丙酮酸乙酯对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用

 目的： 探讨丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate, EP）对缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠脑组织的作用及其可能机制。方法：165只7日龄SD大鼠随机分为3组:假手术组（n=43）、HIBD模型组（n=61）和HIBD+EP处理组（n=61）,造模前30 min腹腔注射EP（50 mg/kg）1次,此后每天1次,3 d后测定脑组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量以及脑组织含水量,TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数;14 d后检测缺血侧和非缺血侧脑重量以判别脑萎缩程度。结果：HIBD+EP组脑组织SOD活性为(125.78±18.35)×103 U/(g protein),较HIBD模型组［(97.84±15.50)×103 U/(g protein)］明显增强（P<0.05）;MDA含量为(4.42±1.04) μmol/(g protein),较HIBD模型组［(6.02±0.89) μmol/(g protein)］明显降低（P<0.05）。此外,HIBD模型组缺血侧（左侧）的脑组织含水量高于非缺血侧（右侧）（P<0.05）,EP治疗后两侧的脑组织含水量无显著差异（P>0.05）,提示EP减轻了缺血侧的脑水肿。同时HIBD+EP组缺血侧脑皮质和海马每个视野的凋亡细胞数目分别为96.63±10.08和41.91±9.96,较模型组（111.54±1.64和51.73±1.77）明显减少,但仍多于假手术组（P<0.05）。HIBD+EP组左脑萎缩程度为(13.25±5.19)%,较HIBD模型组［(20.32±5.10)%］明显减轻（P<0.05）。结论：EP具有抗氧化功能,能减轻脑水肿,减少脑细胞凋亡,减轻脑萎缩,对HIBD新生大鼠脑组织具有保护作用。     

bFGF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中HIF-1α表达的影响及研究

目的 探讨bFGF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中HIF-1α表达的影响以及在临床治疗过程中的临床疗效.方法 选取健康新生7日龄Wistar大鼠96只,雌雄不限,随机分为三组即假手术组(10)、HIBD组、bFGF治疗组.后两组再根据处死动物的时间不同随机分为5个亚组:12h组、24h组、72h组,7d组,每亚组8只.HIBD组制备HIBD模型,bFGF治疗组制备HIBD模型24h后腹腔注射药物.结果 通过使用bFGF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤进行治疗后,H1F-1α得到了较好的抑制.结论 在临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的过程中,使用bFGF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤进行治疗能够取得较好的效果,同时能够较好的抑制住HIF-1α的表达,在临床上值得推广应用.     

Macamide B对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠脑中雌激素受体表达的影响

目的:观察玛卡酰胺B(Macamide B)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠脑组织中雌激素受体α(ER α)和雌激素受体β(ER β)表达的影响。方法:选择出生7 d C57BL/6小鼠30只并将其分为3组:假手术组(sham)、缺氧缺血性脑损伤组(HIBD)、玛卡酰胺B处理组(Macamide B+HIBD),每组10只。采用Rice法建立新生小鼠HIBD模型,采用免疫荧光组织化学染色对ER α和ER β在新生小鼠HIBD脑内的细胞定位进行分析,Western Blot方法检测Macamide B对新生鼠HIBD脑内ER α和ER β表达的影响。结果:ER α和ER β在HIBD新生小鼠脑内神经元和星形胶质细胞中均有表达;与sham组相比,HIBD组ER α和ER β的表达量均明显降低;与HIBD组相比,Macamide B可显著上调ER α和ER β的表达。结论:Macamide B可通过上调新生小鼠脑内ER α和ER β表达表达水平对HIBD发挥神经保护作用。     

NGF及其受体在人胚神经管早期发育中的表达

应用免疫组织化学方法研究NGF及其受体在人胚神经管早期发育中的表达。结果显示,NGF在第3周未检测到,第4周出现阳性着色,随着胚龄增加,免疫阳笥着色逐渐增强。第3周,可检测到少数散在TrkA免疫阳性细胞,随着胚胎发育,阳性细胞逐渐增多,色强度逐渐增强,TrkA、表达时序和分布与NGF基本一致。结果表明,NGF通过其特异性受体介导,在胚胎神经管形成和分化的不同阶段发挥着重要作用。     

片仔癀对局灶性脑梗死大鼠神经生长因子表达的影响

目的:探讨片仔癀对局灶性脑梗死大鼠NGF表达的影响及其作用机制。方法:制备MCAO大鼠模型,将SD大鼠70只随机分为7组:假手术组,模型组,片仔癀大、中、小剂量组,尼莫地平组和脑得生组,造模3 d后取材,采用免疫组织化学法观察各组大鼠大脑皮层NGF的表达情况。结果:与假手术组比较,各造模组大鼠大脑皮层NGF的表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠大脑皮层NGF的表达也均显著升高(P<0.01);与尼莫地平组和脑得生组比较,片仔癀各剂量组大鼠大脑皮层NGF的表达有所升高(P<0.05);结论:片仔癀可促进局灶性脑梗死大鼠大脑皮层NGF的表达,从而起到脑保护的作用。     

Nogo-A在大鼠胃肠神经丛中的表达

目的：探讨Nogo-A蛋白在成年大鼠胃肠神经丛中的表达。方法：利用免疫组织化学法,观察Nogo-A蛋白在大鼠胃肠神经丛中的表达,并用RT—PCR检测Nogo-AmRNA在胃肠组织中的表达情况。结果：在成年大鼠胃肠神经丛,包括黏膜下神经丛、肌间神经丛、浆膜下神经丛内的神经元出现Nogo-A免疫反应阳性,胞质和胞核都可见棕褐色颗粒;胃肠组织的RT—PCR结果显示Nogo-AmRNA为阳性。结论：Nogo-A可广泛表达于各器官系统的神经元中,提示Nogo-A的功能可能与神经元的某个共同的生理活动有关。     

肢体缺血后处理促进缺血性脑损伤大鼠内源性神经干细胞的增殖

背景：远程肢体缺血预处理应用到脑缺血-再灌注损伤领域的研究已有一些报道,但肢体缺血后处理应用于该领域报道很少。 目的：观察肢体缺血后处理对缺血性脑损伤大鼠侧脑室旁神经干细胞增殖的影响。 方法：利用改良线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,将30只造模成功的SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组15只。实验组行远程肢体缺血后处理,对照组不做处理。2组大鼠分别于造模后5,10,15 d处死取脑,处死前1 d每隔8 h腹腔注射50 mg/kg 5-嗅脱氧尿嘧啶核苷1次,共3次。应用免疫组织化学方法检测梗死灶区大鼠脑组织5-嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数。 结果与结论：与对照组比较,实验组脑再灌注损伤程度呈现不同程度减轻,行为学评分降低(P < 0.05)。实验组各时间点梗死灶周边皮质的5-嗅脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。提示局灶性脑缺血造模后的肢体缺血后处理可以改善大鼠行为学表现,促进了内源性干细胞的激活增殖,对缺血性脑损伤有保护作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

EGF培养条件下NGF与BDNF对大鼠海马神经干细胞向神经元分化的差异

目的探讨在表皮生长因子(EGF)培养条件下,相同浓度神经生长因子(NGF)与脑源性神经生长因子(BDNF)对成年大鼠海马神经干细胞向神经元分化比例的差异。方法用含碱性成纤维生长因子(bFGF)、EGF、B27的无血清细胞培养技术体外培养成年大鼠海马神经干细胞,单细胞克隆后行Nestin免疫细胞化学染色,诱导分化1周,行GFAP和NSE免疫细胞化学染色;根据培养液中所加营养因子的不同将单细胞克隆传代细胞分为5组培养:EGF组、NGF组、BDNF组、EGF+NGF组、EGF+BDNF组,此5组细胞培养1周,进行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。结果:单细胞克隆培养后克隆球细胞表达Nestin,诱导分化1周,细胞表达NSE、GFAP;与EGF组、NGF组、BDNF组相比,EGF+NGF组和EGF+BDNF组细胞分化为神经元的比例较高(P<0.05),其中EGF+BDNF组细胞的比例最高。结论在EGF培养条件下,BDNF促进成年大鼠海马神经干细胞向神经元分化的能力高于NGF。     

NGF、BDNF和NT-3在正常成年大鼠主要脑区表达的免疫组织化学研究

目的研究神经生长因子(NGF)﹑脑源性神经营养因子(BDNF)﹑神经营养素-3(NT-3)在正常成年大鼠主要脑区的表达。方法将正常成年大鼠用4%多聚甲醛灌注固定后取脑制成20μm厚的冰冻切片,应用上述3种因子的抗体进行免疫组织化学染色。结果3种因子的表达既有共同点也有不同点:共同点是在主要脑区都能表达,不同点是在单个细胞中,BDNF主要表达于胞浆边缘;NGF在大部分神经元的整个细胞都表达,但少量神经元则在胞核无表达;NT-3则与BDNF相似。结论3种因子在正常成年大鼠主要脑区都能表达。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠急性损伤脊髓Nogo-A表达量影响的研究

目的：研究大剂量甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠脊髓Nogo-A蛋白表达量的影响。方法：采用allen’s打击方法，将大鼠分为正常组、急性脊髓损伤组（对照组）和急性脊髓损伤＋大剂量MP组，损伤大鼠Tg-T10节段，分别于术后3、7、14d取受损节段大鼠脊髓，运用Western-blot方法测定各时相点Nogo-A表达量及其变化，并以HE染色和免疫组化染色对受损脊髓进行形态学观察。结果：Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达，损伤后对照组与MP组各个时相点Nogo-A表达均显著高于正常组（P〈0.05），7d时最高，后逐渐下降，但14d的表达量仍高于正常组。其中大剂量MP组与对照组在各个时间点的表达量具有显著差异（P〈0．05），MP组在各个时间点的表达量显著低于对照组。结论：Nogo-A是SCI后脊髓神经纤维再生的主要抑制因子，大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。     

肢体缺血后处理对大鼠慢性脑缺血后脑内LINGO-1的表达及神经功能的变化

目的:观察大鼠肢体缺血后处理后脑内LINGO-1表达的变化,研究肢体缺血后处理改善慢性脑缺血后神经损伤的分子机制。方法:采用50%三氯化铁处理双侧颈总动脉的方法建立慢性脑缺血模型,随机将大鼠分为假手术组、模型组和肢体缺血后处理组。大鼠肢体缺血后处理3周后采用三等分Y型电迷宫方法观察各组大鼠的学习记忆能力,RT-qPCR检测LINGO-1的mRNA,Western blot法测定LINGO-1的蛋白水平。结果:与模型组相比,肢体缺血后处理组大鼠学习记忆能力显著增加(P0.05)。假手术组大鼠LINGO-1的mRNA及蛋白水平有少量阳性表达。肢体缺血后处理组大鼠LINGO-1的mRNA及蛋白水平均显著下降(P0.05)。结论:慢性脑缺血大鼠脑内LINGO-1水平明显上调,肢体缺血后处理可明显降低LINGO-1的表达水平,并提高学习记忆能力,这可能是肢体缺血后处理改善慢性脑缺血神经功能的分子机制之一。     

神经生长抑制因子Nogo-A在缺血性脑梗塞大鼠脑组织中的表达

目的：研究神经生长抑制因子Nogo-A mRNA 在大鼠缺血性脑梗塞脑内不同时点表达的变化，探讨 Nogo-A基因在缺血性脑梗塞时神经再生的作用。 方法： 建立缺血性脑梗塞（MCAO）模型,采用原位杂交法结合免疫组化技术,检测80只在不同时期缺血性脑梗塞大鼠脑内Nogo-A 的表达量。 结果： 原位杂交法显示：Nogo-A mRNA在脑梗塞后3 d下降，7 d后上升，2周达到高峰，第3、4周保持第2周水平；免疫组化显示：Nogo-A含量在脑梗塞后3 d下降，7 d后上升，3周达到高峰，第4周保持第3周水平。 结论： 脑内Nogo-A 表达在脑梗塞急性期(3 d)变化不明显，而在1周后较为明显，表明：在脑梗塞后期Nogo-A 表达有明显升高，它可能是造成成年哺乳动物损伤后神经再生障碍的重要原因之一。     

施万样细胞对大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响

目的观察施万样细胞对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响,初步探讨施万样细胞对脊神经节的保护作用。方法先将脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)诱导分化为施万样细胞并对后者进行鉴定,后将二者分别植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常对照组、ADSC组和施万样细胞组。后两组建立SNI模型并用相应的组织工程神经桥接损伤的神经。术后4周采用Western Blot和Real-time PCR检测各组大鼠脊神经节神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)蛋白和m RNA的表达。结果 ADSCs能够诱导分化为施万样细胞并表达施万细胞标记物S100β和GFAP蛋白。施万样细胞组大鼠脊神经节内NGF和BDNF蛋白及m RNA表达量均高于ADSC组(P0.05)。结论施万样细胞可上调脊神经节NGF和BDNF的表达,对SNI所致的脊神经节内神经元损伤有保护作用。