不同冷冻方案对家兔卵巢组织卵泡细胞增殖活性的影响

目的探讨不同冷冻方案对家兔卵巢组织卵泡细胞增殖活性的影响。方法应用PROH慢速程序化冷冻及DMSO+EG玻璃化冷冻方案冻存家兔卵巢组织,复苏后机械性分离卵泡,采用3H标记的胸腺嘧啶核苷掺入试验测定2~5层颗粒细胞包裹的小次级卵泡(小OGC组)及5层以上颗粒细胞包裹的大次级卵泡(大OGC组)的cpm值,并以新鲜组为对照。结果PROH组及DMSO+EG玻璃化组复苏后形态正常的小OGC的cpm值分别为2554.67±93.59及2510.67±100.03,新鲜对照组为2507.00±25.94,两冷冻组与新鲜组比较,差异无显著性(P>0.05);而各大OGC组的cpm值分别为5784.00±188.95、5481.33±112.38及9629.00±265.64,两冷冻组与新鲜组比较,差异有显著性(P<0.05);两冷冻组间比较,大OGC及小OGC的cpm值均无显著性差异(P>0.05)。结论①两种冷冻方法对形态正常的小OGC的细胞增殖活性无明显影响,这些卵泡复苏后体外培养及成熟可能为今后卵巢组织冷冻复苏体外培养的研究方向。②两种冷冻方法使形态正常的大OGC细胞增殖活性受到明显抑制,冷冻复苏可能对颗粒细胞造成了损害。③两种冷冻方法对大小OGC细胞增殖活性的影响相似,其具体机制尚需进一步研究。     

卵巢组织的冷冻及其应用的研究进展

卵巢不仅是女性的内生殖器官也是重要的内分泌器官，对于女性生育力和第二性征的维持具有重要的意义。女性肿瘤患者特别是年轻女性由于接受各种抗肿瘤治疗如手术、放疗、化疗，有可能会导致卵巢早衰甚至会切除卵巢从而导致终身不孕，丧失生育力。目前保存女性生育力的方法主要有胚胎冷冻保存，卵母细胞冷冻保存和卵巢组织冷冻保存。相对于前两种方法卵巢组织冷冻保存有其优越性。对于那些因疾病必须切除卵巢，或必须行放疗、     

不同玻璃化冷冻方案对小鼠卵巢组织的影响

目的比较不同组合的冷冻保护剂对小鼠卵巢组织的影响,为人类卵巢组织玻璃化冷冻的保护剂选择提供实验依据。方法将20只小鼠的卵巢进行玻璃化冷冻,组织标本随机分为4组,新鲜的和冻融后的卵巢皮质分别进行光学显微镜观察、TUNEL实验和免疫组织化学分析。结果光镜观察发现各实验组的各级卵泡形态正常率均明显低于对照组,B组的始基卵泡形态正常率和初级卵泡形态正常率均高于A组和C组,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组冻融后卵泡凋亡率、卵母细胞凋亡率和颗粒细胞凋亡率均高于B组,有统计学差异（P〈0．05）。另外,B组卵泡Bax蛋白阳性表达率低于A组和C组,而B组Bcl-2蛋白阳性表达率高于A组和C组,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论实验结果提示：与其它组合相比,EG与PROH的组合更适合小鼠卵巢组织的玻璃化冷冻。     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组(P < 0.05),二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P < 0.05),至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组(P < 0.05),二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组(P < 0.05)。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

不同保存方法对后交叉韧带保存后组织形态学影响*

目的观察不同的低温保存方法对异体骨-后交义韧带-骨复合组织形态学的影响。方法新西兰白兔膝关节96个随机分成4组:新鲜对照组、二步冷冻保存组、-80℃冷冻保存组、-196℃冷冻保存组,后三组经保存二周后于37℃水浴快速复温,随即与新鲜对照组一起进行光镜、电镜观察组织形态学方面的变化。结果HE染色光镜观察:新鲜对照组在胶原纤维形态、排列整齐性及分布致密度均优于其它各组,二步冷冻保存组较新鲜对照组稍差,但明显优于其他二组,-196℃冷冻保存组织学表现最差。电镜观察:新鲜对照组在胶原微纤维排列整齐性及分布致密度方面优于其它各组,二步冷冻组较新鲜对照组差,但优于其它二组,-196℃冷保存组最差。结论二步冷冻保存能够较好地维持后交叉韧带的组织形态学特性。     

两种冷冻方法对人大块卵巢组织卵泡活性的影响

目的 探讨两种冷冻方法冻融人类大块卵巢组织的冷冻效果及对卵泡活性的影响。方法 收集15例人卵巢组织,每例修剪成3块卵巢组织
（约15 mm×15 mm×2mm）,分别随机分配到新鲜对照组（A组）、玻璃化冷冻组（B组）、两步法冷冻组（C组）,组织学分析3组卵泡形态学变
化,并进行卵巢组织体外培养后测定培养液上清中雌激素、孕激素浓度,免疫组织化学染色测定培养后的卵巢组织细胞核增殖相关抗原Ki67 及
B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）表达水平,评估卵泡增殖及凋亡活性。结果 A组正常形态卵泡比率（91.9%）显著高于B组（71.3%）和C组
（82.9%）,差异有统计学意义(P<0.05),C组高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组的始基卵泡和初级卵泡的正常形态率分别为86.8%、
54.4%,均分别高于B组73.8%、44.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时期3组激素测定结果差异不显著(P>0.05)。C组Ki67的阳性率为73%,
分别显著高于A组50%和B组55%(P<0.05),A组低于B组(P<0.05)。Bcl-2阳性率,A组为57%和C组61%相比无差异(P>0.05),但B组42%阳性率分别低
于A组和C组(P<0.05)。结论 人体大块卵巢组织冻融后仍具有活性,并且两步法冻存效果优于玻璃化冷冻法。     

卵巢组织的冷冻和移植研究进展

卵巢组织冷冻技术可以为患有良、恶性肿瘤的女性提供生育保险 ,已经成为生殖医学领域的新型技术和研究的热点之一。冷冻卵巢组织的移植途径有异体移植、异位自体移植、原位移植和卵泡的体外成熟培养 ,其应用前景广阔。     

小鼠卵巢组织玻璃化冷冻的初步研究

目的建立一种有效的卵巢组织玻璃化冷冻方法。方法采用乙二醇和蔗糖两步法、小鼠卵巢组织经5m in、10m in、15m in 3种不同的预平衡时间处理,在玻璃化溶液中暴露相同的时间后直接投入液氮进行玻璃化冷冻。复苏后与新鲜的卵巢组织均进行HE染色、提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳。结果玻璃化冷冻复苏后,预平衡时间为10m in的实验组小鼠卵巢组织中的卵泡保持了较好的形态结构。提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,各实验组与新鲜对照组的结果相似。结论采用乙二醇和蔗糖两步法、预平衡为10m in、直接投入液氮的玻璃化冷冻方法可能是一种有效的卵巢组织片冷冻保存方法。该玻璃化冷冻方法没有造成细胞DNA的损伤。     

人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究

目的探讨人胎儿卵巢组织异种移植后的卵泡生长发育情况。方法28只裸鼠行去势手术后分为3组:O组为对照组;A组为新鲜胎儿卵巢组织移植组;B组为冻融人胎儿卵巢组织移植组。A、B两组均于移植1个月后开始隔天注射5 IU的PMSG持续2个月,获取移植物36h前注射HCG。将获取胎儿卵巢组织进行光学显微镜的观察并测各组血清雌二醇(E2)的浓度。结果A、B两组血清E2水平明显高于O组,差异有显著性(P<0.01),A、B两组间无显著性差异(P>0.05)。移植后存活的卵巢组织中有40%~50%的原始卵泡丢失。A、B两组织中均以原始卵泡为主,可见少量初级卵泡和次级卵泡,未见窦卵泡的生长。移植后人胎儿卵巢组织中初级卵泡和次级卵泡的比例较移植前显著增加(P<0.01),A、B两组相比各级卵泡比例无显著性差异(P>0.05)。结论冻融人胎儿卵巢组织移植于裸鼠的背部皮下能存活,其卵泡处于良好的生长发育状态。     

卵巢组织发生中间质细胞的形态学观察

本文采用光镜和电镜技术观察了12-38周38例胎儿卵巢组织发生中间质细胞的组织化学和超微结构的变化。第12周胎儿卵巢髓质已出现少量散在的间质细胞,第15-16周其向皮质内侧份的生卵索周围延伸,数量增多;19-30周数量减少,仅存在于皮质外侧份;第36周后少见。间质细胞同毛细血管具有密切关系,并具有分泌类固醇激素细胞的超微结构和组织化学特征,它们可能在胚胎时期已具有分泌功能,本文对间质细胞的来源及功能进行了初步探讨。     

对胚胎期卵巢和子宫的形态学观察

目前为止，关于我国胚胎期性腺的研究资料较少，尤以卵巢和子宫的形态学报告更少。为了普及性分化的基本知识，促进优生优育工作的深入发展．我们将过去收集测量的胚胎标本，取其生殖腺进行观察，其中不同胎龄卵巢和子宫21例，进行切片观察，以阐明它们在发育过程中的形态学特点。     

兔卵巢组织冷冻移植后卵母细胞成熟及受精发育能力的研究

目的 探讨兔卵巢组织冷冻复苏后移植对卵母细胞生长、成熟、受精发育潜能的影响。 方法 25只性成熟新西兰雌兔随机分为对照组（5只）、新鲜移植组（10只）及冷冻复苏移植组（10只），卵巢组织均自体多点移植于子宫系膜内。卵巢移植90d后对兔联合使用促排卵、体外成熟培养和卵泡浆内单精子注射技术，观察卵子的成熟情况以及体内和体外成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率。 结果 新鲜移植组和冷冻复苏移植组获卵数均低于对照组(P＜0.05），而两移植组间获卵数差异无显著性；各组未成熟卵子所占比率以及未成熟卵子体外成熟后的成熟率间均无显著性差异；各组间体内成熟卵子、体外培养成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率的差异不明显；各组内体内成熟卵子与体外培养成熟卵子相比受精率、卵裂率间无显著性差异，但体外培养成熟卵子囊胚形成率明显低于体内成熟卵子(P＜0.05）。 结论 兔卵巢经冷冻复苏自体移植后，其卵泡能够重新生长发育；通过体外成熟和受精技术，体内和体外成熟卵子均可产生正常的胚胎。提示卵巢组织冻融移植结合辅助生殖技术可作为一种生育力保存的方法。     

兔卵巢组织冷冻移植后卯母细胞成熟及受精发育能力的研究

目的 探讨兔卵巢组织冷冻复苏后移植对卵母细胞生长、成熟、受精发育潜能的影响. 方法 25只性成熟新西兰雌兔随机分为对照组(5只)、新鲜移植组(10只)及冷冻复苏移植组(10只),卵巢组织均自体多点移植于子宫系膜内.卵巢移植90d后对兔联合使用促排卵、体外成熟培养和卵泡浆内单精子注射技术,观察卵子的成熟情况以及体内和体外成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率. 结果新鲜移植组和冷冻复苏移植组获卵数均低于对照组(P<0.05),而两移植组间获卵数差异无显著性;各组末成熟卵子所占比率以及未成熟卵子体外成熟后的成熟率间均无显著性差异;各组间体内成熟卵子、体外培养成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率的差异不明显;各组内体内成熟卵子与体外培养成熟卵子相比受精率、卵裂率间无显著性差异,但体外培养成熟卵子囊胚形成率明显低于体内成熟卵子(P<0.05). 结论兔卵巢经冷冻复苏自体移植后,其卵泡能够重新生长发育;通过体外成熟和受精技术,体内和体外成熟卵子均可产生正常的胚胎.提示卵巢组织冻融移植结合辅助生殖技术可作为一种生育力保存的方法.     

冷冻维持温度对大鼠血管组织超微结构的影响

目的：探讨不同维持温度冷冻对血管组织超微结构的影响。方法：以15％ DMSO为低温保护剂，采用两步冷冻保存步骤，设计维持温度为-45℃、-50℃、-55℃、-60℃、-65℃和-70℃，对SD大鼠血管组织进行冷冻预处理后，-196℃液氮保存1周。复温后光镜和透射电镜观察。结果：用维持温度-55℃、-60℃冷冻预处理的血管，经液氮保存、复温，血管组织超微结构保持良好，优于其它温度值的实验组。结论：-55℃～-60℃是适宜血管组织冷冻的维持温度值。     

卵巢组织冷冻保存的研究进展

卵巢冷冻技术可保存卵巢中大量的生殖细胞,将冷冻的卵巢组织解冻移植后可恢复卵巢的内分泌功能和生育能力,是癌症患者保存生育能力的一个理想途径。在该技术中诸多因素,如冷冻保护剂(CPA)、冷冻载体、皮质块大小以及冷冻方法等均影响着卵巢冷冻保存的效果;且目前尚缺乏高效、统一和标准的技术程序,因而限制了该技术在临床和科研中的广泛使用。为优化该技术程序,改善冷冻后卵巢功能的恢复情况,本文对影响该技术使用效果的一些因素进行了论述。     

Caspase抑制剂对冻融卵巢组织的影响

目的研究Caspase抑制剂z-DEVD-fmk对冻融小鼠卵巢组织的影响。方法将15只小鼠随机分为3组：A组（新鲜对照组）、B组（添加z-DEVD-fmk组）和C组（未添加z-DEVD-fmk组）,B组和C组的卵巢组织进行玻璃化冷冻,一部分卵巢皮质组织进行组织学分析,另一部分卵巢皮质组织进行自体移植,手术后1个月后测血清雌二醇浓度和移植物增值细胞核抗原（PCNA）表达率。结果光镜观察发现冷冻组的始基卵泡和初级卵泡的形态正常率均明显低于对照组,B组的始基卵泡和初级卵泡的形态正常率与C组比较无明显差异。然而,B组血清雌二醇浓度高于C组,差异有统计学意义。同样,B组移植物卵细胞和间质细胞PCNA蛋白表达率高于C组。结论实验结果提示：Caspase抑制剂z-DEVD-fmk在卵巢组织冻融过程中具有保护作用。     

人类卵母细胞冷冻技术对其超微结构影响的研究进展

卵母细胞冷冻技术一直是生殖医学领域研究的热点和难点之一.由于结构的特殊性使得卵母细胞对低温敏感,同时由于冷冻保护剂的毒性和冷冻方法不同易导致卵母细胞的结构损害.本文就目前冷冻技术对人类卵母细胞超微结构的影响做一综述.     

不同剂量丹参注射液对冻融小鼠卵巢移植早期组织结构的影响

目的探讨不同剂量丹参注射液对冻融小鼠卵巢移植早期组织结构的影响。方法收集1日龄小鼠卵巢,慢速冻融后移植至F1代8~12周雄鼠的肾被膜下,分生理盐水组和低(0.4ml/kg,n=15)、中(4ml/kg,n=15)、高(40ml/kg,n=15)剂量丹参干预组(n=15),分别于移植后第2天、第7天和第14天回收12组卵巢移植物。观察冻融卵巢组织移植前后的组织形态学及超微结构改变,计数卵泡数量。结果光学显微镜、电子显微镜下观察显示,各组卵巢组织移植后7d卵泡细胞和颗粒细胞结构欠完整,移植后14d卵泡结构恢复正常。移植后14d高剂量丹参组(36.2%)各级卵泡数及卵泡存活率多于中、低剂量丹参组(24.2%、20.5)和生理盐水组(12.6%),差异显著(P0.05)。结论移植早期的缺血缺氧可对小鼠卵巢组织造成比冻融过程更严重的损伤;丹参能促进移植后冻融小鼠卵巢卵泡发育,以高剂量丹参作用最明显。     

卵巢组织冷冻移植在女性生育力保存中的研究进展

医疗技术的发展使得癌症患者的存活率越来越高,但放化疗治疗会导致女性卵巢功能早衰,出现过早绝经甚至丧失生育能力。卵巢组织冷冻保存是保存女性生育力的一种方式,甚至是有些患者唯一的生育力保存的选择。目前在世界范围已有17例婴儿是来自冷冻/解冻-移植后的卵巢组织,这给我们带来了希望,同时也带来了挑战,因为这项技术还存在一定的局限性。目前使用的冷冻方法可以保存卵巢内大量的始基卵泡,但是在移植的初期,因组织缺血缺氧会导致大量的卵泡丢失,影响了移植物的存活,缩减了卵巢组织在体内发挥功能的时间。卵巢组织移植存活程度的影响因素很多,包括移植前个体因素和基础疾病及治疗对卵巢的损伤,冷冻的损伤和移植组织块的大小,移植后血管再生情况等。这篇文章将对卵巢组织冷冻作为女性生育力保存方式的研究进展做一综述。     

不同时段缺血对大鼠血管组织超微结构的影响

目的：探讨不同时段缺血对血管组织超微结构的影响。方法：以15％DMSO为低温保护剂，采用两步冷冻法，对SD大鼠血管进行冷藏缺血和常温缺血实验，时间为1、2、3、4、5、6和8h。动脉标本冷冻维持温度为-55℃，静脉为-60℃，-196℃液氮保存1W。复温后标本透射电镜观察。结果：缺血8h，冷藏组血管组织的内皮细胞轻度肿胀，胞浆内线粒体嵴稀疏或破坏。常温组血管组织的内皮细胞坏死增多，胞膜、核膜破裂，细胞核破坏，残留胞膜，内弹性膜区域性裸露等。结论：冷藏缺血，血管组织的超微结构损伤轻微，表明冷藏能明显延长血管组织的缺血耐受时间。