41例新生儿溶血病患者血型血清学检测结果分析

目的：探讨不同的免疫性血型抗体与新生儿溶血病的关系,为新生儿溶血病提供诊断依据。方法采用微柱凝胶技术对41例新生儿溶血病的患者进行ABO血型、Rh(D)血型、直接抗人球蛋白、游离、放散和不规则抗体筛查及抗体鉴定试验,确定患者体内是否有免疫性IgG抗体及IgG抗体特异性。结果41例新生儿溶血病患者中,ABO血型不合者38例,占92.68%,其中由免疫性IgG抗原A抗体引起者21例,由免疫性IgG抗原B抗体引起者17例。Rh血型不合者3例,占7.32%,其中2例由抗-D引起,1例由抗-E引起。41例新生儿溶血病的患者中,直接抗人球蛋白试验阳性者20例,阳性率为48.78%,游离试验阳性者36例,阳性率为87.80%,放散试验阳性者41例,阳性率为100%。结论母婴血型不合的新生儿溶血病主要发生于ABO血型系统,以母亲为O型,患者为A型或B型最为常见;放散试验对新生儿溶血病的诊断最有价值。     

孕妇及胎儿Rh(D/E)免疫性溶血病的诊断与血液治疗

目的：探讨孕妇及胎儿Rh（D/E）血型不合的免疫性溶血病的治疗,预防孕妇早孕自然流产或不足月死胎.方法：用大量去除血浆和换血疗法对孕妇及胎儿或新生儿Rh（D/E）血型不合者进行治疗,以降低IgG抗D/E的含量,提高胎儿或新生儿的成活率.结果：2例孕妇及胎儿Rh（D）血型不合者去除血浆前IgG抗-D分别为512和1 024,去除血浆3周后,IgG抗-D效价降至16和32,以后间断性的治疗,减少治疗频率,保持IgG抗-D≤64,置足月行剖宫术,产下正常男、女婴儿各1名;1例Rh（E）血型不合者未经治疗而胎死宫内;另1例Rh（D）新生儿溶血病（HDN）经换血治疗而得救.1年后随访,3例婴儿发育均良好,与正常婴儿无差异.结论：大量去除血浆,同时补充高蛋白饮食是治疗孕妇及胎儿RhD/E血型不合的免疫性溶血病的好方法,换血疗法是HDN治疗的最佳选择.     

新生儿溶血病Rh血型免疫性抗体检测的分析

目的:探讨母婴Rh血型不合免疫性抗体的特异性及其效价对新生儿溶血病(HDN)的影响。方法:采用血型血清学检测技术对母婴进行ABO及Rh血型鉴定,对15例母婴Rh血型不合HDN患儿的血标本进行直接抗球蛋白试验、抗体游离试验和抗体放散试验,采用间接抗球蛋白试验对患儿及其母亲的血清进行ABO以外血型不规则抗体筛选、特异性鉴定及效价测定。结果:在15例Rh HDN患儿中检出抗-D 4例(26.7%),抗-E 6例(40.0%),抗-cE 3例(20.0%),抗-Ce 2例(13.3%);Rh血型免疫性IgG抗体效价为1∶8～1∶128。结论:产前对孕妇夫妇进行ABO、Rh血型鉴定及Rh血型免疫性抗体筛查及特异性鉴定,产后对患儿及时进行检测诊断和治疗,对减少HDN患儿的受害程度和保证优生优育均有重要的临床意义。     

夫妇血型不合的孕妇产前免疫性抗体检测分析

目的:探讨夫妇血型不合的孕妇免疫性IgG抗体效价异常率及临床意义, 观察凝聚胺法(MPT)检测孕妇血清中IgG抗A(B)及Rh血型抗D抗体的灵敏度和特异性.方法:常规检测夫妇ABO及RhD血型, 对夫妇ABO及Rh血型不合的孕妇血清进行不规则抗体筛选及特异性鉴定;用MPT法检测孕妇血清中IgG抗A(B)及Rh抗D抗体效价.结果:在986例夫妇ABO血型不合的孕妇血清中, MPT法检出IgG抗A(B)效价≥1∶ 64者528例(53.5%), 传统试管法检出512例(51.9%), 两者比较无统计学意义(P＞0.05);在15例RhD阴性孕妇中检出抗D抗体11例(73%).结论:产前对夫妇进行ABO、 RhD血型及IgG抗A(B)和抗D效价检测, 发现异常及时进行治疗, 可减少母婴血型不合新生儿溶血病的发生率;MPT法检测IgG抗A(B)及抗D抗体效价, 操作简便, 结果准确.     

新生儿溶血病ABO血型免疫性抗体检测分析

目的:探讨血型免疫性IgG抗体对母婴ABO血型不合新生儿溶血病的影响.方法:采用抗人球蛋白法、微柱凝胶法对临床有新生儿高胆红素血症的患儿进行血型血清学检测,对母婴ABO血型不合的患儿血标本进行直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验和抗体放散试验,检测免疫性IgG抗体的特异性.结果:在476例临床有新生儿高胆红素血症的患儿中,由母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病为59.5%(283/476).其中直接抗人球蛋白试验阳性率为31.4%(89/283),抗体游离试验阳性率为79.5%(225/283),抗体放散试验阳性率为100%(283/283);在283例ABO新生儿溶血病中,由IgG抗A引起者占48.1%(136/283),由IgG抗B引起者占51.9%(147/283).结论:ABO血型为A型或B型的分布与新生儿溶血病的发病率无显著性差异.     

母婴血型不合HDN患儿致敏红细胞的抗体特异性

目的:调查母婴血型不合新生儿溶血病(HDN)患儿致敏红细胞的抗体特异性,比较不同抗体致敏新生儿红细胞所致HDN的血型血清学特征.方法:对黄疸新生儿,鉴定母婴血型,做新生儿红细胞直接抗球蛋白试验(DAT),检测母婴血浆及新生儿红细胞放散液中可致敏新生儿红细胞的血型抗体以诊断HDN.结果:血型血清学诊断为HDN的252例患儿中,致敏红细胞的抗体分别为:抗-A 40例、抗-B 40例、抗-A 抗-AB 92例、抗-B 抗-AB 65例、抗-AB 4例、抗-A 抗-M 1例、抗-M 3例、抗-c 1例、抗-cE 1例、抗-E3例、抗-D 2例;由ABO血型抗体及抗-M所致HDN者DAT多为阴性或弱阳性,由Rh血型抗体致HDN者DAT均为强阳性,ABO、Rh血型抗体及抗-M致HDN患儿红细胞热放散液中致敏红细胞的抗体效价均高于血浆游离抗体.结论:被调查的HDN患儿绝大多数由来自O型母亲的IgG抗-A、抗-B及抗-AB所致,其次为抗-M及抗-E,由抗-D引起的HDN呈逐步减少的趋势.     

IgG抗-D致新生儿溶血病七例分析

目的 了解IgG抗-D抗体与新生儿溶血病关系。方法 采用盐水法检测患儿和其父母Rh血型，采用直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验检测ABO以外的抗体，采用微柱凝胶间接抗人球蛋白试验进行抗体鉴定。结果 通过母婴血型血清学检查，检出IgG抗-D7例。结论 一旦证实有IgG抗-D，及时为新生儿溶血病患儿选择相合的血液进行换血和综合治疗，其疗效显著。     

Rh新生儿溶血病21例分析

目的对21例Rh新生儿溶血病血清抗体进行回顾性分析。方法采用盐水试管法检测患儿和母亲ABO及Rh血型,采用直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验检测患儿新生儿溶血病,采用微柱凝胶间接抗人球蛋白试验对患儿及母亲血清进行不规则抗体鉴定。结果 21例Rh新生儿溶血病中,抗-D引起16例(占76.2%),抗-E引起3例(占14.2%),由抗-E和抗-c联合引起1例(占4.8%),由抗-c引起1例(占4.8%)。结论为预防新生儿溶血病发生,应推广孕妇产前Rh血型及不规则抗体筛查,换血仍是治疗新生儿溶血病主要方法。     

孕期夫妇血型血清学检测与新生儿溶血病关系的探讨

目的探讨HDN血型血清学检测结果与新生儿溶血病关系。方法采用血清学方法对1680对夫妇进行ABO 及Rh(D)血型鉴定。对妻O型夫非O型者再进一步作IgG抗A(B)效价测定及抗体特异性鉴定。对Rh(D)阴性者, 查抗D IgG抗体。对产前夫妻ABO血型不合,IgG抗A(B)抗体效价≥64或有抗D抗体者,所生新生儿结合临床作ABO 及Rh血型鉴定,Combs实验,游离抗体和抗体释放实验。以验证产前IgG抗体效价与新生儿溶血病的关系。结果 1680 对夫妇中,妻O型,夫非O型者472对,占27．5％;妻Rh(D)阴性5例,占0．30％;夫妻血型不合者不规则抗体2例占 0、42%。有流产史IgG抗A(B)抗体效价>64占夫妻血型不合者24．8％。135例IgG抗A(B)效价≥64或有抗D抗体者,因母婴型不合而发病者,占32．8％。结论 1．夫妻血型不合引起的IgG抗体效价的高低,与流产次数呈正相关趋势。 2．产前IgG抗体效价高低与产后新生儿溶血病的发病率率一致。     

Rh血型鉴定及其免疫性抗体筛查对新生儿溶血病早期诊断的临床价值分析

目的:探讨Rh血型鉴定及其免疫性抗体筛查在新生儿溶血病早期诊断中的价值及临床意义.方法:选取15例2020年8月～2021年8月我院就诊的Rh系统血型不合新生儿溶血病患儿及其母亲,均进行ABO血型鉴定及Rh血型鉴定,对患儿血标本行抗体筛查三项,对血清、放散液行不规则抗体筛选实验.结果:经血型鉴定结果显示,母婴ABO血型一致10例(66.67％),患儿经抗体筛查三项实验均呈阳性,其中抗体放散实验、游离抗体检测显示ABO血型系统外存在不规则抗体,经直接抗人球蛋白实验呈阳性(3+～4+),母血清IgG抗-D效价(128～2048),IgG抗-E效价(64～256),患儿血清中游离IgG抗-D效价位于2～512间,IgG抗-E效价位于4～32间.结论:Rh血型鉴定及其免疫性抗体筛查实验对于早期诊断Rh、ABO系统溶血病具有重大意义,为临床早期诊断、输血及换血治疗时抗体选择提供可靠依据.     

在孕9周前检测孕妇外周血中胎儿的性别

目的：评价使用孕妇外周血中的胎儿细胞和游离DNA进行无创伤性产前诊断的可能性。方法：研究对象为150名孕5－9周的孕妇。使用淋巴细胞分离液和3％的明胶分离胎儿细胞。使用荧光定量PCR（FISH）检测母血中胎儿细胞Y染色体的末端。同时使用巢氏PCR和荧光定量PCR（FQ-PCR)检测150名孕妇血浆中的胎儿SRY基因。结果：FISH,巢氏PCR以及FQ-PCR三种方法的敏感性分别为73.2％，78％和85.4％，特异性分别为96.2％，100％和100％。使用FISH，最早在孕49天检测到胎儿细胞，使用巢氏PCR和FQ-PCR最早在孕49天和42天检测到孕妇血浆中的胎儿游离DNA.结论：三种方法对无创伤性产前诊断都是适合的。但其中FQ-PCR因其检测时间较早而成为最优选择。     

用实时荧光定量PCR方法检测母血中的胎儿SRY基因

目的　从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA ,并加以鉴定 ,预防X连锁遗传病患儿的出生。方法　从孕早期、中期共 3 0 0名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA ,用实时荧光定量聚合酶链反应 (fluorescencequantitativepolymerasechainreaction ,FQ PCR)的方法检测其中的Y性别决定区 (sex determiningregionY ,SRY)基因。结果　孕早期怀男胎的孕妇 82名 ,70名SRY基因阳性 ,其平均浓度为 ( 5 8.82± 2 0 .90 )拷贝 /ml,中位数为 5 8.5 0拷贝 /ml。孕中期怀男胎的孕妇 90名 ,SRY基因均为阳性 ,平均为 ( 15 2 .0 8± 62 61)拷贝 /ml,中位数为 14 9.3 5拷贝 /ml。怀女胎的孕妇均为阴性。结论　用实时荧光定量PCR的方法最早在孕42天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因 ,随孕周的增加 ,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。     

Non-invasive antenatal RHD typing.

The existence of cell free fetal DNA, derived from apoptotic syncytiotrophoblast, in the maternal circulation has opened new possibilities of non-invasive prenatal diagnosis. Although still some technical problems exists, especially the lack of a generic positive control on the presence of fetal DNA and the aspecific amplification of background maternal DNA, non-invasive prenatal RHD typing has been successfully introduced in several laboratories, especially in Europe. The diagnostic accuracy reaches>99%. In the Netherlands PCR guided administration of antenatal anti-D prophylaxis is cost-effective and nearby. In this review the main characteristics and applications of cell free fetal DNA are discussed, with an emphasis on prenatal RHD genotyping.     

中国汉族人群中发现一例Rh血型弱D59型CSCD

【摘要】目的鉴定中国汉族人群中发现的1例Rh血型弱D59型。方法采用常规血清学试剂对筛查出的D变异型血型做血清学鉴定,结合12种单克隆抗体对该标本RHD抗原表位进行确认;使用PCR-SSP法对弱D型进行基因分型。对RHD基因的10个外显子及侧翼序列进行测序并分析其杂合性。结果在该标本中发现等位基因C．1148T〉C,其血清学反应格局符合弱D表型。RHD合子型鉴定其为RHD＋／RHD-杂合型。结论该先证者为中国人群中首次发现的弱D59型。     

孕妇血浆中胎儿DNA的检测

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是遗传病非损伤性产前诊断的主要思路与探索途径。尽管在孕妇外周血中服地细胞的富集,鉴定,和遗传病的非损伤性产前诊断等方面取得了一些重要的进展,但是利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传病非损伤性产前诊断的主要障碍依然是胎儿细胞的富集效率不高,而过高的的母体背景影响检测胎儿特异等位基因。最近发现在孕妇的血浆中存在胎儿DNA,这一发现为非损伤性产前基因诊断开辟了新途径。我们结合煮沸法与硅法,建立了一种有效的,简便的,经济的从血浆中提取DNA的方法,通过调整PCR系统组成,增加循环次数,成功地从母体血浆中扩增出胎儿特异的SRY基因,同时采取严格的防污染措施,避免了假阳性或假阴性结果。我们的结果表明,应用我们建立的血浆DNA提取方法与调整的PCR系统,在孕早期可以准确地确定胎儿的性别,这对于性连锁疾病的非损伤性产前诊断具有重要意义。我们的工作为我国非损伤性产前诊断研究的开展与深入打下基础。     

Rh阴性孕妇外周血基因鉴定胎儿RhD血型的方法

目的建立可靠有效的检测孕妇外周血中胎儿游离DNA的方法,探讨其在非创伤性产前诊断中的价值。结论采用PCR技术对5例RhD阴性孕妇外周血血浆DNA进行分析,然后对出生后婴儿脐带血进行Rh血清学表型分析,回顾性评价无创性预测胎儿RhD基因分析的准确性。结果 5例RhD阴性血浆标本扩增出180bp与156bp两条特异性片段,产后新生儿脐血血清学检测结果为RhD阳性,与PCR检测结果完全吻合。结论孕妇外周血浆中胎儿游离DNA的测定能实现对胎儿RhD基因型的预测判定。孕妇外周血检测胎儿DNA可应用于非创伤性产前诊断。     

不同妊娠状态下孕妇外周血中游离胎儿DNA定量分析

目的对不同妊娠状态下孕妇外周血中游离胎儿DNA(f DNA)定量分析,确定其平均浓度及临床参考值范围,初步探讨在不同妊娠状态下母血中f DNA的浓度变化,为临床应用提供科学依据。方法从孕妇外周血浆中提取fDNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测其中Y性别决定区的SRY基因。结果在正常早期的孕妇组38例血浆标本中有32例检测到SRY基因,其平均浓度149.25拷贝数/ml,参考值范围为33.28~265.22拷贝数/ml;在正常晚期的孕妇组32例血浆标本中全部检测到SRY基因,其平均浓度为212.14拷贝数/ml,参考值范围为142.76~281.52拷贝数/ml;在晚期患有子痫前期的孕妇30例血浆标本中全部检测到SRY基因,其平均浓度为678.70拷贝数/ml,参考值范围为595.01~726.40拷贝数/ml。实验数据用单因素方差分析,组间差异显著性检验用LSD-t检验。妊娠晚期孕妇血浆中f DNA的含量较妊娠早期升高,约为1.4倍,有统计学意义(P<0.01);晚期患子痫前期的孕妇血浆f DNA的水平是同期正常对照组的3.9倍,有统计学意义(P<0.01)。结论1.用FQ-PCR法最早在孕48天孕妇外周血中即可检测到fDNA。2.随着妊娠的进展孕妇血浆中f DNA的含量升高。3.晚期患子痫前期孕妇其血浆f DNA的水平是同期正常对照组的3.9倍,有统计学意义(P<0.01)。4.f DNA在进行无创伤性产前诊断中有重要价值。     

长距离PCR在血友病A携带者检测和产前诊断中的应用

目的　建立一种重型血友病 A(hemophilia A,HA)携带者检测和产前诊断方法。方法　选择有重型 HA家族史的 2 5例 HA携带者 ,采用长距离 DNA扩增 (long distance- PCR,L D- PCR)技术 ,直接检测是否存在凝血因子 (factor ,F )基因倒位。对 L D- PCR基因诊断阳性携带者于妊娠 2 0～ 2 4周抽取夫妻静脉血和胎儿脐静脉血 ,应用 Bigg's一期法检测血浆凝血因子 F 活性 (F ∶C) ,EL ISA法检测血浆血管性血友病因子 (von Willbrand factor,v WF)浓度 ,进一步应用 L D- PCR技术进行产前诊断。应用DNA测序技术验证 L D- PCR结果。结果　在 2 5个无亲缘关系的重型 HA家系中查出 F 基因倒位携带者 8例 ,其中对 4例 L D- PCR基因诊断阳性的携带者进行了产前诊断 ,2例确诊胎儿为 HA患者而建议终止妊娠 ,另 2名为正常胎儿 ,随访 1年 ,小儿发育正常。结论　应用 L D- PCR技术结合携带者外周静脉血及胎儿脐血血浆 F ∶ C和 v WF∶Ag浓度可准确、快速进行重型 HA患者的诊断及其携带者的产前诊断 ,防止血友病患儿的出生     

Pyruvate kinase in fetal plasma and amniotic fluid unsuccessful for the prenatal diagnosis of Duchenne muscular dystrophy

A specific spectrophotometric assay of muscle-pyruvate kinase (M-PK) was used to measure the activity of this isozyme in fetal muscle, fetal plasma and amniotic fluid at about 17–24 wk of gestational age to assess its predictive value for the prenatal diagnosis of Duchenne muscular dystrophy (DMD). Fetal muscle obtained after termination was found to contain a high M-PK specific activity. No significant activity was detected in amniotic fluid from normal or at-risk fetuses. Pure fetal blood was obtained in utero by fetoscopy; significant plasma levels of M-PK activity were measured in a series of control samples, but at-risk fetal plasma contained no higher levels. We conclude that M-PK is of no use for the prenatal diagnosis of DMD.     

Recent developments in fetal nucleic acids in maternal plasma: implications to noninvasive prenatal fetal blood group genotyping.

The discovery of circulating cell-free fetal DNA in maternal plasma has opened up new possibilities for noninvasive prenatal diagnosis. Fetal DNA in maternal plasma has been used for the noninvasive prenatal determination of the RhD status of fetuses carried by RhD-negative pregnant women. In such analysis, the possible need of an internal control for the presence of detectable amounts of fetal DNA in a particular maternal plasma sample has been actively discussed. Recently, the development of a robust method for discriminating single nucleotide differences in plasma DNA using single allele base extension reaction (SABER) followed by matrix-assisted laser-desorption and ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has opened up the possibilities of using a panel of single nucleotide polymorphisms as such a positive control. A second approach is the recent successful development of fetal epigenetic markers which can be developed into universal fetal DNA markers. These developments hold promise to allow the eventual widespread utilization of maternal plasma DNA analysis for the noninvasive prenatal diagnosis of blood group mismatches between the mother and fetus.