应用QF-PCR技术研究孕妇血浆中胎儿游离DNA与染色体非整倍体妊娠的关系

目的孕21三体胎儿孕妇血浆中胎儿游离DNA水平明显高于正常孕妇,该研究旨在评价妊娠时期孕妇血浆中胎儿游离DNA作为筛查唐氏综合征指标的意义及可行性。方法应用荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测怀孕唐氏综合征男胎孕妇和孕正常男胎孕妇血清中胎儿游离DNA的水平。15例孕唐氏综合征男胎孕妇和25例孕正常男胎孕妇及10例孕正常女胎孕妇参与该项研究。结果孕唐氏综合征孕妇血清中胎儿游离DNA水平为185.8基因当量/ml,明显高于正常组(81.9基因当量/ml),P=0.005。结论孕唐氏综合征男胎孕妇血清中胎儿游离DNA含量明显高于正常组,提示荧光定量PCR技术检测孕期母血中胎儿游离DNA水平可能成为筛查唐氏综合征的一个有效指标。     

孕妇血浆游离DNA在唐氏综合征筛查中的应用

目的探讨孕妇血浆游离DNA定量检测在唐氏综合征筛查中的价值。方法采用实时定量荧光PCR检测孕中期孕妇,唐氏综合征高危孕妇的血浆中3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)及男性特有Y性别决定区(sex determ in ingregion Y,S R Y)基因。结果孕中期、唐氏综合征高危孕妇GAPDH拷贝数均值分别为(4.28±1.36)×103copy/m l,(3.08±1.67)×104copy/m l;孕中期、唐氏综合征高危孕妇的SRY拷贝数均值分别为174.02±98.56 copy/m l、1065.01±588.72 copy/m l。孕中期和唐氏高危孕妇血浆游离DNA含量有显著性差异。结论孕妇血浆游离DNA的定量分析在唐氏综合征筛查中有重要的价值。     

妊娠期高血压疾病孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测

目的探讨实时荧光定量PCR（RQ—PCR）检测孕妇外周血中胎儿游离DNA对预测及预防妊娠期高血压疾病的应用价值。方法选15例子痫前期孕妇及正常孕妇20例，用RQ—PCR法检测各例血浆中GAPDH及SRY水平，通过2^-△△ct法分析两组孕妇间的差异。结果22例孕男胎检出SRY21例，13例孕女胎均未检出，子痫前期组胎儿DNA水平明显高于正常组（P=0．009），两者比值为3．57。结论RQ—PCR法检测孕妇外周血中胎儿DNA可作为预测及预防妊高征的一种有效手段。     

妊娠期糖尿病孕妇外周血中胎儿游离DNA-SRY的检测

目的探讨孕妇外周血中游离胎儿DNA水平在诊断及预防妊娠期糖尿病(GDM)中的应用价值。方法用血浆DNA抽提法提取30例孕中晚期孕妇外周血中胎儿游离DNA(其中病例组10例,对照组20例),通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测两组胎儿DNA-SRY含量水平。结果14例孕男胎均出现SRY阳性信号,妊娠期糖尿病组孕妇外周血中胎儿游离DNA-SRY水平明显高于对照组,P<0.05(=0.019)。结论妊娠期糖尿病孕妇外周血中游离胎儿DNA水平的异常升高有望成为预测及诊断GDM发病与疾病程度的一项有效指标。     

妊娠糖尿病孕妇外周血中胎儿游离DNA的定量检测

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论,探讨其在诊断及预防妊娠期糖尿病（GDM）中的应用价值。方法用血浆DNA抽提法提取62例孕中晚期孕妇外周血中胎儿游离DNA（其中病例组32例,对照组30例）,通过实时荧光定量PCR（RQ-PCR）法检测两组孕妇外周血胎儿DNA浓度。结果 39例孕男胎均出现SRY阳性信号,妊娠期糖尿病组孕妇外周血中胎儿游离DNA-SRY水平明显高于对照组（P〈0.05）。结论妊娠期糖尿病孕妇外周血中游离胎儿DNA水平的异常升高有望成为预测及诊断GDM发病与疾病程度的一项有效指标。     

血浆游离DNA定量检测在产前诊断中的应用效果及基因分析研究

目的探讨对产妇进行血浆游离DNA定量检测的效果以及基因分析。方法选取我院孕晚期孕妇、唐氏高危孕妇、孕中期孕妇以及正常女性各22例,共88例,从其血浆中将游离的DNA分离出来,应用荧光PCR对SRY(仅男性含有的Y性别决定基因)、GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶基因)进行检测,统计并比较其检测的准确率、特异性、敏感度。结果孕中期孕妇与正常女性体内GAPDH的含量未出现明显差异(P0.05),唐氏高危与孕晚期孕妇体内的GAPDH含量显著高于孕中期孕妇与正常女性(P0.05);唐氏高危以及孕晚期孕妇的SRY含量无明显差异(P0.05),唐氏高危与孕晚期孕妇SRY含量显著高于孕中期孕妇(P0.05);孕晚期孕妇的检测准确率、特异性、敏感度显著高于唐氏高危与孕中期孕妇(P0.05)。结论孕妇在产前对血浆中游离的DNA进行定量检测的效果显著,有利于产前进行无创伤的性别检测,在唐氏筛查方面具有重要意义,值得在临床上推广和应用。     

孕妇外周血游离DNA检测联合孕中期三联筛查在唐氏综合征中的应用

目的探讨目前唐氏综合征(DS)孕中期无创胎儿DNA检测联合母血清三联筛查(AFP、Freeβ-HCG和uE3)的临床有效性。方法采用全自动时间分辨荧光免疫分析仪对妊娠14～20w妇女进行血清游离雌三醇(uE3)、甲胎蛋白(AFP)、游离绒毛膜促性腺激素β亚基(Freeβ-HCG)检测。分析计算胎儿发生唐氏综合征(Downsyndrome,DS)的危险概率并随访妊娠结局,对阳性者检测其外周血DNA。结果 5512例孕中期妇女经唐氏筛查,筛查阳性率为3.9%(215/5512). 215例高危孕中期孕妇进行外周血游离胎儿DNA检测发现染色体数目异常14例,4例结构异常,检测准确率为100%。外周血游离胎儿DNA检测结果显示21-三体综合征12例、18-三体综合征4例、13-三体综合征2例,与染色体核型分析结果符合率均为100%。结论对大样本妊娠中期孕妇进行唐氏筛查可及早发现高危孕妇,对高危孕妇进一步实施外周血游离胎儿DNA检测,可有效地减少出生缺陷的发生。     

母体循环中胎儿游离DNA的定量分析

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论，从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定，预防x连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期共78名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA，用实时荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ—PCR）的方法检测其中的Y性别决定区（sex—determining region Y，SRY）基因。结果孕早期怀男胎的孕妇28名，25名SRY基因阳性，其平均浓度为（58．82±25．22）拷贝／ml；孕中期怀男胎的孕妇20名，SRY基因均为阳性，平均为（152．08±62．61）拷贝／ml；怀女胎的孕妇均为阴性。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕62天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因，随孕周的增加，母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值。     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测在早产预测中的价值

目的探讨孕妇外周血中的游离胎儿DNA检测的可行性及其水平变化在早产预测中的价值。方法普通PCR检测17例先兆早产孕妇和20例正常孕妇血浆中Y染色体性别决定基因(SRY),继应用荧光定量PCR技术对有SRY基因表达者的胎儿DNA水平进行定量分析并进一步比较早产孕妇组和正常孕妇组间DNA水平的差异。结果17例先兆早产患者及20例对照组中各有9例、10例出现SRY阳性信号。先兆早产组的胎儿DNA水平明显高于正常对照组(P<0.01)。结论孕妇外周血中的游离胎儿DNA可望作为预测早产的指标之一。     

荧光定量PCR检测孕妇外周血中游离胎儿DNA在子痫前期中的价值

目的探讨孕妇外周血中的游离胎儿DNA水平作为子痫前期预测指标的可能。方法普通PCR检测子痫前期孕妇22例和正常孕妇25例的血浆中Y染色体性别决定基因（SRY）,然后应用荧光定量PCR技术对有SRY基因表达者的胎儿DNA水平进行定量分析并比较子痫前期孕妇组和正常孕妇组胎儿DNA水平的差异。结果22例子痫前期患者及25例对照组中各有12例出现SRY阳性信号。子痫前期组的胎儿DNA水平明显高于正常对照组（P〈0.01）。结论孕妇外周血中的游离胎儿DNA可望作为预测子痫前期的指标之一。     

唐氏综合征孕中期产前筛查及产前诊断的临床价值

目的探讨唐氏综合征的产前筛查和产前诊断在预防出生缺陷中的价值。方法对68813例孕15-20w的孕妇采用时间分辨荧光免疫方法检测血清AFP和B-HCG浓度,通过Maiticale软件计算危险系数,对唐氏高危和18-三体高危孕妇取羊水获脐血作染色体诊断,对神经管缺陷（NTD）高危孕妇行系统超声检查。结果筛查68813例孕妇,其中2632例为唐氏综合征或18-三体综合征高分险病例,占总筛查人数的3.82%;NTD高风险542例,占0.79%。接受羊水或脐血染色体检查1772例（占总阳性数的67.32%）,检出异常核型67例,占异常发生率3.78%;NTD高风险行超声检查证实胎儿畸形58例,占筛查高危孕妇的10.7%。结论孕中期产前筛查结合产前诊断可以有效预防出生缺陷的发生。     

Down′s综合征：妊娠中期的早期静脉导管血流波形测定与B超筛查的价值初评

目的评价妊娠中期的早期静脉导管血流波形测定与妊娠中期遗传学超声指标与Down′s综合征的关系。方法对239例在复旦大学附属妇产科医院产科门诊登记建卡的孕妇采用GE730超声多普勒仪进行妊娠中期的早期静脉导管血流波形测定与中期妊娠遗传学超声检查和B超排畸筛查,并建议有异常发现者行羊水穿刺染色体检查。所有孕妇均追踪随访至分娩。采用的统计方法为Bayes判别函数分析和方差分析。结果239例受检孕妇中有154例接受妊娠中期的早期静脉导管血流波形测定,157例进行妊娠中期B超筛查,接受羊水穿刺染色体检查者106例,其中有2例为Down′s儿,行中期引产。B超筛查中发现胎儿颈项软组织增厚14例,肠管回声增强6例,脉络膜囊肿7例,心室强光点5例,肾盂增宽5例,胎儿水肿1例。采用Bayes判别函数分析进行统计分析时,仅心室强光点和胎儿水肿可纳入判别分析方程。结果为：正常：Y=0.705＋1.024×心室强光点;Down′s：Y=-54.538＋43.691×心室强光点＋128×胎儿水肿。利用这两个判别函数式可直接计算新检孕妇属于各类的评分,得分最高的一类即该孕妇属于的相应类别。对16例静脉导管血流波形测定的组内变异采用方差分析,无明显统计学差异。结论中期妊娠遗传学超声筛查有利于发现Down′s儿,结合判别分析函数方程可指导是否应该羊水穿刺。     

怀化地区7859例孕中期唐氏筛查和产前诊断结果分析

目的探讨孕中期唐氏筛查和产前诊断对检出胎儿染色体异常和妊娠不良结局的临床价值。方法应用时间分辨荧光免疫法对7859例孕中期(14-20周)妇女进行血清标记物三联方案(hA;FP+free-β-hCG+uE3)检测。筛查结果应用Multical软件计算21三体、18三体综合征和开放性神经管畸形的风险(rish)概率。对于高风险孕妇经遗传咨询,知情同意,自愿选择行产前诊断,于孕18-24周左右在超声引导下进行羊膜腔穿刺,抽取羊水培养进行胎儿染色体核型分析。并继续追踪胎儿和孕妇情况。结果在7859例孕妇中,筛查到高风险732例,唐氏筛查阳性率为7.65%(601/7859)。其中367例接受羊水或脐血穿刺产前诊断,占筛查高风险孕妇的50.13%(367/732);发现胎儿染色体异常16例,异常检出率4.36(16/367),其中6例唐氏综合征、5例18-三体综合征、4例Turner’s综合征、1例9号染色体臂间倒位。唐氏筛查高风险和低风险组不良妊娠结局分别为6.15%和1.46%,呈显著性差异(<0.05)。结论孕中期产前筛查是预测异常胎儿和不良妊娠结局的有效指标。结合羊水培养或脐血培养等产前诊断技术和方法,对预防先天缺陷儿出生、提高人口素质有重要临床应用价值。     

1026例孕中期妇女唐氏综合征和神经管缺陷的血清筛查及细胞染色体分析

目的：探讨孕中期妇女（14～20）周外周血甲胎蛋白（AFP）和游离绒毛膜促性腺激素（f-βHCG）在胎儿唐氏综合征（Down’s syndrome,DS）产前筛查中的作用。方法：应用免疫化学发光法分别检测1026例孕中期孕妇血清AFP和f-βHCG浓度,结合母龄、孕周和体重等因素,用筛查软件计算风险系数,对DS高危孕妇进行羊水细胞染色体核型分析,神经管缺陷（NTD）高危孕妇行B超检查。结果：筛查的1026例孕妇中,DS高危孕妇64例,阳性率6.2%,NTD高危孕妇9例,阳性率0.88%。在高危孕妇中发现4例胎儿染色体异常,1例经B超检查确诊为神经管畸形。两组异常胎儿染色体检出率有显著性差异（P〈0.01）,35岁或35岁以上孕妇组胎儿异常发生率高于35岁以下孕妇组（P〈0.01）。结论：利用DS筛查结合B超产前诊断,能够提高胎儿先天性缺陷的早期发现和诊断。     

5694例单胎中孕期唐氏征血清学筛查效果分析

目的探讨孕中期唐氏征血清学筛查在检出胎儿21-三体综合征的临床应用价值,对本实验室中期唐氏征血清学筛查进行效果分析。方法采15-20^＋6孕妇静脉血进行唐氏中期三联筛查,高风险结果无创产前筛查或直接产前诊断,电话随访妊娠结局。结果唐氏征血清学筛查共检出2卜三体高风险病例379例,羊水细胞染色体核型分析共确诊胎儿21-三体综合征7例,18-三体综合征3例,13-三体综合征1例,嵌合体1例,其他染色体结构异常3例。随访结果唐氏征筛查高风险病例中,B超胎儿畸形的发生率明显高于低风险人群。结论中孕期唐氏征血清学筛查在检出胎儿21-三体综合征和B超结构异常病例中具有临床应用价值,本实验室21-三体筛查假阳性率6．5％（371／5686）,检出率62．5％（5／8）。     

5933例孕中期母血清产前筛查回顾性分析与诊断

目的探讨孕中期母血清三联筛查法的临床意义及了解枣庄地区21-三体综合征（唐氏综合症）、18-三体综合征及NTD（神经管畸形）的发病率,旨在促进枣庄市产前筛查工作的更好开展。方法采用时间分辨荧光免疫分析法（DELFIA）对枣庄市产前诊断中心自2012年10月至2013年10月采集的5933个标本进行三联法孕中期母血清产前筛查。结果5933例孕妇中446例高风险,总体高风险率是7.5%;其中21-三体综合征高风险324例,高风险率是5.5%;18-三体高风险101例,高风险率是1.7%;NTD高风险21例,高风险率是0.4%。在自愿以及知情基础上经遗传咨询后有164例高风险孕妇行产前诊断,共确诊8例,确诊率是4.8%,其中21三体综合征4例,NTD 2例,畸胎瘤1例,三X综合征1例。结论结果表明孕中期母血清三联筛查法对于预测胎儿染色体病具有重要临床价值,可有效降低新生儿出生缺陷的发生;扩大产筛覆盖率,对实施出生干预工程,提高出生人口素质有重大意义。     

AIRE基因在21-三体综合征无创性产前诊断中应用的可行性研究

目的利用AIRE基因母、胎间差异甲基化,探讨其在无创性产前诊断21-三体综合征患儿中的应用价值。方法随机选择健康的孕妇、非妊娠妇女、21-三体妊娠的孕妇血浆、血细胞、绒毛和胎盘组织,利用甲基化敏感限制性内切酶法,酶切后进行常规PCR检测目的基因AIRE的甲基化模式,分析其影响因素。结果AIRE基因在非妊娠妇女的血细胞和血浆中及妊娠妇女的血细胞中均未甲基化,而在孕妇血浆中高甲基化,且与孕妇绒毛组织和胎盘组织AIRE基因甲基化状态相同,两组间甲基化率差异显著有统计学意义（P〈0．0001）。且母胎间差异甲基化不受孕妇年龄、孕周和胎儿性别的影响。孕早、中、晚期孕妇血浆中甲基化检出率分别为87％、97％、97％稍有不同,但无统计学意义。21-三体妊娠妇女血浆中游离胎儿DNA浓度约为正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的2倍。结论在母体和胎儿DNA中AIRE基因甲基化有显著差异,可作为孕妇血浆中胎儿游离DNA表观遗传学标记,有望进行21-三体综合征的无创性产前诊断。