骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法，以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质，以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白，显色后用PDQuest7．4软件分析电泳图谱，比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示：通过优化样品制备和电泳中的实验环节，获得了蛋白点分离清晰的图谱，平均蛋白点数为780±73，重复实验所得蛋白点匹配率为82±5％。结论：成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法，该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。     

胚胎大鼠神经干细胞双向凝胶电泳方法的建立

背景:神经干细胞是当今研究热点,双向电泳是蛋白质组学研究的技术基础,有必要建立稳定的神经干细胞蛋白质组双向凝胶电泳技术体系.目的:通过对神经干细胞双向凝胶电泳几个关键步骤的分析,建立稳定、重复性好的神经干细胞双向凝胶电泳的分离方法.方法:采用无血清体外细胞培养方法,培养胚胎大鼠神经干细胞并进行鉴定.提取样品蛋白并裂解,被动水化,采用不同IEF参数,使用PDQuest8.0软件对图谱进行分析和比较.观察不同等点聚焦参数下双向电泳图谱质量,蛋白质点的数目及重复性.结果与结论:不同IEF参数条件下的双向电泳图谱的质量有所不同,增加低电压的除盐步骤有助于去除电泳胶图上的横纹.在80 000 Vh聚焦总能量下,获得较理想的电泳图.通过选用适当的IEF参数.建立了适当的神经干细胞双向凝胶电泳方法.     

成年无精子症男性睾丸活检组织双向电泳分析技术的初步建立及其优化

目的:建立并优化成年无精子症男性睾丸活检组织双向凝胶电泳图谱.方法:采用固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳分离技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析双向凝胶电泳技术(2-DE)图谱.对聚焦参数的设置和样品的处理等步骤进行优化.结果:优化后成功地获得了成年无精子症男性睾丸活检组织分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.结论:应用2-DE初步建立了成年无精子症男性睾丸活检组织分辨率较高且重复性好双向凝胶电泳图谱,为从睾丸蛋白质组学水平进一步研究无精子症奠定了基础.     

家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

背景:家兔血清是基础研究中常用的实验样品,双向凝胶电泳是蛋白质组学中最经典的蛋白分离技术,因此建立稳定的家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术体系非常重要.目的:建立家兔血清蛋白分离的双向凝胶电泳技术体系.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-06/07在武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室完成.材料:健康家兔6只,由唐山市职业技术学院动物中心提供.方法:去除高丰度蛋白前后的健康家兔血清样品,分别加入水化上样液使样品中的蛋白充分裂解,还原烷基化后上样,被动水化14 h.等电聚焦电泳后进行SDS-PAGE电泳.凝胶银染后用PDQuest7.4软件进行分析.主要观察指标:①高丰度蛋白去除效率.②2-DE图谱.结果:双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好.未去除高丰度蛋白的血清2-DE图效果优于去除高丰度蛋白后的血清2-DE图.结论:成功建立家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳和质谱鉴定

背景:近年来对于退变腰椎间盘组织蛋白质成分改变的研究取得了很大进展,但是对于正常和退变腰椎间盘整体蛋白质成分改变的分离和差异鉴定却鲜见报道.目的:建立正常和退变腰椎问盘蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨腰椎间盘退变的生物学机制.设计、时间及地点:对比观察,于2007-06/2008-12在南方医科大学病理生理实验室完成.材料:由自愿者提供的正常和退变腰椎间盘组织各6例,年龄21～45岁,其中男9例,女3例;取材范围L3-L5.方法:氯化铯梯度离心去除正常和退变腰椎间盘组织蛋白多糖,通过崮相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分离蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行分析鉴定.主要观察指标:正常腰椎间盘及退变腰椎间盘组织IPG等电聚焦双向凝胶电泳结果.结果:双向电泳显示正常和退变腰椎间盘蛋白质图谱差异显著,从中选取16个差异明显的位点进行质谱仪分析,确定了6种具有显著性意义的差异蛋白质.结论:双向电泳可有效地分离正常和退变腰椎问盘组织蛋白质,通过质谱仪鉴定可以确定其之间差异蛋白质的性质.     

人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质组的差异表达初步研究

目的：应用蛋白质组技术比较人表皮细胞与角膜上皮细胞之间的蛋白质表达差异。方法：实验于2005-11，2006-10在中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室完成。分别培养人表皮细胞与角膜上皮细胞，裂解原代细胞抽提总蛋白，精确定量后进行双向电泳，扫描电泳凝胶获得二维总蛋白图谱。图谱使用软件辅助比较分析，找出差异表达点，从凝胶中抠取差异点，胶内酶解后用基质辅助激光解吸附，电离飞行时间串级质谱法鉴定差异蛋白。结果：人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质凝胶分析获得600余个清晰的蛋白质斑点，在比较分析出的26个差异点中初步鉴定出4个差异表达蛋白，分别是细胞内氯离子通道1、Psodasin、乳酸脱氢酶B和丝氨酸蛋白酶抑制因子。结论：人表皮细胞与角膜上皮细胞在蛋白质表达上有较高的相似性以及较好的可比性，为探索表皮细胞横向分化成角膜上皮细胞的分子机制做出了有益的尝试，并提供了具有一定可操作性的实验方法。     

构建小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组分析鉴定的方法模型

背景:磷酸化蛋白质组的分析鉴定是目前蛋白质组学技术研究的主要目标之一,然而以质谱为核心的鉴定技术尚不完善.目的:建立一种简便易行、适于在一般实验室普及的分析鉴定磷酸化蛋白质组的方法并应用于小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的模型.设计、时间及地点:观察对比实验,于2003--07/2004-06在泸州医学院生物化学教研室及医学分子生物学实验室完成.材料:封闭群乳昆明小鼠100只,年龄1～3 d.体质量3～6 g,雌雄各半;32p-NaH2PO4由中国北京原子能研究所提供.方法:将长势相当的体外培养的乳小鼠肝细胞随机分成两组.一组作同位素32P标记后液氮终止反应,裂解细胞,收集蛋白并定量,双向电泳分离蛋白,干胶及放射自显影,建立小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱,初步确定6种靶标磷酸化蛋白EPs15等;另一组直接裂解细胞,收集蛋白并定量,双向电泳分离蛋白后半干式电转移至PVDF膜,根据靶标蛋白EPs15等的理论等电点和分子量剪下6张小膜.主要观察指标:采用持久性化学发光检测技术确证初步鉴定的6种靶标蛋白EPs15等.结果:①小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱显示约100个蛋白质斑点,经PDQuest2D软件结合蛋白质数据库初步鉴定出已知的6种磷酸化蛋白EPs15等.②6种靶标蛋白的免疫印迹一化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点,与放射自显影图谱上的斑点基本匹配.结论:实验建立的同位素标记结合免疫印迹一化学发光的方法分析鉴定磷酸化蛋白质组简单、实用、灵敏、高效.     

国人胃癌蛋白质组分析中双向凝胶电泳技术建立及优化

目的　初步建立、优化用于胃癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术和计算机图像分析技术 ,提高其分辨率及重复性 ,得到一种分析胃癌蛋白质组双向凝胶电泳新方法。方法　提取胃癌组织中蛋白质 ,对以固相pH梯度为第一向双向电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、电泳参数和凝胶浓度进行一系列优化。进一步采用双向凝胶电泳分离胃癌组和正常组总蛋白质 ,银染显色、图像分析软件分析电泳图谱。结果　重复性实验结果显示同组样品在 3次不同实验中所得蛋白质斑点数目相对标准差 (变异系数平均值 % ) :胃癌组和正常组分别为 2 3.0 0± 10 .11、2 0 .33± 9.90。变异系数范围 (% ) :胃癌组和正常组分别为 3.80～ 6 0 .10、2 .70～ 5 6 .89。同一蛋白质斑点在 3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为 8.76 %± 5 .14 % ,13.0 0 %± 4 .2 2 %和 10 .84 %± 9.16 %。获得了较好的分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱。结论　蛋白质组双向电泳的建立及优化表明适合于胃癌蛋白质组差异表达研究。     

人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法的建立

目的建立和优化人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法。方法对第一向双向电泳的关键因素与环节(如样品处理、电泳参数和凝胶浓度等)进行一系列优化。进一步采用双向凝胶电泳分离骨肉瘤组和正常组总蛋白质,银染显色,Image Master图像分析系统分析电泳图谱。结果重复性实验结果显示同组样品在3次不同实验中所的蛋白质斑点数目相对标准差。(变异系数平均值%):骨肉瘤组和正常组分别为23.00±10.11、20.33±9.90。(变异系数范围%):骨肉瘤组和正常组分别为3.80-6.89、2.70-6.89。同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为8.93%±1.17%,10.16%±2.02%和10.87%±3.86%。获得了优于传统实验方法的分辨率和可重复性的双向凝胶电泳图谱。结论优化的双向凝胶电泳图象分析技术适合于骨肉瘤蛋白质组研究。     

窄范围pH梯度干胶条可提高胃癌细胞蛋白质组表达谱分辨率

目的探讨不同pH梯度干胶条在提高胃癌细胞蛋白质表达谱分辨率中的作用,为深入研究胃癌的蛋白质组学奠定基础。方法提取胃低分化腺癌细胞MGC-803的蛋白质,分别采用pH 3~10和pH 4~7不同pH梯度干胶条建立胃低分化腺癌细胞MGC-803蛋白质双向凝胶电泳图谱,与相对应pH区域的蛋白质斑点进行比较。结果成功地构建出两种不同pH梯度MGC-803细胞的双向凝胶电泳图谱,经比较两种图谱蛋白质斑点结果显示,运用窄范围pH 4~7干胶条可更有效分辨出pH 3~10部分区域内聚积的蛋白质斑点。结论采用窄范围pH的干胶条可提高双向电泳图谱分辨率,优化了胃癌细胞蛋白质组学研究的技术体系,可有效获取待测靶蛋白。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。