miR-144-3p通过靶向调控IRS1抑制肺腺癌细胞的侵袭和转移

背景与目的 MicroRNAs(miRNAs)是短的非编码RNA,是能够调控基因表达、影响细胞过程、促进疾病发展的重要分子.在许多疾病中可以观察到miRNA表达的变化,包括肝炎、心血管疾病和癌症.本研究旨在探讨miR-144-3p靶向调控胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS...     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的:研究微小RNA-543（microRNA-543,miR-543）在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响。方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响。结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制。结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭。     

EFEMP1通过下调MMP-7表达抑制肺癌细胞生长和侵袭

背景与目的 EFEMP1属于fibulin家族成员,是一种与细胞代谢密切相关的重要的细胞外基质蛋白,其在肿瘤的发生发展中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨EFEMP1影响肺癌细胞生长和侵袭转移的生物学作用及其机制。方法 Western blot方法检测肺癌细胞中EFEMP1表达,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测EFEMP1在肺癌细胞中启动子区甲基化状态。肺癌细胞中转染EFEMP1后,检测细胞克隆形成及侵袭能力变化,并用Western blot及实时定量PCR检测MMP-7表达,Luciferase实验检测EFEMP1对基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)报告质粒的影响。结果 Western blot结果显示肺癌细胞中EFEMP1表达下降,MSP分析结果说明A549和H1299中EFEMP1启动子区存在甲基化位点,5-aza-2’-deoxycytidine处理后,EFEMP1表达升高。A549和H1299转染EFEMP1后细胞克隆形成能力以及侵袭活性明显下降,MMP-7蛋白表达下调。Luciferase实验结果显示EFEMP1可以抑制MMP-7报告质粒的表达活性。结论 EFEMP1是一种肺癌生长和侵袭的抑制因子,由于表观遗传学的改变,其在肺癌细胞中表达下降,通过上调MMP-7的表达促进肺癌细胞的侵袭转移。     

miR-9500靶向SMAD2调控肺腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-9500通过靶向SMAD2调控肺腺癌细胞迁移侵袭的相关分子机制。方法 通过生物信息学分析筛选出miR-9500的核心靶基因,并对其进行GO功能和KEGG信号通路富集及生存分析。预测miR-9500与其关键靶基因SMAD2之间的靶向结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-9500与SMAD2之间是否存在直接靶向关系,qRT-PCR和Western blot检测miR-9500对SMAD2 mRNA和蛋白表达水平的影响。划痕、Transwell实验及基质胶侵袭实验分析miR-9500对肺腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果miR-9500核心靶基因主要富集于癌症通路、TGF-β信号通路和黏着斑信号通路等。排名前10的核心靶基因中,只有VAMP2、SMAD2及RXRA的表达水平与肺腺癌患者的总生存期显著相关。miR-9500可靶向结合SMAD2来下调SMAD2的表达水平。且过表达miR-9500可显著抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并显著降低迁移侵袭标志蛋白MMP2、MMP9的表达水平。结论 miR-9500可通过靶向SMAD2抑制肺腺癌细胞的迁移侵袭,其可能作为抑癌因子在肺腺...     

miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-302c对人胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响及机制。［方法］ 实时荧光定量PCR法检测miR-302c在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达情况。在SGC7901和AGS细胞中分别转染miR-302c mimic和inhibitor后,Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染后环磷酸腺苷反应元件结合蛋白1(CREB1)的变化情况。［结果］与永生化的正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,miR-302c在胃癌细胞系SGC7901、MKN28、N87、MKN45和AGS中表达降低。转染 mimic和inhibitor后,miR-302c在SGC7901和AGS中表达分别明显上调和下调(P＜0.001)。Transwell实验发现,上调miR-302c后,SGC7901细胞的侵袭和迁移能力明显降低,而下调miR-302c后,AGS细胞的侵袭和迁移能力明显增强。进一步研究发现,miR-302c可抑制CREB1的表达。功能挽救实验证明CREB1可部分恢复miR-302c上调对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用。［结论］ miR-302c抑制胃癌细胞的侵袭和迁移,其机制可能是通过直接靶向CREB1。     

nm23-H1通过下调PKC信号通路抑制肺癌细胞侵袭

目的 探讨nm23-H1基因调控肺癌细胞PKC信号通路抑制肺癌侵袭和转移的分子机制。方法应用Western-blot、Boyden．Chamber、MTT法和激光扫描共聚焦显微镜技术分别检测nm23-H1基因转染前后以及PKC抑制剂Calphostin C处理前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞膜、胞浆PKC的分布变化;体外侵袭力和增殖力的变化;以及细胞中PKC激活转位变化和Ca^2＋浓度的变化。结果（1）L9981和19981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ蛋白在胞膜的表达量明显较19981-nm23-H1增多（P〈0．001）,表明其处于活化状态的PKC明显增加;（2）PKCα、PKCβⅡ在L9981及L9981-pLXSN细胞中主要位于胞核、核周和质膜,明显处于激活转位状态;在L9981-nnd3-H1细胞中则主要位于胞浆内,处于无活性状态,前二者胞浆中Ca^2＋荧光表达强度显著高于后者（P〈0．001）;（3）19981-nm23-H1体外增殖力,侵袭力显著低于L9981和L9981-pLXSN（P〈0．001）,但后二者间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;（4）抑制剂处理后,L9981和19981-pLXSN细胞中PKCα、PKCβⅡ在胞膜的蛋白表达量和胞浆中的Ca^2＋荧光表达强度均较处理前明显下降（P〈0．001）;3株细胞体外增殖力、侵袭力均较处理前明显下降（P〈0．001）。结论nm23-H1基因可能通过PKC信号通路来发挥其肿瘤转移抑制作用,细胞内钙离子可能参与了这一过程。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与肿瘤侵袭转移的研究进展

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tlymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam 1)，是Rho样GTPase的GDP分离刺激因子，具有调节细胞骨架结构重组，促进细胞运动的功能。研究表明，Tiam1过表达可以诱导肿瘤细胞侵袭、转移，其分子生物学基础主要基于：Tiam1与肿瘤“细胞骨架-粘附分子-细胞外基质”跨膜系统的相互作用，Tiam1对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响，以及其它肿瘤侵袭转移相关因子对Tiaml活性的调控几方面。同时，现有实验结果提示，Tiam1活性调节的多样性和生物效应的特异性，以及Tiam1与其他肿瘤侵袭转移相关因子间的关系及信号转导机制，尚有待深入研究。     

miR-320a抑制结肠癌细胞增殖及肺转移作用的研究

摘 要：［目的］ 探讨调节结肠癌细胞中miR-320a的表达水平后,其对结肠癌细胞生物学行为的影响及可能作用机制。［方法］ 检测调节miR-320a结肠癌细胞的表达水平后,用MTT法检测细胞增殖能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力变化,通过给裸鼠尾静脉注射miR-320a不同表达水平的结肠癌细胞后,观察裸鼠肺转移的情况;通过生物信息学软件预测miR-320a的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因系统进行鉴定,Western Blot法检测β-catenin、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达情况。［结果］ 通过慢病毒感染miR-320a质粒上调结肠癌细胞中miR-320a水平后,可以抑制结肠癌细胞增殖、抑制结肠癌细胞侵袭及肺转移,β-catenin是miR-320a的靶基因,miR-320a下调β-catenin、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin表达,上调E-cadherin表达。［结论］ miR-320a可以抑制结肠癌细胞的增殖及侵袭转移。     

miR⁃93⁃5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR⁃93⁃5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1（protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1）对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 使用LipofectamineTM 2000分别将质粒inhibitor NC、miR⁃93⁃5p inhibitor、pcDNA、pc⁃PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR⁃93⁃5p inhibitor组、pcDNA组和pc⁃PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT⁃PCR检测细胞中miR⁃93⁃5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃93⁃5p与PKMYT1的靶向关系;CCK⁃8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1（Cyclin D1）、细胞周期素B1（Cyclin B1）的蛋白表达水平。结果 与BEAS⁃2B细胞相比,SPC⁃A⁃1细胞、A549细胞、LTEP⁃α⁃2细胞中miR⁃93⁃5p表达水平均升高（均P<0.01）,PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低（均P<0.001）。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR⁃93⁃5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.05）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR⁃93⁃5p NC+3'UTR⁃WT组相比,miR⁃93⁃5p mimic+3'UTR⁃WT组细胞相对荧光素酶活性下降（P<0.001）。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc⁃PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.001）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。结论 沉默miR⁃93⁃5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-765靶向ARID1A对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响

目的 探讨微小核糖核酸-765(miR-765)靶向AT丰富结合域蛋白1A(ARID1A)对结直肠癌细胞侵袭及迁移的影响。方法 收集35例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织,体外培养结直肠癌SW480细胞并分为对照组、siRNA NC组、miR-765 siRNA组、mimic NC组和miR-765 mimic组。qRT-PCR法检测miR-765、ARID1A mRNA表达,Transwell法检测SW480细胞迁移和侵袭情况,蛋白印迹法检测ARID1A、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,双荧光素酶实验检测miR-765与ARID1A的靶向关系。结果 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-765水平显著升高,ARID1A mRNA及蛋白水平显著降低(P＜0.001),且结直肠癌组织中miR-765与ARID1A mRNA呈显著负相关(r=-0.768,P＜0.001);与TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者相比,Ⅲ~Ⅳ期的患者结直肠癌组织中miR-765水平显著升高(P＜0.01),ARID1A蛋白水平显著降低(P＜0.001)。敲减miR-765表达后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著降低,ARID1A水平显著升高(P＜0.05);过表达miR-765后SW480细胞迁移数、侵袭数、miR-765水平及MMP-9、VEGF蛋白水平显著升高,ARID1A水平显著降低(P＜0.05)。miR-765靶向调控ARID1A表达。结论 miR-765可能通过靶向抑制ARID1A表达,促进结直肠癌SW480细胞的侵袭和迁移过程。     

STC1诱导上皮-间质转化促进肺癌细胞的侵袭和迁移

背景与目的：斯钙素1（stanniocalcin 1,STC1）与癌症的发展和不良预后相关,但STC1对肺癌细胞转移的影响及其作用机制目前还未完全阐明。探讨STC1对肺癌细胞侵袭和迁移的影响及其可能的内在分子机制。方法：构建STC1过表达的细胞系HLEC-STC1及对照细胞系HLEC-EV,STC1沉默的细胞系A549-STC1 siRNA及对照细胞系A549-EV;采用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）标志物的mRNA和蛋白质水平变化;并使用细胞免疫荧光技术进一步验证细胞EMT标志物的表达和定位;采用Western blot检测EMT相关信号通路蛋白和转录因子的水平。结果：与对照细胞相比,过表达STC1的HLEC-STC1细胞的侵袭和迁移能力增强,STC1沉默的A549-STC1 siRNA细胞的侵袭和迁移能力减弱（P＜0.05）;过表达STC1的HLEC-STC1细胞中上皮标志物上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达下调,间质标志物神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）及肿瘤干细胞标志物上皮细胞黏附分子（epithelial cell adhesion molecule,EpCAM）表达上调（P＜0.05）;低表达STC1的A549-STC1 siRNA细胞中E-cadherin的表达上调,N-cadherin、vimentin及EpCAM的表达下调（P＜0.05）;同时,HLEC-STC1细胞中细胞外调节蛋白激酶信号通路（extracellular signal-regulated protein kinase,ERK）及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路激活相关的磷酸化（p）-ERK和β-catenin的水平升高,转录因子E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1）和锌指转录因子1（Snail1）的表达水平上调,A549-STC1 siRNA细胞中的结果则相反（P＜0.05）。结论：STC1可能通过激活ERK和Wnt/β-catenin信号通路上调转录因子ZEB1和Snail1的表达水平,从而诱导EMT促进肺癌细胞的侵袭和迁移。     

miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2对胃癌细胞增殖迁移侵袭的影响

目的探讨miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR-NC、miR-513a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-513a-3p、si-NC、si-MDM2、miR-513a-3p+pcDNA3.1和miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2转染至BGC-823细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-513a-3p的表达水平,采用Western blot检测cyclin D1、MMP-2、p21、E-cadherin和MDM2蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC-823的活性,Transwell法检测各组胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-513a-3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC-823、MGC-803中miR-513a-3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03,与胃上皮细胞GES-1(0.76±0.08)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14,miR-513a-3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个,miR-513a-3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,si-NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14,si-MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08;si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个,si-MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-513a-3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关,可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-145靶向KLF5抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的 研究miR-145靶向调控锌指蛋白转录因子5(KLF5)抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖、侵袭、迁移的机制.方法 miR-145 mimics对BIU-87细胞进行转染,实验分为对照组、miR-145阴性对照组、miR-145 mimics组,SV-HUC-1细胞作为SV-HUC-1组.实时荧光定量法(RT-qPC...     

miR-625-5p通过靶向调控PRKACA促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭

背景 与目的:肺腺癌是非小细胞肺癌的一种亚型,虽在诊断和治疗方面已经取得了很大进展,但晚期肺腺癌临床预后和总生存仍较差.近年来多项研究表明,miRNA在多种癌症中发挥作用,并在细胞增殖、转移、炎症等生物学过程中发挥重要作用.探究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制,旨在为后续肺腺癌的诊断和治疗...     

miR-320c靶向FADD基因抑制肺腺癌细胞凋亡促进癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究miR-320c调控肺腺癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:Real-time PCR方法检测miR-320c在肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中的表达情况。通过质粒转染构建miR-320c过表达和敲低的肺腺癌细胞株,采用Transwell实验检测miR-320c对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。通过流式细胞技术检测肺腺癌细胞的凋亡率,免疫共沉淀检测凋亡通路关键复合体的表达判断细胞发生凋亡的情况。生信分析预测miR-320c的下游靶基因,并通过双荧光素酶实验验证。结果:与正常肺上皮细胞相比,miR-320c在肺腺癌细胞中表达升高。过表达miR-320c能够促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,而敲低miR-320c则抑制细胞的迁移和侵袭。进一步实验证实miR-320c通过抑制肺腺癌细胞凋亡发挥其促进迁移和侵袭的作用。荧光素酶报告基因系统验证了miR-320c直接靶向凋亡通路的关键基因FADD;FADD的上调可以有效逆转miR-320c mimic诱导的促进迁移和侵袭作用。结论:miR-320c通过靶向FADD基因抑制肺腺癌细胞凋亡促进癌细胞的迁移和侵袭。     

MicroRNAs associated with tumour migration,invasion and angiogenic properties in A549 and SK-Lu1 human lung adenocarcinoma cells

Objectives

Dysregulation in miRNA expression contributes towards the initiation and progression of metastasis by regulating multiple target genes. In this study, variations in miRNA expression profiles were investigated between high and low invasive NSCLC cell lines followed by identification of miRNAs with targets governing NSCLC's metastatic potential.

Materials and methods

Two NSCLC sub-cell lines possessing opposing migration and invasion properties were established using serial transwell invasion assays. Global miRNA expression profiles were obtained using microarray followed by RT-qPCR validation. Target prediction and pathway enrichment analyses were conducted on dysregulated miRNAs using DIANA-mirPath, DIANA-microT 4.0 and TargetScan 5.2 softwares. Metastatic effects of dysregulated miRNAs were evaluated using wound healing assay, invasion assay and HUVEC angiogenesis assay following transfection with mimics and inhibitors.

Results

A total of eleven differentially expressed miRNAs were revealed from microarray analyses, with four miRNAs validated through RT-qPCR. Three of these miRNAs were further selected for biological function validations, with only two modulating metastasis. A pathway model describing interactions between miRNAs and metastasis highlighted four major pathways: non-canonical Wnt/PCP, TGF-β, MAPK and integrin-FAK-Src signalling cascade.

Conclusion

These results provide a list of potential candidate metastatic markers during the classification of NSCLCs and a platform for the development of bio-therapeutics targeting these miRNA control elements.     

miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究

背景与目的：微小RNA(microRNA,miRNA)是一类小分子内源性RNA,主要在转录后水平调节靶基因的表达。microRNA-335(miR-335)作为一种肿瘤抑制因子,参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨miR-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil formingprotein kinase,ROCK1)基因的表达,并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法：理论预测并通过荧光素酶基因报告验证miR-335与ROCK1基因的3'-非翻译区(untranslated region,UTR)的特异性结合作用;real-time PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测miR-335对ROCK1表达的负性调控作用;Transwell小室法检测miR-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果：Targetscan预测显示,miR-335与ROCK1 3'-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示,miR-335 mimic和ROCK1 3'-UTR能够靶向结合;miR-335在MG-63细胞中低表达,ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示,转染miR-335 mimic或转染ROCK1 siRNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示,过表达miR-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论：miR-335能特异性结合于ROCK1基因的3'-UTR并下调ROCK1的表达,抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。