携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞作用研究

[目的]探讨携带内皮抑素基因腺病毒对卵巢癌HO-8910细胞的抑制作用.[方法]采用细胞培养、光镜、电镜、MTT法、RT-PCR、Western blot、TUNEI,法分析检测结果.[结果]重组腺病毒pLP-Ad-ES能够引起HO-8910细胞凋亡细胞形态结构改变:pLP-Ad-ES能够抑制卵巢癌细胞HO-8910的增殖(P<0.01),并且能够促进细胞凋亡,存在时间一剂量依赖关系;在基因蛋白水平上,随着滴度的增加,内皮抑素的表达增加.[结论]pLP-Ad-ES对卵巢癌HO-8910细胞有明显的抑制作用,能够诱导细胞凋亡.     

IL-18对卵巢癌细胞系抗肿瘤作用的研究

目的：研究IL-18对人卵巢癌细胞系HO-8910的抗肿瘤免疫作用。方法：FLISA法测定IL-18诱导的外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中IFN-γ浓度，MTT法测定PBMC的杀伤活性；流式细胞仪测定HO-8910的细胞周期分布。结果：不同浓度IL-18（0、2、4、6、8、10μg/ml）能较好诱导PBMC分泌不同水平的HFN-γ（0、0.39、.66,0.81,1.56,1.58IU/ml);PBMC与不同效靶比的肿瘤细胞共同温育后，IL-18组PBMC对肿瘤细胞杀伤率较对照组为高（P=0.016)；流式细胞仪检测表明IL-18命名HO-8910卵巢癌细胞的S期百分比明显下降。分别由31.26%。降为5.18%（上清液），29.01%降为18.80%（上清液和PBMC）。结论：IL-18能诱导PBMC分泌IFN-γ因子，IL-18能提高PBMC对HO-8910卵巢癌细胞系的杀伤率及其抑制卵巢癌细胞的生长。     

紫杉醇对浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨紫杉醇对体外培养的浆液性卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡的诱导作用。方法:体外培养卵巢癌细胞HO-8910,用浓度1×10-9 mol/L、1×10-8 mol/L、1×10-7 mol/L和1×10-6 mol/L的紫杉醇作用细胞12 h,24 h,48 h后,提取细胞DNA片段进行2.0 mg/L 琼脂糖凝胶电泳;消化HO-8910细胞并经碘化丙锭(IP)染色后,流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析;电子显微镜对紫杉醇作用后的HO-8910细胞进行形态学分析。结果:体外培养的卵巢癌HO-8910细胞经不同浓度的紫杉醇处理后,细胞生长明显受到抑制;于1×10-7 mol/L 紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳;流式细胞仪分析证实,细胞凋亡率达19.7 %;且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变。结论:卵巢癌HO-8910细胞对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对卵巢癌细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

顺铂对五种肿瘤细胞系Survivin基因表达的影响

目的 探讨顺铂在抑制肿瘤细胞生长的过程中对Survivin基因的影响及其可能的作用机制.方法 选取五种肿瘤细胞系:人胃腺癌细胞株(SGC-7910)、人卵巢癌细胞系(HO-8910)、高转移卵巢癌细胞(HO-8910pm)、人喉癌细胞(Hep-2)、人胰腺癌细胞(PC-2),应用RT-PCR方法检测顺铂作用后Survivin基因表达的变化.结果 五种肿瘤细胞系中Survivin基因均有较高的表达,顺铂对SGC-7910、HO-8910、HO-8910pm细胞系中Survivin基因有显著的抑制作用,Hep-2、PC-2细胞系在顺铂作用后Survivin基因的表达与正常组没有显著差异.结论 顺铂可能是通过抑制Survivin基因诱导SGC-7910、HO-8910、HO-8910PM细胞凋亡而发挥其抗肿瘤功效,而对Hep-2、PC-2细胞系Survivin基因的表达没有明显作用.     

膜式液基薄层细胞制片技术在血性心包积液标本制作中的应用

目的:探讨膜式液基薄层细胞制片技术在血性心包积液标本中的制片效果,以改善血性心包积液的制片质量,提高诊断准确性.方法:临床新鲜2h小时内送检血性心包积液标本,常规推片法和膜式液基薄层细胞制片法同时处理同一标本,HE染色.结果:膜式液基薄层细胞制片法镜下背景、细胞分布、结构等都优于常规推片法,它背景干净、细胞单层分布、结构清楚易诊断,且不受人为因素影响.结论:膜式液基薄层细胞制片技术有利于提高血性心包积液细胞病理诊断准确性.     

紫杉醇对卵巢癌细胞端粒酶活性影响的研究

目的观察紫杉醇对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性的影响,以了解紫杉醇抗癌的可能机理.方法 1～100nmol/L紫杉醇处理HO-8910细胞后,用MTT法测定卵巢癌细胞的生长抑制率,TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果 1～100nmol/L紫杉醇对卵巢癌细胞有明显抑制作用,呈时间依赖性及剂量依赖性,紫杉醇处理卵巢癌细胞后,对端粒酶活性的检测结果显示,端粒酶活性下调.结论紫杉醇对卵巢癌细胞具有明显抑制作用,其下调端粒酶活性可能是紫杉醇抗癌作用的重要机理之一.     

PD98059抑制卵巢癌细胞株HO-8910活性的研究

目的 研究PD98059对卵巢癌细胞株HO-8910的作用.方法 采用MTT法检测卵巢癌细胞活性,用western blot和免疫细胞化学检测细胞内磷酸化c-Fos蛋白的表达.结果 与对照组相比,150μmol/L PD98059组可显著降低细胞活性(P<0.01);PD98059也可抑制细胞c-Fos蛋白的表达.结论 PD98059可能通过降低c-Fos蛋白的表达而抑制卵巢癌细胞的生长.     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖、迁徙和侵袭的影响

背景与目的:肿瘤间质活化的成纤维细胞能表达成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP),本研究通过体外实验研究FAP在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用。方法:人类卵巢癌细胞系HO-8910PM体外培养,加入不同浓度的FAP(30、100和300 pmol/L)处理,用MTT法检测FAP对HO-8910PM增殖的影响;细胞划痕实验检测FAP对HO-8910PM迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验来研究FAP对HO-8910PM侵袭能力的影响。结果:MTT法及细胞生长曲线显示FAP对卵巢癌细胞有促增殖作用,并呈时间、剂量依赖性;细胞划痕试验结果显示,不同浓度的FAP对卵巢癌细胞系的迁徙均有促进作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01);Transwell侵袭实验显示FAP对卵巢癌细胞有促侵袭作用,以100 pmol/L组最为明显(P<0.01)。结论:FAP具有促进卵巢癌细胞的增殖、迁徙和侵袭的作用。     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

洛伐他汀对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响

目的 探讨洛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期和增殖的影响.方法 以MTT法检测洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析洛伐他汀对HO-8910PM细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变.结果 洛伐他汀对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用,并使G0/G1期细胞增多,G2/M、S期细胞减少,32μmol/L用药48h有指示细胞凋亡的亚G1期"凋亡峰"出现.结论 洛伐他汀阻滞HO-8910PM细胞于G0/G1期,并能有效抑制癌细胞的体外增殖,以上作用均有剂量和时间依赖性.     

高低转移人卵巢癌细胞系基因表达谱差异

目的 用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO－8910PM和HO－8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法 分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢上皮的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的mRNA逆转录合成以图像,用软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果 HO－8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因;HO－8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。HO－8910PM与母系HO－8910比较差异2倍以上共有163个基因,差异3倍以上共有21个基因。结论 两株人卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关;HO－8910PM与HO－8910比较存在差异的基因可能与高转移特性相关。     

抑癌基因DOC-2对卵巢癌细胞增殖的影响

目的:探讨抑癌基因DOC2对卵巢癌细胞系HO8910在生长代谢、超微结构及细胞周期等方面的影响及其作用机制。方法:实验分3组:卵巢癌细胞系HO8910、8910P93(转染并表达DOC2基因)、8910pcDNA3.1(转染空载体pcDNA3.1),通过细胞消化计数法和3HTdR掺入法分别测定3组细胞的生长曲线及DNA合成代谢情况;利用透射电镜对细胞的超微结构进行观察比较;最后利用流式细胞仪观察卵巢癌细胞转染前后细胞周期的变化。结果:8910P93在生长增殖及DNA合成方面均明显低于HO8910和8910pcDNA3.1(P<0.05),而后两者之间无明显差异;电镜结果显示,8910P93存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变;细胞周期检测结果显示,处于G1和G2期的8910P93细胞明显增多而S期细胞明显减少。结论:抑癌基因DOC2可通过改变卵巢癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖。     

黄腐酚类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖降低对顺铂的耐药性

目的:探究黄腐酚（xanthohumol,XN）类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖的作用及对顺铂耐药性的影响。方法:以人卵巢癌细胞株HO-8910为研究材料,分为不同浓度(0、5、7.5、15、20 μmol/L)黄腐酚类似物组、对照组、顺铂组、黄腐酚类似物+顺铂组。采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、实时荧光定量酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测黄腐酚类似物对HO-8910细胞增殖及对顺铂耐药性的影响。结果:与对照组比,黄腐酚类似物能够明显抑制HO-8910细胞增殖,差异具有统计学意义（P<0.05）;黄腐酚类似物a13+顺铂组HO-8910细胞对顺铂的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）显著低于顺铂组,细胞活性抑制率（inhibition rate,IR）显著高于顺铂组,差异具有统计学意义（P<0.05）;PKIβ（cAMP抑制剂）、IWP-2（Wnt/β-catenin抑制剂）可降低黄腐酚类似物a13对HO-8910细胞增殖的抑制作用,逆转黄腐酚类似物a13抑制HO-8910细胞对顺铂的耐药作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:黄腐酚类似物可提高顺铂对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,降低细胞对顺铂的耐药性,作用机制与激活cAMP/Wnt/β-catenin信号通路有关。     

紫杉醇作用卵巢癌细胞系HO-8910后CYP1B1 mRNA及蛋白表达差异的研究

背景与目的:用紫杉醇(paclitaxel,PTX)对卵巢癌细胞系HO-8910进行体外化疗后,观察CYP1B1表达的变化,以期探讨CYP1B1基因表达与肿瘤细胞耐药的关系. 材料与方法:以不同浓度PTX(分别为30、15、7.5、3.75、1.88、0.94、0.47 μg/mi)处理H0-8910细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测PTX对HO-8910细胞体外生长的抑制作用,实验同时设只加培养液的对照组.以5 μg/ml PTX分别处理HO-8910细胞24 h、48 h、72 h和50#g/ml PTX处理细胞24 h后,用RT-PCR技术检测存活的卵巢癌细胞中CYP1B1 mRNA的表达水平,用Western blot检测细胞CYP1B1蛋白表达.结果:PTX能抑制HO-8910细胞生长,7种不同浓度的PTX作用72 h后,细胞的抑制率分别为89.10%、76.82%、67.39%、57.27%、46.21%、37.02%、17.56%,随着药物浓度的下降,其抑制率明显降低,各浓度组细胞抑制率间的差异具有统计学意义(P<0.05).经PTX处理后存活的HO-8910细胞中CYP1B1 mRNA及蛋白的表达量增加,高于对照组;5 μg/ml PTX处理HO-8910细胞48 h、72 h和50 μg/ml的PTX处理24 h组,CYP1B1蛋白的表达量高于5 μg/ml PTX处理24 h组(P<0.05).结论:CYP1B1在卵巢癌细胞系中呈高表达,CYP1B1基因在卵巢癌细胞系H0-8910体外PTX化疗中起抑制作用.     

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

地塞米松快速抑制卵巢癌细胞系ERK1/2活性

背景与目的:细胞外信号调节的激酶1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2,ERK1/2)的激活在多种细胞增殖的过程中发挥重要作用。作者曾经发现人工合成的糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,Dex)可显著抑制人卵巢癌细胞系HO-8910的增殖。本研究试图观察Dex对HO-8910细胞ERK1/2活性的影响,以探讨其抑制该细胞增殖的信号转导通路。方法:以Westernblot方法测定ERK1/2在HO-8910细胞中的活性,细胞计数方法检测细胞增殖的改变。结果:1×10-7mol/LDex作用于HO-8910细胞5min即出现ERK1和ERK2活性的同步降低,最大作用出现在30min,与对照相比,二者分别减少41%和54%(P均<0.001),4h恢复至对照水平。ERK1/2活性降低的程度随Dex浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)升高而增大。该作用不能被糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)拮抗剂RU486所阻断。ERK1/2上游激酶MEK1/2的抑制剂PD98059也具有抑制该细胞增殖作用,并能增强Dex对细胞增殖的抑制。结论:Dex能够以不依赖GR的方式快速抑制HO-8910细胞ERK1/2活性,这可能与其抑制细胞增殖过程有关。     

The gene expression profile of highly metastatic human ovarian cancer cell line by gene chip

In this paper, gene chip technique was used to analyze the difference of gene expression patterns in highly metastatic human ovarian tumor cell line HO-8910PM and in normal ovarian epithelial cells to explore the tumor-associated gene-cluster and its function in the process of occurrence an development of ovarian carcinoma. It will be helpful to comprehensively understand the molecular mechanism of cell transformation, to provide the molecular markers and target genes for clinical diagnosis a…     

三氧化二砷联合抗坏血酸对高转移性卵巢癌细胞系HO-8910PM的抗肿瘤实验研究

[目的]在高转移性上皮性卵巢癌细胞株HO-8910PM中观察AS2O3联合抗坏血酸（VitaminC）的抗肿瘤效应。[方法]本研究以高转移性上皮性卵巢癌细胞株HO-8910PM为研究对象,以MTT药敏实验、流式细胞仪以及Western-blot方法检测AS2O3和VitaminC单药及联合的抗肿瘤效应及其机制。[结果]AS2O3和VitaminC单药对HO-8910PM细胞株均具有剂量依赖性的生长抑制作用。AS2O3联合VitaminC后具有明显的协同抗肿瘤效应,并且出现S期阻滞效应。Western-blot结果显示。AS2O3和VitaminC联合作用后,凋亡抑制蛋白bcl-2和凋亡促进蛋白bax分别进一步表达下调和上调。[结论]对高转移性的上皮性卵巢癌细胞株,VitaminC和AS2O3单药均具较好的抗肿瘤效应,VitaminC对AS2O3有较好的化疗增敏效应,两者的联合应用值得在卵巢癌方面进一步研究探讨。