Livin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞活性的影响

目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染 MG-63 细胞。采用免疫细胞染色法及Western blotting检测转染24 h后MG-63 细胞中Livin的表达情况,CellTiter-Glo法检测转染72 h后MG-63 细胞的增殖情况,划痕法检测ASODN对MG-63细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测转染24 h后 MG-63 细胞的凋亡情况和细胞周期。结果 Livin蛋白主要表达于MG-63细胞的胞质。选用下调作用最强的ASODN转染MG-63细胞后,Livin蛋白表达显著下降;不同浓度Livin ASODN 对 MG-63细胞的增殖及迁移有剂量依赖抑制作用;而ASODN 组的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 靶向Livin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力并促进其凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:采用survivin反义寡核苷酸(ASODN)封闭骨肉瘤细胞survivin的作用,观察其对骨肉瘤细胞系MG63增殖和凋亡的影响。方法:以脂质体为载体,介导survivin反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞系MG63,用MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测转染survivin反义寡核苷酸后细胞凋亡率;Westernblot及半定量RTPCR检测转染survivin反义寡核苷酸后的骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达。结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染骨肉瘤细胞系MG63后,细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率明显增加,骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达均明显降低。结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以抑制细胞增殖,有效降低细胞内survivin基因的表达,促进细胞凋亡。     

hTERT反义寡核苷酸对脊索瘤细胞周期及增殖的影响

目的：探讨hTERT反义寡核苷酸（ASODN）抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法：用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸（SODN）和反义寡核苷酸（ASODN）转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果：hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示：ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论：端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.     

沉默HOXC10基因促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡及其机制

目的:探讨沉默同源框C10（Homeobox C10,HOXC10）基因表达对骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法将特异性针对HOXC10基因的shRNA转入骨肉瘤MG-63细胞（HOXC10-shRNA组）,同时以转染Scramble-shRNA作为对照组（Scramble-shRNA组）,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HOXC10 mRNA及蛋白的表达水平。转染处理后,分别采用CCK-8法及FCM法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测HOXC10、ATM和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB)及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3的表达水平。结果:HOXC10-shRNA转入MG-63细胞后,HOXC10 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P均<0.05）。与Scramble-shRNA组细胞活力（0.95±0.12）%和凋亡率（4.35±0.52）%相比,HOXC10-shRNA组细胞活力（0.38±0.06）%明显下降,细胞凋亡率为（18.19±3.76）%明显升高（P均<0.05）;ATM/NF-κB信号通路中相关蛋白ATM、NF-κB及Survivin的表达水平均明显下调（P均<0.05）,而Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。结论:沉默HOXC10基因表达后可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控ATM/NF-κB信号通路的活化相关。     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌耐药细胞COC1/DDP抑制的实验研究

背景与目的: Survivin是近年发现的一种细胞凋亡抑制基因, 它与卵巢癌细胞的生长及耐药性密切相关,本研究探讨经脂质体介导的 survivin反义寡核苷酸 (Lip-ASODN)对人卵巢癌耐药细胞 COC1/DDP生长、凋亡及细胞周期的影响.方法:将脂质体介导的 survivin-ASODN转染 COC1/DDP细胞;细胞动力学检测、 MTT法观察细胞生长情况; RT-PCR检测 survivin mRNA的表达;通过 Western杂交检测 caspase-3蛋白及活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率及细胞周期变化.结果:与空脂质体及 SODN组相比,经 survivin-ASODN作用后的 COC1/DDP细胞的生长受到明显抑制, 72 h的细胞生长抑制率可达( 68.3± 6.2)%( P< 0.05). Survivin mRNA的表达明显下降,而 caspase-3的活性增加,并呈时间依赖性. ASODN组细胞周期发生了明显变化,细胞被阻滞于 G0/G1期,占 79.21%, G2/M及 S期分别为 4.92%、 15.87%,均明显下降;细胞凋亡率为 33.18%,明显高于 SODN组及空脂质体组( P< 0.05).结论: Survivin ASODN能抑制人卵巢癌耐药细胞 COC1/DDP生长,降低 survivin mRNA的表达并诱导 COC1/DDP细胞凋亡.     

反义survivin基因对786-O细胞的体外作用及其对表阿霉素诱导细胞凋亡作用的观察

的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对肾透明细胞癌786-O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivjn的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,将其转入786-O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol／L ASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高（P〈0．05）;转染ASODN 24h后,表阿霉素诱导786-O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivin ASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786-O细胞凋亡,抑制786-O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察Survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响.方法：设计合成特异性Survivin 反义寡核苷酸,转染肝癌SMMC-7721细胞,MTT法测定Survivin ASODN对细胞增殖抑制情况的影响,FCM法检测对细胞周期、凋亡及Survivin蛋白表达的影响.结果：Survivin ASODN可抑制SMMC-7721细胞的生长增殖,并呈浓度和时间依赖性.ASODN转染组可诱导SMMC-7721细胞凋亡（P＜0.01）,细胞周期阻滞于G2/M期（P＜0.05）.ASODN转染组Survivin蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）.结论：Survivin ASODN能下调SMMC-7721细胞Survivin表达,并可抑制其增殖并诱导凋亡.     

反义c-myc寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响

目的研究反义c-myc寡核苷酸（c-mycASODN）对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法设计c—mycASODN片段，转染入人骨肉瘤MG-63细胞，通过MTT检测、HE染色光镜观察、透射电镜超微结构及流式细胞仪（FCM）分析，观察和分析其对瘤细胞体外增殖、凋亡、细胞周期及c-myc基因蛋白的影响。结果MTT示c—mycASODN可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外增殖，10．0μmol／L、作用48h效果最明显，形态学观察到典型瘤细胞凋亡特征，流式细胞仪分析证实反义c—myc寡核苷酸主要阻止瘤细胞进入S期，出现明显的凋亡峰，凋亡率达36.82％，并可抑制c-myc基因蛋白的表达。结论反义c-myc寡核苷酸可诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡，对瘤细胞的增殖有抑制作用。     

Survivin反义寡核苷酸对宣威肺腺癌细胞凋亡的影响

Objective:The aim of the study was to investigate the effects of Survivin antioligonucleotide on the proliferation,apoptosis and cell cycle of Xuanwei lung adenocarcinoma cell XWLC-05.Methods:Specific targeting Survivin ASODN was composed firstly.XWLC-05 would be divided into 4 groups:Group Sham(blank),Group Lip(simple liposome),Group Lip-SODN(transfected sense oligonucleotide) and Group Lip-ASODN(transfected ASODN).All groups had been transfected under the same condition for 48 hours.Then West blotting was...     

生存素反义寡核苷酸促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡

目的:探讨生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)对顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)诱导骨肉瘤细胞凋亡的促进作用。方法:通过合成靶向survivin的ASODN转染骨肉瘤OS732细胞并与DDP联合作用,同时设空白对照组、正义(SODN)组及DDP组进行比较。采用RTPCR、免疫细胞化学法检测各组细胞survivinmRNA和蛋白表达状态,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)、吖啶橙/溴化乙锭(acridineorange/ethidiumbromide,AO/EB)染色法检测各组细胞凋亡水平和形态,MTT法检测细胞生长抑制情况。结果:与空白对照组、SODN组及DDP组相比,ASODN转染组细胞survivinmRNA及蛋白表达明显减弱,细胞凋亡水平较空白对照组、SODN组相应提高,细胞萎缩、染色质浓缩呈典型凋亡改变,细胞生长相对受抑;上述指标在ASODN+DDP组变化更为明显,其细胞凋亡指数(apoptoticindex,AI)和细胞生长抑制率(inhibitionratio,IR,61.36%)明显高于各单“药”组(SODN组6.81%、ASODN组31.82%和DDP组41.35%)及SODN+DDP组(45.45%),P<0.05。结论:ASODN能够特异性封闭骨肉瘤OS732细胞中survivin基因表达,使其功能相应受抑,增加细胞对DDP敏感性,进而增进DDP诱导骨肉瘤细胞凋亡效应。     

Survivin反义寡核苷酸诱导SMMC-7721细胞凋亡及对化疗药物敏感性作用的研究

目的：观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其对化疗药物敏感性的作用。方法：设计合成特异性survivin的ASODN，脂质体转染肝细胞癌SMMC-7721细胞，透射电镜观察细胞超微结构变化；RT—PCR法检测survivinmRNA的表达变化；FCM法检测对细胞周期、凋亡及survivin蛋白表达的影响；MTT法测定survivin表达抑制前后细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂敏感性的影响。结果：ASODN转染后细胞呈现凋亡的形态学改变，survivin mRNA和蛋白表达减弱（P〈0．05），诱导SMMC-7721细胞凋亡（P〈0．01），细胞周期阻滞于G2／M期（P〈0．05）。ASODN转染组可增加SMMC-7721细胞对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性（P〈0、01）。结论：Survivin ASODN转染能下调survivin表达，诱导SMMC-7721细胞凋亡，提高对吡柔比星、氟苷、顺铂的敏感性。     

反义MLL-AF9基因对THP-1细胞增生和凋亡的影响

 目的　研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸（ASODN）对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响。方法　选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸（SODN）,应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表达量,改良MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察ASODN作用于THP-1后细胞出现凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果　与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中MLL-AF9表达明显降低（P <0.01）,相对应MLL-AF9蛋白水平亦明显下降,同时细胞生长受到抑制,被诱导凋亡产生凋亡小体。ASODN转染THP-1细胞0、24和48 h后,ASODN组凋亡率分别为（10.4±3.0）%、（22.8±2.5）%和（24.7±3.1）%,与对照组相比凋亡率显著增加（P <0.01）且呈时间依赖性。结论　利用ASODN靶向沉默MLL-AF9融合基因的表达能有效抑制THP-1细胞增生并促进其凋亡。